呼和浩特地区鲍曼不动杆菌的耐药表型及基因谱分析

目的了解呼和浩特地区2010年临床分离鲍曼不动杆菌的耐药表型和多种耐药基因的携带情况。方法收集2所三级甲等医院临床分离的非重复鲍曼不动杆菌113株,采用纸片扩散法进行药敏试验,试验结果按照CLSI 2010年版标准判读,采用WHONET5.6软件进行数据分析;应用聚合酶链反应(PCR)和测序方法检测10种耐药相关基因(blaOXA-51-like、blaOXA-23-like、blaOXA-24-like、blaOXA-58-like、blaTEM、blaampC、armA、ISAba1、intI1和intI2),依据耐药基因的检出情况,分析并命名相应的耐药基因谱(RGP)。结果鲍曼不动杆菌对米诺环素的耐药率最低,为15.9%;对碳青霉烯类抗生素亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为40.7%和46.0%;对其他抗菌药物的耐药率为51.3%～91.2%;耐药相关基因blaOXA-51-like、blaOXA-23-like、blaTEM、blaampC、armA、ISAba1和intI 1的阳性率分别为100%、55.8%、86.7%、61.1%、92.0%、93.8%和90.3%,未检出blaOXA-24-like、blaOXA-58-like和intI2;共发现存在18种RGP,其中RGP1、RGP2和RGP3所占的比率均大于20%,为主要的流行的RGP。结论碳青霉烯类抗生素和米诺环素对鲍曼不动杆菌仍具有较好的体外抗菌活性,鲍曼不动杆菌多重耐药相关基因的携带率较高,多重耐药现象非常严重,应加强其耐药性监测,合理使用抗菌药物。     

多重PCR方法检测多耐药鲍曼不动杆菌基因型

目的建立一种适于临床微生物实验室快速检测多耐药鲍曼不动杆菌基因的多重PCR方法。方法筛选临床分离鉴定的多耐药鲍曼不动杆菌105株;用热煮沸法提取DNA,采用多重PCR技术,优化反应条件,同时扩增OXA酶基因(blaOXA-23-like,blaOXA-24-like,blaOXA-51-like,blaOXA-58-like)和整合酶基因(intI1,intI2),扩增产物经凝胶成像系统分析。结果105株多耐药鲍曼不动杆菌中,76株是blaOXA-51-like blaOXA-23-like intI1基因型,18株是blaOXA-51-like intI1基因型,10株是blaOXA-51-like blaOXA-23-like基因型,1株是blaOXA-51-like blaOXA-23-like blaOXA-58-like基因型。未检测出携带有blaOXA-24-like和intI2基因的菌株。结论多耐药鲍曼不动杆菌的耐药性及流行趋势与其携带的OXA酶基因和整合酶基因相关。     

OXA-51样D类碳青霉烯酶在鲍曼不动杆菌中广泛分布

目的 研究全国7家教学医院临床分离的美罗培南敏感与非敏感鲍曼不动杆菌中碳青霉烯酶类型及其分布特点。方法 收集2005年北京协和医院、北京朝阳医院、解放军第三0四医院和大连、浙江、南京医院临床分离存活的非重复的美罗培南非敏感不动杆菌126株，并分别从北京协和医院、北京医院、浙江、大连、南京5家医院选取美罗培南敏感的19株菌作为对照，采用琼脂稀释法测定这些菌株对美罗培南、亚胺培南等抗菌药物的MIC；用多重PCR、测序等方法分析鲍曼不动杆菌中OXA-23-like、OXA-24-like和OXA-58-like及OXA-51-like 4个亚组的碳青霉烯酶分布特点。结果 收集145株临床非重复的鲍曼不动杆菌，采用多重PCR方法检测出blaOXA-like基因127株（87．6％），美罗培南非敏感126株菌中，blaOXA-23-like基因8株，blaoOXA-23-like与blaOXA-51-like基因同时存在的65株（51．6％）blaOXA-24-like基因1株、blaoOXA-58-like基因3株。以不同医院为单位，依据药敏谱型挑选4种酶型阳性代表株，分别进行全长引物测定，序列分析blaOXA-24-like确定为OXA-72；3株blaOXA-58-like确定为OXA-58；15株blaOXA-23-like确定为OXA-23；13株blaOXA-51-like测序结果12株为OXA-51等位基因OXA-66，1株为OXA-68。结论 研究结果表明OXAM6／OXA-51样碳青霉烯酶以最普遍存在的方式广泛分布于鲍曼不动杆菌中。     

重症监护病房碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌耐药机制及同源性分析

目的分析耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌基因型,进行同源性分析,探讨碳青霉烯类抗生素耐药率升高的原因。方法应用WHONET5.0分析广州医学院第一附属医院重症监护病房(ICU)分离的鲍曼不动杆菌耐药率变化。收集2008年1月至2009年12月ICU碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌35株,应用VITEK-2全自动细菌鉴定仪进行菌株鉴定,采用K-B纸片扩散法测定15种抗菌药物的敏感性,PCR检测金属β内酰胺酶及碳青霉烯酶OXA基因,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析同源性。结果该院分离的鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药率显著增加,对美罗培南的耐药率从10.8%升高到62.3%,对亚胺培南的耐药率从13.5%升高到58.8%。PFGE分析存在8个克隆;blaOXA-51、blaOXA-23、blaOXA-58阳性的分别为33株(94.3%)、20株(57.1%)和6株(17.1%)。ISAba1相关blaOXA-23是碳青霉烯酶主要的存在形式。未检测到金属β内酰胺酶。结论该院ICU分离的鲍曼不动杆菌OXA-23型碳青霉烯酶基因检出率最高,并存在交叉感染的情况,应引起临床重视。     

重症监护病房耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌耐药机制研究

目的分析鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型,探讨其对碳青霉烯类抗生素耐药率升高的原因。方法收集2008年1月—2012年12月某院重症监护病房(ICU)320株碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌。应用VITEK2全自动微生物分析仪进行菌株鉴定与药敏测定,聚合酶链反应(PCR)检测金属β内酰胺酶和OXA碳青霉烯酶基因。WHONET5.4统计软件:分析鲍曼不动杆菌耐药率变化。结果研究期间碳青霉烯类抗生素的耐药率显著增加,鲍曼不动杆菌对美罗培南的耐药率从10.8%升至80.4%,对亚胺培南的耐药率从13.5%升至83.5%。blaOXA-23及ISAba1相关blaOXA-23阳性率均从25.0%升至97.1%。未检测到blaOXA-24和金属β内酰胺酶基因。结论该院ICU鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药率升高,可能与ISAba1相关blaOXA-23的扩散相关。     

海南省某医院103株鲍曼不动杆菌复合群-内酰胺类耐药性与碳青霉烯酶携带情况分析

目的 鲍曼不动杆菌复合群细菌是临床可造成感染的重要条件性致病菌,本研究旨在调查和分析我国海南省临床来源鲍曼不动杆菌复合群细菌对常用-内酰胺类药物的耐药性及菌株碳青霉烯酶携带情况,探讨其耐药流行性特点。方法 采用微量肉汤稀释法对103株采集自2012-2013年海南省三亚市人民医院的非重复鲍曼不动杆菌复合群细菌进行7种抗菌药物的药敏检测;应用聚合酶链反应(PCR)对收集的鲍曼不动杆菌复合群细菌进行9种碳青霉烯酶编码基因的筛查。结果 103株鲍曼不动杆菌复合群细菌对哌拉西林、头孢他啶、头孢噻肟的耐药率较高(接近50%),对头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦的耐药率为40%,对亚胺培南和美罗培南的耐药率均在20%左右;PCR检测显示有38株携带blaOXA-58基因,62株blaOXA-66基因,其中25株同时携带有这两种基因;其余7种碳青霉烯酶编码基因筛查结果为阴性。结论 本研究中鲍曼不动杆菌复合群细菌对-内酰胺类药物耐药性较高,菌株携带的blaOXA-58和blaOXA-66基因编码的碳青霉烯酶对菌株的耐药表型有一定贡献意义,但仍有其他耐药机制参与到碳青霉烯酶耐药表型的贡献中。     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶及整合子分布

目的 了解耐亚胺培南鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶及整合子分布情况.方法 收集天津医科大学总医院2008年1月至2010年3月期间,103株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌临床标本.用Vitek-2系统鉴定细菌,并进行药敏试验,通过改良Hodge试验、改良三维试验和2-巯基丙酸协同试验初筛碳青霉烯酶,多重PCR同时检测4种OXA型碳青霉烯酶基因、2种金属酶基因及整合酶基因,对整合子可变区进行PCR检测及序列分析.结果 103株鲍曼不动杆菌中,改良Hodge试验检出碳青霉烯酶阳性75株(72.8%),改良三维试验检出产碳青霉烯酶菌株80株(77.7%),未检出产金属酶菌株.PCR检出blaOXA-51-like+bsaOXA-23-like+int11基因84株,blaOxA-51-like+blaOXA-23-like阳性5株,blaOXA-51-like+intll阳性8株,blaOXA-51-like+blaOXA-24-like阳性2株,仅blaOXA-51-like阳性4株,blaOXA-58-like、金属酶基因(IMP-1、VIM-2)及Ⅱ类整合酶基因(intI2)均阴性.89株(96.7%)Ⅰ类整合酶阳性株均扩增出可变区,检出2种耐药基因盒组合形式:aacA4-catB8-aadAl(2 300 bp)81株,aacCl-orfX-orfX-orfX'-aadAla(3 000 bp)8株.结论 鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药及多重耐药主要与其携带的OXA-23型碳青霉烯酶和Ⅰ类整合子有关.

Abstract：

Objective To investigate the carbapenemases and integrons in imipenem-resistant Acinetobacter baumannii. Methods One hundred and three Acinetobacter baumannii were collected from Janurary 2008 to March 2010 in Tianjin Medical University General Hospital. The identification of strains and antimicrobial susceptibility test were performed by using Vitek-2 compact automatic system. Isolates of imipenem-resistant A. baumannii were screened for carbapenemases by modified Hodge test, improved threedimensional test and 2-mercaptopropionic acid synergy test. Isolates were then subjected to the multiplex PCR targeting genes encoding for OXA type carbapenemases, metallo-β-lactamases (MBLs) and integrases. The variable regions of integrons were amplificated and sequenced. Results Among the 103 isolates, 75 (72. 8% ) demonstrated positive in the modified Hodge test, 80 (77.7%)were positive in the improved three-dimensional test. No MBLs was found in the 2-mercaptopropionic acid synergy test. Eightyfour isolates were positive for blaOXA-51-like, blaOXA-23-like, and intI1; five were positive for blaOXA-51-like and blaOXA-23-like ;eight were positive for blaOXA-51-like and int11 ;two were positive for blaOXA-51-like and blaOXA-24-like ;four were only found positive for blaOXA-51-like. The blaOXA-58-like, IMP-1, VIM-2 and intI2 genes were all negative. Eighty-nine(96. 7% )of the intI1 positive strains owned the variable region. Two different cassettes arrangements were identified within class 1 integrons:81 isolates harbored aacA4-catB8-aadAI (2 300 bp) and 8 harbored aacCl-orX-orfX-orX'-aadAla (3 000 bp ) . Conclusion The presence of OXA-23 carbapenermase and class Ⅰ integrons are correlated with Acinetobacter baumannii resistant to carbapenems and multi-drug resistance.     

肺炎患者痰液分离鲍曼不动杆菌耐药基因分析

目的:分析呼吸内科肺炎患者痰液分离鲍曼不动杆菌携带β-内酰胺酶基因及主动外排泵基因情况。方法:收集经生化鉴定为醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体的菌株160株,将鲍曼不动杆菌特异性片段(Ab-ITS)的二重PCR法确认为鲍曼不动杆菌者纳入研究。用PCR法检测鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶基因和主动外排泵基因,包括A类β-内酰胺酶(blaTEM、blaPER和blaCARB)、B类β-内酰胺酶(blaIMP和blaVIM)、C类β-内酰胺酶(blaADC和blaDHA)、D类β-内酰胺酶(blaOXA-23、blaOXA-24、blaOXA-51和blaOXA-58)和主动外排泵相关基因(adeB、adeJ、macB、emrB、emrA、abeS、abeM和craA)。以微量肉汤稀释法检测加入外排泵抑制剂羰基氰化氯苯腙(CCCP)前后,携带adeB基因鲍曼不动杆菌对亚胺培南的最低抑菌浓度(MIC)的变化。结果:临床分离160株醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体中鲍曼不动杆菌143株(占90%),包括亚胺培南耐药株119株(占83.2%)和敏感株24株(占16.8%)。所有鲍曼不动杆菌均检出blaOXA-51基因,其中,亚胺培南耐药株中检出blaOXA-23(98.3%)、blaTEM(41.4%)、blaADC(98.3%)和blaDHA(0.7%),blaPER、blaCARB、blaIMP、blaVIM、blaOXA-24和blaOXA-58均未检出;敏感株中未检出blaOXA-23。adeJ、macB、abeM和craA基因在143株鲍曼不动杆菌中的携带率均为100%;emrB、emrA和abeS基因携带率均超过80%。adeB基因在亚胺培南耐药株中检出117株(98.3%)。在CCCP干预试验中,携带adeB基因的鲍曼不动杆菌MIC50降低1/2。结论:呼吸内科鲍曼不动杆菌主要携带blaOXA-23和adeB主动外排泵基因,可能与亚胺培南耐药密切相关。     

临床分离广泛耐药鲍曼不动杆菌同源性分析及常见耐药基因检测

目的了解上海市同仁医院临床分离广泛耐药鲍曼不动杆菌的基因同源性及耐药机制,为广泛耐药鲍曼不动杆菌感染的防治提供依据。方法采用肠杆菌科基因间重复序列聚合酶链反应(ERIC-PCR)对临床分离的28株广泛耐药鲍曼不动杆菌进行分子生物学分型,采用PCR方法检测9种常见β内酰胺酶基因:blaKPC、blaIMP、blaVIM、blaNDM-1、blaOXA-23、blaOXA-24、blaOXA-48、blaOXA-51和blaOXA-58;膜孔蛋白基因CarO;插入序列ISAba1;以及ISAba1-OXA23、ISAba1-OXA58的连锁检测。结果 28株临床分离的广泛耐药鲍曼不动杆菌大多来自危重患者呼吸道标本,ERIC-PCR基因分型提示为同一来源克隆株;所有菌株均携带blaOXA-23、blaOXA-51基因,未检测出B类β内酰胺酶基因,以及blaOXA-24、blaOXA-48、blaOXA-58等基因;膜孔蛋白基因CarO和插入序列ISAba1检测均为阳性,ISAba1-OXA23、ISAba1-OXA58连锁检测均未扩增到预期条带。结论研究期间临床分离广泛耐药鲍曼不动杆菌为同一克隆株,且携带相同耐药基因,提示存在克隆传播。     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型及插入序列ISA ba1研究

目的：检测耐亚胺培南鲍曼不动杆菌的碳青霉烯酶基因型及其基因周围环境。 方法：对101株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌进行药物敏感试验,头孢他啶与2-巯基丙酸协同试验筛选金属酶,多重PCR同时检测6种碳青霉烯酶耐药基因,对部分阳性产物进行测序比对,同时分析碳青霉烯酶基因上游插入序列。 结果：协同试验未检出产金属酶菌株。所有菌株都携带OXA-51-like基因,87株（86.1%）OXA-23-like基因阳性,2株OXA-24-like基因阳性,OXA-58-like基因与金属酶基因全为阴性。85株OXA-23-like基因上游检测到插入序列ISA ba1,OXA-51-like基因上游未检测到ISA ba1。 结论：OXA-23和OXA-51组β-内酰胺酶基因是本组鲍曼不动杆菌最主要的碳青霉烯酶基因型,OXA-23组碳青霉烯酶基因与插入序列 ISA ba1关系密切。     

Emergence of carbapenem-resistant non-baumannii species of Acinetobacter harboring a blaOXA-51-like gene that is intrinsic to A. baumannii

The bla(OXA-51)-like gene, originally intrinsic to Acinetobacter baumannii, had been detected in two clones of Acinetobacter nosocomialis and one clone of Acinetobacter genomic species "Close to 13TU." These bla(OXA-51)-like genes, all preceded by ISAba1, were located on plasmids that might have originated with A. baumannii. The plasmid-borne ISAba1--bla(OXA-51)-like confers a high level of carbapenem resistance and affects the accuracy of using bla(OXA-51)-like detection as a tool for differentiating A. baumannii from other Acinetobacter species.     

多重耐药不动杆菌16S rRNA甲基化酶和同源性研究

目的 调查2007年7月-2008年5月山西医科大学第二附属医院临床分离的61株多重耐药不动杆菌中介导氨基糖苷类抗生素高水平耐药的16S rRNA甲基化酶基因和Ⅰ类整合子携带耐药基因的分布.方法 利用blaOXA-51基因及16S rRNA-23S rRNA序列进行菌株鉴定,琼脂稀释法测定12种抗菌药物对61株不动杆菌的MIC,PCR筛选6种16S rRNA甲基化酶基因以及整合子基因盒,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株同源性.结果 61株临床分离不动杆菌中55株为鲍曼不动杆菌、3株为3TU不动杆菌、l株13TU不动杆菌、1株醋酸钙不动杆菌、l株溶血不动杆菌.48株不动杆菌对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素均耐药,其中有47株检出armA基因;未检出rmtA、rmtB、rmtC、mad和npmA基因.armA基因阳性的菌株中Ⅰ类整合子阳性27株,分别携带arr-3、accA4、aacCl、catB8、aadA1和dfrA12基因.PFGE条带分析发现47株armA阳性菌株分为5个克隆,其中A、B为主要克隆,分布在我院多个科室中.结论 16S rRNA甲基化酶基因armA在多重耐药不动杆菌中广泛存在,armA基因不位于Ⅰ类整合子中,不动杆菌Ⅰ类整合子携带耐药基因主要介导对氨基糖苷类及氯霉素的耐药性.PFGE结果显示armA基因阳性菌株在我院呈克隆播散,必须采取有效的措施来控制耐药菌的传播.     

从携带多种耐药基因认识鲍曼不动杆菌多重耐药性

目的了解多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药基因和耐药性。方法用MIC法检测鲍曼不动杆菌的耐药性,用PCR方法检测各种耐药基因。结果2株菌对亚胺培南耐药,1株中介;所测菌均呈多重耐药性。23株菌均扩增到blaTEM和aacA4基因;22株菌检测到ampC基因,22株菌aacC1、aadA1基因为阳性,2株菌aphA1基因为阳性;2株菌blaPER基因为阳性,3株菌blaOXA-23型基因阳性。结论携带am-pC、blaPER、blaOXA-23、aacA4、aadA1等多种耐药基因是我院鲍曼不动杆菌多重耐药的主要原因。     

鲍曼不动杆菌OXA-23基因和ISAba1基因检测和耐药性关系

目的 了解鲍曼不动杆菌的耐药现状及OXA-23型碳青霉烯酶介导的耐药性。 方法 收集临床分离的200株鲍曼不动杆菌,用K-B(Kirby-Bauer)法进行常见药物的敏感性实验;通过PCR(polymerase chain reaction)扩增、克隆测序等分析OXA-23基因及ISAba1基因。 结果 温州医学院附属第一医院分离的200株鲍曼不动杆菌除对头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南、多粘菌素等保持相对较高的敏感性,对其余常见抗生素的耐药率均已超过了80%;200株鲍曼不动杆菌中共检到155株携带OXA-23基因,168株携带ISAba1基因。 结论 温州医学院附属第一医院鲍曼不动杆菌耐药情况严重,大多带有OXA-23基因,该基因编码的碳青霉烯酶应为其耐药的主要原因,ISAba1常伴随OXA-23型出现。