脓毒症患者外周血单核细胞NLRP3炎性小体的表达研究

目的:分析脓毒症患者外周血单核细胞(PBMCs)中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)mRNA、半胱氨酸天冬氨酸酶-1(caspase-1)mRNA表达及下游炎症因子水平变化,探讨其在脓毒症发生发展中作用。方法:选取192例脓毒症患者为脓毒症组、187例非感染性全身性炎症反应综合征(SIRS)患者为SIRS组、184例来医院体检的健康人群为参照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测NLRP3 mRNA、caspase-1 mRNA表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)水平及血浆白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)水平。结果:脓毒症组患者血清PCT水平、血清CRP水平、APACHEⅡ及SOFA评分最高、SIRS组患者次之、参照组最低(P0.05)。脓毒症患者NLRP3 mRNA、caspase-1 mRNA表达和血浆IL-1β、IL-18水平最高、SIRS组患者次之、参照组最低(P0.05)。脓毒症患者NLRP3 mRNA表达与caspase-1 mRNA表达(P0.05)、血浆IL-1β水平(P0.05)、血浆IL-18水平(P0.05)均呈正相关;且脓毒症患者NLRP3 mRNA、caspase-1 mRNA表达均与血清PCT水平、血清CRP水平、APACHEⅡ评分、SOFA评分呈正相关(P0.05)。影响脓毒症患者预后的独立危险因素有血清PCT、CRP水平、APACHEⅡ评分、SOFA评分、NLRP3 mRNA表达、caspase-1 mRNA表达及血浆IL-1β、IL-18水平(P0.05)。结论:脓毒症患者外周血单核细胞NLRP3 mRNA、caspase-1 mRNA高表达,血浆IL-1β、IL-18水平升高,NLRP3炎性小体参与脓毒症发生发展。     

肠黏膜核苷酸结合寡聚化结构域样受体-3炎症小体在肠炎组织中的表达及意义

目的探讨肠黏膜核苷酸结合寡聚化结构域样受体-3(NLRP3)炎症小体在肠炎组织中的表达及意义。方法回顾性分析2013年2月至2017年2月治疗的克罗恩患者17例(CD组),中轻度溃疡性结肠炎(UC)患者23例(轻度UC组),中重度UC患者31例(中重度UC组),同时选取正常肠组织标本25例作为对照组。采用免疫组化法检测各组NLRP3炎症小体表达,采用实时定量PCR检测各组NLRP3 mRNA表达,采用ELISA法检测白细胞介素1(IL-1)和caspase-1含量。结果 CD组、轻度UC组和中重度UC组NLRP-3阳性表达率和NLRP-3 mRNA相对表达量明显高于对照组(P0.05);中重度UC组NLRP-3阳性表达率和NLRP-3 mRNA相对表达量为87.10%和2.041±0.090,明显高于轻度UC组(P0.05);CD组、轻度UC组和中重度UC组IL-1和caspase-1含量明显高于对照组(P0.05);中重度UC组IL-1和caspase-1为(57.22±20.03)pg/ml和(761.26±101.06)M/ml,明显高于轻度UC组(P0.05);NLRP-3 mRNA相对表达量与IL-1、caspase-1含量呈正相关(r=0.633和0.557,P0.05);IL-1与caspase-1含量呈正相关(r=0.433,P0.05)。结论克罗恩和溃疡性结肠炎肠组织NLRP3、IL-1和caspase-1表达明显升高,且三者有相关性,推测NLRP3-caspase-1-IL-1信号通路参与炎症性肠病的发病。     

miR-1976在帕金森综合征中的作用

目的探讨miR-1976在帕金森综合征(PD)中的作用。方法选取人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,随机将细胞分为四组,空白对照组、模型组、miR-1976抑制剂(inhibitor)转染组和空白转染组。空白对照组常规培养,不做处理,模型组采用1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导SH-SY5Y细胞建立PD细胞模型,miR-1976 inhibitor转染组转染miR-1976 inhibitor质粒,空白转染组转染空白质粒。采用MMT法检测各组细胞增殖,流式细胞仪检测各组细胞凋亡,荧光定量PCR检测自噬相关基因Beclin1、LC3Ⅰ/ⅡmRNA表达,Western blot检测各组Beclin1、LC3Ⅰ/Ⅱ蛋白表达。结果模型组和miR-1976 inhibitor转染组培养24 h、48 h和72 h时OD值明显低于空白对照组和空白转染组(P0.05);模型组和miR-1976 inhibitor转染组细胞凋亡率分别为(14.221±2.816)%和(11.016±2.910)%,明显高于空白对照组和空白转染组(P0.05);模型组和miR-1976 inhibitor转染组Beclin1 mRNA和LC3Ⅰ/ⅡmRNA相对表达明显高于空白对照组和空白转染组(P0.05),而miR-1976相对表达量明显低于空白对照组和空白转染组(P0.05);模型组和miR-1976 inhibitor转染组Beclin1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白相对表达明显高于空白对照组和空白转染组(P0.05)。结论 miR-1976在PD中有重要作用,miR-1976低表达可抑制神经细胞增殖,促进细胞凋亡及自噬。     

miR-181a靶向RASSF1A促进多发性骨髓瘤U266细胞增殖、侵袭

目的探讨miR-181a靶向Ras相关区域家族1(RASSF1A)促进多发性骨髓瘤U266细胞增殖、侵袭的作用。方法收集40例多发性骨髓瘤患者骨髓组织及50例受试者的正常骨髓组织标本;培养多发性骨髓瘤U266细胞,并分为NC mimic组、miR-181a mimic组、NC inhibitor组、miR-181a inhibitor组。采用MTS法检测细胞增殖活力;Transwell试验检测细胞侵袭能力;实时荧光定量PCR检测各组miR-181a的表达水平;western blot检测RASSF1A、cyclinD1、RhoA蛋白的表达水平;荧光素酶报告试验验证miR-181a靶向RASSF1A 3′非翻译区(UTR)。结果实时荧光定量PCR结果显示,多发性骨髓瘤组织中miR-181a的表达量明显高于正常骨髓组织(P均<0.05);western blot检测结果显示,多发性骨髓瘤组织中cyclinD1、RhoA蛋白的表达量明显高于正常骨髓组织(P均<0.05),而RASSF1A蛋白的表达量明显低于正常骨髓组织(P<0.05);western blot检测结果还显示,miR-181a mimic组cyclinD1、RhoA蛋白的表达量明显高于NC mimic组(P均<0.05),而miR-181a inhibitor组cyclinD1、RhoA的表达量明显低于NC inhibitor组(0.32±0.07 vs 0.71±0.12,0.39±0.06 vs 0.66±0.10,P均<0.05);Transwell试验结果表明,miR-181a mimic组侵袭细胞数(个)明显高于NC mimic组(38.59±7.41 vs 10.29±2.12,P<0.05),而miR-181a inhibitor组侵袭细胞数(个)明显少于NC inhibitor组(7.28±1.24 vs 11.41±2.76,P<0.05);荧光素酶报告试验结果表明,miR-181a mimic组RASSF1A的表达量及RASSF1A 3′UTR荧光素酶报告基因的荧光活力均明显低于NC mimic组(0.81±0.15 vs 1.54±0.26,0.173±0.035 vs 0.291±0.062,P均<0.05),而miR-181a inhibitor组RASSF1A的表达量及RASSF1A 3′UTR荧光素酶报告基因的荧光活力明显高于NC inhibitor组(1.83±0.31 vs 1.25±0.21,0.399±0.067 vs 0.273±0.057,P均<0.05)。结论miR-181a能够促进多发性骨髓瘤U266细胞的增殖、侵袭,并靶向抑制RASSF1A的表达。     

溃疡宁抑制NOXs-ROS-NLRP3炎症小体信号通路影响溃疡性结肠炎大鼠炎症的实验研究

目的研究溃疡宁抑制黏膜组织还原型辅酶Ⅱ氧化酶-活性氧簇-NOD样受体蛋白3(NOXs-ROSNLRP3)炎症小体信号通路影响溃疡性结肠炎大鼠炎症的机制。方法选取BALB/c大鼠45只,随机分为空白组、模型组、溃疡宁组,每组各15只,经右旋葡萄糖硫酸钠(DSS)诱导建立溃疡性结肠炎模型,空白组、模型组给予蒸馏水0.02mL/g,溃疡宁组给予溃疡宁10g/(kg·d),灌胃3周后取结肠黏膜组织,以荧光定量PCR法检测NLRP3、凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(caspase-1)mRNA表达水平,采用鲁米诺化学发光法检测结肠黏膜组织活性氧自由基(ROS)水平,计算DPI抑制后的还原型辅酶Ⅱ(NADPH)消耗率分析NOXs活性,并对比3组组织病理学评分(HS)及血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果 NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA表达水平:空白组溃疡宁组模型组,3组上述指标两两比较,差异有统计学意义(P0.05);ROS水平、NOXs活性:空白组溃疡宁组模型组,3组上述指标两两比较,差异均有统计学意义(P0.05);溃疡宁组HS评分(4.21±0.59)分,血清IL-1β(70.45±8.19)pg/L,TNF-α(61.55±6.24)pg/L,低于模型组,(P0.05),高于空白组(P0.05),模型组和空白组上述指标比较,差异也有统计学意义(P0.05)。结论溃疡宁可能通过抑制结肠黏膜组织NOXs-ROS-NLRP3炎症小体信号通路来降低IL-1β、TNF-α促炎因子表达,从而减轻溃疡性结肠炎大鼠以结肠黏膜损伤为主要表现的炎症。     

EPO对慢性心力衰竭大鼠心功能、心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对慢性心力衰竭大鼠心功能、心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法选择60只SD大鼠,随机分为研究组(20例)、对照组(20例)、空白组(20例);60只大鼠均置于相同环境下饲养,研究组和对照组大鼠采用阿霉素构建心力衰竭模型,模型构建成功后给予研究组大鼠EPO。采用GE vivid7彩色多普勒超声诊断仪检测各组大鼠心功能指标,然后处死大鼠并留取心脏标本,Tunel法检测心肌细胞凋亡,荧光定量聚合酶链反应检测心肌组织中Fas和PI3K mRNA的表达。结果空白组大鼠心功能优于研究组大鼠和对照组大鼠(P0.05),研究组大鼠心功能优于对照组大鼠(P0.05);对照组大鼠的心肌细胞凋亡指数明显高于研究组与空白组大鼠(P0.05),研究组大鼠的心肌细胞凋亡指数高于空白组大鼠(P0.05);对照组大鼠Fas mRNA的表达水平明显高于研究组与空白组大鼠(P0.05),研究组大鼠Fas mRNA的表达水平高于空白组大鼠(P0.05);研究组大鼠PI3KmRNA的表达水平高于对照组大鼠和空白组大鼠(P0.05)。结论 EPO有助于改善慢性心力衰竭大鼠的心功能,并能明显减少心力衰竭大鼠的心肌细胞凋亡,其可能机制为活化PI3K途径。     

MiR-543对人白血病细胞株K562增殖与凋亡的调控及其机制研究

目的:探讨miR-543对人白血病细胞株K562增殖与凋亡的调控作用及其机制。方法:选择2018年2月-2018年9月在本院接受治疗的CML患者46例(男性27例,女性19例)作为CML组,同时选择30例同期体检健康者作为对照组。利用Lipofectamine 2000脂质体将miR-543模拟物(mimic)及阴性对照mimic转染至K562细胞后,应用CCK8方法检测miR-543对K562细胞增殖的影响,荧光素酶报告法分析miR-543对Wnt基因的靶向关系,流式细胞术检测miR-543对白血病细胞凋亡影响,Western blot方法检测Wnt、β-catenin、BCL-2、C-Myc及BAX表达水平。结果:慢性髓系白血病患者的miR-543水平显著低于健康对照组(P 0.05);miR-543 mimic组的miR-543的表达水平显著高于空白对照组(P 0.05);miR-543 mimic组的Wnt基因mRNA水平显著低于空白对照组(P 0.05)。miR-543 mimic可降低Wnt野生质粒的荧光素酶表达水平(P 0.05);miR-543 mimic对Wnt突变质粒的荧光素酶表达水平无抑制作用(P 0. 05)。miR-543 mimic组K562细胞增殖水平显著低于空白对照组及阴性对照scramble mimic组(P 0. 05)。miR-543 mimic组K562细胞凋亡水平显著高于空白对照组及阴性对照scramble mimic组(P 0. 05)。miR-543 mimic组细胞的Wnt、β-catenin、BCL-2及C-Myc蛋白水平均显著低于空白对照组及阴性对照(scramble mimic)组(P 0.05);miR-543 mimic组的BAX蛋白水平高于空白对照组及阴性对照(scramble mimic)组(P 0.05)。结论:miR-543可靶向Wnt蛋白,抑制Wnt信号通路活性,从而抑制白血病细胞的增殖能力,提高细胞凋亡水平。     

支气管哮喘患者外周血单个核细胞NLRP3mRNA和血清IL-18、IL-1β的表达和研究

目的检测支气管哮喘患者中外周单个核细胞Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)mRNA和血清白细胞介素18(IL-18)、白细胞介素1β(IL-1β)的表达,探讨其在哮喘发病中的机制和临床意义。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测100例支气管哮喘患者治疗前后和对照组外周血单个核细胞核内NLRP3mRNA的表达量,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测哮喘患者治疗前后和对照组血清IL-1β、IL-18水平,比较组间的差异,并进行相关性分析。结果急性发作期哮喘患者的NLRP3mRNA的表达及IL-18、IL-1β水平均明显高于慢性持续期哮喘患者(P0.05)。急性发作期和慢性持续期哮喘患者的NLRP3mRNA的表达及IL-18、IL-1β水平均明显高于健康对照组(P0.05)。急性发作期和慢性持续期哮喘患者经治疗后的NLRP3mRNA的表达量及IL-18、IL-1β水平较各自治疗前水平明显降低,且均高于健康对照组水平,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 NLRP3、IL-18、IL-1β均参与了支气管哮喘的气道炎症反应,且与哮喘患者的病情严度程度密切相关。     

NLRP3、IL-18、IL-1β与牙周炎的相关性分析

目的探讨NLRP3炎症小体、白细胞介素-18(IL-18)和白细胞介素-1β(IL-1β)与牙周炎的关系。方法选取2016年2月至2017年2月在我院治疗的慢性牙周炎患者58例为病例组,选取同期健康志愿者60例作为对照组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清和龈沟液IL-18和IL-1β,采用RT-PCR检测血清NLRP3mRNA表达。结果病例组血清NLRP3mRNA相对表达量、IL-18和IL-1β分别为(1.472±0.331)、(57.93±15.49)pg/ml和(34.29±8.99)pg/ml,明显高于对照组(P0.05);病例组龈沟液IL-18和IL-1β分别为(49.04±12.22)pg/ml和(33.92±6.06)pg/ml,明显高于对照组(P0.05);病例组菌斑指数(PLI)、出血指数(BI)、牙周袋深度(PD)和附着丧失(AL)分别为(1.72±0.21)、(2.79±0.44)、(3.61±0.20)mm和(5.01±0.74)mm,明显高于对照组(P0.05);血清NLRP3mRNA相对表达量、血清及龈沟液IL-18和IL-1β分别与PLI、BI、PD、AL呈正相关(P0.05);血清NLRP3mRNA相对表达量与血清及龈沟液IL-18、IL-1β呈正相关(P0.05)。结论牙周炎患者NLRP3炎症小体mRNA、血清及龈沟液IL-18、IL-1β表达明显升高,可能在疾病的发生发展中有一定的作用。     

炎性复合体在初诊儿童ITP中作用

目的:通过检测炎性复合体NLRP3在儿童免疫性血小板减少症(ITP)中表达,探讨其在ITP发病中的作用。方法:本院住院治疗的初诊儿童ITP患者21例为ITP组,10例健康儿童为对照组,采用实时荧光定量PCR(q PCR)检测炎性复合体支架蛋白NLRP3、接头蛋白ASC和caspase-1的表达水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定炎性复合体下游炎症因子IL-18水平,应用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测NLRP3表达。结果:初诊ITP患儿外周血NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA水平较对照组均明显升高(P 0. 05); ITP患儿血浆IL-18水平较对照组也明显升高(P 0. 05);且存在NLRP3蛋白表达水平上调。结论:在初诊ITP患儿体内存在NLRP3炎性复合体及下游炎症因子IL-18表达升高,它们可能参与了儿童ITP的发病。     

肺曲菌病患者外周血中NLRP3-RIP2-NF-κB信号通路的表达及意义

目的:研究NLRP3-RIP2-NF-κB信号通路在肺曲菌病患者外周血中的表达水平,及其介导炎症反应的作用机制。方法:选取2016年5月～2019年10月收治的肺曲菌病患者62例为研究对象,分为侵袭性肺曲霉菌病组(IPA组)24例和非侵袭性肺曲霉菌病组(NIPA组)38例,并选取同期20例非真菌感染者作为对照组。采用RT-PCR法检测三组NLRP3、RIP2、NF-KB mRNA表达水平;Western Blot法检测NLRP3、RIP2、NF-KB蛋白水平;ELISA法检测炎症介质hs-CRP、IL-6水平,对三组上述指标进行比较,并采用Spearman相关性分析分析NLRP3 mRNA与RIP2、NF-κB、IL-6、hs-CRP之间的相关性。结果:(1)IPA组、NIPA组NLRP3、RIP2、NF-κB mRNA表达水平均高于对照组,且IPA组高于NIPA组(P0.05)。(2)IPA组、NIPA组NLRP3、RIP2、NF-κB蛋白表达水平均高于对照组,且IPA组高于NIPA组(P0.05)。(3)IPA组、NIPA组IL-6、hs-CRP水平均高于对照组,且IPA组高于NIPA组(P0.05)。(4)相关性分析发现外周血中NLRP3 mRNA水平与下游基因RIP2、NF-κB mRNA水平呈正相关(相关指数r=0.676,P0.001;r=0.513,P0.001);与炎症介质IL-6、hs-CRP及NLRP3水平呈正相关(相关指数r=0.467,P0.001;r=0.621,P0.001)。结论:肺曲菌病患者外周血中NLRP3、RIP2、NF-κB mRNA和蛋白表达均升高,NLRP3可能通过RIP2依赖的NF-κB信号通道介导肺曲菌病患者致炎过程。     

电针足三里对功能性消化不良大鼠十二指肠半胱氨酸蛋白酶-1和消皮素D的影响

目的 探讨电针足三里对功能性消化不良（FD）大鼠十二指肠细胞焦亡的影响和可能的作用机制。 方法 将24只7日龄Sprague-Dawley（SD）大鼠按照随机数字表法分为空白组、模型组、电针组,每组8只。模型组和电针组采用多因素诱导法（碘乙酰胺灌胃法+夹尾刺激法）制备FD大鼠模型。造模成功后,电针组大鼠给予针刺“足三里”穴后连接韩式穴位神经刺激仪治疗2周,空白组和模型组不予任何干预。于基线期、造模后、电针干预7 d和14 d后记录3组大鼠的体重,于电针干预结束后检测3组大鼠的胃排空率和小肠推进率,并采用酶联免疫法（ELISA）检测其血清白介素-1β(IL-1β)和白介素-6（IL-6）的表达水平,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测3组大鼠十二指肠IL-1β和IL-6转录水平,采用免疫印迹法检测3组大鼠十二指肠半胱氨酸蛋白酶-1（caspase-1）p20和消皮素D（GSDMD）蛋白表达水平。 结果 造模成功后,模型组和电针组大鼠的平均体重与空白组造模成功后比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）;电针干预7 d和14 d后,模型组和电针组大鼠的平均体重与空白组同时间点比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）,且电针组电针干预7 d和14 d后的平均体重与模型组同时间点比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。电针干预结束后,电针组大鼠胃内残留率和小肠推进率与模型组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01),而模型组大鼠胃内残留率和小肠推进率与空白组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01)。电针干预结束后,模型组和电针组大鼠血清中IL-1β和IL-6表达水平、十二指肠组织IL-1β和IL-6 mRNA的表达水平和十二指肠组织GSDMD、caspase-1 p20蛋白表达水平与空白组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01),且电针组大鼠血清中IL-1β和IL-6表达水平、十二指肠组织IL-1β和IL-6 mRNA的表达水平和十二指肠组织GSDMD、caspase-1 p20蛋白表达水平与模型组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。 结论 电针足三里可显著降低FD大鼠十二指肠的细胞焦亡水平,改善十二指肠低度炎症,进而减轻FD临床症状,其作用机制可能与电针足三里可下调caspase-1 p20、GSDMD-N蛋白的表达水平,降低IL-1β和IL-6等炎性因子的表达水平,以及缓解FD大鼠十二指肠的低度炎症有关。     

miR-1290对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探究miR-1290对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法回顾性收集2018年3月至2019年6月海南省人民医院收治的45例患者,取肺腺癌组织及癌旁组织,采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测组织中miR-1290的表达。将肺腺癌细胞随机分为对照组、miR-1290 mimic组和miR-1290 inhibitor组,通过脂质体2000试剂盒,分别以无意义序列、miR-1290 mimic、miR-1290 inhibitor转染细胞。分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell小室、划痕实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。蛋白质印迹法检测Cyclin D1、p27、基质金属蛋白酶(MMP-2和MMP-9)蛋白的表达。经在线生物信息学和双荧光素酶报告基因检测miR-1290的靶基因,荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测miR-1290靶基因的表达。结果与癌旁组织比较,肺腺癌组织中miR-1290表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,miR-1290 mimic组miR-1290表达明显增加,miR-1290 inhibitor组miR-1290表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。培养48 h时,与对照组比较,miR-1290 mimic组细胞吸光度值、侵袭细胞数及划痕“愈合”率明显增加,miR-1290 inhibitor组细胞吸光度值、侵袭细胞数及划痕“愈合”率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,miR-1290 mimic组细胞周期蛋白Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量明显增加、p27蛋白表达明显降低,miR-1290 inhibitor组Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量明显降低、p27蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测显示,与对照组比较,共转染INPP4B-WT、miR-1290 mimic细胞中荧光表达量明显降低(P<0.05);与对照组比较,miR-1290 mimic组二型磷脂酰肌醇4磷酸酶(INPP4B)mRNA和蛋白表达量明显降低,miR-1290 inhibitor组INPP4B mRNA和蛋白表达量明显增加(P<0.05)。结论miR-1290在肺腺癌组织中表达上调,miR-1290可能靶向抑制INPP4B水平,促进肺腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

肺曲菌病患者外周血中NLRP3-RIP2-NF-?资B信号通路的 表达及意义

目的：研究NLRP3-RIP2-NF-?资B信号通路在肺曲菌病患者外周血中的表达水平,及其介导炎症反应的作用机制。方法：选取2016年5月~2019年10月收治的肺曲菌病患者62例为研究对象,分为侵袭性肺曲霉菌病组（IPA组）24例和非侵袭性肺曲霉菌病组（NIPA组）38例,并选取同期20例非真菌感染者作为对照组。采用RT-PCR法检测三组NLRP3、RIP2、NF-?资B mRNA表达水平;Western Blot法检测NLRP3、RIP2、NF-?资B蛋白水平;ELISA法检测炎症介质hs-CRP、IL-6水平,对三组上述指标进行比较,并采用Spearman相关性分析分析NLRP3 mRNA与RIP2、NF-?资B、IL-6、hs-CRP之间的相关性。结果：（1）IPA组、NIPA组NLRP3、RIP2、NF-?资B mRNA表达水平均高于对照组,且IPA组高于NIPA组（P＜0.05）。（2）IPA组、NIPA组NLRP3、RIP2、NF-?资B蛋白表达水平均高于对照组,且IPA组高于NIPA组（P＜0.05）。（3）IPA组、NIPA组IL-6、hs-CRP水平均高于对照组,且IPA组高于NIPA组（P＜0.05）。（4）相关性分析发现外周血中NLRP3 mRNA水平与下游基因RIP2、NF-?资B mRNA水平呈正相关（相关指数r=0.676,P＜0.001;r=0.513,P＜0.001）;与炎症介质IL-6、hs-CRP及NLRP3水平呈正相关（相关指数r=0.467,P＜0.001;r=0.621,P＜0.001）。结论：肺曲菌病患者外周血中NLRP3、RIP2、NF-?资B mRNA和蛋白表达均升高,NLRP3可能通过RIP2依赖的NF-?资B信号通道介导肺曲菌病患者致炎过程。     

超短波对急性肺损伤大鼠炎症反应的疗效及其机制

目的 观察超短波疗法对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤炎症反应的效果,以及对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 (NLRP3)信号通路的影响。 方法 3月龄Sprague-Dawley雄性大鼠24只随机分为对照组、急性肺损伤组和超短波组,每组8只。后两组气管内滴注脂多糖复制急性肺损伤模型,超短波组在造模后即刻、4 h、8 h予超短波干预15 min。造模后24 h处死动物,测量肺组织湿/干重比(W/D);HE染色评估损伤程度;ELISA检测白细胞介素(IL)-1β和IL-18水平;逆转录聚合酶链反应和Western blotting检测NLRP3、caspase-1和IL-1β mRNA和蛋白表达。 结果 急性肺损伤组肺组织W/D较对照组升高(P < 0.05),超短波组较急性肺损伤组有降低趋势,但无显著性差异( P > 0.05)。急性肺损伤组肺损伤评分较对照组增高( P < 0.05),超短波组较急性肺损伤组降低( P < 0.05)。急性肺损伤组血清IL-1β和IL-18水平均较对照组升高( P < 0.05),超短波组较急性肺损伤组降低( P < 0.05)。NLRP3、caspase-1和IL-1β mRNA和蛋白表达,急性肺损伤组均较对照组增高( P < 0.05),超短波组较急性肺损伤组降低( P < 0.05)。 结论 超短波疗法能抑制大鼠急性肺损伤的炎症反应,可能与抑制NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路有关。     

低表达miR-338-3p诱导内皮细胞EOMA炎症反应

目的研究miR-338-3p在内皮细胞EOMA炎症反应中的作用。方法用TNF-α20ng/ml处理内皮细胞系EOMA 24h,实时荧光定量PCR检测miR-338-3p、黏附因子VCAM-1和ICAM-1mRNA表达水平,Western blot分析ERK及p38 MAPK信号通路活性;构建miR-338-3p低表达腺病毒载体(miR-338-3p inhibitor),感染EOMA细胞48h,PCR检测miR-338-3p、VCAM-1及ICAM-1mRNA表达水平,Western blot分析ERK及p38 MAPK信号通路活性。结果 TNF-α20ng/ml处理EOMA细胞24hmiR-338-3p表达水平下降,ERK及p38蛋白磷酸化水平升高,VCAM-1及ICAM-1mRNA表达水平升高;miR-338-3p inhibitor感染EOMA细胞48h,miR-338-3p表达水平明显降低,ERK及p38蛋白磷酸化水平明显升高,黏附因子VCAM-1及ICAM-1mRNA基因表达水平升高。结论在内皮细胞EOMA炎症模型中,TNF-α下调miR-338-3p表达水平;低表达miR-338-3p激活MAPK信号通路活性,增强黏附因子表达水平,诱导EOMA细胞炎症反应。     

miR-132调控SIRT1表达对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺损伤的影响

目的 探讨miR-132在慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织中的表达及其对大鼠肺功能及肺损伤的影响。方法 根据随机数表法将30只SD大鼠分为3组,即对照组(Sham组)、COPD组和COPD+miR-132组,每组10只。COPD组和COPD+miR-132组大鼠气道内滴注脂多糖联合烟熏28 d构建COPD模型,Sham组大鼠滴加等剂量的生理盐水,COPD+miR-132组大鼠额外滴加miR-132转染复合物,每周一次,持续4周。COPD疾病造模成功后,检测大鼠肺组织中miR-132的表达、大鼠肺功能、肺组织形态结构、肺组织中促炎症细胞因子、氧化应激及凋亡水平。检测各组大鼠肺组织中沉默调节蛋白1(SIRT1)及乙酰化的叉头转录因子-1(Ac-FOXO-1)的蛋白表达水平。结果与Sham组相比,COPD组大鼠肺组织中miR-132表达水平明显降低(P 0. 05)、0. 3 s用力呼气量占用力肺活量比值(FEV0. 3/FVC)和呼气峰流速(PEF)升高(P 0. 05)、肺泡平均截距增宽(P 0. 05)、促炎症细胞因子IL-1β,TNF-α及MCP-1的mRNA表达水平增高(P 0. 05)、细胞凋亡和氧化应激水平升高(P 0. 05)、SIRT1及AcFOXO-1的蛋白表达水平明显降低(P 0. 05);与COPD组相比较,COPD+miR-132组大鼠肺组织的miR-132的表达水平明显升高(P 0. 05)、FEV0. 3/FVC和PEF升高(P 0. 05);苏木精-伊红(HE)染色结果显示,miR-132明显降低了COPD大鼠肺泡平均截距(P 0. 05); RT-PCR结果显示,miR-132表达增加可明显抑制大鼠肺组织中促炎症细胞因子IL-1β,TNF-α及MCP-1的mRNA表达水平(P 0. 05); TUNEL染色结果表明,COPD+miR-132组大鼠肺组织中细胞凋亡水平明显低于COPD组(P 0. 05);同时,miR-132预处理可明显抑制COPD大鼠肺组织的氧化应激水平(P 0. 05);机制上,miR-132过表达可上调COPD大鼠肺组织中SIRT1及Ac-FOXO-1的蛋白表达水平(P 0. 05)。结论 在COPD大鼠模型中,miR-132的表达水平明显降低,过表达miR-132可以降低肺泡腔扩大,抑制大鼠肺组织炎症、凋亡及氧化应激水平,其保护作用可能与SIRT1信号通路的激活有关。     

早期脓毒症患者NOD样受体1表达与病情严重程度相关研究

目的 通过前瞻性研究探讨早期脓毒症患者外周血单个核细胞中NLRP1炎性体和NLRP3炎性体相关组分的表达和血浆中相关炎症因子的水平,以及各指标的临床价值.方法 脓毒症患者21例,年龄(67.71±17.17)岁;非感染性SIRS患者20例,年龄(61.35±11.82)岁;健康者20例,年龄(60.38 ±5.61)岁.Real-time PCR检测炎性体复合物各组分以及相关炎症因子mRNA表达水平,ELISA检测血浆IL-1β和IL-18质量浓度.统计方法使用单因素方差分析和Spearman相关性分析.结果 ①NLRP1在早期脓毒症患者和非感染性SIRS患者外周血单个核细胞(PBMC)中的mRNA表达均较健康对照组明显降低(P＜0.01),NLRP3在脓毒症患者PBMC中表达与健康对照组差异无统计学意义(P＞0.05),但其在非感染性SIRS组的表达较脓毒症组和健康对照组明显升高(P ＜0.01);IL-1β在3组人群PBMC中的mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05),IL-18在脓毒症组和非感染性SIRS组中的表达均较健康对照组增高(P＜0.01),其中非感染性SIRS组IL-18表达水平最高.②脓毒症患者血浆中IL-1β的蛋白水平较健康对照组低(P＜0.05),IL-18水平较健康对照组和非感染性SIRS组显著升高(P＜0.01);③NLRP1与SOFA评分呈负相关性(r=-0.44,P＜0.05);与APACHEⅡ评分也具有负相关性(r=-0.52,P＜0.05).结论 NLRP1在早期脓毒症患者PBMC中表达明显降低,且其水平与患者病情严重程度呈负相关,NLRP1水平越低病情越严重.     

miRNA-146a-5p对癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路的影响

目的观察miRNA-146a-5p(miR-146a-5p)对癫痫大鼠海马神经元核因子κB(NF-κB)信号转导通路的影响。方法体外培养新生SD大鼠海马神经元,随后制备癫痫海马神经元模型,随机分为三组,空白对照组(control组):转染时添加等体积opti-MEM培养基;阴性对照组(NC组):转染80 n M浓度NC至癫痫大鼠海马神经元; miR-146a-5p组:转染80 n M浓度miR-146a-5p mimics至癫痫大鼠海马神经元。转染后培养24 h,再用200 ng/ml脂多糖(LPS)诱导6 h,采用免疫荧光双染法鉴定体外培养海马神经元,采用膜片钳技术检测正常大鼠海马神经元和癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测未经LPS诱导各组海马神经元miR-146a-5p表达水平及经LPS诱导后各组海马神经元核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκBα(p IκBα)、NF-κB P65、IKB激酶-β(IKKβ) mRNA表达水平,采用Western blot法检测经LPS诱导后各组海马神经元IκBα、p IκBα、NF-κB P65、IKKβ蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测经LPS诱导后各组细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达水平。结果体外培养7 d的癫痫大鼠海马神经元与正常大鼠海马神经元相比较形态未见明显异常;癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率明显较正常大鼠海马神经元明显增加(P 0. 05); miR-146a-5p组海马神经元miR-146a-5p表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组海马神经元p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05),而IκBαmRNA及蛋白表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组细胞培养液中TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05)。结论miR-146a-5p可抑制LPS诱导的癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路中p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达,促进IκBαmRNA及蛋白表达,减少TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1等炎症因子的释放。     

急性缺血性脑卒中患者外周血NLRP3炎性小体表达变化及临床意义

目的探讨急性缺血性脑卒中(AIS)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体的表达及其临床意义。方法选取2016年1月至2020年1月在该院就诊的AIS患者185例为观察组,另选同期门诊体检健康者50例为对照组。观察组患者依据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分分为轻度组(59例)、中度组(62例)和重度组(64例),依据改良的Rankin量表评分(mRS评分)分为预后良好组(143例)和预后不良组(42例)。测定并比较各亚组间NLRP3mRNA相对表达水平的差异,评价其对AIS患者预后不良的预测价值。结果与对照组比较,观察组PBMCs NLRP3、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)mRNA相对表达水平及蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P0.05)。AIS不同严重程度组间PBMCs NLRP3、Caspase-1mRNA相对表达水平及IL-1β、IL-18水平比较,重度组最高,中度组次之,轻度组最低,差异均有统计学意义(P0.05)。预后不良组患者NLRP3、Caspase-1mRNA相对表达水平及IL-1β、IL-18水平高于预后良好组,差异有统计学意义(P0.05)。AIS患者外周血PBMCs NLRP3mRNA相对表达水平与Caspase-1mRNA、IL-1β、IL-18呈正相关(r=0.760,P0.001;r=0.712,P0.001;r=0.640,P=0.008),也与NIHSS和mRS评分呈正相关(r=0.730,P0.001;r=0.690,P0.001)。受试者工作特征曲线分析显示,NLRP3mRNA相对表达水平预测AIS的曲线下面积为0.894(95%CI:0.821～0.967),当最佳临界值为1.84时,其预测AIS患者预后不良的灵敏度和特异度分别为81.08%和82.50%,其预测效能优于mRS和NIHSS评分。结论 NLRP3炎性小体参与了AIS的炎症级联放大,对于AIS患者预后不良的预测,具有一定的临床应用价值。