肠道病毒感染者的PCR诊断中不同标本的比较研究

作者介绍了对有神经症状的肠道病毒感染者，采取多种标本（脑脊液、血清及咽拭子等），作PCR以检测肠道病毒的RNA。结果发现，在儿童中，取脑脊液和血清联合作PCR更为敏感，而对成年患者则否。对咽拭子标本作PCR，其敏感性为62．5％，而特异性则为75．6％。肠道病毒感染者的PCR诊断中不同标本的比较研究     

PCR杂交梳法在HBV检测中的应用

聚合酶链反应（PCR）以其灵敏性高、特异性强的特点，近年来正广泛应用于乙型肝炎病毒（HBV）感染的研究和诊断。然而，实践证明，PCR影响结果的因素很多，这主要是由于过去PCR产物分析的手段较落后。如琼脂糖凝胶电泳（即一次PCR）的方法只能判断产物的大小，并不能鉴别产物的特异性，因此不可避免地会出现一些难以判别的非特异产物[1]，而造成人为主观因素导致的误差，出现假阳性和重复性差等现象。另外，在实际应用中PCR大约只可以将约103个模板DNA分子扩增出来[2、3]，而不是理论上的只要具有一个拷贝的模板就可以被反应系统扩…     

现代生物技术发展趋势（续完）

PCR的应用前景：PCR可以在体外扩增DNA，从而达到快速、特异、高度敏感地检出DNA，而检测标本可以是纯培养的细胞或微生物，也可以是各种临床标本（血、尿。粪便、体腔积液、嗽口水等）、犯罪现场标本（血斑、毛发、精斑等）、病理标本（新鲜的活检标本或甲醛固定的石腊包理组织）以及考古标本等。PCR除广泛应用于遗传性疾病的诊断之外，还广泛应用于乙型肝炎等传染性疾病的病原学诊断。近年来，在流行性出血热病毒、丁型肝炎病毒、甲肝病毒、心肌炎病毒、轮状病毒、衣原体和支原体、幽门螺杆菌等方面，都开展了PCR检测诊断的大量研…     

我国临床医学领域PCR用于病毒检测的主要现状

聚合酶链反应（PCR）经约十年的发展已运用到多种领域，如基础及临床医学、昆虫学、畜牧业、农业等。在病原微生物检测与研究方面尤以病毒的检测发展较快。在我国近年来已将PCR用于病毒的病原学诊断、流行病学调查、筛选健康人群及病毒基因研究等方面，表现出明显的优越性，范围已近30种病毒。本文就我国临床医学领域PCR用于病毒检测的主要现状作一概述。1PCR技术在乙型肝炎病毒（GBV）检测中的应用HBV－DNA的存在是病毒复制最直接而特异的标志物，且与病情活动及传染性有关。PCR的检测水平超过引起HBV感染所需的病毒最低浓度（1…     

应用多种技术鉴别诊断弓形虫性、囊虫性及结核性脑炎

目的：应用多种检验技术鉴别诊断弓形虫性、囊虫性及结核性脑炎。方法：使用PCR、结核杆菌培养、ELISA检验等方法。对1200例脑炎患者的脑脊液标本中的弓形虫、结核杆菌、囊虫抗原及抗体进行了检测。结果：在1200分脑脊液标本中，共检测出弓形虫DNA阳性87例，结核杆菌DNA阳性105例，总阳性率为15．7％。其中结核杆菌DNA阳性而培养阴性的标本有22例，弓形虫DNA阳性而弓形虫抗体IgM阴性3例。检测出囊虫抗原阳性156例，抗体阳性271例，两项均阳性的134例。结合脑部CT检查发现．抗原阳性的156例病人均有脑部炎性病灶，而单纯抗体阳性的病人则只有16例存在脑部炎性病杜。结论：PCR的方法比较灵敏，但是可能出现假阳性，PCR阳性结果报告应慎重，应结合临床和常规检测结果综合判断。同时也有部分常规检测结果阳性而PCR检测阴性，这说明PCR在理论上有很大的优点，但在实际应用上仍需要完善。为明确囊虫病的诊断，需要把囊虫抗原作为诊断囊虫病的常规化验项目。     

PCR技术在淋巴系统恶性肿瘤患者MRD检测中的应用

基于PCR技术检测MRD的方法多种多样，如共同引物和特异引物PCR，RT-PCR，ASO-PCR，SSCP-PCR，荧光PCR结合毛细管电泳技术以及定量的竞争PCR和实时定量．PCR(RQ-PCR)、LightCycle RQ-PCR等。各种方法均有其优缺点及适用情况，合理选择才能获得所需的灵敏度和特异性。     

PCR法测定临床标本的结核分枝杆菌

传统的结核分枝杆菌（TB）测定方法是抗酸染色法和培养法，前者缺乏灵敏度和特异性，而培养法则耗时。某些难得的肺外感染标本镜值和培养都很困难；故这些标本常需接种豚民作动物试验。PCR法可直接用临床标本鉴定TB。为此，本文作者对TB的镜检法、培养法和PCR法进行了对比分析。标本由Leeuwarden和Enschede公共卫生实验室收集怀疑患有TB病人的标本，同一病人标本分成两份。一份作镜检和培养；另一份作PCR检查。PCR法按照KO0k推荐的方法；疚、欣等标本用10倍量液化剂液化，15000xg离。心15min。尿、脑香液等直接15000xg离心工smin…     

快速诊断结核杆菌感染的PCR方法的实验室应用

[目的]寻找一种即能提高检出的阳性率，又能减少污染环节而导致假阳性，取材方便，操作简单，便于推广的临床标本进行PCR扩增，来进行结核病的实验室快速诊断。[方法]对经X-线、胸片、痰抗酸染色、痰BLL-MGIT快速培养及临床诊断确诊为结核病例40例的痰、全血、外周血单个核细胞进行TB-Ab、PCR的检测比较。[结果]痰液中的结核杆菌-DNA的PCR检出率高达70％，而同一患者外周血分离单个核细胞的阳性率仅为40％。同一血样中TB-Ab与全血PCR方法扩增全血中所有的模版DNA，两方法之间具有显著性差异。全血PCR与外周血单个核细胞PCR比较，二者的阳性率具有显著性差异（P=0．001〈0．01），以全血细胞PCR检测阳性率最高。结核杆菌感染者红细胞粘附功能明显增加，与正常对照组比较县有显著性差异。[结论]检测结核病患者全血细胞TB的PCR实验方法可能为结核杆菌感染的早期、有效的实验室指标。     

临床标本聚合酶链反应的影响因素探讨

聚合酶链反应是一种核酸体外扩增技术。近年来已广泛应用于病原性微生物检测、遗传及肿瘤的诊断等生物学领域。作为一种诊断工具，PCR具有超凡的敏感性，但是，由于PCR方法的结果受诸多因素的影响，如技术操作、标本前处理、试剂等，所以实际应用于临床诊断尚存在许多问题，为了保证PCR结果的可靠性和准确性，本文探讨了临床标本PCR技术检测的影响因素及控制方法。     

两种检测成人肺炎支原体方法的评价

目的：通过对比两种检测肺炎支原体感染的方法，寻找一种快速、准确、简便的，更适于基层普及的检测方法。方法：同时应用PCR方法和MP快速鉴定培养基法，检测北京军区总医院呼吸科2007—03／2008—01住院患者中入院前有发热、鼻塞、流涕、干咳症状超过7d且没有应用大环内酯类者共267例次。结果：PCR方法和MP快速鉴定培养基法均阳性74份，两种方法均阴性173份，PCR方法阳性而MP快速鉴定培养基法阴性者8份，PCR方法阴性而MP快速鉴定培养基法阳性者12份，P〉0．05。结论：两种方法差异无显著性，MP快速鉴定培养基法更适于基层医院开展。     

定量PCR技术

用PCR技术对基因从定性到定量测定是分子生物学方法学研究的一大飞跃，实现对核酸信息量的分析比较，为疾病的诊断和治疗提供更多、有效的基因水平信息。本文介绍了近年来研究和应用较多的4个重要定量PCR方法，即对PCR产物的直接定量、极限稀释法、靶基因与参照基因的同步扩增和竞争性PCR。并对定量PCR的特性和扩增动力学的影响因素等作了讨论。     

错配PCR技术在快速检测耐药结核分枝杆菌中的应用

耐药结核病的早期快速诊断是结核病控制中亟待解决的关键问题之一。利用基因型检测耐药性包括PCR产物直接测序法，错配PCR法等。错配PCR技术最早由Newton等于1989年建立并用于人抗胰岛素基因缺陷的检查，目前已广泛应用于基因点突变的检测。根据PCR引物设计的不同，可将其分为间接错配PCR，即引物与野生型完全互补，以突变株为模板不能扩增得到PCR产物，和直接错配PCR，即引物与特定的点突变完全互补，以野生株为模板不能扩增得到PCR产物。已有用间接错配PCR方法检测结核分枝杆菌利福平耐药的报道。本研究以检测耐利福平的结核分枝杆菌rpoB基因531位点的点突变为对象，建立了直接错配PCR法，并与间接错配PCR法进行了比较。     

实时定量PCR在干细胞及肿瘤研究中的应用

实时定量PCR(real-time quantitative PCR)技术实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,已广泛用于生物医学及临床医学等多个领域。而在干细胞研究和肿瘤诊断的研究中,国内外文献报道较少,本文就其中方法原理、研究进展及其在干细胞和肿瘤研究方面的应用作一简要综述。     

以PCR为基础的指纹图谱技术对军团菌分型的研究进展

本文概述了RAPD、REP／ERIC－PCR及AFLP等以PCR为基础的基因指纹图谱技术对军团菌分型的研究，分析了它们的优缺点，并提出改进的方向。     

荧光定量PCR检测HBV—DNA和ELISA法检测乙肝六项的一致性分析

目的对临床病人血清同时进行荧光定量PCR和ELISA检测，分析两种方法检测乙肝的一致性。方法分别使用Kappa检验、线性回归分析和ROC曲线法对两种测试方法结果进行分析。结果以定性方式处理两种方法测试结果时，Kappa检验结果显示乙肝病毒DNA的PCR检测结果和ELISA法检测的HbsAg、HbsAh、HbeAg及HbeAb结果存在一致性．而和Hbcab及preS2Ag结果不存在一致性；以定量方式处理式处理两种方法测试结果时，线性同归分析和ROC曲线法都显示乙肝病毒DNA的PCR检测结果和ELISA法检测的HbeAg存在一致性，而和HbsAg、HbsAb、HbeAb、HbcAb及preS2Ag结果不存在一致性。结论证实PCR检测乙肝病毒DNA和ELISA检测HbeAg存在良好的一致性，而和ELISA检测乙肝六项其他项目的一致性较差，除方法学本身的局限导致的差异外，由于荧光定量PCR法和ELISA法分别从基因水平和蛋白质水平对乙肝病毒进行测定，测定成分的差异也是影响结果一致性的重要因素．     

提高PCR检测结果可信性的措施

PCR技术问世以来在一些疾病病原学的诊断方面得到了广泛的应用。高灵敏度和高特异性是PCR技术的最大特点，该技术已渗透到分子生物学的各个领域。PCR技术看似易于操作，但由于PCR技术在我国应用时间还不长，且影响因素和环节较多，在实际工作中已遇到不少问题，如假阴性、假阳性，结果的可靠性等，这些质疑对操作人员和临床医师都存在着困惑。因此，要使PCR这一具有强大生命力的技术健康发展，提高PCR检测结果可信性已势在必行。现将如何提高PCR检测结果可信性的一些措施报告如下。1、实验室要求1．1实验室布局：为了避免PCR实验…     

定量PCR的研究进展

定量PCR技术是在PCR定性技术基础上发展起来的基因定量技术，克服了原有的PCR技术存在的不足，能准确敏感地测定模板浓度及检测基因变异等。本文就定量PCR技术中的竞争性PCR和荧光定量PCR技术作一综述，以便更好地理解及应用这项技术。     

LightCycler实时定量PCR与白血病

LightCycler实时定量聚合酶链反应（PCR）是近年来研制的一种新的核酸定量技术，由微体积荧光检测仪和PCR热循环仪组成，PCR热循环时通过热空气对玻璃毛细管加热，能够使温度迅速发生改变（以20℃／s升高或降低），在扩增的同时进行荧光定量检测，具有简便、快速、精确、敏感及可靠等特点。本文对实时定量PCR的技术原理及其在白血病微小残留病检测和基因突变及多态性分析等中的应用进行综述。     

HBV—DNA检测与乙型肝炎血清学标志关系及IgG，IgA，IgM，C3检测结果的初步观察

自从1986年MulliS等创建PCR技术以来，PCR技术在临床检验中得到了广泛应用，本文测定了406例患者的乙型肝炎血清学标志，并用PCR技术测定HBV—DNA，同时测定IgG，IgA，IgM，C3等，对彼此间相应关系作了分析，先报告如下。     

聚合酶链反应检测重组腺病毒方法的建立及评价

病毒载体的应用越来越广泛，而我国病毒载体药物电正处于临床试验阶段．还需对人体和环境安全性密切观察。为研究这类药物在体内扩散和对环境的安全性，需要建立一种灵敏、可靠的检测方法。聚合酶链反应(PCR)技术已应用于临床病原微生物的检测，具有高敏感性、特异性等特点。本研究采用PCR建立了一种快速、简便的重组腺病毒的检测方法，并参考美国FDA检验标准，对该方法进行评价。