骨髓液促进鸡胚绒毛尿囊膜血管的生成

背景:生长因子能促进侧支血管的发育,且多种因子协同效果更为明显,骨髓液中富含多种生长因子.目的:观察血管内膜损伤后的骨髓液对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的作用.方法:受精蛋70枚在(37.5±0.5) ℃条件下孵育,第7天开窗,第8天将存活鸡胚随机分为生理盐水组、正常血清组、正常骨髓液组、损伤血清组、损伤骨髓液组以及血管内皮生成因子组,每组10枚,分别滴加5 μL兔正常血清、5 μL兔骨髓液、5 μL兔血管内膜损害血清、5 μL兔血管内膜损害骨髓液、5 μL生理盐水及0.3 μg 血管内皮生长因子进鸡胚绒毛尿囊膜中,连续3 d.数码相机拍照后平铺于载玻片上,计数鸡胚绒毛尿囊膜新生的血管数目.结果与结论:与正常血清组相比,正常骨髓液组、血管内膜损害血清组鸡胚绒毛尿囊膜新生的血管总数明显增多,大中血管明显增生;且血管内膜损害血清组大、中血管数更为明显增加.提示正常骨髓液具有明显的促进鸡胚绒毛尿囊膜模型血管生成的作用,其强度优于血管内皮生长因子;血管内膜损伤第7天的血清和骨髓液能够明显的促进鸡胚绒毛尿囊膜上的血管生成,其强度优于血管内皮生长因子组.     

骨髓液促进鸡胚绒毛尿囊膜血管的生成

背景：生长因子能促进侧支血管的发育,且多种因子协同效果更为明显,骨髓液中富含多种生长因子。目的：观察血管内膜损伤后的骨髓液对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的作用。方法：受精蛋70枚在（37.5±0.5）℃条件下孵育,第7天开窗,第8天将存活鸡胚随机分为生理盐水组、正常血清组、正常骨髓液组、损伤血清组、损伤骨髓液组以及血管内皮生成因子组,每组10枚,分别滴加5μL兔正常血清、5μL兔骨髓液、5μL兔血管内膜损害血清、5μL兔血管内膜损害骨髓液、5μL生理盐水及0.3μg血管内皮生长因子进鸡胚绒毛尿囊膜中,连续3d。数码相机拍照后平铺于载玻片上,计数鸡胚绒毛尿囊膜新生的血管数目。结果与结论：与正常血清组相比,正常骨髓液组、血管内膜损害血清组鸡胚绒毛尿囊膜新生的血管总数明显增多,大中血管明显增生;且血管内膜损害血清组大、中血管数更为明显增加。提示正常骨髓液具有明显的促进鸡胚绒毛尿囊膜模型血管生成的作用,其强度优于血管内皮生长因子;血管内膜损伤第7天的血清和骨髓液能够明显的促进鸡胚绒毛尿囊膜上的血管生成,其强度优于血管内皮生长因子组。     

鸡胚绒毛尿囊膜数字图像血管定量分析

目的:以生物医学工程的角度,研究基于数字图像处理技术的鸡胚绒毛尿囊膜图像血管自动分析方法,设计和研制专用实验检测系统. 方法:实验于2005-06/2007-06分别在上海理工大学医疗器械与食品学院中心实验室和上海中医药大学进行.根据鸡胚绒毛尿囊膜血管图像的特点,研究和开发了包括鸡胚绒毛尿囊膜血管数字图像背景褪色、血管增强、背景和血管定标、标尺校准、血管测量区域划分、血管面积及面积比参数测量等主要分析软件,以及相应的测量分析系统.通过实验检验分析方法和测量参数,并对分析系统进行改进.结果:建立了有效的鸡胚绒毛尿囊膜数字图像血管自动分析的方法和步骤,研制了专用的实验分析系统.通过药物实验对鸡胚绒毛尿囊膜血管图像进行了参数检测,获取了多组实验数据,并进行了统计分析.统计分析结果显示试验药物有抑制血管生长作用,且作用大小呈剂量依赖关系.结论:经实验证明基于数字图像处理技术的鸡胚绒毛尿囊膜图像血管自动分析方法能提供可靠的鸡胚绒毛尿囊膜模型定量分析数据,并且在分析速度、测量精度、数据重复性等方面均优于常规人工目测血管计数方法.     

血小板衍生膜微粒对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响

本研究探讨血小板衍生膜微粒(platelet-derived membrane microparticles,PMP)对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)新生血管形成的影响。用凝血酶激活血小板释放出PMP,再经高速离心分离出PMP,用流式细胞仪检定PMP,并用BCA法测定PMP的含量。将PMP接种于鸡胚绒毛尿囊膜上,观察PMP对CAM血管生成的影响。结果显示:当PMP的浓度为80μg/ml时,孵育72小时后混合纤维素滤膜周围可见到放射状密集生长的血管网,血管分支数为112.5±11.31,血管面积为(6.19±1.29)(,而在对照组无特异性密集血管生成,血管分支数为82.6±8.05,血管面积为1.78±0.33,二组比较有显著性差异(P<0.05);而与VEGF组比较,后者的血管分支数为128.4±10.02,血管面积为7.44±1.36,二组比较差异无显著性。结论:PMP对CAM新生血管的生成有促进作用。     

不同配伍生物膜对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响:寻求最佳组合方式

背景:如何使生长因子安全的在体内稳定持久的表达,并获得长期的促血管生成效应是亟待解决的问题,这就需要一个良好的药物缓释系统,即可控释的生物模拟系统.目的:探讨不同配伍的生物膜对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响,寻找最佳的组合方式.设计、时间及地点:生物材料学体外观察,于2008-06/2009-05在江苏省中医院中心实验室完成.材料:通过交联剂将肝素、中药与Ⅰ型胶原发生共价结合,然后rhVEGF165、碱性成纤维细胞生长因子与肝素发生生理性结合,将血管生成素1制成微球均匀植入生物膜内,即为实验所需生物膜.方法:将制备的生物膜置于正对观察窗的鸡胚绒毛尿囊膜表面的血管最少处,然后贴在鸡胚绒毛尿囊膜表面上,封口膜封闭假气室,继续孵育.实验组在给予生物膜基础上,依次加入0,10,50,100 ng碱性成纤维细胞生长因子,从中筛选出最显著促进鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的组合作为生物膜1;再依次加入100 μL丹参注射液、黄芪注射液、三七总甙注射液、川芎嗪注射液,同法筛选出生物膜2:再依次加入10,50 ng血管生成素Ⅰ,同法筛选出生物膜3作为实验最终结果.同时设立空白对照组,鸡胚绒毛尿囊膜表面未贴生物膜,仅加入PBS.加药7 d后取绒毛尿囊膜,拍摄给药部位,采用Image Pro Plus 5.0.2进行数据收集.主要观察指标:不同配伍的生物膜对血管新生面积的影响.结果:①与空白对照组比较,生物膜+0,10,50,100 ng碱性成纤维细胞生长因子各组新生血管面积均明显增加,其中生物膜+100 ng碱性成纤维细胞生长因子组增加幅度最高(P<0.01),为此将其选为生物膜1.②与生物膜1组比较,生物膜1+三七总甙注射液组、生物膜1+川芎嗪注射液组无明显变化,生物膜1+丹参注射液组、生物膜1+黄芪注射液组新生血管面积分别增加25.48%,63.21%(P均<0.01),因此将生物膜1+黄芪注射液组作为生物膜2的最佳组成.③与生物膜2组比较,生物膜2+10 ng血管生成素Ⅰ组新生血管面积无明显差异;生物膜2+50 ng血管生成素Ⅰ组新生血管面积增加21.49%(P<0.05),因此将其作为生物膜3.结论:在实验制备的生物膜基础上,加入100 ng碱性成纤维细胞生长因子、100μL黄芪注射液组、50 ng血管生成素Ⅰ的组合,具有明显促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的作用.     

地塞米松治疗子宫内膜异位症鸡胚尿囊膜模型的实验研究

目的:探讨地塞米松(dexamethasone,DEX)对子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)血管生成的抑制作用,为抗血管途径治疗EMs提供依据.方法:将EMs患者在位子宫内膜碎屑接种于8 d胚龄的鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)上,建立子宫内膜异位症鸡胚尿囊膜模型(EMsCAM).分别设定接种组、接种治疗组(DEX)和空白组.利用Image-Pro Plus 6.0软件,定量血管新生面积、蛋壳开窗处对应的CAM面积,计算出血管新生面积与CAM面积的比值.结果:接种组CAM血管生成反应明显增强,血管面积比(VA/CAM)明显大于空白组;接种治疗组VA/CAM明显小于接种组.结论:EMs在位子宫内膜能明显促进CAM的血管生成,为EMs异位种植和存活理论的研究提供一个理论依据.地塞米松能显著抑制异住病灶的血管形成,是抗血管途径治疗EMs的有效策略之一.     

鸡胚背根神经节神经元移植于鸡胚绒毛尿囊膜层的培养

目的 建立一种易于观察、取材方便、价格低、实验周期短、经济实用的鸡胚背根神经节神经元的干细胞鸡胚内培养方法.方法 摘取孵化13～15 d间鸡胚的背根神经节,经胰蛋白酶消化分离等方法获得纯化的神经元,将其移植于鸡胚绒毛尿囊膜层后,继续培养.结果 在适宜的环境中,鸡胚背根神经节神经元在于细胞鸡胚的绒毛尿囊膜层生长良好.结论 鸡胚背根神经节神经元能在干细胞鸡胚的绒毛尿囊膜层生长、分化及再聚集并发育成正常神经网络组织.     

吸湿链霉菌A-125对肿瘤血管生长因子抑制作用的研究

目的 :探讨吸湿链霉菌A 1 2 5发酵提取物对肿瘤血管生长因子抑制作用的研究。方法 :采用发酵方法从吸湿链霉菌A 1 2 5中提取肿瘤血管生长因子抑制剂 ,点样于接种肿瘤血管生长因子的鸡胚绒毛尿囊膜上 ,分为 1 0 0 μg、2 0 0 μg、40 0 μg及对照组 ,置 37℃CO2 培养箱中 ,48h后观察结果。结果 :吸湿链霉菌A 1 2 5发酵提取物在 2 70nm紫外有最大吸收 ,它溶于有机溶剂 ,不溶于水。鸡胚绒毛尿囊膜实验显示 :低剂量 1 0 0 μg组使肿瘤血管生长略有抑制 ,中剂量 2 0 0 μg组肿瘤血管生长受到明显抑制 ,高剂量 40 0 μg组肿瘤血管出现坏死。结论 :吸湿链霉菌A 1 2 5发酵提取物能显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜中的肿瘤血管生长 ,并随剂量增加对肿瘤血管生长因子的抑制作用而增强 ,直至肿瘤血管坏死。且具有很强的抗血管生成活性 ,故吸湿链霉菌A 1 2 5发酵提取物将是很好的肿瘤血管生长因子抑制剂。     

黄芪、脉络宁注射液载入修饰胶原对鸡胚尿囊膜血管新生的协同促进作用

背景:课题组先期研究发现黄芪载入修饰后胶原可以促进血管新生,与生长因子载入疗效相当,运用中医理论中具有协同作用的中药合用是否能进一步提高疗效尚不清楚.目的:探查黄芪、脉络宁载入修饰后胶原促鸡胚尿囊膜血管新生及长入胶原的疗效,并证明黄芪与脉络宁是否有协同作用.方法:实验分空白组、控制组(单纯胶原)、黄芪组(黄芪注射液1 mL载入胶原)、脉络宁组(脉络宁注射液1 mL载入胶原)、黄芪+脉络宁组(黄芪注射液及脉络宁注射液各0.5 mL载入胶原),各组植入鸡胚尿囊膜孵化7 d后取出,测定鸡胚尿囊膜内微血管数、各组胶原内微血管数、血红蛋白含量、rhVEGF165阳性细胞数.结果与结论:各实验组鸡胚尿囊膜内血管呈轮辐状生长及鸡胚尿囊膜包裹标本率高于空白组与控制组,鸡胚尿囊膜内微血管数、胶原内微血管数、血红蛋白含量、rhVEGF165阳性细胞数均高于控制组,差异有显著性意义(P < 0.01);其中黄芪+脉络宁组又高于黄芪组与脉络宁组,差异有显著性意义(P < 0.05).提示黄芪、脉络宁载入胶原后可以促进鸡胚尿囊膜内血管新生并刺激血管长入胶原内,黄芪与脉络宁合用具有协同作用,机制之一为刺激血管内皮细胞血管内皮生长因子的表达.     

吸湿链霉菌A—125对肿瘤血管生长因子和抑制作用的研究

目的：探讨吸湿链霉菌A－125发酵提取物对肿瘤血管生长因子抑制作用的研究，方法：采用发酵方法从吸湿链霉菌A－125中提取肿瘤血管生长因子抑剂，点样于接种肿瘤血管生长因子的鸡胚绒毛尿囊膜上，分别100μg,200μg，400μg及对照组，置37℃CO2培养箱中，48h后观察结果。结果：吸湿链霉菌A－125发酵提取物在270nm紫外有最大吸收，它溶于有机溶剂，不溶于于。鸡胚绒毛尿囊膜实验显示，低剂量100μg组使肿瘤血管略有抑制，中剂量200μg组肿瘤血管生长 受到明显抑制，高剂量400μg组肿瘤血管出现坏死。结论：吸湿链霉菌A－125发酵提取物能显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜中的肿瘤血管生长，并随剂量增加对肿瘤血管生长因子的抑制作用而增强，直至肿瘤血管坏死，且具有很强的抗血管生成活性，故吸湿链霉菌A－125发酵提取物将是很好的肿瘤血管生长因子抑制剂。