APL患者诱导分化治疗前后粘附分子ICAM1和VCAM1变化与临床意义

目的探讨粘附分子sICAM-1和sVCAM-1与白血病之间的关系及其在白血病诊断、治疗及预后监测中的临床意义。方法采用ELISA法检测As2O3对原代APL细胞分泌sICAM-1和sVCAM-1的影响：通过RT—PCR检测As203治疗前后APL患者sICAM-1和sVCAM—1 mRNA表达变化;采用MTT法检测0．5umol／L的As2O3对APL细胞体外增殖的影响。结果As2O3治疗前APL患者血清中粘附分子水平显著高于对照组,治疗后5～12天血清sICAM-1水平升高,此后逐渐下降,30天时接近正常水平。As2q在体外也可升高原代APL细胞分泌粘附分子水平。As2O3治疗后sVCAM—1和sICAM-1的基因表达均增强,并且随着治疗时间的延长,表达量上调。As2O3在体外能显著抑制APL原代细胞的增殖。结论三氧化二砷可诱导APL细胞由早幼粒细胞向成熟细胞分化,诱导APL患者血清中sVCAM-1和sICAM—1分泌。     

全反式维甲酸诱导急性早幼粒细胞白血病细胞分化中分化抑制因子1表达水平的变化

目的 探讨分化抑制因子1(ID1)在全反式维甲酸(ATRA)诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞分化中的作用.方法 运用基因芯片、放线菌酮抑制试验、实时定量RT-PCR和Western blot.方法 检测ID1存ATRA诱导的APL细胞系及原代APL细胞分化过程中表达情况.结果 在ATRA污导的NB4细胞和APL初诊患者原代细胞分化过程巾ID1基因的表达上调,ATRA诱导NB4细胞2hID1表达达高峰,其相对表达水平与对照相比升高359.4±48.7倍;ATRA处理APL患者骨髓细胞ID1表达水平2 h达高峰,其中1例患者晕复3次检测的.结果 为对照的(311.1±48.7)倍.而且ID1基因的上调不需要其他蛋白的合成.而在ATRA处理ATRA耐药细胞系NB4-R2细胞未见ID1的表达发生明显变化.结论 ID1基因可能作为ATRA的靶基因参与了ATRA诱导的粒系分化.     

急性早幼粒细胞白血病患者纤溶活性的临床研究

目的 研究急性早幼粒细胞白血病(APL)患者纤溶活性在诱导治疗缓解前后的改变及其机制,观察全反式维甲酸(ATRA)或ATRA+三氧化二砷(ATO)诱导治疗对APL患者纤溶活性的影响.方法 选择初治APL患者26例,在诱导治疗过程中分别用发色底物法和ELISA法检测患者血浆纤溶酶原和纤维蛋白(原)降解产物(FDP),用全自动血凝仪检测纤维蛋白原和D-二聚体,在治疗前和完全缓解后用流式细胞术检测细胞表面膜联蛋白Ⅱ(Annexin Ⅱ)和尿激酶型纤溶酶原激活剂受体(u-PAR)的表达,实时定量PCR检测AnnexinⅡ和u-PAR的mRNA表达水平.结果 APL患者存在原发性纤溶亢进,APL细胞表面Annexin Ⅱ和u-PAR蛋白的表达率和mRNA水平均高于正常对照,经以ATRA或ATRA+ATO为基础的诱导缓解方案治疗达到完全缓解后血浆纤维蛋白原、纤溶酶原、FDP及D-二聚体恢复正常,Annexin Ⅱ和u-PAR表达水平相应下降,但仍高于正常对照水平.结论 APL细胞表面Annexin Ⅱ和u-PAR高表达可促使APL纤溶酶生成增多,导致APL患者纤溶亢进.ATRA或ATRA+ATO可通过下调APL细胞Annexin Ⅱ和u-PAR表达纠正APL纤溶异常,这可能是减少APL出血的机制之一.     

全反式维甲酸诱导急性早幼粒细胞白血病细胞分化为树突状细胞的实验研究

全反式维甲酸（ATRA）诱导APL细胞分化为成熟树突状细胞（dendritic cell，DC），目前国内外鲜见报道。本研究探讨全反式维甲酸与经典细胞因子共同作用诱导急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞分化为DC的可能性，为研制APL-DC疫苗提供新的方法。对初治APL患者骨髓单个核细胞及HL-60细胞株分别在完全培养液中培养，用经典细胞因子组合（GM—CSF、IL-4、TNF-α）共处理，ATRA只在实验组加用。观测细胞形态，检测DC免疫表型，测定上清液IL-12水平，观察MLR反应及CTL效应。结果表明：实验组所得细胞有较明显树突状突起，有APL遗传学特征，其CD1a、CD83、CD80、CD86、HLA—DR和CD1d表达及IL-12分泌水平明显增高，并具有明显的MLR反应及CTL效应，但在HL60-DC中，CD1a增加无统计学差异。结论：利用ATRA可以成功诱导APL细胞为成熟功能性DC，其介导的MLR及CTL效应明显。经ATRA组合诱导的树突状细胞CD1d表达明显增高，推测可能参与NKT细胞激活，具体机制需进一步研究。     

全反式维甲酸诱导APL细胞分化过程中钙信号途径基因表达水平的变化

为研究钙信号途径在髓系分化中的作用,采用基因芯片技术检测了钙信号途径相关基因在全反式维甲酸(ATRA)诱导急性早幼粒细胞性白血病(APL)细胞株NB4细胞分化过程中的表达情况,并运用实时定量RT-PCR验证基因芯片部分结果,同时检测这些基因在ATRA和8-CPT-cAMP单独和联合作用于NB4-R1细胞和ATRA诱导APL初诊患者原代细胞分化时的表达情况。结果发现:在ATRA诱导NB4细胞分化过程中,许多能直接调节胞内钙离子浓度的基因发生了变化,同时发现许多钙信号途径下游的效应分子的表达上调,并得到实时定量RT-PCR验证。这些基因在ATRA和8-CPT-cAMP单独作用于NB4-R1细胞时变化不大,而在ATRA和8-CPT-cAMP联合作用于NB4-R1细胞分化时与ATRA诱导NB4细胞分化时的表达变化相似。另外,以上基因在ATRA诱导APL初诊患者原代细胞分化的变化情况与诱导NB4细胞分化时相似。结论:钙信号途径可能参与了ATRA诱导的APL细胞分化。     

乌苯美司增强全反式维甲酸诱导急性早幼粒细胞白血病细胞分化的体外研究

目的探讨氨肽酶N抑制剂乌苯美司（ubenimex）对全反式维甲酸（ATRA）诱导人急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞分化的影响及可能机制。方法采用流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD11b，四氮唑蓝（NBT）还原实验检测细胞分化；Western blot法检测细胞c—Myc、ERK1／2及P—ERK1/2 、p38MAPK及p—p38MAPK蛋白表达。结果ubenimex单独应用对NB4细胞的NBT还原能力及CD11b表达无明显影响，但ubenimex能增强ATRA诱导NB4细胞的NBT还原能力及CD11b的表达。100μg／mlubenimex能增强10nmol／LATRA诱导原代APL细胞的NBT还原能力。100μg／mlubenimex增强10nmol／LATRA下调NB4细胞c—Myc蛋白的表达；抑制10nmol／LATRA引起的NB4细胞的p38MAPK磷酸化。结论ubenimex能够增强ATRA对APL细胞的诱导分化作用，可能与抑制p38MAPK的磷酸化及对原癌基因c—Myc表达的调控有关。     

CSN复合物在ATRA诱导APL细胞分化过程中的表达及其意义

目的:探索CSN复合物在急性早幼粒细胞白血病(APL)患者中的表达及其在全反式维甲酸(ATRA)诱导急性早幼粒细胞分化中的作用。方法:以NB4细胞为实验对象,通过细胞形态学观察及流式细胞术的CD11b检测以监测ATRA诱导分化;用Western blot及逆转录荧光定量PCR检测CSN复合物在细胞分化过程中的变化,并采用实时荧光定量PCR的方法检测APL患者及其治疗缓解后CSN复合物亚基的表达情况。结果:在NB4细胞中ATRA可诱导细胞CD11b表达,细胞在形态上呈明显分化特征;CSN复合物各个亚基的表达水平随细胞分化逐渐下调。APL患者中CSN表达水平明显高于非白血病患者组(P0.05),ATRA诱导缓解治疗后达完全缓解的患者中CSN的表达水平较治疗前明显下降。结论:CSN复合物在APL中高表达,ATRA可以下调CSN复合物的表达,提示CSN复合物在APL发病和治疗中发挥着重要作用。     

低剂量辐射对造血系统兴奋效应的研究

目的 探讨低剂量辐射对造血系统的兴奋效应。方法 采用深部X线对小鼠进行低剂量辐射,甲基纤维素半固体培养造血祖细胞,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中GM－CSF、IL－3水平变化,脾组织切片原位杂交、脾细胞RNA狭缝杂交、Northern blot检测GM－CSF、G－CSF和IL－3的mRNA表达水平。结果 ①受照后小鼠造血细胞体外培养中CFU－GM和BFU－E数量明显增多;②血清中GM－CSF水平升高;③GM－CSF、G－CSF的转录升高。结论 低剂量辐射对造血系统有兴奋效应,这种兴奋效应可能与造血刺激因子升高有关。     

急性早幼粒细胞白血病患者血清及NB4细胞上清对正常粒系造血功能的影响

目的　探讨急性早幼粒细胞白血病 (APL)患者血清对正常粒 单核系祖细胞 (CFU GM )生长的影响及其抑制活性变化的有关因素。方法　用细胞培养方法动态观察了 2 4例APL患者在全反式维甲酸 (ATRA)治疗过程中 ,其血清对正常CFU GM生长的影响 ;用ELISA和生物活性法分别检测血清中粒细胞集落刺激因子 (G CSF)、γ干扰素 (IFN γ)及肿瘤坏死因子 (TNF)活性。结果　治疗前 ,血清对CFU GM的生长呈抑制作用 ,抑制活性明显高于骨髓缓解时和正常血清 (P <0 0 1) ;治疗过程中 ,血清对CFU GM的抑制活性逐渐加强 ,在白细胞达高峰前 3～ 6天最强 ,然后逐渐减弱 ;骨髓缓解时 ,血清对CFU GM的抑制活性明显下降 ,与正常血清比较 ,差异无统计学意义。血清对正常CFU GM抑制活性与患者骨髓白血病祖细胞 (CFU L)、早幼粒细胞百分率呈正相关 ,与骨髓CFU GM呈负相关 ,与血清G CSF含量或TNF活性间无线性相关。血清IFN γ活性为阴性。结论　①未治疗的APL患者血清对正常粒 单核系造血有抑制作用。ATRA治疗APL取得缓解的机制之一 ,是通过诱导白血病细胞分化成熟 ,造血抑制活性不断减低 ,正常造血得以恢复 ;②血清抑制活性的异质性除与白血病细胞有关外 ,尚与其它细胞因子参与有关     

Survivin基因在NB4细胞株细胞和急性早幼粒细胞白血病细胞表达及其抗凋亡作用与临床意义

为了检测survivin基因在APL细胞中的表达率并探讨其表达与临床的相关性，本研究采用RT-PCR方法检测PML／RARα和survivin mRNA表达。结果显示：NB4细胞经过ATRA处理后，survivin mRNA表达随着时间的延长而逐渐下降，在72小时几乎检测不到survivin mRNA表达。36例初发、复发APL患者骨髓单个核细胞均有PML／RARα融合基因表达，其中survivin mRNA阳性表达24例（占67％），阴性表达12例（占33％）；22例缓解期APL患者骨髓单个核细胞PML／RARα融合基因表达均为阴性，其中survivin mRNA阳性表达8例（占36％），阴性表达14例（占64％）；初发、复发组、PML／RARa基因长型阳性组与缓解组相比，survivin mRNA表达阳性率均明显增高（两者P值均〈0．05），而与急性白血病组相比survivin mRNA表达阳性率均明显减低（两者P值分别〈0．05，〈0．001）。36例初发、复发APL患者，无论survivin mRNA表达阳性或阴性，用ATRA治疗都能达到完全缓解；临床上并发DIC和严重感染的4例APL患者的survivin mRNA表达皆为阳性（其中1例死亡），而survivin mRNA表达阴性患者临床症状均较轻，只有轻微的皮肤粘膜出血、发热和乏力等症状。2例APL患者经用ATRA治疗后外周血象以及骨髓象诱导分化症象不明显者，其survivin mRNA表达均为阳性。结论：APL患者骨髓单个核细胞survivin基因阳性表达率较其它类型急性白血病明显减低，survivin基因表达与临床有一定的相关性。     

腺苷酸环化酶的活化影响NB4细胞对全反式维甲酸的敏感性

目的　探讨急性早幼粒细胞白血病 (APL)细胞对全反式维甲酸 (ATRA)耐药的分子机制。方法　以ATRA敏感及耐药的APL细胞株NB4和NB4 R1为模型 ,观察细胞形态、表面分化抗原以及对四氮唑蓝还原能力的改变 ,分别研究腺苷酸环化酶 (AC)和磷酸二酯酶 (PDE)的特异激活剂毛喉素、拮抗剂 9 (四氢 2 呋喃基 ) 9H 嘌呤 6 氨 (SQ2 2 5 36 )对ATRA诱导分化作用的影响。结果　AC的拮抗剂SQ2 2 5 36能显著抑制ATRA对NB4细胞的诱导分化作用 ,ATRA SQ2 2 5 36组与ATRA组比较 ,CD11b阳性率由 (95 .9± 2 .5 ) %降至 (6 0 .3± 7.1) % ,NBT还原实验吸光度 (A) 540 值由 0 .5 85±0 .0 92降至 0 .170± 0 .0 2 8,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。而AC的激活剂毛喉素则可以克服NB4 R1细胞对ATRA的耐药 ,ATRA 毛喉素组与ATRA组比较 ,CD11b阳性率由 (34.3± 5 .3) %升高至 (94 .6±2 .4 ) % ,NBT还原实验A540 值由 0 .110± 0 .0 2 8升高至 0 .395± 0 .0 4 9,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。PDE的特异激活剂钙调蛋白以及拮抗剂 3 异丁基 1 甲基黄嘌呤 (IBMX)对ATRA的作用基本没有影响。结论　AC能否正常激活也许是APL对ATRA产生耐药的重要原因之一。     

All-trans retinoic acid (ATRA) therapeutical effect in acute promyelocytic leukemia.

All-trans retinoic acid (ATRA) is able to specifically differentiate acute promyelocytic leukemic cells (APL) in short-term culture. Patients with APL achieved complete remission within 1-3 months by a progressive maturation of leukemic cells. The advantages of this differentiation therapy are the rapid disappearance of the bleeding disorders and the absence of aplastic phase avoiding the early deaths occurring in 15-30% of patients with conventional chemotherapy. However, relapses occurred when ATRA alone was maintained. For this reason, a chemotherapy is added after complete remission obtained by ATRA. A pilot study on 27 patients was proposed with the sequential combination of ATRA and chemotherapy. A European trial randomizes conventional therapy to the sequential ATRA-chemotherapy protocol. Retinoic acid receptor (RAR alpha) is rearranged by the specific translocation t(15;17) of APL; a PCR technique was developed in order to ensure the diagnosis and to follow the minimal residual disease. Transfection experiment of the chimaeric gene inhibits the transactivation of the natural RAR. ATRA is able to revert the arrest of maturation perhaps through an increase of the expression of the normal allele of RAR, which could overpass the impairment induced by the chimaeric protein on target responsive elements. One of the steps of the repair is the modulation of programmed cell death (PCD). Bcl-2, a gene involved in the PCD, is modulated in in vitro studies, arguing for the engagement of the cell in the natural death. The beneficial effect of differentiation therapy is probably due to the induction of the natural death of the malignant cell.     

急性早幼粒细胞白血病全反式维甲酸治疗时IL—8及其受体表达 …

目的：探讨白细胞介素８（ＩＬ－８）及其Ａ型受体（ＩＬ－８ＲＡ）的表达在全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）诱导治疗急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）中的临床意义。方法：动态检测ＡＰＬ患者１８例ＡＴＲＡ治疗中血浆ＩＬ－８水平（ＥＬＩＳＡ法）取３例骨髓单个核细胞（ＭＮＣ）加ＡＴＲＡ（１０＾－６ｍｍｏｌ／Ｌ）体外诱导，流式细胞仪动态检测ＭＮＣ膜Ｌ－８ＲＡ的表达。结果：ＭＮＣ加入ＡＴＲＡ诱导７２小时，上清ＩＬ－８水平明显     

基因ifi56在全反式维甲酸诱导急性早幼粒细胞白血病细胞分化中的表达及其真核表达质粒的构建

本研究探讨ifi56基因在全反式维甲酸诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞分化中的表达,构建人ifi56真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内表达及定位情况。用RT-PCR技术检测APL细胞NB4经维甲酸处理不同时间后ifi56的表达,并从白血病细胞NB4中扩增ifi56全长编码序列,将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,转染到293T细胞中,提取细胞蛋白,用Western blot方法检测蛋白表达情况,荧光显微镜检测IFI56的定位。结果表明,ifi56在未经处理的NB4细胞中几乎检测不到,当用维甲酸处理72小时后明显升高,并成功将ifi56插入到质粒pEGFP-C1中,Western blot检测到融合蛋白表达,分子量约为83 kD。IFI56重组蛋白在293T细胞内主要定位于细胞胞浆中。结论:ifi56表达随着APL细胞分化明显升高,成功构建ifi56基因真核表达载体,IFI56蛋白主要定位于细胞浆。     

PML-RARα对BHLHB2基因转录调控的影响

本研究探讨异常转录因子PML-RARα对BHLHB2基因的转录调控机制,进一步揭示急性早幼粒细胞性白血病(APL)的致病机理。利用RT-PCR技术研究PML-RARα融合蛋白及ATRA在APL模式细胞株PR9和APL病人来源的NB4细胞中对BHLHB2转录的影响;利用ChIP-PCR技术探讨PML-RARα在体内调控BHLHB2转录的作用方式;通过分析病人样本数据,观察BHLHB2在各种急性髓系白血病(AML)中的表达情况。结果表明,随着PML-RARα融合蛋白的表达升高,BHLHB2的转录受到明显抑制,并且无论在APL模式细胞株PR9还是APL病人来源的NB4细胞中,ATRA均能够解除这种抑制,诱导BHLHB2的表达上调;而在不表达PML-RARα的U937细胞株中,ATRA不能诱导BHLHB2的表达上调。研究结果提示,PML-RARα通过结合于BHLHB2的启动子区域抑制其转录。与其他类型的AML和正常的骨髓细胞相比,BHLHB2在APL中表达较低。结论:BHLHB2是PML-RARα的靶基因,PML-RARα通过与其启动子区域结合对其转录进行负调控。     

急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因的临床研究

目的 研究急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因的亚型、变化及其临床意义。方法 采用筑巢式逆转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测初治APL患者PML-RARα融合基因,监测完全缓解者微小残留病灶。结果 32例初治APL患者PML-RARα融合基因均为阳性(100%),其中S型为25%,L型为75%。L型的复发率及早期病死率分别为12.5%、12.5%,显著低于S型的复发率及早期病死率(25%和37.5%)。L型患者的预后比S型患者好。采用全反式维甲酸(ATRA)及小剂量高三尖杉酯碱诱导治疗,缓解后分别用化疗与维甲酸交替进行强化治疗,使PML-RARα阳性率随缓解期的延长而逐渐降低。同时监测16例APL缓解患者,PML-RARα融合基因阴性患者可长期生存。结论 PML-RARα融合基因的检测对APL的确诊、预测预后具有重要的临床意义。