电针刺激耳穴对小鼠丧失可控应激诱发学习记忆损害行为的作用机制研究

摘要 目的：观察丧失可控应激是否会诱发学习记忆损害行为,探讨针刺治疗学习记忆损害行为的作用机制。 方法：结合经典抑郁症动物模型——习得性无助（learned helplessness, LH）模型的范式并在此基础上进行了改进,即小鼠前3天能够通过学习控制斯金纳箱中的有效鼻触器来主动躲避足底电击;后3天有效鼻触器功能丧失,小鼠从而丧失了对足底电击的控制,建立丧失可控应激（loss of controllable stress, LOC）小鼠模型。同时,设计无足底电击的对照组（control of non-foot-shock, Control）。建模完成后,利用新物体识别箱和Morris水迷宫检测学习记忆行为的变化,并电针刺激耳穴,观察对学习记忆损害行为的改善。随后,利用高尔基染色观察腹侧前额叶（ventral prefrontal cortex, vPFC）神经元结构的变化,免疫组化染色观察vPFC脑区C-fos的表达,Western Blot检测I型囊泡谷氨酸转运体蛋白（vesicular glutamate transporter I, VGLUT1）、突触蛋白I（synapsin I, SYN-1）的表达及针刺后相应指标的变化。 结果：LOC组小鼠在经历认知挫败后造成了学习记忆功能的损害;针刺能够改善其记忆的获取及巩固;vPFC谷氨酸能（glutamate, Glu）神经元显著激活,VGLUT1、突触小泡蛋白（synaptophysin, SYN）表达水平降低,且耳迷走神经刺激能够显著降低其活动水平,调控VGLUT1、SYN蛋白的表达。 结论：耳穴刺激通过调控vPFC中神经元结构的变化及VGLUT1、SYN蛋白表达改善丧失可控应激诱发的学习记忆损害行为。     

宁神灵冲剂和脱氢表雄酮对慢性轻度应激小鼠认知功能的影响

目的观察慢性轻度应激 (CMS)小鼠模型的自发与认知行为变化 ,中枢胆碱能毒蕈碱型 (M )受体的改变及中药宁神灵冲剂和脱氢表雄酮 (DHEA)的干预作用。方法连续 3周对小鼠采用 7种不可预知的应激原建立CMS模型 ,于应激 2周后进行药物治疗 1周。用自发运动和水迷宫评定行为改变 ,用放射性配基法测定皮层、海马、下丘脑和小脑的M受体改变。结果未治疗的CMS小鼠自发运动明显减少 ,寻找平台潜伏期明显延长 (P <0 0 1)。经服用宁神灵冲剂和DHEA后可有效改善上述行为变化。CMS小鼠大脑皮层、海马的M受体特异性结合与对照组比较减少 (P <0 0 5 ) ,经上述两种药物治疗后恢复至正常水平。结论CMS可使动物的自发运动减少 ,并使其空间学习记忆功能减退 ,该变化与脑内胆碱能受体活性低下有关。中药宁神灵治疗后与DHEA一样可有效改善上述变化。     

人参茎叶皂甙对吗啡耐受性的影响

本文研究了人参茎叶皂甙对吗啡耐受性产生的影响。实验结果表明，人参茎叶皂甙５０ｍｇ／ｋｇ灌胃给药能够明显对抗吗啡引起的小鼠自主活动增强现象，并抑制吗啡镇痛（小鼠对夹尾压痛）的耐受作用。长期应用吗啡对小鼠体重增长抑制的作用逐渐减弱。人参茎叶皂甙能够加强吗啡抑制体重增长的作用。上述结果提示，人参茎叶皂甙对吗啡耐受性的产生有一定的抑制作用     

热应激及热应激预处理对小鼠学习记忆以及情绪的影响

目的:从行为学角度研究热应激(HS)及热应激预处理(HP)对小鼠学习记忆及情绪的影响。方法:雄性昆明小鼠32只随机分为对照组、HP组、HS组、(HP+HS)组4组各8只。通过Morris水迷宫评价小鼠学习记忆能力,开场试验评价小鼠自主活动,采用中国地鼠情绪唤醒水平评定量表测定情绪唤醒水平。结果:Morris水迷宫结果显示,与对照组相比,HS组寻找平台潜伏期延长,HP组寻找平台潜伏期缩短,(HP+HS)组寻找平台潜伏期明显缩短,差异具有统计学意义(P0.05);(HP+HS)组与HS组相比,水平运动、垂直运动均有所增多(P0.05);空间搜索试验中,与对照组比较,HS组在目标象限停留的时间明显延长,在目标象限对侧的第三象限停留时间缩短(P0.05);开场试验中,与对照组相比,HS组水平运动、垂直运动、粪便粒数均减少(P0.05),中央格时间延长(P0.05)。结论:HP可使学习记忆能力加强,而急性HS则对学习记忆能力有损害作用,HP可对此损害产生一定保护作用,HS对学习记忆能力的影响随应激后时间推移有减弱趋势。HP使小鼠自主活动增强,急性HS可使自主活动降低。急性HS造成情绪唤醒降低,HP不改变情绪唤醒水平;HS及HP均可降低小鼠的体重。     

人参茎叶甙对吗啡耐受性的影响

本文研究了人参茎叶皂甙对吗啡耐受性产生的影响。实验结果表明，人参茎叶皂甙５０ｍｇ／ｋｇ灌胃给药能够明显对抗吗啡引起的小鼠自主活动增强现象，并抑制吗啡镇痛（小鼠对夹尾压痛）的耐受作用。长期应用吗啡对小鼠体重增长抑制的作用逐渐减弱。人参茎叶皂甙能够加强吗啡抑制体重增长的作用。上述结果提示，人参茎叶皂甙对吗啡耐受性的产生一定的抑制作用。     

螺旋藻改善铝中毒小鼠学习记忆障碍机制探讨

目的：探讨螺旋藻改善铝中毒小鼠学习记忆障碍的作用机制。方法：用口服氯化铝方法建立小鼠铝中毒学习记忆障碍模型，并用螺旋藻多糖灌胃进行实验性治疗。用跳台试验和避暗试验检测各组小鼠的学习记忆行为，并用免疫组化ABC法检测各组小鼠海马神经元型一氧化氮合酶（nNOS)的表达。结果：与对照组比较，模型组小鼠表现出明显的学习记忆障碍，海马nNOS表达下降。实验组的学习记忆能力较模型组有明显改善，海马nNOS表达增加。结论：螺旋藻对铝中毒小鼠的学习记忆障碍有明显的改善作用，其作用机制可能与增加nNOS的表达有关。     

脑卒中患者行为记忆障碍的研究

目的：通过对脑卒中患者行为记忆能力的测查，为了解脑卒中患者记忆能力障碍提供客观依据，同时探讨病变部位及病程对其行为记忆能力的影响。方法：用Ｒｉｖｅｒｍｅａｄ行为记忆检查对３８例脑卒中患者及３８例正常人进行测查。结果：（１）脑卒中患者的行为记忆能力较正常对照组有明显障碍（Ｐ＜０．０１）。（２）无论病灶是在皮层还是在皮层下，均可引起患者行为记忆障碍，而皮层损伤者其障碍较皮层下更明显（Ｐ＜０．０５）。（３）病程对脑卒中患者的行为记忆能力有影响，病程超过１年者其行为记忆能力低下更明显（Ｐ＜０．０１）。（４）脑卒中患者工具性日常生活活动能力与行为记忆能力呈显著正相关（Ｐ＜０．０１）。结论：Ｒｉｖｅｒｍｅａｄ行为记忆检查可作为脑卒中患者行为记忆障碍的客观指标，脑卒中患者行为记忆能力受到损害     

吡拉西坦拮抗地西泮致健忘作用的实验研究

背景：地西泮可导致患者短时记忆缺损，特别是老年人在长期连续用药后不仅认知功能受到损伤，药物催眠的疗效减弱甚至消失。吡拉西坦可通过多种机制促进学习记忆，目前两者合用对地西泮的疗效和不良反应的影响报道较少。目的：探讨吡拉西坦与地西泮合用对地西泮的记忆缺损副作用和镇静催眠治疗作用的影响。设计：完全随机设计。地点和材料：实验在温州医学院药理教研室完成，所需的材料有415只昆明种小鼠、地西泮(Dia)、吡拉西坦(Pir)、谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)。方法：在避暗法和自发活动中，小鼠随机分成生理盐水组、Dia组、Pir组和Dja Pir组；在跳台法中，在上述分组的基础上两个Pir组再各分为低剂量组和高剂量组；在Y电迷宫法中，小鼠分成生理盐水组，Glu组、GABA组、GABA Glu组、Dia Glu组、Pir GABA、Dia组、Dia Pir组。主要观察指标：小鼠学习和测验的错误次数、潜伏期、自发活动及空间辨别学习能力。结果：地西泮对小鼠记忆获得和空间辨别学习能力有明显地损害作用，而吡拉西坦和对地西泮造成的记忆损害有明显地改善作用；吡拉西坦对地西泮的中枢抑制作用无显著影响。结论：吡拉西坦能纠正地西泮的致健忘作用，但不影响地西泮的中枢抑制作用。     

跑转轮运动与限制性应激对小鼠恐惧记忆与焦虑样行为的影响

目的:探讨自愿跑转轮运动与长期限制性应激对小鼠恐惧记忆与焦虑样行为的影响与海马脑源性神经营养因子的关系。方法:将10周龄雄性C57Bl/6J小鼠80只随机分为8组,每组10只。其中,对照组(C1、C2)小鼠不接受运动或应激等任何行为干预方式的刺激,运动组(R1、R2)小鼠笼内安装有跑转轮装置,应激组(S1、S2)小鼠接受长期限制性应激,应激-运动组(S-R1、S-R2)小鼠笼内安装有跑转轮装置,并且接受长期限制性应激。另外,用于行为测试的(C2、S2、R2、S-R2)小鼠依次进行条件恐惧测试和高架十字迷宫测试,用于生化实验的(C1、S1、R1、S-R1)小鼠使用免疫印记法测定海马BDNF蛋白含量。结果:在情境条件恐惧测试,应激组与应激-运动组小鼠较对照组的冰点行为时间百分比存在着显著性(P<0.05)减少;但在线索条件恐惧测试中,各组小鼠的冰点行为时间百分比没有明显差异。应激-运动组小鼠较运动组在闭合臂以及开放臂的停留时间存在显著性(P<0.05)差异,应激-运动组小鼠较运动组进入开放臂的次数出现显著性(P<0.05)增加。各组小鼠海马BDNF蛋白含量之间没有明显差异,只有应激组小鼠较对照组表现出明显升高的趋势(P=0.070)。结论:应激损害了成年小鼠的情境恐惧记忆能力,但提高了海马BDNF蛋白水平。在条件恐惧测试后进行的高架十字迷宫实验中发现,应激-运动组小鼠的焦虑样行为明显少于运动组,认为先于条件恐惧测试进行的长期限制性应激似乎有助于维持6周跑转轮运动的抗焦虑作用。     

脑源性神经营养因子对改善东莨菪碱致学习记忆障碍的实验研究

目的：探讨脑源性神经营养因子对中枢神经系统高级机能活动的作用机理,为临床应用脑源性神经营养因子治疗学习记忆障碍疾病提供实验依据。方法：以小鼠为实验对象,采用学习记忆行为训练和生化测定的方法,观察脑源性神经营养因子对东莨菪碱致学习记忆障碍、海马脑区蛋白质含量的影响。结果：脑源性神经营养因子能显著地改善东莨菪碱所致的学习记忆障碍,使东莨菪碱实验小鼠海马脑区的蛋白质含量显著增加。结论：脑源性神经营养因子对东莨菪碱所致的小鼠学习记忆障碍的改善与康复均具有明显作用。     

巨细胞病毒感染小鼠学习记忆与CaMK Ⅱ表达的变化

目的:探讨巨细胞病毒感染对小鼠学习记忆的影响、Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的表达,及其在学习与记忆中的作用。方法:采用颅内注射制造巨细胞病毒颅内感染小鼠模型,利用Morris水迷宫试验对病毒感染组和对照组动物的学习和记忆成绩进行3 d测试,记录其学习和记忆成绩,同时观察海马组织神经细胞[Ca2+]i及CaMKⅡ在胞膜中表达水平的变化。结果:Morris水迷宫测试的结果显示,病毒感染组小鼠的学习记忆成绩明显下降,神经细胞[Ca2+]i较对照组增高,胞膜蛋白CaMKⅡ的水平表达下降,且差异有显著性(P<0.01)。结论:巨细胞病毒感染能够导致小鼠学习记忆能力下降及CaMKⅡ在神经细胞胞膜的表达下降,说明CaMKⅡ参与了巨细胞病毒对学习记忆的影响。     

螺旋藻改善铝中毒小鼠学习记忆障碍机制探讨

目的:探讨螺旋藻改善铝中毒小鼠学习记忆障碍的作用机制。方法:用口服氯化铝方法建立小鼠铝中毒学习记忆障碍模型,并用螺旋藻多糖灌胃进行实验性治疗。用跳台试验和避暗试验检测各组小鼠的学习记忆行为,并用免疫组化ABC法检测各组小鼠海马神经元型一氧化氮合酶(nNOS)的表达。结果:与对照组比较,模型组小鼠表现出明显的学习记忆障碍,海马nNOS表达下降。实验组的学习记忆能力较模型组有明显改善,海马nNOS表达增加。结论:螺旋藻对铝中毒小鼠的学习记忆障碍有明显的改善作用,其作用机制可能与增加nNOS的表达有关。     

慢性不可预知性温和性应激对小鼠学习记忆功能的影响

目的:探讨慢性不可预知性温和应激(CMS)对小鼠空间学习和记忆功能的影响。方法:健康成年昆明小鼠30只,随机分为2组,对照组和模型组,各15只。通过10种应激因子制备CMS损伤小鼠。6周后应用Morris水迷宫实验方法,检测小鼠空间学习、记忆能力。结果:模型组寻找平台的逃逸潜伏期高于对照组(P<0.01),在靶标象限停留的时间和穿越靶标象限的次数均显著低于对照组(P<0.01)。结论:CMS可导致小鼠空间学习和记忆功能发生障碍。     

植物雌激素与突触素表达及空间认知水平的相关性研究

目的：观察两种雌激素－α－玉米赤霉醇（α－ZAL）和苯甲酸雌二醇（EB）对β淀粉蛋白毒性片段Aβ25－35所致神经损伤小鼠学习记忆的保护作用。方法：选用雌性Balb/C小鼠，经侧脑室注射Aβ25－35造成拟老年性痴呆模型，用Morris水迷宫测其空间学习记忆能力，用RT－PCR，Western blot等方法观察脑突触素的表达。结果：模型组小鼠寻找平台的潜伏期明显延长，经两种雌激素治疗后有明显改善。模型组小鼠海马突触素mRNA表达水平较对照组明显降低，经两种雌激素治疗后其表达明显增强。结论：模型小鼠学习记忆能力下降的原因之一与突触素表达下降密切相关。植物雌激素α－ZAL和EB一样能对抗Aβ25－35的毒性作用，促进突触素的表达，从而改善小鼠的学习记忆能力。     

苯磷硫胺对衰老鼠学习记忆能力的影响

目的：探讨苯磷硫胺对老年小鼠学习和记忆能力的影响。方法：用Y型迷宫测试衰老鼠后将实验小鼠分成实验组和对照组,分别予添加苯磷硫胺饲料和普通饲料喂养6个月,通过Y迷宫对其学习和记忆能力进行评价,用免疫组化方法观察其海马齿状回颗粒下层细胞的发生情况。结果：实验组小鼠学习记忆能力较对照组明显改善,免疫组化显示BRDU标记的新生细胞数量明显增加。结论：苯磷硫胺能改善正常衰老小鼠学习记忆能力,而海马新生细胞的增加是其作用的可能机理之一。     

长期应激对大鼠学习与记忆及纹状体边缘区c-Fos、c-Jun表达的影响

目的：探讨长期应激对大鼠学习、记忆及及纹状体边缘区即刻早期基因表达的影响.方法：将40只成年雄性SD大鼠分为两组：每组20只.应激组和对照组, 应激组大鼠持续暴露于应激原环境中达3周,用Morris水迷宫和Y 迷宫作业测试其空间学习与记忆成绩, 再应用免疫细胞化学方法检测c-Fos、c-Jun蛋白在纹状体边缘区内的表达.结果：（1）Morris水迷宫测试：应激组大鼠应激后寻找平台的潜伏期较对照组明显延长（P＜0.05）,Y迷宫测试：应激组大鼠寻找安全区的正确率明显低于对照组（P＜0.01）;（2）应激组纹状体边缘区c-Fos、c-Jun蛋白表达水平较对照组明显下调（P＜0.05）.结论：长期应激可减弱学习与记忆能力, 纹状体边缘区即刻早期基因表达变化可能是应激影响学习与记忆的机制之一.     

吡拉西坦拮抗地西泮致健忘作用的实验研究

背景地西泮可导致患者短时记忆缺损,特别是老年人在长期连续用药后不仅认知功能受到损伤,药物催眠的疗效减弱甚至消失.吡拉西坦可通过多种机制促进学习记忆,目前两者合用对地西泮的疗效和不良反应的影响报道较少.目的探讨吡拉西坦与地西泮合用对地西泮的记忆缺损副作用和镇静催眠治疗作用的影响.设计完全随机设计.地点和材料实验在温州医学院药理教研室完成,所需的材料有415只昆明种小鼠、地西泮(Dia)、吡拉西坦(Pir)、谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA).方法在避暗法和自发活动中,小鼠随机分成生理盐水组、Dia组、Pir组和Dia+Pir组;在跳台法中,在上述分组的基础上两个Pir组再各分为低剂量组和高剂量组;在Y电迷宫法中,小鼠分成生理盐水组,Glu组、GABA组、GABA+Glu组、Dia+Glu组、Pir+GABA、Dia组、Dia+Pir组.主要观察指标小鼠学习和测验的错误次数、潜伏期、自发活动及空间辨别学习能力.结果地西泮对小鼠记忆获得和空间辨别学习能力有明显地损害作用,而吡拉西坦和对地西泮造成的记忆损害有明显地改善作用;吡拉西坦对地西泮的中枢抑制作用无显著影响.结论吡拉西坦能纠正地西泮的致健忘作用,但不影响地西泮的中枢抑制作用.     

莨菪类生物碱对吗啡依赖小鼠痛阈影响的比较

目的：观察莨菪类生物碱对吗啡依赖小鼠痛阈的影响。方法：连续腹腔注射吗啡(10mg／kg，1次／d，共7d)建立小鼠依赖模型，并腹腔注射莨菪类生物碱(4mg／kg，1次／d，共7d)。结果：吗啡组小鼠痛阈明显下降。东莨菪碱能显著提高吗啡依赖小鼠的痛阈。同剂量山莨菪碱和阿托品均有对抗吗啡依赖小鼠的痛阈下降的现象。结论：莨菪类生物碱中，东莨菪碱在提高吗啡依赖小鼠痛阈的作用最强。     

心理行为干预辅助治疗痴呆并发行为和精神症状

目的：探讨心理行为干预辅助治疗痴呆并发行为和精神症状（BPSD）的效果。方法：60例BPSD患者随机分为研究组和对照组各30例,均口服利培酮和脑复康药物治疗。研究组同时辅助心理行为干预治疗。包括记忆、文体活动及ADL训练、行为矫正等。于治疗前后采用痴呆病理行为评定量表（BEHAVE—AD）、简易智能状态量表（MMSE）及ADL能力量表（ADL）评定2组患者的痴呆程度、行为症状及ADL。结果：治疗6周后,2组BEHAVE-AD评分均较治疗前有明显下降（P〈0．01）,2组间比较,研究组下降更明显（P〈0．05）。MMSE评分研究组较治疗前及对照组明显提高,ADL评分明显下降（均P〈0．05）,而对照组治疗前后变化不明显。结论：心理行为干预辅助治疗BPSD患者,可有效改善其认知,提高残存记忆功能和ADL能力。     

褪黑素对小鼠缺血再灌注脑损伤后海马CA3区神经元的保护作用

目的:观察褪黑素(melatonin,MT)对缺血再灌注脑损伤小鼠学习记忆能力的影响,探讨MT 对缺血再灌注脑损伤的神经保护作用.方法:将60 只健康小鼠随机分为对照组,模型7 d 组和治疗7 d 组.模型组采用双侧颈总动脉夹闭法建立小鼠缺血再灌注脑损伤,治疗7 d 组分别于处死前3 d 腹腔注射MT(20 mg/kg,3 次/ d),对照组同时给予等量生理盐水.各组小鼠于处死前3 d 采用Y-型电迷宫检测小鼠学习记忆能力,行为检测完毕后行脑组织SOD、NO、MDA 及脑组织含水量检测;电镜下观察海马CA3 区神经元超微结构变化.结果:与模型组相比,治疗7 d 组小鼠的学习记忆能力明显改善(P ＜ 0.05);治疗7 d 组SOD 含量显著升高,NO、MDA 含量明显下降;电镜下,较非治疗组海马神经元的损伤明显改善.结论:褪黑素可以明显改善缺血再灌注脑损伤小鼠的学习记忆能力,不同程度的减少或减轻神经元的损害,说明其具有神经保护作用.