外源性胆绿素对中波紫外线诱导的HaCaT细胞光损伤的保护作用

目的 探讨外源性胆绿素对中波紫外线（UVB）照射的HaCaT细胞的保护作用及其机制。方法 将培养的HaCaT细胞分为对照组（不加胆绿素,不照射UVB）、UVB组（30 mJ/cm2 UVB照射）和100 nmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L胆绿素 + UVB组（分别于30 mJ/cm2 UVB照射前1 h加入相应浓度胆绿素）,处理完成后继续培养24 h,观察HaCaT细胞形态变化,CCK8法检测各实验组细胞生存率。Western 印迹检测抗氧化信号分子Nrf?2蛋白及光损伤信号分子基质金属蛋白酶1（MMP?1）和MMP?3蛋白表达。结果 CCK8法结果显示,UVB组HaCaT细胞活力低于对照组（P < 0.05）,在加入100 nmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L 胆绿素预处理后,细胞生存率逐渐升高,与UVB组比较,差异有统计学意义（均P < 0.05）。Western印迹显示,UVB组MMP?1（1.150 ± 0.187）、MMP?3（0.979 ± 0.054）蛋白表达较对照组（0.116 ± 0.018、0.636 ± 0.035）升高（均P < 0.01）,而100 nmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L胆绿素 + UVB组MMP?1（0.825 ± 0.139、0.313 ± 0.047和0.286 ± 0.036）、MMP?3（0.888 ± 0.017、0.672 ± 0.042和0.569 ± 0.037）蛋白表达较UVB组降低（均P < 0.05）。UVB组Nrf?2蛋白（0.906 ± 0.034）较对照组（1.242 ± 0.141）表达降低（P < 0.05）,100 nmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L胆绿素 + UVB组Nrf?2蛋白表达（1.556 ± 0.112、1.897 ± 0.234和2.035 ± 0.274）较UVB组升高（均P < 0.01）。结论 外源性胆绿素对UVB诱导的HaCaT细胞损伤起保护作用,该作用可能与Nrf?2抗氧化信号通路有关。     

紫檀芪对中波紫外线照射的HaCaT细胞抗氧化物酶表达及活性的影响

目的 探讨紫檀芪对HaCaT细胞急性中波紫外线（UVB）损伤的防御作用及相关机制。方法 MTS法和流式细胞仪检测不同浓度紫檀芪作用后HaCaT细胞增殖活性及凋亡与坏死率,筛选无毒性紫檀芪浓度。HaCaT细胞随机分为对照组（不做任何处理）、UVB组和2.44、4.88、9.75 μmol/L紫檀芪组及2.44、4.88、9.75 μmol/L紫檀芪 + UVB组。Western印迹法检测紫檀芪和UVB处理前后HaCaT细胞内Nrf2核转位情况,定量PCR检测过氧化氢酶（CAT）和超氧化物歧化酶（SOD）的表达,ELISA检测CAT和SOD活性。结果 MTS法和流式细胞仪检测结果显示,2.44、4.88和9.75 μmol/L紫檀芪对HaCaT细胞无毒性作用。对照组Nrf2胞质蛋白1.03 ± 0.08、胞核蛋白1.04 ± 0.11;与对照组比较,2.44、4.88和9.75 μmol/L紫檀芪组Nrf2胞质蛋白和胞核蛋白均无明显变化,UVB组Nrf2胞质蛋白无明显变化,但Nrf2胞核蛋白显著增加（1.77 ± 0.08,q = 17.24,P < 0.01）。与对照组及UVB组比较,2.44、4.88和9.75 μmol/L紫檀芪 + UVB组Nrf2胞质蛋白浓度均显著下降（0.86 ± 0.10、0.87 ± 0.11、0.46 ± 0.11,均P < 0.05）,胞核蛋白浓度则显著升高（2.38 ± 0.11、2.57 ± 0.11、2.07 ± 0.13,均P < 0.01）。qPCR显示,与对照组相比,UVB照射对CAT mRNA表达有明显的抑制作用（P < 0.05）,对SOD mRNA表达则无明显影响（P > 0.05）,2.44、4.88和9.75 μmol/L紫檀芪组CAT和SOD的表达亦均无明显变化（P > 0.05）。然而,2.44、4.88、9.75 μmol/L紫檀芪可减轻UVB对CAT表达的抑制（P < 0.05）,并上调SOD的表达（P < 0.05）。ELISA显示,UVB照射可显著降低HaCaT细胞内CAT和SOD活性（均P < 0.001）,2.44、4.88、9.75 μmol/L紫檀芪可减轻UVB对CAT和SOD活性的抑制作用（P < 0.05）,但其活性仍明显低于对照组（P < 0.05）。结论 紫檀芪可通过激活Nrf2通路,上调其下游抗氧化物酶CAT、SOD表达,防御HaCaT细胞急性UVB损伤。     

Nrf2蛋白在中波紫外线照射HaCaT细胞中的光保护作用

【摘要】 目的 探讨Nrf2对中波紫外线（UVB）致HaCaT细胞光损伤的保护作用及其作用机制。方法 将培养的HaCaT细胞分为对照组、UVB组、Nrf2组、Nrf2 + UVB组，Nrf2组、Nrf2 + UVB细胞感染Nrf2基因过表达慢病毒，UVB组、Nrf2 + UVB组细胞以30 mJ/cm2的UVB照射30 s，继续培养24 h，观察UVB照射后HaCaT细胞形态的变化，Western印迹检测各组Nrf2蛋白水平，CCK8法检测各组细胞生存率，流式细胞仪检测各组细胞活性氧（ROS）水平，生化法检测超氧化物歧化酶（SOD）水平。多组间均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果 对照组 HaCaT 细胞形态为多角形、呈簇集状生长，UVB照射后细胞出现皱缩、变圆，漂浮细胞数增多，贴壁数量明显减少。对照组、UVB 组、Nrf2组、Nrf2 + UVB组Nrf2蛋白相对表达水平分别为1.84 ± 0.047、0.63 ± 0.082、2.19 ± 0.168、1.43 ± 0.069，差异有统计学意义（F = 64.81，P < 0.05），Nrf2组水平高于对照组（t = 14.82，P < 0.05）；4组细胞生存率分别为98.00% ± 2.39%、24.40% ± 2.98%、71.63% ± 3.39%、43.38% ± 3.39%，差异有统计学意义（F = 236.66，P < 0.05），UVB 组细胞活力低于对照组（t = 33.34，P < 0.05）和Nrf2 + UVB组（t = 10.07，P < 0.05）；4组细胞的相对ROS含量分别为1.27 ± 0.10、5.65 ± 0.19、2.10 ± 0.73、3.67 ± 0.19，差异有统计学意义（F = 481.39，P < 0.05），UVB组高于对照组（t = 33.68，P < 0.05）和Nrf2 + UVB组（t = 12.47，P < 0.05）。4组细胞SOD水平差异有统计学意义（F = 170.76，P < 0.05），UVB组低于对照组（t = 11.25，P < 0.05）和Nrf2 + UVB组（t = 17.52，P < 0.05）。4组细胞IL-6水平差异有统计学意义（F = 532.34，P < 0.05），UVB 组高于对照组（t = 28.48，P < 0.05），Nrf2 + UVB组低于UVB 组（t = 27.82，P < 0.05）。4组细胞TNF-α水平差异无统计学意义（F = 2.02，P = 0.19）。结论 Nrf2可以通过降低细胞内ROS水平，提高内源性抗氧化酶SOD的活性，保护细胞免受UVB照射引起的氧化损伤。     

熊果酸对干扰素γ刺激HaCaT细胞产生白细胞介素33的影响

目的：探讨熊果酸对干扰素γ（IFN?γ）刺激HaCaT细胞产生白细胞介素33（IL?33）的影响及其机制。方法不同浓度熊果酸（0、0.1、1、5、10、20、40、80μmol/L）分别刺激HaCaT细胞24、48、72 h,MTT法检测其对细胞增殖的影响。将HaCaT细胞与200μg/L IFN?γ共培养建成炎性细胞模型,再与10和15μmol/L熊果酸共培养,以IFN?γ诱导的HaCaT炎性细胞模型为对照,探讨熊果酸的抗炎作用,RT?PCR法检测IL?6和IL?33 mRNA的表达,Western印迹法检测IL?33、p?ERK1/2和ERK1/2蛋白的表达。结果 MTT法检测显示,5~20μmol/L熊果酸作用24 h对细胞活力影响不大,而40~80μmol/L熊果酸在各个时间点均可明显抑制HaCaT细胞增殖（P<0.05）,故后续实验采用10和15μmol/L浓度。HaCaT细胞经IFN?γ刺激后,IL?33 mRNA（0.812±0.036）、IL?6 mRNA（0.947±0.091）表达量和IL?33蛋白表达（1.317±0.119）均显著高于空白对照组（分别为0.412±0.021、0.595±0.030和0.147±0.036,均P<0.05）;而IFN?γ+10μmol/L熊果酸组（分别为0.447±0.042、0.437±0.099和0.923±0.058）和IFN?γ+15μmol/L熊果酸组（分别为0.438±0.028、0.350±0.075和0.564±0.113）又较IFN?γ组（分别为0.812±0.036、0.947±0.091和1.317±0.119）显著降低（均P<0.05）,且这两个熊果酸组IL?33 mRNA水平与空白对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）,而IFN?γ+15μmol/L熊果酸组IL?33蛋白水平显著低于IFN?γ+10μmol/L熊果酸组（P<0.05）。HaCaT细胞分别经IFN?γ刺激5、60 min后,p?ERK1/2蛋白表达均明显高于空白对照组。IFN?γ+15μmol/L熊果酸5 min组和60 min组p?ERK1/2蛋白的相对表达量（0.458±0.053、0.302±0.054）分别低于IFN?γ5 min组（0.941±0.042）和60 min组（0.509±0.032）,差异均有统计学意义（P<0.05）,而总ERK1/2蛋白表达量不变。结论熊果酸能够降低IFN?γ刺激的HaCaT细胞IL?33的表达量,其机制可能与调节ERK信号通路相关蛋白的表达有关。     

白细胞介素22对人表皮角质形成细胞CC趋化因子配体27表达的影响

目的 研究白细胞介素22（IL-22）对人表皮角质形成细胞CC趋化因子配体27（CCL27）表达的影响及机制。方法 免疫组化法检测10例银屑病患者皮损及5例健康对照组皮肤中CCL27的表达。培养HaCaT细胞,分为8组：对照组用PBS处理,IL-22处理组分别用12.5、25、50、100、200 μg/L IL-22处理,信号通路阻断组先分别加入50 μmol/L AG490（JAK2/STAT3通路抑制剂）或PD98059（MAPK-ERK1/2通路抑制剂）阻断处理,2 h后各加入50 μg/L IL-22,继续于37 ℃、5% CO2孵箱中培养。孵育24 h 后,分别提取 HaCaT 细胞总蛋白并收集上清液,Western印迹、ELISA法分别检测CCL27表达。结果 免疫组化检测示,银屑病患者皮损中CCL27的表达水平明显高于正常人皮肤。Western 印迹显示,HaCaT细胞分别用12.5、25、50、100、200 μg/L IL-22处理后,CCL27相对表达量逐渐升高至0.491 ± 0.013、0.620 ± 0.019、0.623 ± 0.014、0.802 ± 0.052、1.138 ± 0.013,均较对照组（0.413 ± 0.013）升高（P＜0.01）;IL-22 + AG490组及IL-22 + PD98059组CCL27表达量分别为0.411 ± 0.019和0.280 ± 0.012,均低于50 μg/L IL-22组（均P＜0.01）。ELISA法检测显示,各组HaCaT细胞CCL27分泌水平变化趋势与Western印迹法检测结果一致。结论 IL-22可促进HaCaT 细胞CCL27表达,其机制可能与MAPK-ERK1/2和JAK2/STAT3通路有关。     

安石榴苷对中波紫外线诱导HaCaT细胞光损伤的预防作用研究

目的 探讨安石榴苷对中波紫外线（UVB）诱导角质形成细胞损伤的保护机制。 方法 培养的HaCaT细胞分为空白对照组、安石榴苷组、UVB组、安石榴苷 + UVB组。噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖能力,Hoechst/碘化丙锭（PI）染色和流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法测定金属基质蛋白酶1（MMP1）及其组织抑制因子1（TIMP1） mRNA表达水平,Western印迹检测丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路相关蛋白P38、JNK、ERK的磷酸化水平变化。 结果 MTT试验示,10 ～ 40 μmol/L安石榴苷对UVB诱导的HaCaT细胞损伤有较佳的预保护作用。UVB组HaCaT细胞强Hoechst和强PI双染细胞较空白对照组增多,安石榴苷 + UVB组较UVB组减少。流式细胞仪分析,UVB组凋亡细胞百分率（9.82% ± 0.11%）高于空白对照（1.24% ± 0.91%,P < 0.01）,而安石榴苷（10、20、40 μmol/L） + UVB组凋亡细胞百分率（分别为6.38% ± 0.14%、5.24% ± 0.17%、3.77% ± 0.11%）较UVB组低,差异有统计学意义（均P < 0.01）。UVB组MMP1 mRNA相对表达量（12.376 ± 0.602）高于空白对照组（1.007 ± 0.147,P < 0.01）,而TIMP1 mRNA相对表达量（0.103 ± 0.006）低于空白对照组（1.006 ± 0.139,P < 0.01）,安石榴苷组MMP1及TIMP1 mRNA与空白对照组比较,差异无统计学意义（均P > 0.05）。安石榴苷预处理的HaCaT细胞经30 mJ/cm2 UVB照射后MMP1 mRNA相对表达量较UVB组降低（均P < 0.01）,而TIMP1 mRNA较UVB组升高（均P < 0.01）。Western印迹示,经UVB照射后,HaCaT细胞p-ERK、p-JNK及p-p38表达升高（均P < 0.01）。安石榴苷组HaCaT细胞p-ERK、p-JNK及p-p38表达没有明显改变（P > 0.05）,而安石榴苷 + UVB组有不同程度下降（均P < 0.01）。 结论 安石榴苷对UVB引起HaCaT细胞损伤有一定的预防作用。     

黑果枸杞多糖对中波紫外线诱导HaCaT细胞光损伤的保护作用

目的 探讨黑果枸杞多糖对HaCaT细胞光损伤的预防作用及机制.方法 采用超声辅助水提法提取柴达木黑果枸杞中的多糖成分.体外培养的HaCaT细胞分为3组,对照组:正常培养,不做其他处理;中波紫外线(UVB)组:30 mJ/cm2 UVB照射;实验组:30 mJ/cm2 UVB照射前6h加入2 g/L黑果枸杞多糖溶液.照射1h后继续培养12h,倒置显微镜观察细胞形态,MTS法测定细胞增殖,流式细胞仪测定细胞凋亡率,酶标法检测细胞丙二醛和谷胱甘肽过氧化物酶含量、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力,ELISA法检测上清液和细胞中白细胞介素1(IL-1)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平.结果 与对照组相比,UVB组细胞形态模糊不清,出现死亡漂浮现象;实验组细胞肿胀,但形态尚清楚.MTS结果显示,3组间细胞增殖吸光度值差异有统计学意义(F=48.88,P＜0.01),其中UVB组(1.72±0.12)显著低于对照组(2.34±0.11),实验组(2.11±0.10)又显著高于UVB组,差异均有统计学意义(P＜0.05).UVB组细胞凋亡率(82.41％±2.49％)显著高于对照组(3.98％±0.19％)和实验组(22.79％±0.97％),实验组细胞凋亡率明显高于对照组,各组间比较差异均有统计学意义(均P＜ 0.05).UVB组与对照组比较,丙二醛含量明显上升,SOD活性、谷胱甘肽过氧化物酶含量、CAT活性明显下降(均P＜0.05).同时,UVB组较对照组上清液中IL-1和TNF-oα含量及细胞中TNF-α含量均明显升高(均P＜0.05),但细胞中IL-1差异无统计学意义(P＞0.05).结论 黑果枸杞多糖对HaCaT细胞的光损伤有保护作用,其保护机制可能与减少细胞炎症物质的合成和口分泌及减少自由基有关.     

硒代蛋氨酸对中波紫外线致HaCaT细胞氧化损伤的保护作用

目的 研究硒代蛋氨酸对中波紫外线（UVB）致HaCaT细胞氧化损伤的影响及其可能机制。方法 培养HaCaT细胞,分为4组：①正常对照组,不做任何处理;②硒代蛋氨酸组：分别加入1、10、50、100、200 nmol/L和1 μmol/L 硒代蛋氨酸预孵育24 h;③UVB组：30、60、90 mJ/cm2 UVB照射;④硒代蛋氨酸 + UVB组：不同浓度硒代蛋氨酸预孵育24 h后进行不同剂量UVB照射。采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,比色法检测超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及丙二醛（MDA）水平。采用析因设计方差分析、单因素方差分析对数据进行统计学分析,多重比较采用LSD法。 结果 析因设计方差分析结果显示,UVB照射对细胞增殖活性有抑制作用（F = 128.04,P < 0.05）,且随UVB强度增加,细胞增殖活性逐渐下降,组间差异有统计学意义（P < 0.05）;硒代蛋氨酸预孵育对细胞增殖活性也有影响（F = 5.95,P < 0.05）,其中10 nmol/L ~ 1 μmol/L硒代蛋氨酸 + UVB组与UVB组比较,细胞增殖活性显著升高（P < 0.05）;UVB照射和硒代蛋氨酸对细胞增殖活性无明显交互作用（F = 1.65,P > 0.05）。30 mJ/cm2 UVB 照射后,UVB组凋亡率（31.9% ± 2.67%）较正常对照组（4.1% ± 0.67%）显著升高（P < 0.05）;而10、50、100、200 nmol/L和1 μmol/L硒代蛋氨酸 + 30 mJ/cm2 UVB组凋亡率［依次为：（21.9 ± 3.72）%、（17.2 ± 1.67）%、（4.6 ± 0.85）%、（7.5 ± 1.86）%、（13.5 ± 1.95）%］均较30 mJ/cm2 UVB组凋亡率显著下降（P < 0.05）。30 mJ/cm2 UVB组与正常对照组相比,SOD和GSH-Px活性降低,MDA含量升高（P < 0.05）;10 nmol/L ~ 1 μmol/L硒代蛋氨酸 + 30 mJ/cm2 UVB组与30 mJ/cm2 UVB组比较,SOD和GSH-Px活性增高,MDA含量下降（P < 0.05）。 结论 硒代蛋氨酸可以减轻UVB诱导HaCaT细胞氧化损伤,其机制与增强抗氧化酶活性、减少氧自由基有关。     

蜕皮甾酮对UVB诱导HaCaT细胞损伤的保护作用

目的探讨蜕皮甾酮(ecdysterone,EDS)对中波紫外线(UVB)诱导角质形成细胞损伤的保护作用及机制。方法将培养的HaCaT细胞分为正常对照组、UVB组、2.0μmol/L蜕皮甾酮剂量组(UVB+2.0μmol/L蜕皮甾酮),1.5μmol/L蜕皮甾酮剂量组(UVB+1.5μmol/L蜕皮甾酮),1.0μmol/L蜕皮甾酮剂量组(UVB+1.0μmol/L蜕皮甾酮);CCK-8法检测蜕皮甾酮对HaCaT细胞增殖能力的影响;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态;采用PI单染和Annexin V-FITC/PI染色法,流式细胞仪检测HaCaT细胞凋亡率;比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)水平。Western印迹检测MMP-1,MMP-9,TIMP-1蛋白表达水平变化。结果在所选浓度范围内,蜕皮甾酮对HaCaT细胞的增殖无明显影响(P0.05)。与正常对照组比较,UVB组HaCaT细胞出现明显的凋亡形态,凋亡率明显增高;1.0μmol/L、1.5μmol/L、2.0μmol/L蜕皮甾酮剂量组较UVB组凋亡细胞逐渐减少,差异有统计学意义(均P0.01)。与正常对照组相比,UVB组HaCaT细胞SOD和GSH-Px活性降低,MDA含量升高(P0.01);1.0μmol/L、1.5μmol/L、2.0μmol/L蜕皮甾酮剂量组与UVB组比较,SOD和GSH-Px活性增高,MDA含量下降(P0.01)。Western印迹显示:UVB组HaCaT细胞MMP-l,MMP-9蛋白表达量明显高于正常对照组(P0.01),而TIMP-l蛋白表达量低于正常对照组(P0.01);1.0μmol/L、1.5μmol/L、2.0μmol/L蜕皮甾酮剂量组MMP-l,MMP-9表达量明显低于UVB组(P0.01),而TIMP-l表达量明显高于UVB组(P0.01)。结论蜕皮甾酮对中波紫外线诱导的HaCaT细胞凋亡,氧化损伤和光老化均具有一定的保护作用。     

维生素B_2修饰的纳米酶对紫外线诱导HaCaT细胞氧化应激损伤的作用及机制

目的探讨维生素B_2修饰的纳米酶(VB_2-IONzymes)对中波紫外线(UVB)照射后HaCaT细胞氧化应激损伤的作用及可能的机制。方法 UVB照射诱导HaCaT细胞光损伤模型,将培养的HaCaT细胞分为空白组、UVB照射组、VB_2-IONzymes组、UVB+VB_2-IONzymes组。CCK-8检测HaCaT细胞增殖活性,酶生化法检测细胞醛缩酶(MDA)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平,ELISA法检测细胞中Nrf2及HO-1蛋白水平。结果 UVB照射组HaCaT细胞增殖活性显著降低,细胞MDA水平升高,SOD水平降低,Nrf2及HO-1蛋白表达下降,与空白组相比,差异均有统计学意义(P0.01);加入VB_2-IONzymes后,与UVB照射组相比,细胞活力明显提高(P0.05),细胞MDA水平显著降低,细胞内SOD水平、Nrf2及HO-1蛋白表达均显著上升(P均0.01)。结论 VB_2-IONzymes有抗氧化应激作用,其机制可能与促进Nrf2和HO-1表达相关。     

黄芪甲苷对HaCaT细胞的光保护效能及其机制

目的 观察黄芪甲苷对于中波紫外线（UVB）损伤的人表皮细胞的保护作用,探讨其相关机制。方法 将培养的永生化人皮肤角质形成细胞（HaCaT细胞）分为对照组、UVB组、黄芪甲苷组和UVB + 黄芪甲苷组,其中UVB组和UVB + 黄芪甲苷组细胞接受50 mJ/cm2 UVB照射,加药组加入不同浓度的黄芪甲苷（10、20、50、100、200 mg/L）进行干预,24 h后CCK8法检测细胞活性。根据CCK8法检测结果选择最佳药物浓度（20 mg/L）进行后继实验。照光后继续培养24 h,流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）水平,Western印迹法检测HaCaT细胞中p53、p38、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和高迁移率族蛋白A1（HMGA-1）的表达。 结果 与对照组相比,10 mg/L和20 mg/L黄芪甲苷组对HaCaT细胞的增殖活性无明显影响（F = 1.32,P > 0.05）,50、100和200 mg/L黄芪甲苷对细胞增殖活性有一定抑制作用（F = 20.20,P < 0.05）;UVB组与对照组比较,HaCaT细胞增殖活性显著下降（F = 99.00,P < 0.01）。与UVB组相比,UVB + 黄芪甲苷（10 ~ 200 mg/L）组HaCaT细胞增殖活性不同程度升高（F = 19.08,P < 0.01）,其中UVB + 20 mg/L黄芪甲苷组升高程度最高。进一步实验表明,与UVB组相比,UVB + 20 mg/L黄芪甲苷组ROS产生受到明显抑制（t = 21.12,P < 0.01）。Western印迹结果表明,与对照组比较,UVB组p53、p38、MMP-9和HMGA-1蛋白的表达升高（均P < 0.01）,而UVB + 20 mg/L黄芪甲苷组细胞内p53、p38、MMP-9和HMGA-1蛋白的表达水平较UVB组显著降低（P < 0.01）。 结论 黄芪甲苷可有效抑制UVB引起的表皮细胞光损伤。     

白藜芦醇对中波紫外线照射的人角质形成细胞凋亡及细胞周期的影响

【摘要】 目的 探讨白藜芦醇对中波紫外线（UVB）照射后人原代角质形成细胞（HEK）凋亡和细胞周期的影响。方法 0、25、50、100、150和200 μmol/L白藜芦醇处理人原代角质形成细胞12 h,分别采用CCK-8、BrdU和LDH法检测白藜芦醇对细胞增殖活性和死亡的影响。分别采用50 mJ/cm2 UVB和100 μmol/L白藜芦醇处理HEK细胞,分为正常对照组、白藜芦醇组、UVB组和UVB + 白藜芦醇组,采用Western印迹检测凋亡相关蛋白多腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）和胱天蛋白酶3（caspase-3）以及细胞周期相关蛋白（cyclin）B1和cyclin E1的表达水平,采用流式细胞仪检测细胞凋亡水平和细胞周期分布。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果 0、25、50、100、150和200 μmol/L白藜芦醇组HEK细胞增殖活性差异有统计学意义（F = 46.52,P < 0.001）,不同浓度组均低于对照组（均P < 0.001）;100 μmol/L白藜芦醇组细胞DNA合成活力（0.761 ± 0.141）低于对照组（2.226 ± 0.141,t = 17.92,P < 0.001）;25、50、100和200 μmol/L白藜芦醇组细胞死亡率差异无统计学意义（F = 1.938,P > 0.05）。UVB和白藜芦醇处理后,4组细胞凋亡率和G1期、G2期、S期的细胞比例以及PARP、caspase-3、 cyclin B1、cyclin E1的表达水平差异均有统计学意义（均P < 0.05）。UVB组细胞凋亡率（24.69% ± 3.54%）及PARP、caspase-3的剪切水平（2.190 ± 0.349、0.090 ± 0.016）均高于对照组和UVB + 白藜芦醇组（4.00% ± 0.81%、0.926 ± 0.040、0.024 ± 0.019,均P < 0.05）;UVB组cyclin E1、cyclin B1蛋白水平（0.116 ± 0.017、0.775 ± 0.080）均低于正常对照组,UVB + 白藜芦醇组cyclin E1表达水平（0.287 ± 0.047）高于UVB组、cyclin B1表达水平（0.504 ± 0.009）低于UVB组（均P < 0.05）;UVB组S期细胞比例低于对照组和UVB + 白藜芦醇组,G1期、G2期细胞比例均高于UVB + 白藜芦醇组（P < 0.05）。结论 白藜芦醇可以抑制HEK增殖活力,抑制紫外线照射诱导的细胞凋亡,调控细胞周期进程。     

人参皂苷Rg1对UVB损伤PG12及成纤维细胞的保护作用

目的研究人参皂苷Rg1对中波紫外线（UVB）损伤皮肤成纤维细胞以及作为皮肤神经细胞模型的PC12细胞的保护作用。方法实验分为UVB模型组、UVB＋Rg1三个不同浓度保护组、对照组,分别以60mJ／cm^2、100mJ／cm^2强度UVB造成培养的皮肤成纤维细胞、皮肤神经细胞模型PC12（神经元化）细胞损伤,用MTT法检测细胞增殖活性,酶生化法检测光损伤前后细胞培养上清SOD活性、MDA含量。结果强度为60mJ／cm^2、100mJ／cm^2的中波紫外线分别可以造成体外培养的人皮肤成纤维细胞、神经元化PC12细胞增殖活性降低,细胞培养上清SOD活性降低,MDA含量升高,与UVB模型组相比均P〈0．05。给定浓度范围的Rg1能增加细胞的增殖活性,增加细胞培养上清SOD活性、降低MDA含量。结论紫外线可以造成体外培养的人皮肤成纤维细胞及PC12细胞氧化损伤,人参皂苷Rg1对损伤的细胞具有一定保护作用,其机制可能与它的抗氧化、增强细胞活力有关     

42 ℃热处理在UVB诱导黑素细胞氧化损伤中的作用

【摘要】 目的 探讨热处理在UVB诱导的人黑素细胞氧化应激损伤中的作用。 方法 体外培养原代人表皮黑素细胞,将纯化的MC分为4个处理组：对照组（37 ℃正常培养）、热处理组（42 ℃孵育1 h）、UVB处理组（100 mJ/cm2 UVB照射）、联合处理组（42 ℃孵育1 h后给予100 mJ/cm2 UVB照射）,各组连续处理3 d。MTT法检测细胞活率,生物化学法检测超氧化物歧化酶活力和丙二醛浓度,流式细胞仪检测细胞内活性氧和细胞凋亡率。 结果 对照组细胞活率、细胞凋亡率、超氧化物歧化酶活力、丙二醛浓度、活性氧荧光强度分别为：（100 ± 6.14）%、（4.66 ± 0.58）%、（53.39 ± 8.23） U/gprot、（1.09 ± 0.32） mmol/gprot、1070.85 ± 42.07。UVB照射可以明显提高MC凋亡率［（24.14 ± 2.90）%］、丙二醛［（1.65 ± 0.33） mmol/gprot］和细胞内活性氧（1416.45 ± 79.12）水平,降低细胞活率［（50.23 ± 5.36）%］和超氧化物歧化酶活力［（31.98 ± 11.89） U/gprot］,而热处理可以显著降低UVB诱导的凋亡［（14.9 ± 1.49）%］,降低丙二醛［（1.10 ± 0.26 ） mmol/gprot］、活性氧（1033.30 ± 68.41）的含量,同时恢复细胞的活率［（74.12 ± 6.17）%）］和超氧化物歧化酶活力［（51.63 ± 6.55）U/gprot］。 结论 热处理对UVB诱导的黑素细胞的氧化应激损伤具有保护作用。