脊髓缺血再灌注损伤中热休克蛋白表达的研究

目的：研究脊髓缺血再灌注损伤（SCⅡ）后热休克蛋白（HSP70）表达的变化。方法：制作SCⅡ动物模型，采用光镜，激光多普勒超声，免疫组化等技术，研究SCⅡ后HSP70表达的变化。结果：（1）缺血30min，血灌流量平均下降85．37％，再灌流即刻血灌流量迅速升高，再灌流10min左右达到最高点，再灌流30min，血灌流量基本恢复到缺血前的基线水平，以后逐渐降低。（2）缺血后部分大鼠再灌注后出现“二次瘫痪”现象。（3）脊髓缺血30min再灌注60min后即有HSP70的表达增强，随着再灌注时间的延长，HSP70表达逐渐增多，在再灌注240min达到高峰，此后，HSP70表达逐渐减少，在再灌注24h基本消失，结论：（1）脊髓缺血一定时间后恢复血液供应，可以发生再灌注损伤。（2）脊髓缺血灌注后HSP70的表达增加。     

脊髓缺血再灌注损伤中即早基因表达及细胞凋亡的研究

目的细胞凋亡是受一些基因控制的,很多因素可激活这些基因而导致细胞凋亡。研究脊髓缺血再灌注损伤(SCII)后即早基因(c-fos、c-jun)表达的变化和细胞凋亡。方法制作SCII动物模型,采用光镜、荧光显微镜、激光多普勒超声、免疫组化等技术,研究SCII后即早基因(c-fos、c-jun)表达的变化和细胞凋亡。结果缺血30min,血灌流量平均下降85.37%,再灌流即刻血灌流量迅速升高,再灌流10min左右达到最高点。再灌流30min,血灌流量基本恢复到缺血前的基线水平,以后逐渐降低。缺血的部分再灌注后出现“二次瘫痪”现象。荧光染色发现缺血再灌注后脊髓神经细胞有凋亡的形态学改变:如核固缩、边聚等。实验组动物脊髓神经细胞核中出现棕色c-fos和c-jun的阳性表达产物,对照组仅有轻微c-fos和c-jun表达。结论脊髓缺血一定时间后恢复血液供应,可以发生再灌注损伤。脊髓缺血再灌注后c-fos和c-jun的表达均增加,而且在SCII后细胞死亡以凋亡为主,c-fos和c-jun可能参与了I/R损伤诱导的神经细胞凋亡。     

脊髓缺血再灌注损伤中即早基因表达及细胞凋亡的研究

目的 细胞凋亡是受一些基因控制的。很多因素可激活这些基因而导致细胞凋亡。研究脊髓缺血再灌注损伤(SCⅡ)后即早基因(c-fos、c-jun)表达的变化和细胞凋亡。方法 制作SCⅡ动物模塑，采用光镜、荧光显微镜、激光多普勒超声、免疫组化等技术，研究SCⅡ后即早基因(c-fos、c-jun)表达的变化和细胞凋亡。结果 缺血30min，血灌流量平均下降85．37％，再灌流即刻血灌流量迅速升高，再灌流10min左右达到最高点。再灌流30min，血灌流量基本恢复到缺血前的基线水平。以后逐渐降低。缺血的部分再灌注后出现“二次瘫痪”现象。荧光染色发现缺血再灌注后脊髓神经细胞有凋亡的形态学改变：如核固缩、边聚等。实验组动物脊髓神经细胞核中出现棕色c-fos和c-jun的阳性表达产物，对照组仅有轻微c-fos和c-jun表达。结论 脊髓缺血一定时间后恢复血液供应，可以发生再灌注损伤。脊髓缺血再灌注后c-fos和c-jun的表达均增加，而且在SCⅡ后细胞死亡以凋亡为主，c-fos和c-jun可能参与了I／R损伤诱导的神经细胞凋亡。     

人参皂苷Rg1对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的探索人参皂苷Rg1对于大鼠脊髓缺血再灌注损伤(SCII)后细胞凋亡的影响。方法成年健康Sprague-Dawley大鼠48只,随机分为假手术组(n=8)、缺血组(n=8)、再灌注组(n=16只)和药物组(n=16)。假手术组仅安放球囊不阻断血流;缺血组脊髓缺血30 min;药物组大鼠分别于脊髓缺血前30 min及术后腹腔注射人参皂苷Rg1 30 mg/kg;再灌注组与药物组相同时间点注射相同体积生理盐水。假手术组、缺血组于缺血后30 min,药物组和再灌注组于再灌注后6 h及24 h应用HE染色检测细胞形态改变,应用免疫组织化学染色检测Bcl-2及survivin表达。结果缺血组、再灌注组及药物组HE染色均有神经元损伤,药物组损伤较其他两组明显减轻。缺血组、再灌注组和药物组survivin、Bcl-2阳性细胞明显高于假手术组(t3.896,P0.01)。药物组6 h、24 h survivin及Bcl-2蛋白阳性细胞均较再灌注组显著增加(t6.693,P0.001)。结论人参皂苷Rg1可减少早期大鼠SCII后神经元损害,增加抗凋亡蛋白survivin、Bcl-2的表达,抑制凋亡。     

缺血预处理对肝硬化大鼠肝脏缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的探讨缺血预处理(IP)对硬化肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制。方法Wistar雄性大鼠制成肝硬化模型。分两组:IP组离断肝周韧带,消除侧枝循环,用Pringle's法阻断肝门15min,然后恢复血供,关腹;C组只予以开、关腹。48 h后,再次Pringle's法阻断肝门30 min,恢复血供。用Western blotting法测IP后6、24、48 h肝组织中热休克蛋白70(HSP70)表达的水平;测再灌注1、3 h血清生化酶(ALT、AST、LDH)及再灌注3h肝组织中谷胱苷肽(GSH)水平;行病理学观察。结果IP后6 h,两组均有微量HSP70表达,至24-48hIP组HSP70表达显著增强,呈高水平;而C组中在各时点HSP70均无表达增强。再灌注1h,IP组的ALT、AST、LDH水平显著低于C组(P<0.01或P<0.05);再灌注3h,IP组的ALT、AST水平明显低于C组(P<0.01)而其肝组织中的GSH水平明显高于C组(P<0.05)。术后一周生存率IP组(93.10%)明显高于C组(73.33%)(P<0.05)。缺血再灌注后1、3h,IP组的肝细胞损伤明显轻于C组。结论在硬化大鼠肝脏中,IP启动内源性保护机制,诱导HSP70的大量表达,而HSP70通过增加或提高GSH的产生及其活性,清除自由基,减轻硬化肝脏缺血再灌注损伤。     

在体大鼠心肌缺血时间对再灌注损伤形成的影响

目的观察在体大鼠心肌缺血不同时间后再灌注120 min的心肌酶学与超微结构变化,评价缺血时间对再灌注损伤形成的影响。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支(LAD)15 min、30 min、60 min,以及分别再灌注120 min,造成心肌缺血和缺血/再灌注。自腹主动脉取血检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、天门冬酸氨基转移酶(AST),采用透射电镜观察心肌细胞超微结构变化。结果单纯缺血15 min及缺血15 min再灌注120 min心肌损伤不明显,两组血清心肌酶无显著性变化。单纯缺血30 min心肌损伤明显,缺血30 min再灌注120 min心肌损伤更为严重,心肌酶漏出均增多,两组之间有显著性差异(P0.05)。单纯缺血60 min与缺血60 min再灌注120 min心肌损伤最重,心肌酶漏出均增多,但两组间无显著差异(P0.05)。结论缺血时间过短或过长,恢复血供后都不会形成再灌注损伤,缺血30 min再灌注120 min可形成典型心肌缺血再灌注损伤。     

实验性脊髓分级缺血再灌注损伤的行为学变化分析

目的:观察脊髓分级缺血再灌注损伤与行为学变化的关系.方法:40只新西兰大白兔随机分为假手术组、缺血30min组、缺血45min组和缺血60min组,每组10条.采用肾下腹主动脉阻断法,建立脊髓缺血再灌注损伤模型.手术后联合采用Reuters法、Jacobs法和Rivlin法对后肢感觉、运动、和反射功能综合评估.术后第2天HE染色观察腰髓病理学改变.结果:阻断腹主动脉血流30、45,60min后开放表现出轻、中、重不同程度缺血再灌注损伤脊髓的病理变化特点.脊髓轻度缺血再灌注损伤后神经功能评分恢复良好且迅速;脊髓中度缺血再灌注损伤后神经功能评分恢复缓慢且不能完全恢复;脊髓重度缺血再灌注损伤后神经功能评分不能够恢复至术前水平.结论:联合采用Reuters法、Jacobs法和Rivlin法能够准确地反映脊髓分级缺血再灌注损伤后行为学变化.     

人参皂苷Rb1通过减轻线粒体损伤对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察人参皂甙Rb1预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后的干预效果,探讨人参皂甙Rb1对抗脊髓缺血再灌注损伤可能的线粒体干预机制。方法构建大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组(n=12)、缺血再灌注损伤组(SCII组,n=12)和人参皂甙Rb1药物组(药物组,n=48),药物组(n=48)又分为10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg、80 mg/kg四个亚组,每组12只,术前30 min及术后每天,腹腔注射相应剂量人参皂甙Rb1。各组于损伤后48 h行大鼠后肢神经功能评分;分别检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;取脊髓组织检测SOD、MDA含量以及细胞色素C氧化酶(COX)活性。结果与SCII组比较,药物组BBB评分升高(P0.05),血清及脊髓组织SOD含量升高,MDA含量减少,脊髓组织COX活性升高(P0.05);且呈剂量依赖性,但40 mg/kg与80 mg/kg之间无明显变化。结论人参皂甙Rb1可以通过抑制线粒体损伤,减轻大鼠脊髓缺血再灌注损伤后的氧化应激,且在10~40 mg/kg范围呈剂量依赖性。     

高氧液对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用及对HSP90表达的影响

目的：寻找新的防止脊髓缺血损伤致瘫痪的手段，研究高氧液对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用及对热休克蛋白90(heat shock protein HSP90)表达的影响。方法：雄性新西兰大白兔20只，随机分成对照组(n=10)及高氧液组(n=10)。夹闭腹主动脉肾下段20min，建立兔脊髓缺血模型。高氧液组于缺血前20min持续以20mL／(kg&;#183;h)恒速静脉输入高氧液，直到再灌注后20min；对照组则采用同种方法静脉输入等容量生理盐水。再灌注后4，8，12，24和48h分别对动物后肢运动功能评分。再灌注48h后，处死动物取脊髓(Ls)，石蜡包埋切片行组织病理学观察及免疫组织化学染色，并按照McCarthy等的方法对免疫组化染色结果进行分析。结果：高氧液组神经功能评分在各时间点均明显高于对照组(P&;lt;0．05)；与对照组相比，高氧液组脊髓前角正常神经细胞数明显增多(P&;lt;0．01)，HSP90的表达高氧液组明显多于对照组(P&;lt;0．01)。结论：高氧液对兔脊髓缺血再灌注损伤有显著的保护作用，这种保护机制与脊髓缺血后皮质HSP90表达上调有关。     

脊髓缺血再灌注损伤中血流量变化与组织病理学相关性研究

目的探讨缺血再灌注脊髓损伤（SCIfR）中的脊髓血流量（SCBF）与组织病理学变化规律相关性。方法阻断兔腹主动脉法制备腰段脊髓IR模型,实验组根据SCI／R时间段分为假手术组、缺检查。结果在缺血30min组腰髓局部血灌注量迅速下降至基线值的-77．51％（P=2．01E-17）,有明确病理学改变。再灌注初始,局部血流迅速增高并超过基线水平,随后逐渐降低,再灌注1h后局部血灌注基本恢复基线水平（3．7％P值=0．437899）,以后血流量低于基线水平,出现缺血后延迟低灌注;直至再灌注4h（-23．5％,P值=1．34E-3）,低灌注保持相对稳定,血流未见恢复,病理学改变明显进一步加重。结论研究表明SCI／R血流动力学变化与组织病理学改变程度具有时间依从性,组织延迟性低灌注损伤是SCIfR重要病理学特点,为脊髓继发性损伤提供了理论依据。     

一氧化氮在脊髓损伤中改善血供与加重损伤的双重相关性研究

目的探讨一氧化氮(NO)在继发性脊髓损伤中的作用。方法通过伤前30min大鼠蛛网膜下腔注射NO合成酶底物左旋精氨酸(L-Arg)及其抑制剂(L-NAME),采用激光多普勒血流仪观测NO对伤段脊髓血流(SCBF)的影响,并评估NO对继发性脊髓损伤的作用。结果L-Arg改善了伤段SCBF,但加重了脊髓损伤。适当剂量的L-NAME降低了早期的SCBF,却改善了神经功能。然而大剂量的L-NAME由于长时间的抑制了NO的产生,导致了脊髓长时间的缺血,不利于神经功能的恢复。结论NO的过度释放加重了继发性脊髓损伤,而过度抑制也同样不利于神经功能的恢复。     

ICAM-1在脊髓缺血再灌注损伤后表达变化及意义

目的　探讨细胞间粘附分子 1在大鼠脊髓缺血再灌注损伤后表达变化及其意义。方法　采用Zivin法建立脊髓缺血再灌注损伤模型。以GAPDH为内参照物 ,应用半定量RT PCR方法、免疫组化及免疫荧光激光共聚焦显微镜定性、定量测定脊髓微血管内皮细胞表面ICAM 1mRNA表达变化。结果　正常脊髓微血管内皮细胞表面仅有微量的ICAM 1表达 ,单纯缺血不引起ICAM 1表达。再灌注后损伤区ICAM 1表达发生了改变 ;再灌注 4h ,ICAM 1mRNA表达量明显升高 ,再灌注 12h其在单位微血管面积上的荧光强度约比单纯缺血组增加了 1 2。提示脊髓损伤后微血管内皮细胞初始ICAM 1表达增加是由再灌注损伤激发 ,其后延迟递增表达增强 ,说明ICAM 1参与了脊髓再灌注损伤的炎症病理过程。结论　ICAM 1可做为脊髓I R后炎症反应程度的监测指标。     

远程预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用(英文)

目的:探讨远程预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用。方法:20只成年雄性新西兰大白兔随机分成2组(各组n=10),即对照组和远程预处理(RPC)组。所有动物脊髓缺血前1h戊巴比妥钠麻醉动物(30mg/kg,iv)。RPC组动物麻醉后进行双后肢短暂缺血2次(充气式压力止血带环扎双后肢,压力26.6kPa,阻断10min,松开10min,再阻断10min),最后一次缺血后再灌注30min,阻闭肾下腹主动脉20min,制作兔脊髓缺血模型。对照组动物不进行双后肢短暂缺血,其余同RPC组。再灌注后4,8,12,24和48h分别对动物后肢运动功能评分。再灌注48h后,处死动物取脊髓(L5～7),石蜡包埋切片行组织病理学观察。结果:RPC组神经功能评分在各时间点均明显高于对照组(P=0.000);与对照组相比,RPC组脊髓前角正常神经细胞数明显增多(P=0.000),且神经功能评分与脊髓前角正常神经细胞计数之间有显著相关性(r=0.868,P<0.01)。结论:远程预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤有显著的保护作用。     

硫酸镁对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护

背景硫酸镁用于脑缺血再灌注损伤的治疗已取得了较满意的疗效,但对脊髓缺血再灌注损伤的作用机制尚不十分清楚.目的观察硫酸镁对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护效果,进一步探讨其作用机制.设计以实验动物为研究对象,随机对照的重复测量设计.单位一所大学医学院中心实验室.对象实验于2003-04/2004-06在西安交通大学医学院中心实验室完成.健康成年新西兰大白兔27只,体质量1.9～2.5 kg.随机抽签法分为硫酸镁组、生理盐水组和假手术组,每组9只.方法夹闭腹主动脉肾下段30min后恢复血流再灌注48 h,建立兔脊髓腰骶段缺血模型.硫酸镁组给予静脉灌注硫酸镁(0.25 mL/kg·h),生理盐水组用等量生理盐水代替.假手术组仅行中线剖腹术,不结扎动脉.在缺血前,缺血30 min及再灌注后1,2,8,16,24 h对动物行体感诱发电位监测,再灌注24及48 h后对硫酸镁组、生理盐水组动物行运动功能评分.再灌注后48 h处死动物,对脊髓行组织病理学检查.主要观察指标①运动功能评分.②体感诱发电位监测.③脊髓组织病理学检查.结果缺血30 min时硫酸镁组体感诱发电位(N1)潜伏期明显延长;再灌注后前2 h潜伏期较缺血时明显恢复,其后又显著延长.缺血30 min时生理盐水组波形消失.假手术组体感诱发电位没有明显变化,动物均完全康复.硫酸镁组各时间点潜伏期恢复均明显高于生理盐水组(P＜0.05);再灌注24和48 h后,硫酸镁组的神经功能评分分别为(3.7±0.5)和(3.4±0.7)分,均显著高于生理盐水组[(3.0±0.7)和(2.6±0.9)分](P＜0.05);再灌注48 h后硫酸镁组的脊髓前角正常神经细胞计数显著高于生理盐水组(23.4±3.4,12.3±3.2,P＜0.01).结论硫酸镁具有减轻兔脊髓缺血再灌注损伤及保护神经功能的作用.     

高压氧对家兔急性脊髓缺血再灌注损伤的保护作用

目的　通过建立兔脊髓缺血再灌注损伤模型观察其组织病理学、生化指标及影像学变化,探讨脊髓缺血再灌注损伤机制。在此基础上研究高压氧对脊髓缺血损伤的保护作用。方法　采用夹闭法制备家兔急性脊髓缺血再灌注损伤模型,测定脊髓缺血４０ 分钟及再灌注后脂质过氧化物（ＬＰＯ）含量以及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ） 活性,并观察神经功能缺失程度及组织病理学变化,同时观察腰（Ｌ４）为中心脊髓磁共振扫描（ＭＲＩ）的变化。结果　脊髓缺血４０ 分钟后所有动物均出现双后肢瘫痪,肌力为２ 级,再灌注后动物神经功能有不同程度的恢复;缺血后脊髓组织ＬＰＯ 含量明显升高,ＳＯＤ活性下降,与正常对照及假手术组相比差异有显著性（ Ｐ＜０ ．０５）,再灌注后ＬＰＯ 含量有所下降,直至２４ 小时恢复正常,ＳＯＤ 则在再灌注２～６ 小时活性进一步降低,至２４ 小时恢复正常水平。组织病理学显示缺血后即有明确的病理改变,再灌注后这种改变更为严重;ＭＲＩ显示脊髓缺血后Ｔ２ 加权像有明确的异常高信号;ＨＢＯ 治疗组与缺血再灌注６ 小时对照组相比较,ＬＰＯ含量下降,ＳＯＤ活性增强,差异有显著性（ Ｐ＜０ ．０５）。结论　脂质过氧化是脊髓缺血再灌注损伤的主要机制,高压氧治疗可增强自由基清除     

东莨菪碱和氯胺酮预防主动脉阻断所致脊髓缺血性损伤

目的评价东莨菪碱和氯胺酮对主动脉阻断所致脊髓缺血性损伤保护作用.方法28只新西兰大白兔随机数字表法分成对照组、东莨菪碱组、氯胺酮组、东莨菪碱+氯胺酮组.每组肾下主动脉阻断30min,动态监测脊髓血流量(SCBF)、后肢运动功能、组织水含量及组织学改变.结果再灌注20 h,后肢运动功能东莨菪碱+氯胺酮组优于对照组(t=5.36,P＜0.05),脊髓水含量东莨菪碱+氯胺酮组比对照组减少10.5%(t=4 01,P＜0.01),组织学改变东莨菪碱+氯胺酮组最轻,对照组最严重.阻断中及开放2 h东莨菪碱+氯胺酮组SCBF比值较对照组显著增加.结论东莨菪碱和氯胺酮联合应用比单独应用能更有效地预防脊髓缺血性损伤.     

Pretreament with repeated electroacupuncture induced neuroprotection against spinal cord ischemiareperfusion injury in rabbits

AIM:To investigate whether pretreatment with repeated electroacupuncture (EA) could induce ischemic tolerance against transient spinal cord ischemia in rabbits.METHODS:24male New Zealand white rabbits were randomly assigned to 3 groups(n=8 each),animals in the control group received no treatment;animals in the SP and EA group received sodium pentobarbitone 30mg/kg each day for 5 days;animals in EA group were also received electroacupuncture at the Zusanli acupoint 30min a day for 5days.24hours after the last treatment,spinal cord ischemia was induced by an infrarenal aortic occlusion for 20min.Hind-limb motor function was determined with the Tarlov criteria at 4,8,12,24 and 48h after reperfusion.All animals were sacrificed at 48h after reperfusion and the spinal cords(I5) were remoed immediately for histopathologic study.RESULTS:The neurologic outcome and histopathology(48h) in the EA group were significantly better than the control group(P=0.006).CONCLUSION:Pre-ischemic treatment with electroacupuncture significantly reduces spinal cord ischemia-reperfusion injury in rabbits.     

重复电针预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用

AIM: To investigate whether pretnatment with repeated electroacupuncture (EA) could induce ischemic tolerance against transient spinal cord ischemia in rabbits. METHODS: 24 male New Zealand white rabbits were randomly assigned to 3 groups(n = 8 each), animals in the control group received no treatment; animals in the SP and EA group received sodium pentobarbitone 30 mg/kg each day for 5 days; animals in EA group were also received electroacupuncture at the Zusanli acupoint 30 min a day for 5 days. 24 hours after the last treatment, spinal cord ischemia was induced by an infrarenal aortic occlusion for 20 min. Hind-limb motor function was determined with the Tarlov criteria at 4,8,12,24 and 48 h after reperfusion. All animals were sacrificed at 48h after reperfusion and the spinal cords(L5) were removed immediately for histopathologic study. RESULTS: The neurologic outcome and histopathology (48 h) in the EA group were significantly better than the control group( P = 0. 006) . CONCLUSION: Pre-ischemic tr