miR-138在慢性乙型肝炎肝癌患者中的表达及其对外周血T细胞PD-1表达的影响

目的 探讨miR-138在慢性乙型肝炎肝癌患者(HCC)中的表达及其对外周血T细胞PD-1表达的影响。方法Real-time PCR检测HCC患者外周血和腹腔积液miR-138含量,ELISA检测HCC患者外周血和腹腔积液sPD-1含量,CD3免疫磁珠分选HCC患者外周血T淋巴细胞,流式细胞术和WesternSblot检测miR-138 mimic或miR-138 inhibitor转染后T细胞PD-1表达,双荧光素酶报告基因系统验证miR-138对PD-1基因3’-UTR区的靶向作用。 结果 HCC患者腹腔积液和外周血血清miR-138相对表达量,sPD-1含量和CD3₊T细胞中PD-1表达量均显著高于对照组(P<0.05)且miR-138相对表达量与sPD-1含量、CD3₊T细胞PD-1表达量均呈负相关(P<0.05)。miR-138在HCC患者T细胞中通过靶向作用PD-1基因3’-UTR区负向调节PD-1表达。结论 miR-138通过靶向作用PD-1参与了HBV相关HCC的发生发展过程。     

肝细胞癌肿瘤微环境细胞毒性T细胞PD-1的表达及其临床意义

目的 探讨程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)在肝细胞癌(HCC)肿瘤微环境细胞毒性T细胞中的表达及其临床意义。方法 回顾性选取2012年1月至2020年12月入复旦大学附属中山医院青浦分院接受手术治疗的HCC患者344例为研究对象,手术切除HCC患者的癌组织,免疫组织化学双染色法检测PD-1的表达,依据PD-1的表达中位数水平分为PD-1高表达和PD-1低表达,分析PD-1表达与临床病理参数的相关性,采用Kaplan-Meier方法计算总生存率和无进展生存率并绘制生存曲线,采用多因素Cox回归分析HCC的预后影响因素。结果 PD-1表达于HCC肿瘤浸润淋巴细胞的细胞膜和(或)细胞质上,肿瘤浸润淋巴细胞中PD-1的高表达率为43.9%(151/344);HCC肿瘤组中PD-L1的阳性表达率为21.8%(75/344);HCC肿瘤浸润免疫细胞中PD-L1的阳性表达率为47.1%(162/344);肿瘤浸润CD8⁺T细胞高密度率为45.3%(156/344)。PD-1高表达与肿瘤组织学分级、肿瘤细胞PD-L1表达、CD8⁺T淋巴细胞PD-L1表达、C...     

PD-1、TIM-3、VISTA在急性髓系白血病患者T细胞上的表达及意义

目的:研究多种负性共刺激分子在急性髓系白血病(AML)患者外周血T细胞上的表达及其对预后的影响。方法:收集初治、完全缓解(CR)、未缓解(NR)AML患者外周血标本,采用流式细胞术检测CD4~+和CD8~+T细胞PD-1、VISTA、TIM-3的表达水平,并收集患者临床资料进行统计分析。结果:初治AML组患者CD4~+和CD8~+T细胞PD-1、VISTA、TIM-3表达水平均较对照组显著增高(P0.05),CR组CD4~+和CD8~+T细胞PD-1、TIM-3、VISTA表达水平均较初治组及NR组显著降低(P0.05);初治AML患者CD4~+和CD8~+T细胞TIM-3表达水平与VISTA表达水平正相关(r=0.85,r=0.73);初治AML患者,首次诱导化疗未缓解组及高危组患者CD4~+T细胞PD-1、VISTA表达水平显著上升(P0.05),高危组CD8~+T细胞TIM-3表达水平显著上升(P0.05),CBFβ-MYH11突变阳性组CD8~+T细胞VISTA表达水平显著降低(P0.05)。结论:PD-1、TIM-3、VISTA在AML外周血T细胞上的表达可能参与AML的免疫逃逸,并可能成为急性髓系白血病患者的治疗靶点。     

细胞抑制性受体PD-1及LAG-3在慢性乙型肝炎患者CD4+ T细胞表面的表达及其意义

目的探讨慢性乙型肝炎患者(CHB)外周血CD4~+T淋巴细胞抑制性受体程序性死亡分子-1(PD-1)及淋巴细胞活化基因-3(LAG-3)的表达水平及其与疗效的关系。方法采用流式细胞术分别检测71例CHB初治患者和40例健康人外周血CD4~+T淋巴细胞PD-1及LAG-3的表达水平,同时在治疗前(T1)、治疗后24周(T2)及治疗后52周(T3)随访接受干扰素抗病毒治疗的CHB患者17例。采用实时荧光定量PCR技术检测血清HBV DNA水平,化学发光微粒子免疫分析技术定量测定血清HBV标志物,速率法检测ALT水平。结果与健康对照组相比,71例CHB患者CD4~+T细胞可检测到高水平PD-1及LAG-3表达,两组之间差异有统计学意义(P0.01);HBeAg(~+)组PD-1及LAG-3表达水平明显高于HBeAg(-)组,两者间差异有统计学意义(P0.05);有效抗病毒治疗患者PD-1及LAG-3水平随着DNA及ALT水平的下降而明显下降,与治疗前相比,差异有统计学意义(P0.05)。结论有效的抗病毒治疗可促使CHB外周血CD4~+T淋巴细胞功能恢复,可能为CHB的治疗及疗效监测提供了依据。     

CXCR5、sPD-1、Hcy在AIDS患者治疗过程中的动态变化及临床意义

目的探讨获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者抗逆转录病毒治疗(ART)过程中血清趋化因子受体5(CXCR5)、可溶性程序性细胞死亡受体-1(sPD-1)、同型半胱氨酸(Hcy)的变化及临床意义。方法选取AIDS患者120例(AIDS组),分别在AIDS患者治疗前1 d及治疗后3、6、12个月检测其人类免疫缺陷病毒(HIV)-1载量、CD4+T细胞绝对数及CXCR5、sPD-1、Hcy、血脂[三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)]水平;以体检健康者45名作为正常对照组。采用Pearson相关分析评估各项指标与CD4+T细胞绝对数、HIV-1载量的相关性。结果AIDS组治疗前sPD-1和Hcy水平均显著高于正常对照组(P<0.01),CXCR5、CD4+T细胞绝对数均显著低于正常对照组(P<0.01)。与治疗前比较,随着ART时间的延长,AIDS患者CD4+T细胞绝对数、CXCR5水平均显著升高(P<0.05),在治疗6个月时达到峰值;Hcy、TC、TG、LDL-C在治疗12个月时显著升高(P<0.05);HDL-C无变化;治疗3个月时HIV-1载量开始降低(P<0.05),治疗6个月时降低更为显著(P<0.05);治疗12个月时血清sPD-1水平显著降低(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,CD4+T细胞绝对数与CXCR5、Hcy水平均呈正相关(r值分别为0.192、0.401,P<0.05),与sPD-1呈负相关(r=-0.708,P<0.05);HIV-1载量与CXCR5、Hcy均呈负相关(r值分别为-0.682、-0.318,P<0.05),与sPD-1呈正相关(r=0.368,P<0.05)。结论动态监测AIDS患者ART过程中CD4+T细胞绝对数、HIV-1载量、CXCR5、sPD-1、Hcy和血脂的变化,有助于及时了解HIV感染的进展情况。     

miR-335-5p/ADCY3诱导的再生障碍性贫血患者免疫异常的机制研究

目的:探究miR-335-5p/ADCY3失衡对获得性再生障碍性贫血(AA)患者淋巴细胞功能的影响。方法:采集AA患者外周血标本50例,其中重型再生障碍性贫血(SAA)38例,非重型再生障碍性贫血(NSAA)12例,同时采集健康志愿者(HC)外周血标本22例。标本分离单个核细胞(PBMNC)后,用RT-PCR检测miR-335-5p及ADCY3 mRNA的表达量。用RNAimax转染试剂,将阴性对照miR-335-5p及miR-335-5p mimic分别转染至AA患者的PBMNC,流式细胞术检测CD4+T和CD8+T细胞增殖、活化及分泌细胞因子的能力。应用双荧光素酶报告基因系统验证miR-335-5p与靶基因的靶向关系。结果:同HC来源的PBMNC(HC-PBMNC)相比,SAA和NSAA来源的PBMNC中miR-335-5p的表达量均明显降低(0.08±0.01 vs 0.74±0.10,P0.01**;0.17±0.02 vs 0.74±0.10,P0.01**)。而且,SAA来源的PBMNC中miR-335-5p的表达量显著低于NSAA(P0.01**)。与对照组相比,体外上调miR-335-5p的表达,AA来源的PBMNC(AA-PBMNC)中,CD4+T和CD8+T细胞增殖能力均明显降低(P0.05*和P0.05*)。而且上调miR-335-5p的表达可显著抑制AA-PBMNC中CD4~+和CD8~+T细胞的活化(P0.01**和P0.01**)。此外,上调AA-PBMNC中,miR-335-5p的表达还可明显降低CD4~+TNFα~+T细胞、CD8~+IFNγ~+T细胞和CD8~+TNFα~+T细胞的比例(P0.01、P0.05和P0.05)。靶基因筛查显示,ADCY3在AA-PBMNC中的表达量明显高于HC-PBMNC (1.70±0.15 vs 0.76±0.12,P0.001)。而且,miR-335-5p可显著抑制ADCY3 3′UTR野生型质粒的荧光素酶活性(P0.05)。结论:MiR-335-5p在AA-PBMNC中显著低表达,且与疾病严重程度相关。体外上调AA-PBMNC中miR-335-5p的表达量可纠正患者免疫异常状态。这些改变可能与靶基因ADCY3的抑制增强有关。     

CD8~+T细胞功能耗竭与继发性噬血细胞综合征发病的关系及其机制研究

目的:探讨CD8~+T细胞功能变化在继发性噬血细胞综合征(sHLH)发病过程中的作用和意义,揭示sHLH可能的发病机制。方法:流式细胞术检测sHLH患者CD8~+T细胞耗竭标记PD-1、TIM-3和LAG-3的表达,ΔCD107a表达和细胞内干扰素γ(IFN-γ)分泌水平,检测效应记忆CD8~+T细胞、调节性T细胞及双阴性T细胞的数量。结果:sHLH患者CD8~+T细胞上抑制性受体PD-1、TIM-3和LAG-3的表达水平分别为40.73±22.64、15.97±14.45和0.73(0-37.41),明显高于对照组的14.48±7.98、1.95±1.52和0.01(0-2),差异均有统计学意义(P0.001);而CD8~+T细胞的ΔCD107a表达量(4.49±2.71 vs 6.07±2.14,P=0.035)和IFN-γ分泌水平(37.30±24.46 vs 55.17±22.23,P=0.034)则明显低于对照组。sHLH患者效应记忆性CD8~+T细胞的数量明显少于对照组(14.35±10.37 vs 22.92±11.12,P=0.016),而调节性T细胞及双阴性T细胞数量则无明显差异。sHLH患者活动期CD8~+T的PD-1、TIM-3和LAG-3表达量分别为38.09±21.87、14.35±13.70和0.82(0-13.22),明显高于缓解期的24.27±17.23(P=0.03)、8.64±5.60(P=0.014)和0.13(0-3.69)(P=0.043)。结论:CD8~+T细胞功能耗竭可能是参与sHLH发生的重要环节之一。     

围绝经期和绝经后女性雌激素与T细胞亚群和PD-1的相关性

目的:探讨绝经前、围绝经期和绝经后外周血雌激素水平与T细胞亚群和PD-1表达的相关性。方法:选取对照组女性60例,围绝经期组30例,绝经后期组40例。采用流式细胞术和化学发光等技术测定T细胞亚群、PD-1表达和雌激素水平。结果 :相比正常组,围绝经期组和绝经后期组CD3+、CD4+T细胞亚群相对值及CD4+/CD8+比值显著下降(P<0.05)。CD8+T细胞亚群相对值在组间无统计学差异。CD4+、CD8+T细胞PD-1相对表达量3组间有差异(P<0.05),绝经后期组低于围绝经期组和正常组。CD4+、CD8+T细胞亚群PD-1相对表达量均与E2呈正相关(P<0.001)。结论:围绝经期及绝经后期女性CD3+、CD4+和CD8+T细胞亚群相对值均下降。CD4+、CD8+T细胞PD-1表达量也降低,显示雌激素与T细胞免疫关系密切。     

乙型肝炎病毒基本核心启动子区A1762T/G1764A突变检测的意义

目的探讨乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)基本核心启动子区(BCP)A1762T/G1764A联合突变在不同疾病中发生的差异及其与乙肝相关肝癌预后的关系。方法选择慢性乙肝(CHB)患者38例、乙肝肝硬化(LC)患者36例、乙肝相关肝细胞肝癌(HCC)患者74例,用巢式PCR扩增患者血清中HBV BCP区,直接测序法检测HBV BCP区变异,分析A1762T/G1764A突变与HBV复制、HBeAg表达和HBV感染不同阶段的关系,以及与HCC患者预后的关系。结果在148例患者中,A1762T/G1764A突变总体发生率为54.7%,乙肝相关HCC组中A1762T/G1764A突变发生率为79.7%,而CHB、LC患者分别为31.6%、27.8%,HCC组变异的发生率明显高于CHB组(P0.05)和LC组(P0.05);A1762T/G1764A突变组HBV-DNA载量与非突变组比较差异无统计学意义(P0.05);HBeAg阳性组A1762T/G1764A突变发生率为41.4%,HBeAg阴性组为73.5%,HBeAg阴性组变异发生率明显高于HBeAg阳性组(P0.05);HCC患者A1762T/G1764A变异组与非变异组之间无病生存期及总体生存期差异无统计学意义(P0.05)。结论 HBV核心启动子区A1762T/G1764A联合突变与HCC发生具有显著关系,该变异与血清HBV-DNA的复制水平无关,但与血清HBeAg表达水平有关,与乙肝相关HCC预后无显著关系。     

非小细胞肺癌患者外周血及肿瘤组织中CD4^+T淋巴细胞上Tim-3的表达及其对巨噬细胞活性的影响

目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血及肿瘤组织中CD4^+T淋巴细胞上T细胞免疫球蛋白黏蛋白结构域分子3(Tim-3)的表达及其临床意义。方法收集西南医科大学附属医院2017年1月至2018年6月收治住院的64例NSCLC患者外周血、肺癌组织和癌旁正常肺组织标本,同时选取40例健康人群作为对照。采用流式法检测Tim-3和程序性死亡蛋白配体(PD-1)在CD4^+T细胞上的表达,实时荧光定量PCR(qPCR)测定巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg1)mRNA的水平,分析Tim-3和PD-1与巨噬细胞活性的关系。结果肺癌患者外周血中CD4^+T淋巴细胞上Tim-3、PD-1表达分别为4.96%和24.13%,均显著高于健康对照人群的2.05%及10.25%(P<0.05);且肺癌患者外周血CD4^+T淋巴细胞上Tim-3^+PD-1^+的表达水平为4.36%,也明显高于健康对照组的2.63%(P<0.05)。肺癌组织中CD4^+T淋巴细胞上Tim-3、PD-1表达及Tim-3^+PD-1^+共表达均显著高于癌旁正常组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。与癌旁正常组织比较,肺癌组织中iNOS mRNA略有降低,而Arg1 mRNA水平则显著升高,且肺组织中Tim-3、PD-1表达和Tim-3^+PD-1^+共表达与巨噬细胞活性iNOS/Arg1比值均呈负相关(P<0.05)。结论NSCLC患者外血周及肿瘤组织中CD4^+T淋巴细胞上Tim-3和PD-1表达上调,促使M1型巨噬细胞转变为M2型,具有负性免疫调节作用。     

酪酸梭菌二联活菌对晚期早产儿外周血T细胞表达CD28和PD-1的影响及临床意义

目的研究晚期早产儿在酪酸梭菌二联活菌治疗前后外周血T细胞表达PD-1和CD28差异;探讨酪酸梭菌二联活菌对晚期早产儿免疫功能影响及临床意义。方法选取新生儿重症监护室的晚期早产儿40人,按随机分组法平均分为两组(实验组和对照组),最终对照组18例、实验组17例完成试验。实验组服用酪酸梭菌二联活菌(溶于奶粉溶液);对照组仅服用相同剂量的奶粉溶液。分别于入院时(生后24小时内)和干预7天后抽取患儿外周静脉血。流式细胞仪检测CD4+与CD8+T细胞上PD-1和CD28表达量。同时检测患儿入院时的生化指标,观察生化指标与PD-1、CD28表达的相关性。结果 (1)相对于对照组,实验组在酪酸梭菌二联活菌治疗后,CD8+T细胞上PD-1表达更高(P=0.0262);(2)相对于对照组,实验组在酪酸梭菌二联活菌治疗前后,其CD4+T细胞PD-1的表达的下降幅度(治疗后与治疗前的比值)和CD28的表达的上升幅度均显著增高(P=0.0318;P=0.00380);(3)所有晚期早产儿(对照组和实验组)在酪酸梭菌二联活菌治疗前,其CD8+T细胞上PD-1表达与血清白蛋白呈负相关(r=-0.5097,P=0.0018),而其CD28表达与血清球蛋白呈正相关(r=0.5699,P=0.0004)。结论 (1)酪酸梭菌二联活菌治疗影响晚期早产儿T细胞上PD-1和CD28表达;(2)酪酸梭菌二联活菌治疗有助于改善晚期早产儿的免疫功能。     

慢性乙型肝炎及乙型肝炎后肝硬化、肝癌患者外周血辅助性T淋巴细胞表达水平分析

目的探讨慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)及乙型肝炎后肝硬化(liver cirrhosis,LC)、肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者外周血辅助性T淋巴细胞(Th)的表达水平。方法选择2014年1—3月建平县疾病预防控制中心传染病网络报告的HBV 34例(CHB组)及2014年1—12月在建平县疾病预防控制中心登记注册的乙型肝炎后LC 31例(乙型肝炎后LC组)和乙型肝炎后HCC 29例(乙型肝炎后HCC组),另选择2014年1—3月参加建平县医院体格检查结论健康的志愿者30例(对照组)。所有入选患者均进行Th(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)检测并比较。结果 4组外周血Th各指标值总体比较差异均有统计学意义(P0.05)。CHB组、乙型肝炎后LC组及乙型肝炎后HCC组外周血CD3+、CD4+及CD4+/CD8+值均明显低于对照组,外周血CD8+值均明显高于对照组;乙型肝炎后HCC组外周血CD3+、CD4+及CD4+/CD8+值均明显低于CHB组及乙型肝炎后LC组,而CD8+值明显高于CHB组及乙型肝炎后LC组;乙型肝炎后LC组外周血CD3+、CD4+及CD4+/CD8+值均明显低于CHB组,而CD8+值明显高于CHB组,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论 CHB及乙型肝炎后LC、HCC患者均存在明确外周血Th异常表达,乙型肝炎后HCC患者最为严重。     

PD-1在弥漫大B细胞淋巴瘤的表达及对CD8+T细胞功能影响的研究

目的 研究程序性细胞死亡受体1(PD-1)在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中的表达情况及对T细胞功能的影响.方法 收集临床上诊断为DLBCL的患者经手术切除的标本54例:根据国际预后指数(IPI)分类,IPI<2分的31例,IPI>2分的23例,瘤周正常淋巴组织14例,利用Western Blot技术分析DLBCL组织和正常淋巴组织中PD-1表达水平的差异;通过流式细胞仪对比分析上述两种组织中PD-1+CD8+T比例及IFN-γ/IL-2双阳性的水平.结果 Western Blot显示DLBCL组织及正常淋巴组织均表达PD-1,而肿瘤组织中PD-1的表达水平高;正常淋巴组织PD-1+CD8+T细胞比例低于肿瘤组织(P<0.01),IPI<2 DLBCL组织中PD-1+CD8+T细胞比例较IPI>2分的DLBCL组织低(P<0.01);正常淋巴组织中PD-1+CD8+T细胞和PD-1-CD8+T细胞中IFN-γ/IL-2双阳性的表达未见明显差异(P>0.05);DLBCL组织中PD-1+CD8+T细胞较PD-1-CD8+T细胞中IFN-γ/IL-2双阳性比例低(P<0.01),且IPI>2分的DLBCL组织中PD-1+CD8+T细胞比IPI<2分PD-1+CD8+T细胞中IFN-γ/IL-2双阳性比例低(P<0.01).结论 DLBCL组织中PD-1表达增多,且IFN-γ/IL-2双阳性比例减少,且随着IPI增加,上述现象更加明显.     

复发性自然流产患者T细胞中Tim-3和PD-1的表达

目的探讨复发性自然流产(RSA)患者T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(Tim-3)及程序性死亡因子-1(PD-1)在T细胞中的表达情况,为其作为治疗RSA的潜在靶点提供理论依据。方法采集22名正常早孕妇女(对照组)及21例RSA患者抗凝外周血,用流式细胞术分别检测T细胞表面分子Tim-3及PD-1的表达情况。结果 RSA患者外周血T细胞中Tim-3~+T细胞比例(1.01%±0.64%)和PD-1~+T细胞比例(40.76%±13.76%)均明显低于对照组(1.85%±0.96%、54.32%±26.65%)(P0.01、P0.05);RSA组T细胞中Tim-3~+PD-1~+双阳性T细胞比例(0.59%±0.27%)明显低于对照组(1.37%±0.85%,P0.001),而Tim-3-PD-1~+T细胞比例(40.17%±13.68%)和Tim-3~+PD-1-T细胞比例(0.43%±0.41%)与对照组(52.95%±26.28%、0.48%±0.31%)比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 Tim-3~+CD3~+T细胞、PD-1~+CD3~+T细胞及Tim-3~+PD-1~+双阳性T细胞水平降低可能与RSA有关,有作为RSA治疗潜在靶点的价值。     

微小RNA-340对肝细胞癌细胞转移和侵袭力的影响

目的探讨高表达微小RNA-340(miR-340)对肝细胞癌(HCC)细胞转移和侵袭力的影响。方法采用LipofectamineTM2000试剂盒进行miR-340转染,Transwell侵袭实验评价侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)测定HCC细胞株miR-340、E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的mRNA水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定MMP-2和MMP-9蛋白水平,用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测核转录因子κB1(NF-κB1)蛋白水平。结果与HepG2相比miR-340在HCC细胞系中表达水平降低,高表达miR-340的HepG2细胞、MHCC-97L细胞侵袭能力下降。高表达miR-340的HepG2细胞和MHCC-97L细胞E-钙黏蛋白mRNA表达上调,N-钙黏蛋白mRNA水平下调,波形蛋白mRNA水平下调。miR-340使HepG2细胞和MHCC-97L细胞中MMP-2和MMP-9的表达下降;与HCC细胞系比较,高表达miR-340的HepG2细胞NF-κB1表达量下降40%、MHCC-97L细胞下降66%,差异有统计学意义(P0.05)。生物信息学分析预示NF-κB1是miR-340的潜在靶基因且萤光素酶报告分析又进一步证实了miR-340可以直接作用于NF-κB1的3′端非编码区。结论 miR-340在抑制细胞迁移、侵袭和上皮细胞间质转化中起着重要的作用,提示miR-340表达水平降低是HCC发生的重要环节,基于miR-340的治疗方法可用于HCC诊治。     

肝细胞肝癌患者血浆miR-29a水平的变化及其临床意义

目的探讨肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者血浆miR-29a水平的变化及其临床意义。方法病例对照研究,收集湖北省十堰市太和医院2016年1月~6月期间入院的30例肝细胞肝癌HCC患者,30例肝硬化(cirrhosis of liver,LC)患者和30例健康对照(healthy controls,HC)的血浆标本,采用实时荧光定量PCR检测血浆中microRNA-29a(miR-29a)含量,通过受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析血浆miR-29a表达水平在肝癌诊断中的敏感度和特异度,并对HCC患者血浆中miR-29a含量和甲胎蛋白(AFP)含量进行相关性分析。结果比较miR-29a的相对表达量,HCC组(3.38±8.37),LC组(8.79±3.80)和HC组(11.98±6.64)差异具有统计学意义(P=0.000),其中HCC组显著低于LC组(P=0.046)和HC组(P=0.001),LC组显著低于HC组(P=0.026)。ROC曲线下面积miR-29a为0.816(95%C1 0.695~0.938)小于AFP 0.918(95%CI 0.853~0.982),诊断效率miR 29a不如AFP。HCC患者血浆中miR-29a含量和AFP浓度具有显著相关性(P=0.002),血浆miR-29a和AFP联合应用有助于提高HCC的诊断效率。结论 HCC患者血浆miR-29a水平降低,可能成为HCC诊断的参考指标。     

miR-181a靶向RASSF1A促进多发性骨髓瘤U266细胞增殖、侵袭

目的探讨miR-181a靶向Ras相关区域家族1(RASSF1A)促进多发性骨髓瘤U266细胞增殖、侵袭的作用。方法收集40例多发性骨髓瘤患者骨髓组织及50例受试者的正常骨髓组织标本;培养多发性骨髓瘤U266细胞,并分为NC mimic组、miR-181a mimic组、NC inhibitor组、miR-181a inhibitor组。采用MTS法检测细胞增殖活力;Transwell试验检测细胞侵袭能力;实时荧光定量PCR检测各组miR-181a的表达水平;western blot检测RASSF1A、cyclinD1、RhoA蛋白的表达水平;荧光素酶报告试验验证miR-181a靶向RASSF1A 3′非翻译区(UTR)。结果实时荧光定量PCR结果显示,多发性骨髓瘤组织中miR-181a的表达量明显高于正常骨髓组织(P均<0.05);western blot检测结果显示,多发性骨髓瘤组织中cyclinD1、RhoA蛋白的表达量明显高于正常骨髓组织(P均<0.05),而RASSF1A蛋白的表达量明显低于正常骨髓组织(P<0.05);western blot检测结果还显示,miR-181a mimic组cyclinD1、RhoA蛋白的表达量明显高于NC mimic组(P均<0.05),而miR-181a inhibitor组cyclinD1、RhoA的表达量明显低于NC inhibitor组(0.32±0.07 vs 0.71±0.12,0.39±0.06 vs 0.66±0.10,P均<0.05);Transwell试验结果表明,miR-181a mimic组侵袭细胞数(个)明显高于NC mimic组(38.59±7.41 vs 10.29±2.12,P<0.05),而miR-181a inhibitor组侵袭细胞数(个)明显少于NC inhibitor组(7.28±1.24 vs 11.41±2.76,P<0.05);荧光素酶报告试验结果表明,miR-181a mimic组RASSF1A的表达量及RASSF1A 3′UTR荧光素酶报告基因的荧光活力均明显低于NC mimic组(0.81±0.15 vs 1.54±0.26,0.173±0.035 vs 0.291±0.062,P均<0.05),而miR-181a inhibitor组RASSF1A的表达量及RASSF1A 3′UTR荧光素酶报告基因的荧光活力明显高于NC inhibitor组(1.83±0.31 vs 1.25±0.21,0.399±0.067 vs 0.273±0.057,P均<0.05)。结论miR-181a能够促进多发性骨髓瘤U266细胞的增殖、侵袭,并靶向抑制RASSF1A的表达。     

肝细胞肝癌肿瘤微环境中功能耗竭CD8+T细胞脂代谢特征的观察

目的:探讨肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)肿瘤微环境中CD8~+T细胞耗竭与脂代谢的关系。方法:利用流式细胞分析、实时细胞能量代谢检测仪、实时PCR等方法检测HCC和癌旁组织中CD8~+T细胞脂代谢及功能相关蛋白或基因的表达;在此基础上分析其功能和脂代谢的关系。结果:HCC浸润的CD8~+T细胞具有以下特征:功能耗竭(干扰素-γ减少、程序性死亡分子-1表达升高);多个脂肪酸合成酶表达下调,脂肪酸含量下降;线粒体结构、功能受损(P0.05)。结论:HCC中浸润的功能耗竭CD8~+T细胞具有脂肪酸代谢异常特征。     

梅毒患者外周血程序性死亡分子1的表达水平及临床价值研究

目的分析梅毒患者外周血程序性死亡分子1(PD-1)的表达水平及临床价值。方法将2018年6月至2019年6月在该院就诊的60例梅毒患者纳入梅毒组,另选取同期该院30例体检健康志愿者作为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测外周血PD-1水平,比较2组外周血PD-1水平及不同临床特征的梅毒患者外周血PD-1水平。采用Spearman相关性分析外周血PD-1与梅毒患者临床特征的相关性。采用流式细胞术检测外周血CD4~+CD25~(+hight)调节性T细胞(Treg)、CD4~+CD25~(+low)Treg、CD4~+CD25~(+low)Treg/CD4~+CD25~(+hight )Treg及其细胞表面上的PD-1水平。结果梅毒组外周血PD-1水平显著高于对照组(P0.05);不同性别、年龄的梅毒患者外周血PD-1水平比较,差异无统计学意义(P0.05);但梅毒快速血浆反应试验(RPR)滴度为1∶8患者外周血PD-1水平显著高于1∶1、1∶2、1∶4患者,临床分期Ⅱ期患者外周血PD-1水平显著高于Ⅰ期患者(P0.05)。Spearman相关分析结果显示,外周血PD-1与RPR滴度、临床分期呈正相关(r=0.659、0.433,P0.01)。梅毒组外周血CD4~+CD25~(+hight )Treg、PD-1~+/CD4~+CD25~(+hight )Treg、PD-1~+/CD4~+CD25~(+low)Treg细胞高于对照组,CD4~+CD25~(+low)Treg/CD4~+CD25~(+hight )Treg显著低于对照组(P0.05)。结论梅毒患者外周血PD-1存在高表达现象,且表达水平与病情密切相关。     

非小细胞肺癌围手术期患者外周血T细胞PD-L1/PD-1的检测及其意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者围手术期外周血T细胞程序性死亡分子1/配体(PD-L1/PD-1)的表达水平及其临床意义。方法收集60例NSCLC患者手术前后及60例健康体检者外周血标本,流式细胞仪检测外周血T细胞CD4+PDL1+、CD8+PD-L1+、CD4+PD-1+、CD8+PD-1+的百分比。结果 NSCLC患者术前与健康对照组CD4+PD-L1+、CD8+PD-L1+、CD4+PD-1+、CD8+PD-1+T细胞的百分比(%)分别为(7.14±1.69 vs 4.99±1.14)、(4.56±0.40 vs 1.48±1.08)、(17.21±2.70 vs 14.30±2.92)、(13.31±3.16 vs 8.38±2.11),差异均有统计学意义(P均0.05)。术后外周血NSCLC患者CD4+PD-L1+、CD8+PD-L1+、CD4+PD-1+、CD8+PD-1+T细胞的百分比(%)依次为(5.86±1.54)、(3.58±0.52)、(13.38±2.17)、(11.48±2.61),与术前比较均降低,差异均有统计学意义(P均0.05);且CD4+PD-L1+、CD8+PD-L1+、CD8+PD-1高于健康对照组(P均0.05)。结论外周血T细胞中PD-L1/PD-1百分比与NSCLC进展有关,检测PD-L1/PD-1对NSCLC的诊疗和预后监测有一定的帮助。