lncRNA LEF1-AS1通过靶向miR-612调控皮肤鳞状细胞癌细胞株增殖、凋亡、迁移侵袭的体外实验研究

【摘要】 目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）LEF1-AS1对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其机制。方法 通过干扰皮肤鳞状细胞癌SCC13细胞LEF1-AS1的表达和过表达、抑制miR-612的表达，将SCC13细胞分为转染LEF1-AS1干扰序列、无义序列的干扰LEF1-AS1组、干扰对照组，转染miR-612过表达序列、无义序列的miR-612过表达组、过表达对照组，以及转染LEF1-AS1干扰序列与miR-612抑制序列的干扰抑制组，和转染LEF1-AS1干扰序列与miR-612抑制无义序列的干扰抑制对照组。采用qRT-PCR法检测各组细胞miR-612的相对表达，CCK8法检测细胞增殖，流式细胞仪分析细胞的凋亡情况，Transwell试验检测细胞的迁移、侵袭能力，Western印迹检测细胞周期蛋白依赖激酶1（cyclinD1）、细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂（p21）、Bcl-2家族蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达。用LncBase Predicted v.2 在线预测网站预测lncRNA LEF1-AS1与miR-612之间的互补序列，将互补/非互补序列用于构建荧光素酶报告基因质粒，分别与miR-612过表达及过表达对照基因共转染SCC13细胞，验证lncRNA LEF1-AS1与miR-612的结合能力。两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果 miR-612过表达组细胞增殖能力、迁移及侵袭细胞数均低于过表达对照组（均P < 0.05），凋亡率高于过表达对照组（P < 0.05）。干扰LEF1-AS1组、干扰对照组、干扰抑制组、干扰抑制对照组miR-612的相对表达差异有统计学意义（F = 150.78，P < 0.001），24、48、72 h时的增殖能力差异有统计学意义（均P < 0.05），凋亡率、迁移及侵袭细胞数差异均有统计学意义（均P < 0.05）。干扰LEF1-AS1组细胞中miR-612表达、凋亡率高于干扰对照组，48、72 h细胞增殖能力、迁移细胞数和侵袭细胞数低于干扰对照组（均P < 0.05），而干扰抑制组细胞中miR-612表达、细胞凋亡率低于干扰抑制对照组，48、72 h细胞增殖能力、迁移细胞数和侵袭细胞数高于干扰抑制对照组（均P < 0.05）。Western印迹显示，4组细胞cyclinD1、p21、Bcl-2、Bax、MMP-2、MMP-9蛋白相对水平差异均有统计学意义（均P < 0.001），干扰LEF1-AS1组cyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白相对水平均高于干扰对照组，p21、 Bax蛋白相对水平低于干扰对照组（均P < 0.05）；而干扰抑制组cyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白相对水平均高于干扰抑制对照组，p21、 Bax蛋白相对水平低于干扰抑制对照组（均P < 0.05）。共转染互补序列后，miR-612过表达组细胞荧光活性低于过表达对照组（t = 21.19，P < 0.001）；而共转染非互补序列后，miR-612组细胞荧光活性与过表达对照组差异无统计学意义（t = 0.28，P = 0.78）。结论 lncRNA LEF1-AS1调控皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭，机制与靶向miR-612相关。     

miR-519d-3p通过调控Toll样受体4/核因子-κB信号通路对前列腺癌细胞的影响机制研究

目的 探讨通过微小RNA-519d-3p(miR-519d-3p)调控Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路对前列腺癌细胞的机制研究。方法 于2021年6月购买前列腺癌细胞株PC3,培养至对数时期,随机分为对照组、下调miR-519d-3p组、上调miR-519d-3p组。采用聚合酶链反应检测miR-519d-3p表达情况,对比干预24h、48h、72h细胞增殖、细胞迁移、侵袭率;检测细胞TLR4/NF-κB信号通路蛋白表达状况。结果 与对照组相比,下调miR-519d-3p组细胞增殖率、细胞侵袭数、迁移数、miR-519d-3p表达量、B淋巴细胞瘤-2基因/Bcl-2相关X基因(Bcl-2/Bax)、TLR4/β-actin、NF-κB/β-actin蛋白表达量上升,细胞凋亡率下降(P<0.05);与下调miR-519d-3p组相比,上调miR-519d-3p组细胞增殖率、细胞侵袭数、迁移数、miR-519d-3p表达量、Bcl-2/Bax、TLR4/β-actin、NF-κB/β-actin蛋白表达量降低,细胞凋亡率升高(P<0.05)。结论 上...     

Mansonone F对前列腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及其机制研究

目的研究Mansonone F在前列腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移中的作用及其机制。方法噻唑蓝(MTT)检测0μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L Mansonone F作用于前列腺癌DU145细胞48h后的细胞增殖。流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法(Western blot)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(Akt)蛋白表达,Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移。使用8μmol/L Mansonone F和激活剂IGF-1处理DU145细胞,观察激活PI3K/Akt信号通路对Mansonone F干预的DU145细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。结果 Mansonone F明显抑制DU145细胞增殖(P0.05);8μmol/L Mansonone F显著提高细胞凋亡率、Bax蛋白表达(P0.05),降低细胞侵袭数、迁移数、Bcl-2、p-Akt蛋白水平(P0.05),对Akt蛋白表达无明显影响。激活PI3K/Akt信号通路逆转Mansonone F表现出对DU145细胞增殖、侵袭、迁移、Bcl-2蛋白表达的抑制作用,以及细胞凋亡、Bax蛋白表达的促进作用。结论 Mansonone F通过抑制PI3K/Akt信号通路,进而抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移并促进其凋亡。     

基底细胞癌Bcl-2、Bax、Bcl-xl蛋白免疫组化表达的定量研究

目的 通过对基底细胞癌 Bcl-2、 Bax、 Bcl-xl蛋白表达的研究,探讨 3种蛋白在基底细胞癌发生、发展中的作用。 方法 按病理亚型将 46例基底细胞癌分为非侵袭组（ 21例）和侵袭组（ 25例）,采用免疫组化 SP法检测 Bcl-2、 Bax、 Bcl-xl蛋白在石蜡切片上的表达,并对组化结果进行图像分析以获得平均光密度和 Bcl-2/Bax的比值。结果 非侵袭性基底细胞癌组 Bcl-2蛋白表达水平和 Bcl-2/Bax的比值高于侵袭性基底细胞癌组, P值分别为 0.005和 0.044;两组间 Bcl-xl、 Bax蛋白表达水平的差异无显著性, P值分别为 0.097和 0.979。结论 Bcl-2、 Bcl-xl、 Bax蛋白可能参与了基底细胞癌的发生、发展。     

基底细胞癌Bcl—2、Bax、Bcl—xl蛋白免疫组化表达的定量研究

目的 通过对基底细胞癌Bcl-2、Bax、Bcl-xl蛋白表达的研究，探讨3种蛋白在基底细胞癌发生、发展中的作用。方法 按病理亚型将46例基底细胞癌分为非侵袭组（21例）侵袭组（25例），采用免疫组化SP法检测Bcl-2、Bax、Bcl-xl蛋白在石蜡切片上的表达，并对组化结果进行图像分析以获得平均光密度和Bcl-2／Bax的比值。结果 非侵袭性基底细胞癌组Bcl－2蛋白表达水平和Bcl-2/Bax的比值高于侵袭性基底细胞癌组，P值分别为0．005和0．044；两组间Bcl-2、Bax蛋白表达水平的差异无显著性，P值分别为0．097和0．979。结论 Bcl-2、Bax、Bcl-xl蛋白可能参与了基底细胞癌的发生、发展。     

HPA-siRNA促进皮肤鳞癌A431细胞凋亡并抑制其增殖、侵袭和迁移的机制

目的探讨乙酰肝素酶(HPA)小干扰RNA(siRNA)对皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及其机制。方法将体外培养的A431细胞分为空白对照组(未转染)、阴性对照组(转染NC-siRNA)和HPA沉默组(转染HPA-siRNA),RT-PCR检测各组细胞中HPA mRNA的表达,MTT法、流式细胞仪和Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移;Western blot检测细胞中HPA蛋白和PI3K/AKT信号通路相关蛋白PCNA、MMP-2、Bcl-2、p-AKT和AKT的表达。结果与空白对照组相比,HPA沉默组细胞在2～3 d生长过程中的A值明显下降,侵袭和迁移细胞数均明显减少,HPA mRNA和HPA、PCNA、MMP-2、Bcl-2、p-AKT蛋白的表达水平均明显降低,细胞凋亡率明显升高(P0.05);而空白对照组与阴性对照组间差异无统计学意义(P0.05)。结论 HPA siRNA可抑制A431细胞增殖、侵袭和迁移并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路的活化有关。     

MiRNA-373在皮肤鳞状细胞癌的表达及对侵袭的影响

目的 分析microRNA-373 (miR-373)在皮肤鳞状细胞癌(鳞癌)组织和细胞中的表达,探讨对皮肤鳞癌细胞侵袭的影响.方法 实时PCR检测皮肤鳞癌组织和细胞中miR-373的表达,将miR-373模拟物、miR-373抑制剂以及阴性对照miRNA转染皮肤鳞癌A431细胞,采用细胞侵袭实验分析miR-373表达下调对细胞侵袭的影响,采用Western印迹分析miR-373表达下调对MMP-2和MMP-9蛋白表达的影响.结果 皮肤鳞癌组织(2.465±0.218)和SCL-1细胞及A431细胞(1.864±0.178,2.919±0.277)中miR-373的表达水平显著高于瘤旁组织和细胞(1.000±0.000),差异有统计学意义(P＜0.05).在转移性的皮肤鳞癌患者(3.323±0.344)中,miR-373的表达显著高于非转移组(1.914±0.161),差异有统计学意义(t=4.158,P＜0.01).与未处理组和阴性对照组相比,miR-373模拟物显著增加皮肤鳞癌A431细胞中miR-373的表达水平和细胞的侵袭能力,而miR-373的抑制剂显著下调皮肤鳞癌A431细胞中miR-373的表达水平和细胞的侵袭,差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 MiR-373表达下调显著抑制皮肤鳞癌A431细胞的侵袭,并能显著下调MMP-2和MMP-9蛋白的表达.     

miR-384靶向HTRA1影响瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和凋亡

目的：明确miR-384对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFBs)增殖和凋亡的影响。方法：RT-qPCR和Western Blot检测miR-384和靶向高温需求因子A1（HTRA1）在KFBs和人瘢痕疙瘩皮肤组织中的表达。CCK-8细胞计数试剂盒检测KFBs增殖活力;流式细胞术检测KFBs细胞凋亡;Western Blot检测Ki-67、增殖细胞核抗原（PCNA）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-384对HTRA1的靶向作用。结果：KFBs和人瘢痕疙瘩皮肤组织中miR-384呈低表达,HTRA1呈高表达。转染anti-miR-384后KFBs增殖活力升高,细胞凋亡率降低,Ki-67、PCNA和Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低。转染si-HTRA1后KFBs增殖活力降低,细胞凋亡率增加,Ki-67、PCNA和Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高。miR-384靶向负性调控HTRA1表达。结论：miR-384可能通过靶向调控HTRA1促进瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖,抑制细胞凋亡。     

miR-203-5p靶向调控ERBB4基因参与子宫内膜癌细胞凋亡

目的探究microRNA-203-5p(miR-203-5p)靶向调控H编码人表皮生长因子受体4的癌基因(oncogene encoding human epidermal growth factor receptor 4,ERBB4)对子宫内膜癌小鼠细胞凋亡的影响和作用机制。方法随机选取18只SPF级雄性C57/BL6小鼠,依据随机数字表法将其分为常规组和模型组,构建子宫内膜癌小鼠模型;TargetScan预测miR-203-5p靶基因;构建ERBB4的siRNA表达载体;免疫组化检测ERBB4表达情况;将传代培养后取对数期细胞用于实验,将细胞分为Blank组、Negative control (NC)组、miR-203-5p mimic组、miR-203-5p inhibitor组、si-ERBB4组、miR-203-5p mimic+si-ERBB4组;采用MTT法测定各组细胞的增殖情况;采用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;采用RT-PCR法和western blot法测定相关mRNA和蛋白表达量。结果 miR-203-5p靶向ERBB4;miR-203-5p在子宫内膜癌小鼠子宫内膜组织中为低表达,ERBB4为高表达;与Blank组相比,miR-203-5p mimic+si-ERBB4组细胞凋亡率上升且增殖明显抑制,miR-203-5p inhibitor组结果相反;与Blank组相比,miR-203-5p表达在miR-203-5p mimic组和miR-203-5p mimic+si-ERBB4组中上升,在miR-203-5p inhibitor组中结果相反;与Blank组相比,在miR-203-5p inhibitor组中bcl-2表达上升而bax、Caspase-3下降,在miR-203-5p mimic组、si-ERBB4组和miR-203-5p mimic+si-ERBB4组中结果相反;与Blank组相比,ERBB4 mRNA及蛋白表达在miR-203-5p mimic组、si-ERBB4组和miR-203-5p mimic+si-ERBB4组下降。结论 miR-203-5p在子宫内膜癌小鼠子宫内膜组织中低表达,ERBB4高表达。诱导miR-203-5p表达,可以通过靶向下调ERBB4基因,上调bax、Caspase-3表达并下调bcl-2表达,从而抑制其细胞侵袭,诱导其发生凋亡。     

HDAC6siRNA对SCL-1细胞增殖和细胞凋亡的影响及分子机制

目的研究组蛋白去乙酰化酶6(histonedeacetylase6,HDAC6)siRNA对皮肤鳞状细胞癌(简称鳞癌)SCL-1细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法将SCL-1细胞分为三组:A为未处理组;B为siRNA对照组;C为HDAC6siRNA转染组。利用脂质体2000分别介导HDAC6siRNA和对照siRNA至SCL-1细胞中,利用Westernblot研究HDAC6siRNA对SCL-1细胞中HDAC6蛋白表达的影响。采用CCK-8试剂和流式细胞术分别研究HDAC6siRNA对SCL-1细胞增殖和细胞凋亡的影响,进一步利用WesternBlot技术分析细胞增殖相关蛋白P21和细胞凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达。结果 HDAC6siRNA转染组中HDAC6蛋白表达显著低于未处理组和siRNA对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。与未处理组和siRNA对照组相比,HDAC6siRNA转染组中SCL-1细胞的增殖明显受到抑制(P<0.05)。HDAC6siRNA转染组中SCL-1细胞的早期凋亡率明显高于未处理组和siRNA对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。HDAC6siRNA转染组中Bcl-2表达明显下调,而P21和Bax表达显著上升。结论 HDAC6可能在皮肤鳞癌的发生发展中发挥重要作用,下调皮肤鳞癌中HDAC6的表达有望成为有用的分子治疗靶点。     

miRNA211在人皮肤黑素瘤的表达及功能研究

目的 探讨miRNA211（miR?211）在恶性黑素瘤进展过程中的表达以及靶分子MMP?16与miR?211表达的相关关系。方法 实验分阴性对照组、空载体对照组、miR?211过表达组。TaqMan荧光定量PCR检测miR?211在黑素细胞、黑素瘤细胞的表达,以及在痣、黑素瘤组织中的表达。SRB试验和流式细胞仪分别检测细胞增殖和细胞周期分布。甲基纤维素克隆形成试验和Transwell迁移试验研究细胞克隆形成和细胞迁移。用集落大小衡量克隆形成力,而同一迁移距离下的相对细胞数用来衡量细胞迁移能力。TaqMan荧光定量PCR检测比较miR?211表达增加前后MMP?16 mRNA表达的变化。结果 miR?211在黑素瘤细胞G361、C32和A375表达量分别是0.09 ± 0.02,0.000 52 ± 0.000 20,0.000 03 ± 0.000 01（F = 10410,P < 0.01）。miR?211在黑素瘤标本的表达量（0.17 ± 0.03）显著低于痣的表达量（0.87 ± 0.08）,t = 9.118,P < 0.01。在体外,miR?211表达上调的黑素瘤细胞miR?211过表达组与阴性对照组及空载体对照组比较,细胞增殖与细胞周期分布,差异无统计学意义。miR?211过表达组、空载体对照组的克隆形成力分别是0.49 ± 0.05、0.85 ± 0.09,两组比较,差异有统计学意义（t = 2.19,P < 0.05）。miR?211过表达组、空载体对照组的克隆形成力分别是0.49 ± 0.06、0.82 ± 0.09,两组比较,差异有统计学意义（t = 3.15,P < 0.05）。而空载体对照组与阴性对照组比较,差异无统计学意义。转染miR?211 mimics后24 h,在miR?211过表达组和空载体对照组的MMP?16 mRNA水平比较分别是0.33 ± 0.02和0.91 ± 0.03,两组比较,t = 11.30,P < 0.01;48 h分别是0.52 ± 0.01和0.96 ± 0.02,两组比较,t = 5.02,P < 0.05;72 h分别是0.71 ± 0.01和0.97 ± 0.03,两组比较,t = 3.85,P < 0.05。空载体对照组与阴性对照组在3个时间点的比较,差异均无统计学意义。结论 miR?211在恶性黑素瘤的细胞水平和组织水平低表达。miR?211抑制黑素瘤细胞的锚着非依赖性生长及细胞的迁移。miR?211表达上调后,MMP?16 mRNA表达下调,可能是miR?211下游的靶分子从而影响黑素瘤的侵袭转移。     

表皮生长因子受体shRNA联合西罗莫司对Colo-16细胞体外增殖、凋亡的研究

目的:探讨表皮生长因子受体（EGFR）shRNA联合西罗莫司对人皮肤鳞状细胞癌Colo-16细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法:Colo-16细胞分为5组：正常细胞组（常规培养+磷酸盐缓冲液）、阴性对照组（转染shRNA-NC质粒+磷酸盐缓冲液）、西罗莫司组（常规培养+西罗莫司）、EGFR shRNA组（转染EGFR s...     

GATA结合蛋白3转录调控星形胶质细胞上调基因-1表达对子宫内膜癌细胞增殖､侵袭的影响

目的研究GATA结合蛋白3(GATA3)转录调控星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)表达对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭的影响。方法体外培养人子宫内膜癌原代培养细胞、人子宫内膜癌细胞系HEC-1-A、Ishikawa及HEC-1-B、人子宫内膜上皮细胞hEEC。将HEC-1-A细胞随机分为对照组、GATA3过表达质粒组、GATA3空载质粒组、GATA3 siRNA组、GATA3 siRNA阴性对照组,分组转染后,CCK-8实验评测各组细胞增殖情况;流式细胞实验评测各组细胞凋亡情况;细胞划痕、Transwell侵袭实验分别评测各组细胞迁移侵袭情况;qRT-PCR实验评测各组细胞GATA3与AEG-1的表达;免疫印记实验评测各组细胞凋亡蛋白caspase-9、Bax及EMT标志蛋白E-cadherin、Vimentin表达。同样方法分组转染人子宫内膜癌原代培养细胞后,检测各组细胞增殖、侵袭情况。结果与人子宫内膜上皮细胞比较,人子宫内膜癌原代培养细胞、人子宫内膜癌细胞系HEC-1-A、Ishikawa及HEC-1-B细胞中GATA3、AEG-1表达明显升高(P<0.05)。与对照组比较,GATA3过表达质粒组HEC-1-A细胞活力(包括人子宫内膜癌原代培养细胞)、迁移距离、侵袭细胞数(包括人子宫内膜癌原代培养细胞)、GATA3与AEG-1 mRNA表达水平、Vimentin表达升高(P<0.05),HEC-1-A细胞凋亡率、caspase-9、Bax及E-cadherin表达降低(P<0.05);GATA3 siRNA组呈相反趋势(P<0.05);GATA3空载质粒组、GATA3 siRNA阴性对照组各指标无明显差异(P>0.05)。结论下调GATA3表达,可降低AEG-1表达,抑制子宫内膜癌细胞增殖及侵袭迁移,促进其凋亡。     

基于MAPK/Wnt3a/mTOR/VEGF信号通路上调miR-23对子宫肌瘤细胞凋亡、侵袭、迁移的影响

目的 基于丝裂原活化蛋白激酶/人Wnt-3a蛋白/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/血管内皮生长因子(MAPK/Wnt3a/mTOR/VEGF)信号通路探究上调miR-23对子宫肌瘤细胞凋亡、侵袭、迁移能力的影响.方法 选取子宫肌瘤细胞,经培养后分为对照组、下调组、上调组,对三组增殖、凋亡、侵袭、迁移能力进行检测,检测miR-2...     

VEGF促进人黑素瘤SK-MEL-1细胞侵袭性的自分泌机制初探

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)对人黑素瘤细胞SK-MEL-1侵袭力以及对该细胞中基质金属蛋白酶9(MMP-9)的影响,初步研究VEGF对肿瘤侵袭能力的影响及可能的作用机制。方法使用VEGF体外培养人黑素瘤SK-MEL-1细胞,免疫组化法检测该细胞VEGFR-1水平;通过细胞体外侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变,再分别使用含20,40,80μg/LVEGF培养液培养SK-MEL-1细胞,以正常培养SK-MEL-1细胞为空白对照组,使用半定量RT-PCR和Western blot法对4组细胞中MMP-9 mRNA表达和蛋白水平进行分析。结果 VEGFR-1在SKM-EL-1细胞胞核和胞浆中均有表达。外加VEGF培养后,细胞侵袭力明显增强(P<0.01);MMP-9mRNA表达和蛋白水平在外加VEGF组明显高于空白对照组,且高浓度和低浓度组之间差异有统计学意义(P均<0.05)。结论人黑素瘤SK-MEL-1细胞系中存在有自分泌机制,VEGF可通过自分泌机制上调人黑素瘤SK-MEL-1细胞MMP-9mRNA表达及蛋白水平,进而促进肿瘤的侵袭转移。     

沙眼衣原体pORF5质粒蛋白通过HMGB1抑制细胞凋亡机制初步研究

【摘要】 目的 探讨pORF5质粒蛋白抗凋亡分子机制,为进一步阐明沙眼衣原体致病机制提供实验依据。方法 将HeLa细胞分为两组,一组用凋亡诱导剂碳酰氰基-对-氯苯腙（CCCP）刺激30 min,另一组经pORF5质粒蛋白预处理18 h后,再用CCCP刺激30 min。然后,Western印迹检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和胱天蛋白酶3（caspase-3）的表达水平;JC-1荧光探针检测HeLa细胞线粒体膜电位变化;间接免疫荧光观察细胞色素c释放情况。为了分析高迁移率族蛋白1（HMGB1）是否参与pORF5质粒蛋白的抗凋亡作用,分别用HMGB1 shRNA和对照RNA稳定转染HeLa细胞,再用pORF5质粒蛋白与CCCP共刺激两种细胞后,测定Bcl-2、Bax和活化的caspase-3蛋白的表达以及细胞色素c的释放情况。两组间比较采用配对样本t检验。结果 pORF5质粒蛋白能拮抗CCCP 诱导的线粒体膜电位的下降,CCCP单独处理组Hela细胞红/绿荧光强度比率为0.4 ± 0.1,显著低于pORF5与CCCP共处理组（1.7 ± 0.3,t = 6.95,P < 0.01）。与对照组相比,pORF5与CCCP共处理组HeLa细胞Bcl-2蛋白表达水平增加（5.3 ± 0.6）倍（t = 8.62,P < 0.01）,而Bax和活化的caspase-3平均表达水平分别降低79% ± 10%（t = 9.23,P < 0.01）和75% ± 8%（t = 4.26,P < 0.05）。与对照RNA转染组相比,HMGB1 shRNA转染组HeLa细胞线粒体膜电位下降（t = 11.23,P < 0.01）,细胞色素c释放增加,Bcl-2的表达水平降低（t = 7.19,P < 0.05）,而Bax的表达水平增加（t = 13.06,P < 0.01）。结论 沙眼衣原体pORF5质粒蛋白通过HMGB1阻断线粒体凋亡途径发挥抗凋亡作用。     

miR-195靶向MYB激活PI3K-Akt通路调控皮肤鳞癌细胞增殖与恶性转移

 目的:探讨微小RNA-195（miR-195）对皮肤鳞癌细胞增殖与恶性转移的影响及其机制。方法:通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-195和MYB基因在皮肤鳞癌细胞（A431细胞）和人正常皮肤细胞（HaCaT细胞）中的表达。CCK-8实验检测过表达及下调miR-195对A431细胞增殖能力的影响；Western blot检测过表达及下调miR-195对A431细胞凋亡相关蛋白Bcl-2相关蛋白X（Bax）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）表达的影响；Western blot分析过表达及下调miR-195对A431细胞上皮细胞-间充质转化（EMT）的影响。TargetScan和双荧光素酶报告基因实验分析miR-195和MYB之间的关系，分析下调MYB对A431细胞增殖和EMT的影响。Western blot检测过表达MYB后对PI3K-Akt通路的影响。LY294002作用细胞后，检测过表达MYB对A431细胞增殖和EMT的影响。结果：与HaCaT细胞相比，A431细胞中miR-195表达明显下调（P<0.01），MYB表达明显上调（P<0.01）。过表达miR-195抑制A431细胞增殖与EMT，促进细胞凋亡，下调miR-195则起到相反作用；miR-195和MYB具有靶向和负调控关系；下调MYB的表达抑制A431细胞增殖与EMT；过表达MYB激活细胞内PI3K Akt通路，且通过该通路促进A431细胞增殖与EMT。结论：miR-195通过靶向MYB激活PI3K-Akt通路调控A431细胞的增殖和转移。