大部分肝切除模型大鼠肝再生组织中CD34蛋白及Delta-like-1蛋白的表达**☆

背景:当肝脏受到严重损伤或肝脏大部分缺失时,肝干细胞迅速分裂增殖向成熟肝细胞分化修复肝组织,但肝再生是一个复杂的多信号分子调控的过程,参与调控的相关基因及蛋白质目前尚不十分清楚.目的:观察大部分肝切除后大鼠肝再生组织中CD34蛋白、Delta-like-1蛋白的表达变化.方法:切除2/3肝脏建立大鼠肝再生动物模型,应用苏木精-伊红染色、酶组织化学染色、免疫组织化学染色方法在不同时间点检测肝再生组织中ATP酶、增殖细胞核抗原、CD34、Delta-like-1蛋白的表达情况.结果与结论:在肝再生的启动阶段ATP酶表达下调,CD34、Delta-like-1表达上调;在肝再生的持续增殖阶段,ATP酶表达上调到正常水平,CD34、Delta-like-1表达下调;增殖细胞核抗原表达为持续上调.说明ATP酶、CD34、Delta-like-1在不同阶段表达不同,提示在肝再生过程中各信号分子的协同作用及Notch- Delta信号通路参与其作用机制.     

不同性别肝大部切除小鼠的肝再生

背景:各种病因所致的肝硬化及肝癌发病率存在明显的性别差异.肝受损或手术后肝脏均可通过其自身强大的再生能力进行代偿,但肝再生过程中不同性别肝细胞的再生状况是否存在差异尚不清楚.目的:比较肝大部切除后不同性别小鼠肝脏再生能力是否存在差别.方法:采用不同性别成年昆明小鼠行肝脏大部切除,称量手术切除的肝组织,并于术后1,3,5,7,10,14 d取再生肝组织,称量后常规制作组织切片备用,取材前2 h腹膜下注射5一溴脱氧尿核苷50 mg/kg.观察比较不同性别小鼠再生肝组织的结构变化、细胞形态,以及术后各时间点肝再生率、肝组织5一溴脱氧尿核苷的标记指数.结果与结论:苏木精一伊红染色切片镜下结果显示,肝脏大部切除后各时间点不同性别小鼠肝组织结构无明显差别.不同性别小鼠肝大部切除后各时间点肝再生率及5一溴脱氧尿核苷标记指数差异均无显著性意义(P>0.05).提示肝大部切除后不同性别小鼠肝的再生能力无明显差别.     

大部分肝切除模型大鼠肝再生组织中CD34蛋白及Delta-like-1蛋白的表达

背景：当肝脏受到严重损伤或肝脏大部分缺失时,肝干细胞迅速分裂增殖向成熟肝细胞分化修复肝组织,但肝再生是一个复杂的多信号分子调控的过程,参与调控的相关基因及蛋白质目前尚不十分清楚。目的：观察大部分肝切除后大鼠肝再生组织中CD34蛋白、Delta-like-1蛋白的表达变化。方法：切除2/3肝脏建立大鼠肝再生动物模型,应用苏木精-伊红染色、酶组织化学染色、免疫组织化学染色方法在不同时间点检测肝再生组织中ATP酶、增殖细胞核抗原、CD34、Delta-like-1蛋白的表达情况。结果与结论：在肝再生的启动阶段ATP酶表达下调,CD34、Delta-like-1表达上调;在肝再生的持续增殖阶段,ATP酶表达上调到正常水平,CD34、Delta-like-1表达下调;增殖细胞核抗原表达为持续上调。说明ATP酶、CD34、Delta-like-1在不同阶段表达不同,提示在肝再生过程中各信号分子的协同作用及Notch-Delta信号通路参与其作用机制。     

肝硬化部分切除后肝再生及结构变化

背景：肝脏自身具有强大的再生能力,临床资料显示大部分肝癌患者合并有肝硬化,切除肿瘤后肝脏质量可逐渐恢复,提示硬化的肝脏仍具备修复潜能。目的：尝试用肝部分切除方法诱导小鼠硬化肝组织内具再生能力的细胞增殖,观察再生肝脏的结构变化。方法：使用CCl4皮下注射方法制备小鼠肝硬化模型。对肝硬化小鼠行肝部分切除,于切除后1,3,5,7,10,14及21 d取小鼠肝组织并称质量。观察比较肝部分切除后不同时间小鼠再生肝组织的结构变化;评估肝再生率;免疫组化方法分析肝星形细胞标志分子结蛋白及肝星形细胞活化标志分子α-平滑肌肌动蛋白的表达变化;5-溴脱氧尿核苷标记技术对增殖细胞进行定性、定位。结果与结论：肝硬化小鼠肝部分切除后第1,3,5,7,14,21天肝再生率分别为6.58%,22.03%,21.39%,29.05%,45.22%,50.98%。苏木精-伊红染色和Masson染色显示CCl4注射8周后呈早期肝硬化病理改变,肝部分切除后肝组织结构逐步改善。免疫组化结果显示肝部分切除后第1天再生肝组织内结蛋白表达减少,但第3天至第14天呈上升趋势,21 d则明显减少;肝再生过程中各时间点α-平滑肌肌动蛋白表达依时递减。5-溴脱氧尿核苷阳性细胞在肝部分切除后1-7 d主要为肝细胞,肝部分切除后14-21 d阳性细胞定位于肝血窦内皮及窦腔内。结果表明早期肝硬化小鼠大部肝切除后3 d出现明显的再生反应,并逐步恢复正常的肝组织结构。     

倒千里光碱对肝大部分切除小鼠肝脏损伤后再生修复的影响

背景:目前大多数应用倒千里光碱造成肝损伤模型都是以大鼠为实验对象,有研究报道倒千里光碱并不能抑制小鼠肝细胞增殖,也有报道倒千里光碱对小鼠的肝细胞具有增殖抑制作用.目的:观察单纯肝脏大部分切除及其联合应用倒千里光碱致小白鼠对肝损伤后再生修复的影响.方法:40只C57BL/6J小鼠随机数字表法分为2组,每组20只.倒千里光碱/肝脏部分切除组:腹腔注射倒千里光碱溶液70 mg/kg,注射2次,每次间隔2周,4周后肝脏2/3切除.肝脏部分切除组:腹腔注射生理盐水70 mg/kg,注射2次,每次间隔2周,4周后行肝脏2/3切除.观察术后14 d肝脏大体结构恢复情况;苏木精-伊红染色观察术后第3,7天肝细胞损伤情况;BrdU染色观察术后第3天成熟肝细胞增殖情况;CK19和C-kit免疫组织化学方法观察术后第3,7,14天肝脏卵圆细胞增生情况.结果与结论:肝脏部分切除组14 d肝大体结构基本恢复正常,而倒千里光碱/肝脏部分切除组肝脏大小没有明显的恢复.苏木精-伊红染色可见倒千里光碱/肝脏部分切除组明显的肝细胞变性改变;BrdU染色肝脏部分切除组术后第3天有明显肝细胞增殖,而倒千里光碱/肝脏部分切除组肝细胞增殖很少.CK19和C-kit免疫组织化学结果显示倒千里光碱/肝脏部分切除组术后第3天开始肝脏主要通过肝卵圆细胞增生并逐渐向肝细胞和小胆管分化,从汇管区开始向肝小叶内延伸以修复损伤.提示倒千里光碱可抑制小鼠肝脏损伤后肝细胞增殖再生.建立倒千里光碱/肝脏部分切除小鼠模型可诱导肝脏卵圆干细胞增生.     

左归丸对同种异性骨髓移植小鼠肝再生相关基因信号通路的影响

背景:维持正常的肝再生足避免肝纤维化和肝癌发生发展的关键环节,中医药调控肝再生主要反映在单味或复方中药对肝细胞、间质细胞、骨髓干细胞的增殖调控.目的:利用基因芯片技术探讨中药左归丸对同种异性骨髓移植小鼠肝再生相关基因信号通路的影响.设计、时间及地点:开放件实验,于2002-01/2007-12在湖北中医学院附属医院肝病研究所完成.材料:SPF级4周龄BABL/C小鼠,雄性10只,作为供体;雌性80只,作为受体,随机分为单纯骨髓移植组、左归丸治疗组,40只/组.小鼠16K v1.0基因表达谱寡核苷酸芯片由上海生物芯片公司提供.芹归丸由熟地、淮山药、枸杞子、山茱萸、菟丝了、川牛膝、鹿角胶、龟板胶组成.方法:两组受体小鼠接受60Co源γ射线照射后,经尾静脉输入供鼠单个核细胞悬液0.2 mL(约2×106个细胞),移植后分别给予生理盐水、左归丸7g/(kg·d)灌胃,6个月后取肝组织标本.选用小鼠基因表达谱寡核苷酸芯片,提取液氮冻存肝组织总RNA,利用反转录酶合成掺有荧光标记的cDNA探针,将探针与基因表达谱芯片杂交,筛选样奉之间杂交信号比值有差异表达的基因.利用GenBank ID和UniGene数据库将差异表达基因聚类,按基因本体分类法对聚类的差异表达基因分类,并采用KEGG数据库查询差异表达基因所涉及的信号通路.主要观察指标:差异表达基因谱.与肝再生相关的代谢及信号通路.结果:①与单纯骨髓移植组相比,左归丸治疗组差异表达基因共1 147条,已知功能基因有533条,其中209条基因涉及70种生物化学通路.②在差异表达基因涉及的代谢信号通路中,与肝再生相关的信号通路主要有Wnt信号通路、MAPK信号通路、TGF β信号通路、Jak-STAT信号通路、凋亡、Toll样受体信号通路等,这些通路中Wnt1、EGF、FGF2、FGF16、MAPKK1、E2F、CSF3、Myd88、sFRP1、sFRP5、CSF2受体、CNTF受体、Caspase 12等基因表达上调,MAPK9、Rac1、GSK3、Wnt10a、IL12a、蛋白激酶C γ、Akt2、Activin A受体等基因表达下调.结论:左归丸调控肝再生的作用机制可能在于网络式双向调控肝再生相关信号通路中的基因表达.     

大鼠肝再生增强因子的基因克隆及序列分析

背景:肝再生增强因子是一种重要的次级肝再生因子,能够特异性地促进肝脏再生.目的:将乳鼠肝脏提取的RNA,利用特异引物克隆到肝再生增强因子基因,对其进行了生物信息学分析.设计、时间及地点:基因分子学体外实验,于2008-03/05在河南大学生命科学学院神经生物学实验室完成.材料:SPF级3日龄Wistar大鼠肝组织.方法:取3日龄Wistar大鼠肝组织.按异硫氰酸胍-苯酚-氯仿一步法抽提肝组织总RNA,按分子生物学实验指南的步骤进行反转录-聚合酶链反应方法扩增目的片段,用凝胶同收试剂盒回收纯化目的基因,连接T载体,转入大肠杆菌,提取质粒送上海生工生物工程技术服务有限公司测序.应用分子生物学软件对测序结果进行分析.主要观察指标:聚合酶链反应扩增条带观察;测序结果分析;丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸磷酸化位点的预测;系统进化树分析.结果:聚合酶链反应扩增结果与目的片段位置一致,测序结果表明为肝再生增强因子mRNA,基因全长378 bp,在人、牛、小鼠、斑马鱼等物种中高度保守.结论:实验成功克隆了大鼠肝再生增强因子基因.     

胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植对宿主肝功能的影响及安全性评估

背景:体外诱导胚胎干细胞分化为肝细胞已有不少成功的报道,但其体内移植后能否有效整合入宿主肝板、在肝内能否进一步生长分化并表达肝细胞功能以及成瘤的风险等情况目前还不清楚.目的:应用治疗性肝再生模型进行胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植, 观察其在肝组织替代、体内的生长分化及成瘤性情况.设计:随机对照动物实验.单位:中山大学附属第二医院小儿外科.材料:选用BALB/c小鼠24只为受体,鼠龄6～8周,体质量20～ 35 g,雌雄不拘购自广州市实验动物中心.实验所用胚胎干细胞源性肝干细胞由作者所在课题组诱导胚胎干细胞分化而成.小鼠胚胎干细胞株E14由本院干细胞中心提供.方法:实验于2006-07/2007-06在中山大学附属第二医院干细胞研究中心完成.将24只小鼠随机分为2组:肝再生模型 干细胞移植组和肝切除 干细胞移植组,每组12只.前组分两次按50 mg/kg剂量腹腔内注射倒千里光碱(retrorsine) ,间隔2周,第2次注射4周后行70%肝部分切除制造肝损伤;然后经门静脉分别移植1×105羟基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)荧光标记的细胞入小鼠肝内进行胚胎干细胞源性肝干细胞移植.后组在行70%肝部分切除制造肝损伤模型后进行胚胎干细胞源性肝干细胞移植.主要观察指标:荧光显微镜下观察移植细胞组受体鼠肝脏内分布、整合与体内生长分化情况.2周后行白蛋白荧光免疫组化(双荧光染色)、血清白蛋白水平检测其功能状况.将胚胎干细胞源性肝干细胞注入治疗性肝再生小鼠肝内,将未分化的胚胎干细胞移植入小鼠腋区皮下作为对照,观察胚胎干细胞源性肝干细胞体内成瘤情况.结果:①肝干细胞在受体鼠肝内生长情况:CFDA SE标记的胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植1周,受体小鼠肝实质内可见散在绿色荧光分布.2周后,肝实质内绿色荧光分布区域明显扩大,且可见类似肝索样结构排列.②肝功能:共焦白蛋白荧光免疫组化(双荧光染色)结果表明,受体小鼠肝组织内可见标记细胞表达白蛋白阳性信号(呈黄色荧光),肝再生模型 干细胞移植组和肝切除 干细胞移植组血清白蛋白水平则无明显差异(P > 0.05).③肝干细胞移植安全性:6周内未见畸胎瘤形成,而将未分化的胚胎干细胞移植入小鼠腋区皮下6周后则可见畸胎瘤形成.结论:胚胎干细胞源性肝干细胞移植入治疗性肝再生模型小鼠肝内后可有效在肝内能进一步生长分化并部分表达肝细胞功能;且此移植安全性较好.     

小鼠肝脏大部分切除后改良再生模型的建立

目的:探讨小鼠肝脏大部分切除后再生模型的改良制作方法。方法:将8~10周龄雄性C57BL/6小鼠腹腔麻醉后,用带针6-0 proline缝线环绕肝左外叶、肝中叶共同肝蒂,距肝蒂0.2 cm穿肝右中叶表面固定,结扎肝蒂,于结扎线远侧0.2 cm处切除小鼠肝脏左外叶、肝中叶(左、右)。观察小鼠术后成活率以及术后3 d、7 d、14 d小鼠肝脏质量。结果:成功建立小鼠肝脏大部分切除模型,该模型切除小鼠肝左外叶、肝中叶(左、右),切除肝质量占肝总质量的66.7%,术后小鼠存活率100%。术后小鼠剩肝代偿性增生,术后第3天恢复至原肝总质量的58.2%,第7天恢复至原肝总质量的78.0%,术后第14天恢复至原肝总质量的93.2%。结论:本研究建立的改进型小鼠肝脏大部分切除后再生模型,具有简便、可操作性强、成功率高等优点。     

分次与一次肝部分切除术建立大鼠肝再生模型的对比研究

目的分别采用分次与一次肝部分切除术方法建立大鼠肝再生模型,通过对比研究以期为研究肝再生规律提供更合理技术平台.方法 SD大鼠随机分为3组:①分次肝部分切除组(A);②一次肝部分切除组(B);③对照组(C).比较各组切除肝重、残肝重、全肝重与切肝比例,同时比较前两组胆漏、出血、腹腔感染及下腔静脉狭窄并发症发生率,对比分析不同手术方法对肝再生量化的准确性差异及手术建模成功率的影响.结果各组全肝重及肝脏指数其差异统计学上无意义(P>0.05),分次肝部分切除组与对照组比较,切除肝重、残肝重与切肝比例统计学上无意义(P>0.05),而一次肝部分切除组与分次肝部分切除组及对照组三组对比,切除肝重、切肝比例均比后者小(P<0.05)、残肝重则比后者大(P<0.05).一次切除组胆漏、出血、腹腔感染及下腔静脉狭窄并发症发生率均比分次肝部分切除组高(P<0.05).结论采用分次肝部分切除术建立大鼠肝再生模型,量化肝脏切除程度的准确性高,并发症发生率低,手术成功率高,是理想的手术方法.     

The Hereditary Syndrome of Thrombocytopathia, Bleeding Tendency, Extreme Miosis, Muscular Fatigue, Asplenia, Headache, etc

SYNOPSIS
A new, autosomal dominantly inherited syndrome with a bleeding disorder was described in 1985 by Stormorken and his co-workers.1,2 In this multifaceted syndrome, there were the following integral components: thrombocytopathia, extreme miosis with Argyll Robertson-like traits, muscular fatigue, a tendency to spasms, asplenia, ichthyosis, dyslexia, etc.
Headache with migraine traits was also present in the family in all 4 generations in which this syndrome had been observed. Nasal and conjunctival bleeding were part of the headache picture in some of the individuals exhibiting the hemorrhagic syndrome. While the attack-related bleeding disturbances only involved family members who also suffered from the hemorrhagic syndrome, the headache per se may seem to behave differently: The affected son's headache seems to have developed into a headache with tension headache traits, whereas the other, unaffected, son's headache has common migraine traits. The familial headache which in earlier generations clearly had migraine traits, therefore, may be inherited independently from the hemorrhagic disorder. In other words, a migraine or migraine-like headache is most probably not an obligatory integral part of this syndrome. The thrombocytopathia in this disorder comprises abnormal serotonin storage, uptake, and release (Stormorken and co-workers, to be published).
The admittedly somewhat farfetched possibility also exists that the headache, although being similar to migraine, differs essentially from it and may be an expression of the serotonin aberration.     

Effect of 5-fluorouracil, mitoxantrone, methotrexate, and vincristine on the antibacterial activity of ceftriaxone, ceftazidime, cefotiam, piperacillin, and netilmicin

Using the checkerboard agar dilution technique, antibacterial activity and in vitro interactions of 4 antineoplastic agents and 5 antimicrobial drugs were examined against 56 strains of 7 bacterial species. 5-fluorouracil was found to inhibit all strains of Staphylococcus aureus and of Staphylococcus epidermidis at a concentration of 0.8 micrograms/ml or less. 84% of all gram-negative strains were inhibited synergistically when 5-fluorouracil was combined with beta-lactam antibiotics. Methotrexate and cefotiam were antagonistic in 42% of all combinations, especially when tested against Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae.     

大麻素受体在成年大鼠脑组织中的分布特点

目的：研究大麻素CB1、CB2受体在成年大鼠脑组织的分布特点和规律,为进一步研究其功能打下基础。方法：用兔抗鼠CB1、CB2受体特异性抗体免疫组化染色,检测大鼠脑组织主要部位两种受体的表达分布情况。结果：CB1受体阳性细胞在脑组织有广泛大量的分布,大脑皮质、胼胝体、海马、基底核区及小脑浦肯野细胞层、脑桥等区域均有较明显表达。CB2受体阳性细胞的数量及分布部位与CB1受体表达基本一致,少数区域如胼胝体、小脑白质阳性细胞数相差较大,CB2受体明显多于CB1受体的表达。结论：大麻素CB1、CB2受体在成年大鼠脑组织均广泛分布,并在多数部位表达情况一致,少数部位存在表达程度差异,提示其在神经系统中参与了某些生理及病理作用。 关键词 CB1受体;CB2受体;大麻素;脑组织;大鼠     

品管圈在提高儿科住院患儿服药到口率中的应用

目的：探讨品管圈在儿科病房服药到口护理工作改进中的管理作用。方法：通过品管圈活动步骤,运用质量管理工具对儿科住院患儿服药不能到口的问题进行改进,并将改进前后状况进行比较讨论。结果：住院患儿服药到口率从42.5%提升到99.19%(P＜0.01)。结论：品管圈方法的应用提高了住院患儿服药到口率,提高了医护人员的团队精神,增强了护士的责任心,提升了护士的个人素质和自信心。     

Aluminum, iron, lead, cadmium, copper, zinc, chromium, magnesium, strontium, and calcium content in bone of end-stage renal failure patients.

BACKGROUND: Little is known about trace metal alterations in the bones of dialysis patients or whether particular types of renal osteodystrophy are associated with either increased or decreased skeletal concentrations of trace elements. Because these patients are at risk for alterations of trace elements as well as for morbidity from skeletal disorders, we measured trace elements in bone of patients with end-stage renal disease. METHODS: We analyzed bone biopsies of 100 end-stage renal failure patients enrolled in a hemodialysis program. The trace metal contents of bone biopsies with histological features of either osteomalacia, adynamic bone disease, mixed lesion, normal histology, or hyperparathyroidism were compared with each other and with the trace metal contents of bone of subjects with normal renal function. Trace metals were measured by atomic absorption spectrometry. RESULTS: The concentrations of aluminum, chromium, and cadmium were increased in bone of end-stage renal failure patients. Comparing the trace metal/calcium ratio, significantly higher values were found for the bone chromium/calcium, aluminum/calcium, zinc/calcium, magnesium/calcium, and strontium/calcium ratios. Among types of renal osteodystrophy, increased bone aluminum, lead, and strontium concentrations and strontium/calcium and aluminum/calcium ratios were found in dialysis patients with osteomalacia vs the other types of renal osteodystrophy considered as one group. Moreover, the concentrations of several trace elements in bone were significantly correlated with each other. Bone aluminum was correlated with the time on dialysis, whereas bone iron, aluminum, magnesium, and strontium tended to be associated with patient age. Bone trace metal concentrations did not depend on vitamin D intake nor on the patients' gender. CONCLUSIONS: The concentration of several trace elements in bone of end-stage renal failure patients is disturbed, and some of the trace metals under study might share pathways of absorption, distribution, and accumulation. The clinical significance of the increased/decreased concentrations of several trace elements other than aluminum in bone of dialysis patients deserves further investigation.