变色液体培养基系统快速鉴定结核分枝杆菌和耐药性测定

由于固体培养基鉴定结核分枝杆菌(结核菌)及药敏试验均需28 d,其制作过程需加热,且培养基中蛋白质对药物有吸附作用,故仅用于常规抗结核药敏试验,不适合用于分枝杆菌最低抑菌浓度(MIC)测定.多耐药结核菌和非结核菌对常用抗结核药物耐药,因此急需一种快速测定分枝杆菌药敏的方法,筛选新的药物.尽管Bactec系统可用于分枝杆菌药敏试验和MIC测定[1],但试剂和仪器昂贵.因此,我们采用快速变色液体培养基系统鉴定结核与非结核分枝杆菌,并测定了结核菌常规药物的敏感性和非结核分枝杆菌对9种药物的MIC,结果如下. 一、材料和方法 1.标本来源:128株结核菌,34株非结核分枝杆菌(其中15株龟分枝杆菌脓肿亚种、4株龟分枝杆菌龟亚种、14株偶发分枝杆菌和1株胞内分枝杆菌).上述菌株为深圳地区和广州地区分离株. 2.结核菌快速鉴定及药敏试剂、分枝杆菌MIC测定试剂和菌株鉴定试剂:对硝基苯甲酸(PNB)培养基、5%氯化钠耐受试验、芳香硫酸酯酶(3、14     

变色液体培养基在分枝杆菌快速分离、鉴定及药敏试验检测中的应用

近１０余年来,分枝杆菌感染尤其是结核病的发生率在发达国家呈上升趋势,且仍然是发展中国家严重的公共卫生问题犤１犦。分枝杆菌诊断技术的发展远远不能满足临床实验室的需要。传统固体培养基虽可直接获取结果,但分离、鉴定分枝杆菌及药敏试验需２～３个月,且其在制作过程需加热,培养基中蛋白质对药物有吸附作用,故仅用于常规抗结核药敏试验,不适合用于分枝杆菌最低抑菌浓度（MIC）测定。多耐药结核菌和非结核菌对常用抗结核药物耐药,因此急需一种快速测定分枝杆菌药敏的方法,筛选新的药物犤２犦。尽管Bactec系统可用于分枝杆菌…     

用重组噬菌体检测结核分枝杆菌耐药性

目的　建立一种特异性强 ,灵敏度高的结核分枝杆菌 (结核菌 )的检测及药敏试验方法。方法　采用生物发光技术检测可表达荧光素酶的分枝杆菌噬菌体phage 40 ,对不同细菌的发光反应和药敏试验进行测定 ,探讨噬菌体生物发光检测方法的灵敏度和特异性。结果　phage 40对各种分枝杆菌均有特异性发光 ,对非分枝杆菌发光值很低 ,两者差异有显著性意义 ;不同的分枝杆菌发光值有差异 :卡介苗的发光值最高 ,在 4 2× 10 6 ml时最大发光值为 2 84 7mV ,结核菌的发光值最低 ,H37Ra在 6 4× 10 6 ml时最大发光值为 72 4mV ,H37Rv在 7 6× 10 6 ml时的最大发光值是 74 3mV ;在含抗结核药物的培养基中 ,耐药结核菌的发光强度比非耐药结核菌强 ,其强度差异有显著性意义。phage40的药敏试验结果与常规罗氏培养基法符合率一致 ,可在 72h内得到结果。结论　生物发光技术可快速、敏感地检测结核菌 ,通过发光分析 ,建立了一种简便、快速的药敏试验方法     

结核分枝杆菌的耐药性研究

目的研究临床分离结核分枝杆菌耐药性,为科学选择抗结核药物提供依据。方法采用病人标本分离培养和药敏试验方法,对617例结核分枝杆菌临床分离株进行耐药性调查。结果本医院2011年度从住院结核患者痰标本中分离到617株结核分枝杆菌,均进行了临床常用抗结核药物敏感试验。所分离的临床株结核分枝杆菌对异烟肼和利福喷叮的耐药率均超过31%;对利福平和链霉素的耐药率超过27%,对利福布叮、丁胺卡那霉素耐药率超过15%。结论该医院临床分离的结核分枝杆菌耐药率处于较高的水平,提示临床应根据药敏试验结果选择抗结核药物,控制耐药结核菌株的产生。     

结核分枝杆菌体外药敏试验标准株的建立与评价

目的 按照《病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准》(WS/T 812—2022),对已有多年使用基础的5株中国临床来源结核分枝杆菌菌株进行系统鉴定评价,以此建立我国的结核分枝杆菌体外药敏试验标准株。方法 建立标准的实验操作程序,对菌株进行培养特性、表型、生化特征、药敏试验及分子特征检测等系统评价,完成全基因组测序,建立主代及工作菌株库。结果 菌株的表型、生化及分子生物学检测结果表明5株菌符合结核分枝杆菌特征,性状稳定;耐药类型为2株全敏感菌株,2株耐多药结核菌株和1株广泛耐药结核菌株;完成全基因组测序;已获得中国疾病预防控制中心病原微生物菌(毒)种保藏中心(CHPC)保藏编号。结论 5个菌株符合结核分枝杆菌体外药敏试验质控菌株及抗结核药物筛选及评价测试菌株的要求,将为中国标准株的建立工作提供参考,为我国结核病耐药监测以及抗结核药物研发提供有力的支撑。     

11例非结核分枝杆菌耐药性分析

目的探讨非结核分支杆菌对常规11种抗结核药物的耐药分布及分支杆菌菌型鉴定初筛的意义。方法通过鉴别培养基(PNB和TCH)做分支杆菌菌型初筛鉴别,并回顾分析11例非结核分支杆菌临床症状及抗结核药物的耐药情况。结果非结核分支杆菌对11种抗结核药物的耐药率很高,异烟肼(H)、利福平(R)、力克肺疾(D)、氧氟沙星(O)、丙硫乙烟胺(TH)、对氨基水杨酸钠(P)的低浓度药物实验全部耐药,对高浓度药物也出现很高的耐药率。结论对涂片抗酸染色阳性者进一步做结核分支杆菌菌型初筛鉴别及药敏试验有重要临床价值。     

为什么要对分枝杆菌进行鉴定?怎样快速从临床标本中直接鉴定结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌?

结核分枝杆菌（结核菌）和非结核分枝杆菌感染的临床表现、X线特征极其相似，两者形态学上难鉴别，但临床治疗差别大，许多非结核分枝杆菌对抗结核药物天然耐药，常规化疗效果不佳，因此，目前分枝杆菌的鉴定对结核病诊断、鉴别诊断和有效化疗有重要意义。     

严重耐多药结核病的临床实验室监测

目的 监测结核分枝杆菌对一线和二线抗结核药物的耐药性水平,掌握严重耐多药结核病的流行情况.方法 2004年10月至2007年4月期间山东省胸科医院收集的1021株临床菌株,采用绝对浓度法在鸡蛋培养基上检测1 021株菌株对4种一线和5种二线抗结核药物的药物敏感性.结果 结核分枝杆菌复合群989株(96.9%),非结核分枝杆菌32株(3.1%).989株结核分枝杆菌对一线抗结核药物的总体耐药率为32.3%(95%可信区间为28.7%～35.8%),其中耐多药结核菌株107株(10.8%),有20株菌株符合严重耐多药结核的定义标准.严重耐多药结核菌株占所有耐多药结核菌株的18.7%,全部来自复治肺结核患者.结论 结核分枝杆菌对二线抗结核药物耐药性水平较高,严重耐多药结核在复治结核患者中的流行情况严重.研究显示持续开展抗结核药物耐药性的临床实验室监测十分必要.     

临床分离快速生长分枝杆菌的鉴定及对抗结核药物的敏感性分析

目的比较不同方法鉴定快速生长分枝杆菌(RGM)的准确性,检测RGM对抗结核药物的敏感性。方法 18株RGM使用DNA微阵列芯片法和基因测序法进行菌株鉴定,用比例法检测对利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇、丙硫异烟胺、对氨基水杨酸、卷曲霉素、氧氟沙星和卡那霉素9种抗结核药物的药物敏感性。结果 DNA微阵列芯片法与基因测序结果对偶然分枝杆菌和脓肿分枝杆菌鉴定符合率为100%,对其他菌株的鉴定结果偏差较大。RGM对临床上常用的9种抗结核药物普遍耐药,耐药程度依次为马赛分枝杆菌(9种药物全耐药)、脓肿分枝杆菌(8~9种药物耐药)、新金色分枝杆菌(8种药物耐药)、偶发分枝杆菌(7种药物耐药)、血液分枝杆菌(7种药物耐药)、康赛医院分枝杆菌(6种药物耐药)和富西亚分枝杆菌(4种药物耐药)。结论分子诊断技术在临床实验室的应用意义重大。使用抗结核药物治疗RGM感染患者的风险极大,应该按照RGM药敏折点标准进行药敏试验,以指导临床合理用药。     

变色液体培养基在分枝杆菌快速分离、鉴定及药敏试验检测中的应用

近10余年来,分枝杆菌感染尤其是结核病的发生率在发达国家呈上升趋势,且仍然是发展中国家严重的公共卫生问题[1].分枝杆菌诊断技术的发展远远不能满足临床实验室的需要.传统固体培养基虽可直接获取结果,但分离、鉴定分枝杆菌及药敏试验需2～3个月,且其在制作过程需加热,培养基中蛋白质对药物有吸附作用,故仅用于常规抗结核药敏试验,不适合用于分枝杆菌最低抑菌浓度(MIC)测定.……     

130株结核分枝杆菌药敏试验结果分析

目的 探讨结核分枝杆菌依赖抗结核药物的发生率及特点。方法 采用绝对浓度间接法对137株结核分枝杆菌（含7株非结核分枝杆菌）进行7种药物的敏感性试验，药物依赖判定：在含抗结核药物的培养基上生长旺盛程度和菌量，高浓度药物培养基≥低浓度药物培养基≥对照培养基。结果 130株结核分枝杆菌和7株非结核分枝杆菌共检出依赖菌12株（8．76％）。其中依赖异烟肼3株（2．19％），依赖利福平10株（7．3％），依赖链霉素3株（2．19％），同时依赖2种药物者4株（2．92％）。结论 药物依赖现象均发生自耐多药菌株，尚未发现非结核分枝杆菌及初始耐药菌药物依赖。     

广东肇庆地区非结核分枝杆菌耐药情况分析

目的了解广东肇庆地区肺结核患者分离株的非结核分枝杆菌(NTM)的耐药情况。方法收集结核患者和疑似结核患者中551份痰液标本在酸性罗氏培养基进行培养,培养阳性的标本进行对硝基苯甲酸(PNB)鉴定管培养,鉴定为非结核分枝杆菌,同时采用比例法进行异烟肼(INH)、利福平(REP)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(Sm)、氧氟沙星(Ofx)、卡那霉素(Km)、对氨基水杨酸(PAS)、卷曲霉素(Cm)、丙硫异烟胺(Pto)药物的药物敏感试验。结果 PNB鉴定管培养阳性的68株非结核分枝杆菌,对9种抗结核药物的耐药率分别为INH 100.00%(68/68)、REP 95.59%(65/68)、EMB 95.59%(65/68)、Sm 92.65%(63/68)、Ofx 85.29%(58/68)、Km 58.82%(40/68)、PAS 55.88%(38/68)、Cm 70.59%(48/68)、Pto 77.94%(53/68)。提示NTM对抗结核药物的总体耐药率100.00%。结论广东肇庆地区非结核分枝杆菌耐药性强,对临床常用抗结核药物呈现多重耐药严重,治疗困难。     

苏州地区非结核分枝杆菌的菌种鉴定和药敏相关性分析

目的 分析苏州地区非结核分枝杆菌(NTM)的菌种鉴定组成结构以及耐药情况。方法 药敏试验采用改良的罗氏培养比例法。采用基因芯片对非结核分枝杆菌进行菌种鉴定。结果 苏州地区的非结核分枝杆菌共鉴定出6种,其中包括:胞内分枝杆菌73株(57.2%),堪萨斯分枝杆菌32株(25%),龟/脓肿分枝杆菌15株(11.7%),鸟分枝杆菌6株(4.7%),草分枝杆菌1株(0.7%),偶然分枝杆菌1株(0.7%)。NTM对抗结核一线药物的链霉素和异烟肼的耐药率最高,分别为95.3%和98.4%。其次对利福平和乙胺丁醇的耐药率分别为72.7%与28.9%。对与二线药物对氨基水杨酸与阿米卡星的耐药率最高,分别是99.1%和90.2%。其次对左氧氟沙星和丙硫异烟胺的耐药率为76.5%与18.6%。结论 苏州地区的NTM以胞内分枝杆菌为主,且不同的NTM之间对于药物的耐药情况存在差异,准确进行菌种鉴定,有利于患者的精准治疗。     

喹诺酮类药物体外抗结核分枝杆菌活性的比较研究

第三代喹诺酮类药物因其具有较强的抗结核分枝杆菌活性 ,与其他抗结核药物之间无交叉耐药性 ,因此 ,这类药物已成为耐药结核病人的主要选用药物[1] 。目前国产与进口氟喹诺酮类均已广泛应用 ,为了比较国产与进口药物的抗结核分枝杆菌活性 ,通过国产左氧氟沙星、司帕沙星与进口同类药物对临床分离 5 8株结核分枝杆菌的最低抑菌浓度(ＭＩＣ)测定 ,进行比较研究 ,报道如下。一、材料和方法1.菌株 :5 8株结核分枝杆菌临床分离株 ;Ｈ37ＲＶ为试验对照菌株。菌株号 :ＡＴＣＣ35 835。2 .药物 :本研究使用的进口左氧氟沙星纯粉均由日本第一制药株式…     

分枝杆菌快速变色液体培养基系统的临床应用评价

目的评价一种快速检测分枝杆菌的培养、鉴定和药敏系统.方法采用分枝杆菌快速变色液体培养基系统检测200份标本,并与改良L-J培养基法进行比较.结果快速变色液体培养基系统阳性率(37.5%)明显高于改良L-J培养基(17%).变色液体培养基和改良L-J培养基涂阳平均检出时间分别为8天和19天,涂阴平均检出时间分别为13天和26天;污染率分别为3%和2.5%.与异烟肼、链霉素、利福平、乙胺丁醇一致率分别为87%、61%、93%和92%.且MTBC和MOTT的鉴定和MTBC的药敏只需要2～6天.结论这种新型变色液体培养基系统具有快速、操作简便、实用等特点,培养分枝杆菌阳性率高,鉴定和药敏系统快速准确,且可进行多种抗结核药物药敏检测和药物最小抑菌浓度测定,值得临床推广应用.     

甘肃省53株非结核分枝杆菌对9种常用抗结核药物的敏感性分析

目的 初步了解2012－2014年甘肃省临床分离的非结核分枝杆菌（NTM）对常用抗结核药物的耐药情况。方法 收集临床分枝杆菌分离株,用PNB/TCH生长试验和基于16S rRNA基因的序列分析法鉴定NTM。采用传统固体罗氏培养基绝对浓度法对NTM进行9种常用抗结核药物链霉素（SM）、利福平（RFP）、丙硫异烟胺（TH₁₃₂₁）、异烟肼（INH）、对氨基水杨酸钠（PAS）、左氧氟沙星（LVFX）、乙胺丁醇（EMB）、卡那霉素（KAN）和吡嗪酰胺（PZA）的敏感性测试。结果 共收集到分枝杆菌1 081株,经鉴定53株为NTM,分离率为4.90%。其中胞内分枝杆菌最多,为36株;其次是堪萨斯分枝杆菌,为8株;其他依次是鸟分枝杆菌4株、戈登分枝杆菌2株、脓肿分枝杆菌2株和偶然分枝杆菌1株。药敏结果显示,耐药率从高到低依次为RFP（73.58%）、TH₁₃₂₁（69.81%）、INH（67.92%）、SM（62.26%）、PAS（60.38%）、PZA（47.17%）、EMB（28.30%）、LVFX（26.41%）、KAN（15.09%）,其中耐药株49株,耐药率为92.45%,NTM对9种抗结核药物的耐药程度有差异。结论 NTM对抗结核药物敏感性差,应参照NTM药敏结果选择合理的药物,提高治愈率,减少耐药发生。     

112例非结核分枝杆菌药敏耐药分析

目的了解分析本院非结核分枝杆菌耐药情况,对2006—2010年非结核分枝杆茼耐药情况进行评价。方法采用绝对浓度法对10种抗结核药物利福平（RFP）、异烟肼（INH）、乙胺丁醇（EMB）、链霉素（SM）、力克肺疾（PNA）、阿米卡星（AMK）、左氧氟沙星（LOFL）、卷曲霉素（CPM）、环丙沙星（CIP）和对氨基水扬酸（PAS）进行药敏试验。结果2925例标本中鉴定出儿2例（3．82％）非典型结核分枝杆菌,总耐药率为100％。结论本院的非结核分支杆菌耐药情况应该引起高度重视。     

结核分枝杆菌快速药敏方法学研究进展

在结核病防治过程中 ,结核分枝杆菌耐药尤其是多重耐药结核分枝杆菌 (ＭＤＲ ＴＢ)问题已成为有效控制结核病的重要障碍[1] 。ＭＤＲ ＴＢ的产生与临床不规范治疗密切相关 ,而规范的治疗需要快速敏感的药敏试验为指导。建立快速敏感的结核分枝杆菌药敏试验方法已成为有效控制结核病的首要条件[2 ] 。然而目前分枝杆菌药敏试验仍多采用传统方法即绝对浓度法、比例法和抗性比例法 (ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｒａｔｉｏｍｅｔｈｏｄ) ,这些方法均具有生长依赖性 ,在得到分离菌株后需要 3～ 4周才能获得药敏试验结果[3 ] 。建立于 2 0世纪 80年代的…     

耐多药结核杆菌对二线抗结核药物的敏感性实验研究

目的 明确耐多药结核杆菌对部分二线抗结核药物的敏感性,为治愈耐多药结核病提供依据.方法 选用改良罗氏培养基,采用药敏比例法测定耐多药结核菌对卷曲霉素、丁胺卡那、左旋氧氟沙星、对氨基水杨酸此四种临床常用二线抗结核药物的敏感性.结果 22株耐多药结核分枝杆菌对卷曲霉素、丁胺卡那、左旋氧氟沙星、对氨基水杨酸的敏感率依次为:72.7%、90.9%、63.6%、45.5%.结论 本地区耐多药结核菌对对氨基水杨酸敏感率较低,对其它三种二线抗结核药还处于低水平耐药状态,但已出现广泛耐药结核杆菌菌株,应予重视.     

南京地区结核分枝杆菌耐药状况的调查

目的监测结核分枝杆菌对一线和二线抗结核药物的耐药水平,掌握耐多药结核病流行情况。方法2003~2008年6年内本院收集的4 703株临床分枝杆菌,采用绝对浓度法在改良罗氏培养基上检测其对4种一线抗结核药和5种二线抗结核药的敏感性。结果结核复合群4 470株(95%),非结核分枝杆菌233株(5%)。4 703株分枝杆菌对9种抗结核药的耐药率为RIF(48.50%)、INH(45.52%)、SM(31.85%)、EB(19.58%)、DIP(18.56%)、LVX(16.24%)、PAS(9.78%)、AMK(7.61%)、CPM(6.29%)。与2003年的报道相比,对INH、RIF、EB、LVX、DIP的耐药率均明显增高,P<0.01;对SM、CPM的耐药率增高无显著性差异,P>0.05;而对AMK和PAS的耐药率明显降低,P<0.01。4 470株结核杆菌中有耐多药结核菌(MDR-TB)和严重耐多药结核菌(XDR-TB)分别为1 573和136株,分别占结核杆菌总数的35.19%和3.04%。其中MDR-TB数比2003年报道的32.02%略高。结论结核杆菌对抗结核药耐药水平较高且有增高的趋势,MDR-T...