干扰素-α对 U937细胞的促凋亡和抗增殖作用及其机制

为了研究干扰素α对白血病细胞U937细胞的抗增殖作用及其机制，用不同浓度的干扰素仪（500U／L、1000U／L、2000U／L、3000U／L、4000U／L）对U937细胞作用不同时间（0、12、24、36和48小时），用MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率，RT-PCR方法分析cyclin E mRNA的表达。结果表明：不同浓度的干扰素α处理细胞后，U937细胞生长明显受抑，2000U／L干扰素α能引起细胞凋亡，凋亡率为25．28％-70．54％（P〈0.01），细胞周期相关基因cyclin E mRNA表达降低；干扰素α对U937细胞的抑制率，呈浓度-时间依赖性。结论：干扰素α对U937细胞有明显抗增殖和促凋亡作用，此结果将为干扰素-α在白血病临床治疗方面的应用提供有力的实验证据。     

干扰素与细胞凋亡

干扰素是细胞因子中的一个家簇,具有重要的生物学功能。近年来,许多文献报道了干扰素与细胞凋亡之间的关系。本文就干扰素诱导或抑制细胞凋亡,及其对凋亡的影响机制作一综述。     

干扰素-α对U937細胞的促凋亡和抗增殖作用及其机制

为了研究干扰素α对白血病细胞U937細胞的抗增殖作用及其机制,用不同浓度的干扰素α(500U/L、1000U/L、2000U/L、3000U/L、4000U/L)对U937細胞作用不同时间(0、12、24、36和48小时),用MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,RT-PCR方法分析cyclinEmRNA的表达。结果表明:不同浓度的干扰素α处理细胞后,U937细胞生长明显受抑,2000U/L干扰素α能引起细胞凋亡,凋亡率为25.28%-70.54%(P<0.01),细胞周期相关基因cyclinEmRNA表达降低;干扰素α对U937细胞的抑制率,呈浓度-时间依赖性。结论:干扰素α对U937细胞有明显抗增殖和促凋亡作用,此结果将为干扰素-α在白血病临床治疗方面的应用提供有力的实验证据。     

干扰素α-2b对HL-60细胞抑增殖与促凋亡的影响

为了研究干扰素α-2b （IFNα-2b）对HL-60细胞增殖与凋亡的影响，采用瑞氏染色观察HL-60细胞的形态变化．吖啶橙／溴化乙锭双染色观察细胞凋亡，通过CDl3测定观察细胞膜抗原表达及成熟分化，MTT实验观察增殖活性。结果显示：加入IFNα-2b 48小时后，HL-60细胞凋亡率升高，增殖活性下降，而且随着IFNα-2b浓度的升高，抑制作用更加明显。CD13表达逐渐下降，细胞形态逐渐向成熟转化。结论：IFNα-2b能促进HL-60细胞凋亡、抑制HL-60细胞增殖和促进分化成熟。     

IFI6的研究现状

干扰素诱导蛋白6(interferon,alpha-inducible protein6,IFI6)是一个能被Ⅰ型干扰素诱导上调的干扰素刺激基因(interferon stimulate gene,ISG)之一。近年来发现IFI6在抗病毒、抗凋亡和促肿瘤等多个生物学功能发挥重要作用,在多种恶性肿瘤,病毒相关性疾病和自身免疫性疾病中高表达。IFI6与细胞色素C共定位于线粒体,能够抑制细胞色素C释放,起着抵抗细胞凋亡作用,对肿瘤的放化疗效果有一定的影响。本文就IFI6的研究现状作一简要综述。     

破骨细胞分化相关因子在骨巨细胞瘤内的表达及其作用

目的:明确肿瘤坏死因子超家族成员在骨巨细胞瘤的表达及对其肿瘤细胞的作用,同时观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体联合干扰素γ作用于骨巨细胞瘤肿瘤细胞的效果。方法:实验于2005-01/2006-08在解放军总医院骨科研究所完成。①用免疫组织化学染色方法检测肿瘤坏死因子超家族成员核因子κB受体激活因子配基、核因子κB受体激活因子、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体、死亡受体4、死亡受体5、骨保护素等因子的表达。②骨保护素、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体、干扰素γ分别以不同的浓度作用于培养的骨巨细胞瘤肿瘤细胞24h;随后用干扰素γ(1000 U/mL)先诱导24h再加入肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(100,200μg/L)作用于细胞24h,用CCK-8方法来检测细胞存活率。③选取在药物合理浓度范围内有明显抑制作用的用药方式所作用的细胞,用流式细胞仪检测其凋亡率,倒置显微镜下观察细胞药物作用后的形态学改变。结果:①破骨细胞分化相关因子在细胞和组织水平的表达:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体、骨保护素、核因子κB受体激活因子配基在骨巨细胞瘤所有细胞成分内均有表达,死亡受体4,死亡受体5在多核巨细胞内强阳性表达,在梭型单核细胞表达强度较弱,部分标本内死亡受体4呈阴性表达。核因子κB受体激活因子仅在多核巨细胞内强阳性表达。②CCK-8检测药物作用后细胞抑制作用:骨保护素对肿瘤细胞无抑制作用,肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体仅在较高浓度时对肿瘤细胞有弱的抑制作用,干扰素γ对巨细胞瘤细胞抑制作用有浓度依赖性,当先以干扰素γ(1000 U/mL)诱导24h再加入肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(100,200μg/L)共同作用24h,细胞存活率明显下降。③凋亡分析:流式细胞检测发现干扰素γ(1000 U/mL)诱导24h再联合不同浓度肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(100,200μg/L)作用后,凋亡率分别为(39.94±2.87)%,(48.32±3.33)%,倒置显微镜观察也可见明显的细胞抑制表现。结论:干扰素γ与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体序贯用药后在各自合理用药浓度范围内对骨巨细胞瘤肿瘤细胞的凋亡作用明显增强,为骨巨细胞瘤的治疗提供了一种全新的选择。     

X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子的克隆及其转录活性检测

目的：X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1能够诱导半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3凋亡，其具体转录调控机制尚不十分清楚。克隆X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1基因启动子，检测干扰素对其转录活性的影响。 方法：实验于2006—05／2007—07在香港大学分子生物学研究所和洛阳华美生物工程公司完成。①材料：结肠癌细胞株Lovo和Swl116来自美国American Type Culture Col-lection。pGL3 basic载体，内参照pRL-CMV载体和Dual-luciferase reporter Kit，T4DNA连接酶，限制性内切酶KpnI和XhoI均由Promega公司提供。②实验方法：采用PCR法扩增获得X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1基因的启动子片段，将之定向克隆到含荧光素酶报告基因的pGL3 basic载体上，获得的报告基因质粒命名为pLUC107，瞬时转染Lovo和Swl116细胞株，经α-干扰素刺激处理，启动子转录活性用荧光素酶相对表达活性表示。 结果：①PCR扩增结果：在预期的271bp处出现清晰DNA片段，无非特异扩增现象，证明其为X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子的PCR扩增产物。②重组质粒的酶切鉴定及测序：重组质粒pLUC107双酶切后可见约为271bp的DNA片段，与理论值相一致。DNA测序证实含X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子荧光素酶报告基因质粒构建成功。③干扰素对X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子转录活性的影响：与未经α-干扰素处理的含pLUC107的Lovo和Swl116细胞的荧光素酶相对活性值比较，经α-干扰素处理后两种细胞的荧光素酶相对活性值均明显升高（P均〈0．05），且升高幅度与α-干扰紊呈剂量依赖性。 结论：成功克隆出X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1基因启动子片段，并利用荧光素酶报告基因证实α-干扰素可上调其转录活性。     

干扰素调节因子4在B细胞淋巴瘤细胞株中表达及其与细胞耐药的关系

背景：干扰素调节因子4是B细胞终末分化的重要转录因子，限制性表达于淋巴细胞，在基因调控中起重要作用，但其与疾病预后的最终关系仍未确定。 目的：假设干扰素调节因子4在B淋巴细胞中的表达与细胞耐药有关，观察新型抗肿瘤药蛋白酶体抑制剂硼替佐米对干扰素调节因子4的影响。 设计、时间及地点：细胞学体外实验，于2006—03／2007—02在河南省肿瘤医院中心实验室完成。 材料：Daudi和Namalwa细胞株由上海血液学研究所提供。阿霉素为山西普德药业有限公司产品，硼替佐米为西安杨森公司产品。 方法：将Daudi和Namalwa细胞各自接种于200μL RPMI-1640培养体系中，分别加入0，5，10，20，30，50，100μg/L阿霉素；对于Namalwa细胞，另设立联合用药组，即15nmol/L硼替佐米＋上述各浓度阿霉素；药物处理48h后，加入MTT继续培养。选择单药50μg/L阿霉素、15nmol/L硼替佐米以及两药联合作用Namalwa细胞12，24，48，72h，行半定量RT-PCR和Westem印迹分析。 主要观察指标：干扰素调节因子4在细胞株中的表达。MTT法检测细胞增殖抑制率。AnnexinV／PI法检测细胞凋亡情况。药物对Namalwa细胞干扰素调节因子4基因和蛋白表达的影响。 结果：Namalwa细胞表达干扰素调节因子4基因和蛋白，Daudi细胞中未检测出其表达。各浓度阿霉素作用48h后，Daudi细胞增殖抑制率显著高于Namalwa细胞（P〈0．05）；阿霉素联合硼替佐米共培养48h，Namalwa细胞增殖抑制率显著高于单药阿霉素（P〈0．05）。硼替佐米、阿霉素联合硼替佐米作用48h细胞凋亡率显著高于单药阿霉素（P〈0．01）。单药阿霉素处理12，24，48，72h，干扰素调节因子4基因和蛋白均未发生明显变化：单药硼替佐米处理48h干扰素调节因子4基因表达开始下调，72h出现蛋白表达下调；两药联合处N24h即出现干扰素调节因子4基因表达下调，48h随之出现蛋白表达下调。 结论：Namalwa细胞中干扰素调节因子4的表达与阿霉素耐药有关，硼替佐米能够下调干扰素调节因子4的表达，克服阿霉素的耐药。     

干扰素α-2b对人类早幼粒白血病细胞株HL-60细胞的抑制增殖与促进凋亡的作用

背景:儿童急性白血病复发的主要根源是微小残留白血病细胞的存在,在试图清除微小残留病的众多治疗方法中,免疫生物治疗越来越受重视。以前的研究发现干扰素α-2b能有效抑制神经母细胞瘤和恶性淋巴瘤患儿体内肿瘤细胞的增长,其能否抑制白血病细胞的增长?目的:通过体外实验观察干扰素α-2b对白血病细胞的影响。设计:以人类早幼粒白血病细胞株HL-60为观察对象,对比观察实验。单位:青岛大学医学院附属医院儿科研究所细胞培养室、免疫实验室、细胞室。材料:HL-60细胞系由山东省医学科学院基础所提供。干扰素α-2b购自Megagene公司,FITC-兔抗鼠Ig工作液(CatEK001)和CD13抗人单克隆抗体工作液(Cat.DK013Y)购自协和干细胞基因工程有限公司。方法:体外建立HL-60细胞培养体系,调整细胞浓度为1×10~9 L~(-1),分为对照组和实验组,各实验组中加入终含量分别为5×10~5,1×10~6,2×10~6,5×10~6,1×10~7U/L的干扰素α-2b,对照组加入等量生理盐水,继续培养48 h。光镜下采用瑞氏染色观察HL60细胞的形态变化,采用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双染色观察细胞凋亡,通过CD13蛋白表达测定观察细胞膜抗原表达及成熟分化,通过MTT实验检测HL-60细胞增殖活性。主要观察指标:根据HL-60细胞核染色质是否均匀一致及着色情况,判断细胞是否发生凋亡;根据酶标仪检测的吸光度(A值)判断HL-60细胞增殖情况;根据CD13阳性细胞数量判断HL-60细胞成熟程度。结果:①HL-60细胞凋亡:培养48h,当干扰素α-2b为5×10~5U/L时,以早期凋亡细胞为主,当干扰素α-2b含量为1×10~7 U/L时,以晚期凋亡细胞为主,HL-60细胞凋亡率均高于对照组,差异有显著性意义(X~2= 23.79.29.57,P<0.01)。②HL-60细胞增殖情况:当干扰素α-2b含量为2×10~6 U/L和1×10~7 U/L时,A值均低于对照组,差异有显著性意义(t=5.65,11.31,P<0.01)。③HL-60细胞成熟程度:当干扰素α-2b含量为1×10~6U/L和1×10~7 U/L时,CD13~ 细胞百分比均低于对照组,差异有显著性意义(x~2=6.89,14.73,P<0.01)。结论:干扰素α-2b有促进HL-60细胞凋亡、抑制HL-60细胞增殖和促进分化成熟的作用。     

干扰素-γ治疗肾细胞癌的生物学效应

干扰素-γ是一种具有广谱抗病毒、抗增殖和免疫调节等活性的细胞因子,主要由人活化的T细胞、NK细胞及NKT细胞产生。肾细胞癌是起源于肾小管上皮细胞的恶性肿瘤,对化疗、放疗均不敏感,除手术以外其主要的治疗方法是免疫治疗。干扰素-γ可通过抑制肾癌细胞生长、促进肾癌细胞凋亡以及提高机体对肾癌细胞的免疫监视功能进而对肾癌细胞产生抑制作用。本文对干扰素-γ来源与分子结构、基因表达、受体与信号传导及对肾细胞癌的作用机制等方面进展作一综述。     

丹参及细胞因子对成纤维细胞增殖和细胞凋亡的影响

本文探讨了丹参注射液、人重组白细胞介互２（ＩＬ－２）和重组干扰素α－２ｂ（ＩＦＮ）对体外培养成纤维细胞增殖的作用。结果表明ＩＦＮ和ＩＬ－２均可促进成纤维细胞的增殖，发挥丝裂原作用。丹参则显著抑制细胞增殖活性，使成纤维细胞崩成圆形或块状结构，内含细胞器，线粒体和内质网变性，呈曲型的细胞凋亡改变，提示丹参通过抑制成纤维细胞增殖，促使细胞凋亡，发挥抗纤维化作用。     

干扰素α对慢性髓系白血病来源的树突状细胞表达Fas／FasL的影响

本研究探讨干扰素α对慢性髓系白血病（CML）来源的树突状细胞（DC）表达Fas／FasL的影响。在CML—DCs的培养液中除加入SCF，GM—CSF，TNF—α及IL-4外，还加入IFN—α。培养10-14天，除了鉴定细胞免疫表型和Ph^1染色体比例外，还应用流式细胞仪检测细胞表达Fas／FasL比例，用PI染色分析细胞凋亡，ELISA法检测上清液sFas含量。结果表明：加入IFN-α后，CML—DC共刺激分子的表达显著改善，Ph^1（＋）细胞比例随IFN—α浓度增加而减低；培养细胞Fas的表达上调，sFas含量却下降，FasL表达阴性，细胞凋亡比例增加。结论：IFN—α在改善CML-DC表型同时，可通过Fas途径促进Ph^1（＋）细胞凋亡，使Ph^1（-）细胞数量相对增加。     

多发性骨髓瘤分子水平治疗的新策略

随着传统化疗、干扰素及干细胞移植的发展，多发性骨髓瘤的治疗取得了很大进步，但仍存在耐药及易复发等问题。为了进一步改善骨髓瘤患者的预后，在分子水平治疗方面出现了一些新的策略，如以骨髓新生血管、细胞表面受体、骨髓瘤细胞DNA分子作为靶点，促进骨髓瘤细胞的凋亡，调节骨髓微环境，或是调节骨髓微环境与骨髓瘤细胞间的相互作用。这些新的治疗方法在临床及动物试验中已取得一定疗效。     

输入供体凋亡细胞对受体外周免疫耐受的影响

背景:预输注供者凋亡细胞能够诱导受者体内产生针对供者抗原发生的特异性免疫耐受,但其具体途径尚不清楚.目的:观察供体凋亡淋巴细胞输注后受体外周血细胞因子的变化.设计、时间及地点:细胞观察性实验,于2007-11/2008-05在南方医科大学附属珠江医院移植免疫实验室完成.材料:供体C57BL雄性小鼠14只,8～10周龄,受体Balb/c雄性小鼠50只,6～8周龄.方法:分离供体小鼠脾脏细胞,放置于紫外线灯距离20 cm处的摇床上照射1 h,紫外线诱导C57BL小鼠脾脏细胞凋亡.将受体Balb/c小鼠随机分为凋亡细胞组和活细胞组,分别将107个供体C57小鼠脾脏凋亡细胞、活细胞经尾静脉输注于受体小鼠.主要观察指标:输注后0,1,3,6,12 h经心脏采血,Luminex技术液态芯片法检测外周血白细胞介素1 β、白细胞介素2、白细胞介素4、白细胞介素5、白细胞介素6、白细胞介素10、白细胞介素12、粒细胞-巨细胞集落刺激因子、干扰素γ、肿瘤坏死因子变化.结果:只检测到白细胞介素6、白细胞介素10、白细胞介素12、粒细胞-巨细胞集落刺激因子、干扰素γ 5种细胞因子,其他细胞因子末测出.经紫外线诱导后小鼠脾脏细胞凋亡率达到93.86%.与0 h相比,外周血中干扰素γ和白细胞介素10分别在输注活细胞后6 h和3,6 h明显升高,其他细胞因子无明显变化.与0h相比,输注凋亡细胞1,3,6,12 h后,外周血中各细胞因子无明显变化.活细胞组输注后1 h白细胞介素6和输注后3,6 h白细胞介素10浓度高于凋亡细胞组,其他细胞因子差异不显著.结论:同种异源供者凋亡淋巴细胞输注对外周血细胞因子浓度无变化,提示其对受体外周免疫功能可能无明显影响,其诱导产生的免疫耐受可能主要在局部发挥作用.     

干扰素调节因子在肿瘤发生中的研究进展

干扰素调节因子(interferon regulatory factors,IRFs)是一类在干扰素表达调控中起重要作用的转录因子家族,目前共发现有10个成员,其在免疫调节、细胞分化、细胞凋亡和细胞周期调节中具有重要作用。本文就该家族成员的功能特点、免疫活性,特别是在细胞分化及肿瘤发生中的作用作一综述。     

干扰素药物临床应用进展

1957年Isaacs和Lindenmann首先发现病毒感染的细胞能产生一种因子，作用于其他细胞干扰病毒的复制，因而命名为干扰素。根据产生干扰素细胞来源不同、理化性质和生物学活性的差异，干扰素(IFN)有α—IFN、β—IFN和γ—IFN三种，以α-干扰素作用最强。     

X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子的克隆及其转录活性检测

目的:X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1能够诱导半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3凋亡,其具体转录调控机制尚不十分清楚.克隆X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1基因启动子,检测干扰素对其转录活性的影响.方法:实验于2006-05/2007-07在香港大学分子生物学研究所和洛阳华美生物工程公司完成.①材料:结肠癌细胞株Lovo和Sw1116来自美国 American Type Culture Col-lection.pGL3 basic载体,内参照pRL-CMV载体和Dual-luciferase reporter Kit,T4 DNA连接酶,限制性内切酶Kpn I和XhoI均由Promega公司提供.②实验方法:采用PCR法扩增获得X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1基因的启动子片段,将之定向克隆到含荧光素酶报告基因的pGL3 basic载体上,获得的报告基因质粒命名为pLUC107,瞬时转染Lovo和Sw1116细胞株,经α-干扰素刺激处理,启动子转录活性用荧光素酶相对表达活性表示.结果:①PCR扩增结果:在预期的271 bp处出现清晰DNA片段,无非特异扩增现象,证明其为X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子的PCR扩增产物.②重组质粒的酶切鉴定及测序:重组质粒pLUC107双酶切后可见约为271 bp的DNA片段,与理论值相一致.DNA测序证实含X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子荧光素酶报告基因质粒构建成功.③干扰素对X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子转录活性的影响:与未经α-干扰素处理的含pLUC107的Lovo和Sw1116细胞的荧光素酶相对活性值比较,经α-干扰素处理后两种细胞的荧光素酶相对活性值均明显升高(P均 < 0.05),且升高幅度与α-干扰素呈剂量依赖性.结论:成功克隆出X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1基因启动子片段,并利用荧光素酶报告基因证实α-干扰素可上调其转录活性.     

壁虎粉提取物作用于乙型肝炎病毒侵袭的HepG2和HL-7702细胞的实验研究

目的探讨壁虎粉提取物对乙型肝炎病毒侵袭过的人肝癌细胞（HepG2）和人肝细胞（HL-7702）中乙型肝炎病毒的复制能力和细胞生长状况的影响。方法实验分壁虎粉干预组、干扰素干预组、乙肝对照组和正常对照组四组,除正常对照组,其他三组以终浓度为1×107IU/mL含HBV-DNA的患者血清侵袭2小时后,再以一定浓度壁虎粉提取物或干扰素分别作用于上述两种细胞,收集各时段的培养液上清和（或）细胞,检测培养液上清AST、ALT、r-GT和LDH含量;采用荧光定量PCR法检测HBV-DNA;AO/EB进行细胞凋亡染色。结果两种细胞不同组别（除正常对照组外）培养6天、9天较培养3天AST显著增高（P〈0.01）,以两个干预组增高更为明显;HepG2干预组各时间段LDH含量高于HL-7702干预组（P〈0.01）,以壁虎粉干预HepG2组增高最为明显,同时凋亡细胞增多也较明显;两干预组细胞HBV-DNA含量较乙肝对照组低约1个数量级。结论壁虎粉提取物和干扰素对HBV复制具有抑制作用,对HL-7702细胞作用更为明显;壁虎粉提取物可诱导肝癌HepG2细胞早期凋亡、坏死。     

心脏移植后冠状血管病发生与细胞凋亡的实验研究

目的：检测心脏移植后冠状血管病变标本中细胞凋亡的发生，确定凋亡机制在移植后冠状血管病发生中的作用。方法：建立心脏移植后冠状血管病模型，检测细胞凋亡的发生，探讨细胞凋亡的发生规律及细胞凋亡与移植后冠状血管病的关系。结果：实验组和对照组心肌可见凋亡细胞，但无显著差异。血管壁中未见到凋亡细胞，结论：凋亡发生与组织内细胞成分多少有关，心肌内细胞凋亡的发生率高于血管壁组织。     

利用干扰素残留液治疗口唇疱疹

干扰素是一种干扰病毒复制的细胞因子，具有抗病毒、抗肿瘤及免疫调节功能，是人体防御系统的重要组成部分。干扰素通过诱发多种抗病毒蛋白，抑制病毒在细胞内复制，增强自身杀伤细胞（NKC）活性及其他免疫调节作用，有效地阻止病毒侵袭和感染的发生，并有抑制肿瘤细胞生长、清除早期恶变细胞的作用。我院为肝病专科医院，大量病人应用干扰素进行抗病毒治疗，干扰素的种类有赛若金、运德素、干扰素、因特芬，等等。近年来利用空安瓿中残留干扰素治疗口唇周围疱疹、颜面疖肿以及带状疱疹198例，均收到了良好效果。