一起GⅠ型诺如病毒混合感染多克隆蜡样芽胞杆菌致急性胃肠炎暴发事件实验室分析

  目的  通过一起急性胃肠炎暴发事件的实验室检测,分析暴发相关病原特征。  方法  对患者粪便、呕吐物标本以及可疑污染食品样本进行相关病原及毒力基因的实时荧光PCR筛查以及阳性菌的培养检测,对分离菌株进一步进行毒力基因分布分析和脉冲肠凝胶电泳分型分析。  结果  25例患者的粪便标本诺如病毒荧光PCR阳性,检出率为71.43%（25/35）,均为GⅠ型;5例患者的6份标本中蜡样芽胞杆菌荧光PCR和病原培养均为阳性,1名厨师粪便标本蜡样芽胞杆菌荧光PCR和培养结果均为阳性。 7件可疑食品样本中4件检出蜡样芽胞杆菌,其中5份食品样本ces基因阳性。 19株蜡样芽胞杆菌分离株脉冲场凝胶电泳（PFGE）分为14种带型,5例患者分离株中有2株PFGE带型相同且与厨师来源菌株分型一致,相同食品来源分离株的PFGE带型不完全一致。 19株分离株均不携带ces基因。  结论  诺如病毒和蜡样芽胞杆菌可能是导致本次急性胃肠炎暴发事件重要病原,以多病原快速筛查为指导的实验室检测对于病原的识别具有重要意义。     

中国蜡样芽胞杆菌脉冲场凝胶电泳标准化技术的建立与应用

目的 本研究旨在选择不同的内切酶和电泳条件对蜡样芽胞杆菌(蜡样杆菌)脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法进行评价,建立中国蜡样杆菌标准PFGE方法. 方法 蜡样ATCC国际标准菌株及分离自我国不同地区和来源的蜡样杆菌,制备胶块用溶菌酶和蛋白酶K分别裂解后,选用不同的内切酶对胶块内DNA进行酶切,比较PFGE电泳结果的分离度,评价获得最佳操作方案,选取51株蜡样杆菌菌株进行PFGE实验,对此实验方法进行评价分析. 结果 确立的蜡样杆菌 PFGE 分型方法的标准操作程序,可以较好地对蜡样杆菌进行分子分型研究,初步描述了51株蜡样杆菌菌株PFGE型别特征. 结论 实验确定的蜡样杆菌PFGE方法,可以为蜡样杆菌引起的食源性疾病及医院感染的溯源控制提供技术手段.     

蜡样芽胞杆菌快速检测及其毒力基因筛选

目的筛选蜡样芽胞杆菌鉴定基因和快速检测毒力基因。方法选择分离自食品和土壤的代表性蜡样芽胞杆菌共329株,聚合酶链式反应（PCR）方法检测gyrB和groEL基因的种特异性,检测毒力基因在菌株中的分布特征。 基于检测结果,用多重PCR检测方案快速检测蜡样芽胞杆菌鉴定基因及其毒力因子。结果在蜡样芽胞杆菌及其近缘芽胞杆菌中,除1株苏云金芽胞杆菌扩增阳性外,gyrB基因具有蜡样芽胞杆菌种特异性;而groEL基因在4种芽胞杆菌中均有扩增。 6种毒力基因nheA、entFM、bceT、hblC、cytK和ces的携带率分别为84.19%、79.64%、49.24%、47.72%、47.11%和1.52%。 选择nheA、hblC、entFM、ces、cytK和gyrB用于快速鉴定蜡样芽胞杆菌及其毒力基因,获得了双重PCR扩增体系（gyrB和cytK）与4重PCR扩增体系（nheA、hblC、entFM和ces）的最佳检测方案。结论筛选的蜡样芽胞杆菌鉴定基因和毒力基因能够全面、特异、简便、高效地检测蜡样芽胞杆菌,可为食品安全检测及快速诊断提供依据,在实际检验工作中具有良好的应用前景。     

从咽拭子中分离出一株蜡样芽胞杆菌

蜡样芽胞杆菌引起食物中毒者较多见,引起咽部感染者报道较少.1999年11月我们从患者一咽试子中分离出一株蜡样芽胞杆菌,报告如下:     

97株蜡样芽胞杆菌的生物学鉴定及药敏试验

９７株蜡样芽胞杆菌的生物学鉴定及药敏试验朱江孔繁林储从家罗次节张艳蜡样芽胞杆菌（ｂａｃｉｌｕｓｃｅｒｕｓ）从临床标本中检出，其病原性日渐引起重视。现把我院近年来从临床标本中分离的９７株蜡样芽胞杆菌的生物学特性和药敏试验结果报道如下。１．标本来源：全部...     

炭疽高发地区土壤样本中常见芽胞杆菌的分离及鉴定

目的 通过分离鉴定炭疽可疑污染土壤样本的芽胞杆菌,评价消毒效果和了解监测地区土壤中的芽胞杆菌分布情况。 方法 采集炭疽监测点土壤样本60份,对炭疽芽胞杆菌和其他芽胞杆菌进行分离培养和聚合酶链反应扩增鉴定。 结果 在可疑污染土壤样本中未分离到炭疽芽胞杆菌;从分离到的48个单克隆菌落中扩增到33个目的片段,经测序和blast比对,确定得到地衣芽胞杆菌13株,枯草芽胞杆菌8株,短小芽胞杆菌扩增11株,蜡样芽胞杆菌扩增到1株,巨大芽胞杆菌引物和环状芽胞杆菌引物特异性不好。 结论 本研究提示该监测点炭疽疫情消毒效果可信,但需要进一步研究验证;几种芽胞杆菌在土壤中广泛存在,在炭疽监测工作中进行病原体分离时需要加以鉴别,可通过特异基因扩增来辅助检验。     

7株蜡样芽胞杆菌的分离鉴定

蜡样芽胞杆菌（B．cereus）为条件致病菌，在自然界广泛分布，常见于食物中毒。近年也有其他感染的报道。我院先后从临床标本中分离到7株蜡样芽胞杆菌，报告如下。一、材料和方法1．菌株来源7株蜡样芽胞杆菌均从我院病人检得，其中从呕吐物中检出3株，血液2株，中耳分泌物及伤口脓液中各1株。2．试验材料所用培养基及药敏纸片购自浙江省军区后勤部卫生防疫检验所．二、培养与鉴定结果1．培养特性血液标本注入葡萄糖硫酸镁肉汤中35℃培养，24h呈均匀混浊，有菌膜，再移种于血平板。其他标本直接划线于血平板。35℃24h培养，可见圆形、浅灰色…     

蜡样芽胞杆菌致感染性眼内炎一例报告

蜡样芽胞杆菌为需氧、产芽胞的革兰阳性菌,广泛分布于外界环境中,为环境中的污染菌,可见于正常结膜囊,一般不致病。在伤口多次分离到中等量或大量需氧芽胞杆菌,通常是有意义的,在穿通性眼外伤或眼内异物污染此菌后,极易生长繁殖,引起人爆发性眼感染,常导致眼球摘除或失明。我院于2009年12月先后从一病人的角膜坏死组织及眼内容中分离出蜡样芽胞杆菌一例,报告如下：     

蜡样芽胞杆菌群分类学研究进展

蜡样芽胞杆菌群由蜡样芽胞杆菌及其近缘菌组成,该群内菌种由于在表型特征和基因特征上高度相似,使该群菌分类和鉴定复杂且难以统一。随着分子生物学和基因组学的发展,该群分类学研究发展迅速,目前已形成了表型、基因组以及将表型和基因组特征相结合的基因种/亚种/生物变种方法等几种分类框架。本研究就近年来蜡样芽胞杆菌群分类学研究进展进行综述。     

蜡样芽胞杆菌食物中毒的防治

蜡样芽胞杆菌是需氧性、有运动力、能产生芽胞的革兰氏阳性杆菌。近年来,该菌引起的食物传播性疾病不断增加。国内,自1973年南京首次报告某工厂托儿所因吃剩饭所做的泡饭引起中毒以来,辽宁、黑龙江、广东、安徽等地也相继有报告,其中毒食物分别为剩小米饭、剩大米饭、剩高粮米饭、剩菜和甜酒酿。这些食物都是由于受到蜡样芽胞杆菌的大量污染而使人进食后发生中毒。蜡样芽胞杆菌在自然界分布很广,常见于土壤和尘埃中。该菌带有芽胞,芽胞不突出菌体,并具有耐热性,其37℃16小时的肉汤培养物的 D80°你值(在80℃     

一起产志贺毒素大肠埃希菌O146∶H10引起的食物中毒的溯源分析

  目的  对2019年广西壮族自治区桂林市发生的一起校内食物中毒进行病原检测及溯源分析。  方法  对该起食物中毒事件开展流行病学调查,采集腹泻患者粪便、餐厨工作人员肛拭子、留样食品、厨房环境及餐厨用具涂抹样本,按常规方法进行病原分离和鉴定,对分离的病原菌进行毒力基因检测及脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型分析。  结果  本次食物中毒事件共造成87人出现腹泻或其他症状。从1例腹泻患者粪便及1位餐厨工作人员肛拭子标本中分离到产志贺毒素大肠埃希菌,血清型均为O146∶H10,志贺毒素基因均为stx_1c亚型,且2株分离株具有相同的PFGE带型。  结论  这起食物中毒是由产志贺毒素大肠埃希菌O146∶H10引起,为国内首次报道由非O157产志贺毒素大肠埃希菌引起的食物中毒事件。     

2021年武汉市一起肠炎沙门菌引起的跨区食源性疾病暴发的病原学分析

  目的  对2021年武汉市一起跨区食源性疾病暴发事件进行病原菌的鉴定和溯源分析，查明事件暴发原因。  方法  采集此次食源性疾病暴发事件中相关人员的肛拭子样本、粪便样本和食品样本进行分离培养，用VITEK 2 Compact 全自动微生物鉴定系统鉴定分离到的菌株，并进行血清学分型，耐药性敏感试验；采用脉冲场凝胶电泳法（PFGE）对本次事件的检出菌及近两年本地区临床散发病例的同型别菌株进行分子分型和聚类分析；提取本次事件病原菌和本地区同型别菌株的核酸进行全基因组测序，通过基因注释和序列比对分析病原菌的毒力因子与耐药基因，结合多位点序列分型，变异位点检测和不同地区同型别菌株的全基因组序列构建基于单核苷酸多态性的系统发育树对病原菌进行溯源。   结果  共分离出5株肠炎沙门菌，其中2株来自食物样本，3株来自患者粪便和肛拭子样本。 5株检出菌的PFGE带型完全相同，均对抗生素阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、头孢唑啉、头孢西丁、头孢呋辛、甲氧苄啶–磺胺甲恶唑耐药，携带相同的耐药基因和毒力因子，均为ST11型。 本次事件检出菌株的序列间仅存在1个突变位点。 检出菌的全基因组序列与本地肠炎沙门菌序列高度相似。   结论  肠炎沙门菌为本次事件的致病菌。经同源性分析，此株病原菌为本地区肠炎沙门菌流行株。 全基因组测序技术可作为PFGE分子分型的补充应用于病原菌的监测和暴发事件调查。     

一起沙门菌食物中毒的实验室诊断与分析

目的 查明内蒙古某市某村发生食物中毒突发公共卫生事件的性质规模,调查可疑危险因素及其污染来源,控制疫情蔓延. 方法 制定病例定义,开展病例主动搜索,采集患者肛拭子及粪便样品、可疑食品及环境样品,进行病原菌的分离培养.分离菌株进行生化和血清学鉴定,PFGE分子分型和药敏检测. 结果 共出现43例感染病例,均参加了2014年5月6日的婚宴聚餐.19份检测样品中从7份患者肛拭子分离到肠炎沙门菌,志贺菌、致泻性大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌及蜡样芽孢杆菌检测阴性.7株肠炎沙门菌XbaⅠ酶切后的PFGE谱型完全相同,说明感染菌株来自同一个克隆,即有共同的感染源头.PulseNet China数据库比对分析显示,本次疫情菌株的PFGE图谱与我国肠炎沙门菌分离株中常见的PFGE带型JEGX01.CN0002 完全相同. 结果 此次事件为一起肠炎沙门菌引起的食物中毒,感染菌株具有国内优势的PFGE带型.     

一起疑似产气荚膜梭菌食物中毒事件的实验室检测分析

  目的   通过一起疑似产气荚膜梭菌食物中毒事件的检测分析,为类似食物中毒事件提供诊断依据。  方法   采用多重实时荧光定量PCR方法和基因芯片检验方法快速筛查识别病原菌,根据初筛结果进行常规的细菌分离培养、生化鉴定和质谱分析,对分离到的菌株采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术进行分子分型,采用BioNumerics 8.0软件对菌株的PFGE指纹图谱进行聚类分析。  结果   多重实时荧光定量PCR方法提示4份粪便标本中均有产气荚膜梭菌和基因芯片检验方法提示1份鸡肝食品中有产气荚膜梭菌,并通过常规的细菌分离培养、生化鉴定和质谱分析从2份剩余鸡肝和4份腹泻患者粪便中分离到产气荚膜梭菌,其中只有3份粪便标本中产气荚膜梭菌计数＞1.0×106 CFU/g,但通过PFGE聚类分析从6份标本中检出的菌株图谱完全一致。  结论  通过从食物和腹泻标本中检出PFGE图谱相似度100%的产气荚膜梭菌,说明此次食物中毒可能是由被产气荚膜梭菌污染的鸡肝导致的,今后要提高由厌氧菌引起的食物中毒的认识水平,防止漏检。     

北京市一起由宋内志贺菌引起的细菌性痢疾暴发病原学分析

  目的  对北京市一起由宋内志贺菌引起的暴发疫情进行流行病学调查以及病原学分析,为此类疫情处理提供参考。  方法  2019年9月5 — 20日,采集病例及厨师粪便/肛拭子样本,以及水样、外环境等标本进行病原分离鉴定,并将分离到的病原菌进行药物敏感性试验、脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型、全基因组测序,利用全基因组数据分析病原菌的耐药、毒力相关基因,并进行多位点序列分型（MLST）,构建全基因组单核苷酸多态性（wgSNP）分型树状图。  结果  共分离到16株宋内志贺菌和1株肠产毒性大肠埃希菌（ETEC）,志贺菌均对氨苄西林、四环素、复方新诺明、头孢唑啉、头孢噻肟、庆大霉素、萘啶酸、阿奇霉素、多西环素耐药,且均为产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株。 均为ST152型,是国内常见型别。 其中1株宋内志贺菌全基因组中存在insA插入序列,而在其他志贺菌全基因组中未发现,与其同时分离到的ETEC全基因组中发现有该插入序列。  结论  本次疫情是由多耐药宋内志贺菌引起。 在病原溯源研究中,全基因组数据分析是PFGE分型的必要补充。     

新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市一起肉毒中毒事件调查分析

  目的  通过对新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市一起肉毒中毒事件进行调查分析和实验室检测,并采取有效措施预防。  方法  通过查阅就诊记录、访谈相关医生并通过入户调查方式进行现场流行病学调查,采集病例粪便、剩余食物等进行肉毒毒素实验室检测及分型鉴定。  结果  确诊病例2例,均被收治入院。 使用A、B型肉毒抗毒素治疗后, 症状明显缓解。 实验室分离到肉毒梭菌,经荧光定量PCR方法检测携带A型毒素基因,确定为A型肉毒梭菌,小鼠实验检测到A型肉毒毒素。  结论  本次事件是一起由家庭自制豆豉引起的肉毒梭菌中毒,由A型肉毒梭菌污染导致,建议加强居民教育,防止食品制作和储存环节污染。     

2018-2020年福建省南平市沙门菌分子分型及耐药性分析

目的 了解2018—2020年福建省南平市沙门菌血清学分型、分子分型及耐药情况,为沙门菌引起的食源性疾病的溯源和临床合理用药提供指导。方法 依据GB 4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门菌检验》微生物检验方法和《食源性疾病监测工作手册》对收集到的样本进行检测,采用分离培养及生化实验进行沙门菌鉴定,利用玻片凝集法进行血清学试验,利用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术对分离到的菌株进行遗传相关性分析,用微量肉汤稀释法进行耐药性分析。结果 55株沙门菌菌株分属21种血清型,以肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌为主,分别占30.90%和29.09%;食品中分离的沙门菌有19种血清型,食源性疾病病例中分离的沙门菌有4种血清型;菌株的PFGE形成13种带型,具有多态性,相似度为37.29%～100.00%,总体相似度达到63.77%。同一血清型可出现不同的PFGE带型,部分肠炎、鼠伤寒、唐卜逊沙门菌出现成簇现象。沙门菌对氨苄西林、萘啶酸、磺胺异恶唑有较高的耐药性,分别达到67.27%、65.45%、54.55%。对三代头孢菌素类药物（头孢他啶、头孢西丁）和庆大霉素以及阿奇霉素等药物敏感。...     

2013-2020年北京市海淀区成年人致泻大肠埃希菌流行特征和分型研究

目的 掌握北京市海淀区成年人致泻大肠埃希菌(DEC)流行特征和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型特点.方法 对2013-2020年在3家哨点医院就诊的1961例成年人腹泻患者粪便或肛拭子标本进行DEC检测,对其中66株DEC菌株进行PFGE分型试验.结果 成年人DEC检出率为9.54％(187/1961),产肠毒素大肠埃希...