葡萄籽原花青素对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖和凋亡的影响

目的：明确葡萄籽原花青素（GSP）对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖和凋亡的影响。方法：体外培养A431细胞,用不同浓度的GSP（5、10、20、40、80 μg/mL）处理,采用MTT实验和克隆形成实验检测细胞活力和增殖能力,Western blot检测细胞通路PI3K/Akt/GSK-3β信号转导通路蛋白的表达。结果：随着GSP浓度增加,A431细胞活力及细胞克隆逐渐下降,细胞凋亡逐渐增加。GSP处理后A431细胞中p-PI3K、p-Akt和p-GSK-3β表达水平明显降低。结论：GSP可以诱导A431细胞凋亡和抑制A431细胞增殖,其机制可能与抑制PI3K/Akt/GSK-3β信号通路活化有关。     

槲皮黄酮抑制LRIG2/EGFR信号转导诱导人皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡

目的 研究槲皮黄酮(Qu)对人皮肤鳞状细胞癌(CSCC)A431细胞增殖、凋亡及免疫球蛋白样结构域2(LRIG2)/表皮生长因子受体(EGFR)信号转导的影响.方法 CCK8法和流式细胞术分析Qu对A431细胞活力、增殖及凋亡相关指标的影响;倒置显微镜观察A431细胞的克隆数;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测5-溴...     

miR-195靶向MYB激活PI3K-Akt通路调控皮肤鳞癌细胞增殖与恶性转移

 目的:探讨微小RNA-195（miR-195）对皮肤鳞癌细胞增殖与恶性转移的影响及其机制。方法:通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-195和MYB基因在皮肤鳞癌细胞（A431细胞）和人正常皮肤细胞（HaCaT细胞）中的表达。CCK-8实验检测过表达及下调miR-195对A431细胞增殖能力的影响；Western blot检测过表达及下调miR-195对A431细胞凋亡相关蛋白Bcl-2相关蛋白X（Bax）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）表达的影响；Western blot分析过表达及下调miR-195对A431细胞上皮细胞-间充质转化（EMT）的影响。TargetScan和双荧光素酶报告基因实验分析miR-195和MYB之间的关系，分析下调MYB对A431细胞增殖和EMT的影响。Western blot检测过表达MYB后对PI3K-Akt通路的影响。LY294002作用细胞后，检测过表达MYB对A431细胞增殖和EMT的影响。结果：与HaCaT细胞相比，A431细胞中miR-195表达明显下调（P<0.01），MYB表达明显上调（P<0.01）。过表达miR-195抑制A431细胞增殖与EMT，促进细胞凋亡，下调miR-195则起到相反作用；miR-195和MYB具有靶向和负调控关系；下调MYB的表达抑制A431细胞增殖与EMT；过表达MYB激活细胞内PI3K Akt通路，且通过该通路促进A431细胞增殖与EMT。结论：miR-195通过靶向MYB激活PI3K-Akt通路调控A431细胞的增殖和转移。     

萝卜硫素通过下调Cox-2/Akt/GSK3β信号传导抑制人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖

目的：明确萝卜硫素对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株增殖、凋亡的影响及其对Cox-2/Akt/GSK3β信号传导相关蛋白水平的影响。方法：体外培养皮肤鳞状细胞癌A431细胞株,分为不同剂量（30 μM,60 μM,120 μM）萝卜硫素组、单纯顺铂组及顺铂+萝卜硫素组,采用CCK8法、流式细胞术分别检测A431细胞相对存活率及凋亡率,Western Blot检测了A431细胞中Survivin、Casepase-3、Cox-2、Akt、p-Akt、GSK3β及p-GSK3β蛋白的表达水平。结果：与对照组比较,60 μM及120 μM萝卜硫素组、单纯顺铂组及顺铂+萝卜硫素组细胞相对存活率显著降低（均P<0.05）,细胞凋亡率显著增高（均P<0.05）,Survivin、Cox-2、p-Akt、p-GSK3β蛋白表达水平显著降低（均P<0.05）,而Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05);120μM萝卜硫素组与顺铂组比较,细胞相对存活率、细胞凋亡率,Survivin、Cox-2、p-Akt、p-GSK3β蛋白表达水平及Caspase-3蛋白表达,无明显统计学差异(P>0.05)。结论：萝卜硫素可通过诱导A431细胞凋亡、抑制细胞增殖发挥抗肿瘤作用,其机制可能与抑制Cox-2/Akt/GSK3β信号通路活化有关。     

干扰NDRG1表达通过调控PI3K/Akt信号通路对皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响

目的探讨小干扰RNA(siRNA)干扰N-myc下游调节基因1(NDRG1)基因表达对皮肤鳞状细胞癌A431细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法将siRNA-NDRG1干扰质粒转染至人皮肤鳞状细胞癌A431细胞中,采用RT-PCR和Western blot检测A431细胞中NDRG1 mRNA和蛋白表达;采用CCK-8、流式细胞术分别检测A431细胞增殖活性和凋亡率;采用Western blot检测A431细胞中凋亡相关蛋白Caspase3、Bax和Bcl-2以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT表达水平。采用100μg/L的PI3K/AKT信号通路特异性激活剂IGF-1与si-NDRG1单独或联合处理A431细胞,流式细胞术和Western blot检测细胞凋亡率以及PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白表达水平。结果 NDRG1 siRNA干扰可显著抑制A431细胞中NDRG1 mRNA和蛋白表达;干扰NDRG1基因表达可显著抑制A431细胞增殖活性,提高细胞凋亡率,并上调Cleaved-Caspase3和Bax蛋白表达水平,下调Bcl-2、p-PI3K及p-AKT蛋白水平;然而,IGF-1与si-NDRG1联合作用时,IGF-1可抑制NDRG1基因干扰后对A431细胞凋亡的促进作用以及对p-PI3K和p-AKT蛋白的下调作用。结论干扰NDRG1基因表达可通过抑制PI3K/AKT信号通路活化诱导人皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡。     

lncRNA UCA1通过激活miR-143/HK2通路促进皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、侵袭和EMT

 目的: 探讨长链非编码RNA UCA1 (lncRNA UCA1)在皮肤鳞状细胞癌A431细胞中的表达及其对A431细胞增殖、侵袭及其上皮间质转化（EMT）的影响。方法:通过RT-qPCR检测皮肤鳞状细胞癌、癌旁正常组织、A431细胞、HaCaT细胞中lncRNA UCA1的表达;siRNA技术下调lncRNA UCA1表达,利用四甲基偶氮唑蓝（MTT）、细胞侵袭实验和Western blot检测下调lncRNA UCA1对A431细胞增殖、侵袭和EMT的影响。通过生物信息学miRanda软件和双荧光素酶报告基因实验分析lncRNA UCA1和微小RNA-143（miR-143）之间的关系。RT-qPCR检测miR-143在A431细胞、HaCaT细胞中的表达。同时上调lncRNA UCA1和miR-143表达,分析lncRNA UCA1通过miR-143对A431细胞增殖、侵袭和EMT的影响。通过生物信息学TargetScan软件和双荧光素酶报告基因实验检测miR-143与己糖激酶Ⅱ(HK2)之间的关系;RT-qPCR检测HK2在A431细胞、HaCaT细胞中的表达。siRNA技术下调HK2表达,分析A431细胞增殖、侵袭和EMT能力。结果：在A431细胞中lncRNA UCA1的表达上调（P<0.01）,miR-143表达下调（P<0.01）,HK2表达上调（P<0.01）。siRNA下调lncRNA UCA1表达明显抑制了A431细胞增殖、侵袭与EMT;lncRNA UCA1靶向且负调控miR-143;下调miR-143的表达促进A431细胞增殖、侵袭与EMT;上调lncRNA UCA1通过miR-143促进A431细胞增殖、侵袭与EMT。miR-143与HK2具有靶向关系。siRNA下调HK2表达抑制了A431细胞增殖、侵袭与EMT,lncRNA UCA1通过miR-143促进HK2表达。结论：lncRNA UCA1在皮肤鳞状细胞癌A431细胞中表达上调且通过miR-143/HK2轴促进A431细胞增殖、侵袭及其EMT。     

渥曼青霉素通过PI3K-AKT-mTOR信号通路抑制人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖

目的研究渥曼青霉素对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、凋亡及PI3K-AKT-mTOR信号通路的影响。方法 CCK8法检测A431细胞增殖活性,Caspase-glot-3/-9活性测定试剂盒检测Caspase-3/9活性,Western blot实验分析Cleaved caspase-3、Cleaved PARP、p-P85(Y458)、p-AKT(S473和T308)和p-S6K(T389)蛋白表达水平,ELISA法检测单链DNA(ss DNA)的水平,流式细胞术检测A431细胞凋亡率。结果渥曼青霉素(0.5~6μmol/L)处理A431细胞48 h后,呈浓度和时间依赖性的抑制细胞增殖、诱导Caspase-3/9活性的增强、增高了细胞凋亡标志物ss DNA水平、还促使了促凋亡蛋白Cleaved caspase-3和Cleaved PARP的表达;4μmol/L的渥曼青霉素处理细胞48 h后,能明显诱导A431细胞的早期和晚期凋亡,还显著抑制了P85(Y458)、AKT(S473和T308)和S6K(T389)的磷酸化水平;渥曼青霉素相比于同浓度的PI3K-AKT-mTOR信号通路抑制剂(LY3023414、纳巴霉素、OSI-027和MK-2206)抗A431细胞增殖的活性更强。结论渥曼青霉素通过抑制PI3K-AKT-mTOR信号传导降低了人皮肤鳞状细胞癌A431细胞的增殖活性,诱导了细胞凋亡。     

维A酸衍生物ECPIRM对皮肤T细胞淋巴瘤HH细胞增殖、凋亡的影响及其机制初探

【摘要】 目的 探讨维A酸衍生物ECPIRM对人皮肤T细胞淋巴瘤HH细胞的增殖抑制作用及潜在机制。方法 以0（对照组）、5、10、20 μmol/L ECPIRM处理HH细胞72 h,采用CCK8法检测ECPIRM对HH细胞增殖活力的影响,采用流式细胞仪检测ECPIRM对HH细胞凋亡的影响。以10 μmol/L ECPIRM处理HH细胞72 h,采用转录组学测序分析ECPIRM对HH细胞基因表达的调控作用,结合KEGG通路分析和GO功能富集分析比较ECPIRM诱导的差异表达的相关基因。采用反转录qPCR验证相关通路中关键基因的表达变化。组间差异采用单因素方差分析,采用LSD-t检验进行两两比较。结果 CCK8结果显示,ECPIRM对HH细胞IC50为（4.91 ± 2.48） μmol/L,对照组与5、10、20 μmol/L ECPIRM组HH细胞活力分别为100.00% ± 2.87%、49.58% ± 4.53%、48.36% ± 2.88%、31.44% ± 2.46%,4组细胞活力差异有统计学意义（F = 162.86,P < 0.001）,5、10、20 μmol/L组细胞活力均低于对照组（t值分别为15.36、15.73和20.89,均P < 0.001）。流式细胞仪检测结果显示,4组细胞凋亡率差异有统计学意义（11.51% ± 1.84%、23.83% ± 5.72%、36.19% ± 8.33%、49.75% ± 4.10%,F = 17.62,P < 0.001）,10、20 μmol/L组细胞凋亡率均高于对照组（t值分别为4.46、6.92,均P < 0.01）。转录组学分析发现,ECPIRM诱导的增殖抑制作用可能与类固醇的代谢调控有关。反转录qPCR验证发现,10 μmol/L ECPIRM组L-氨基酸氧化酶（IL4I1）、乙酰辅酶A乙酰转移酶2（ACAT2）、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合酶1（HMGCS1）、甲羟戊酸二磷酸脱羧酶（MVD）、3-β-羟基类固醇-8,7-异构酶（EBP）、极低密度脂蛋白受体（VLDLR）、3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMGCR）mRNA相对表达与对照组比较明显受到抑制（均P < 0.05）。结论 维A酸衍生物ECPIRM对HH细胞可发挥显著的抗增殖及凋亡诱导作用,其机制可能与类固醇代谢关键基因的表达抑制有关。     

miR-196-5p靶向HOXA5激活JAK/STAT通路促进皮肤鳞状细胞癌的增殖、侵袭及EMT

 目的: 探讨miR-196-5p对皮肤鳞状细胞癌(CSCC)增殖、侵袭和EMT的影响及其潜在的作用机制。方法：利用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-196-5p在癌旁正常组织、CSCC组织、A431细胞和HaCaT细胞中的表达水平。过表达或下调miR-196-5p在A431细胞中的表达后,通过CCK 8实验检测miR-196-5p对A431细胞增殖能力的影响;细胞侵袭实验检测miR-196-5p对A431细胞侵袭能力的影响;Western blot检测miR-196-5p对A431细胞内E-cadherin、N-cadherin表达的影响。生物信息学软件TargetScan预测miR-196-5p和HOXA5的作用位点,双荧光素酶报告基因实验分析miR-196-5p和HOXA5之间的关系。上调HOXA5在A431细胞内表达后检测其对A431细胞增殖、侵袭和EMT的影响。Western blot分析下调HOXA5对JAK/STAT通路的影响。AG490作用细胞后,分析下调HOXA5对A431细胞增殖、侵袭和EMT的影响。结果：与癌旁正常组织相比,CSCC组织中miR-196-5p表达水平明显升高（t=6.32,P=0.024）,HOXA5表达明显降低（t=7.60,P=0.017）。与HaCaT细胞相比,A431细胞中miR-196-5p表达明显升高（t=18.58,P=0.003）,HOXA5表达明显降低（t=19.72,P=0.003）。过表达miR-196-5p促进A431细胞增殖、侵袭与EMT,下调miR-196-5p则起到相反作用;miR-196-5p靶向且负调控HOXA5;过表达HOXA5抑制A431细胞增殖、侵袭与EMT;下调HOXA5激活细胞内JAK/STAT通路。AG490作用细胞后下调HOXA5对A431细胞增殖、侵袭与EMT的促进作用。结论：miR-196-5p靶向HOXA5激活JAK/STAT通路促进CSCC的增殖、侵袭和EMT。     

生存素小分子干扰RNA对皮肤鳞状细胞癌A431细胞生存素基因表达及生物学功能的影响

目的 探讨生存素小分子干扰RNA（siRNA）对皮肤鳞状细胞癌A431细胞生存素基因表达及细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭力的影响。方法 培养的A431细胞分为3组：生存素siRNA组、阴性对照组和空白对照组,分别用50.0 nmol/L脂质体包裹的生存素基因序列特异性siRNA、无关序列siRNA阴性脂质体及预制囊泡转染。实时定量反转录-聚合酶链反应（RT?PCR）、Western印迹法分别检测A431细胞生存素mRNA及蛋白的表达。采用MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞仪膜联蛋白Ⅴ/碘化丙锭双染法检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭力,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果 转染后48 h,生存素siRNA组、阴性对照组、空白对照组A431细胞中生存素mRNA水平分别为0.56 ± 0.15、0.88 ± 0.37、0.90 ± 0.43,蛋白表达水平分别为0.59 ± 0.04、0.86 ± 0.05、0.91 ± 0.07,差异均有统计学意义（F = 276.67、243.61,均P < 0.001）,且生存素siRNA组生存素mRNA和蛋白表达水平均显著低于阴性对照组和空白对照组,差异均有统计学意义（P < 0.05）,而阴性对照组与空白对照组间差异无统计学意义（均P > 0.05）。重复测量方差分析显示,转染生存素siRNA能抑制A431细胞增殖（F = 13.19,P = 0.004）,且生存素siRNA组A431细胞增殖抑制率明显高于阴性对照组和空白对照组（均P < 0.05）,而阴性对照组与空白对照组比较,差异无统计学意义（P > 0.05）。转染后24 h, 3组间A431细胞凋亡率差异有统计学意义（F = 83.97,P = 0.002）,且生存素siRNA组A431细胞凋亡率显著高于阴性对照组（P < 0.05）和空白对照组（P < 0.05）,而阴性对照组与空白对照组间差异无统计学意义（P > 0.05）。转染后48 h,生存素siRNA组G2/M期细胞比例显著高于阴性对照组（P < 0.05）和空白对照组（P < 0.05）,而生存素siRNA组A431细胞迁移数及侵袭数均显著低于空白对照组（均P < 0.05）和阴性对照组（均P < 0.05）。结论 生存素序列特异性siRNA能抑制A431细胞生存素基因表达和细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭,提示生存素可成为皮肤鳞状细胞癌基因治疗的靶点。     

转染反义微小RNA-155对人皮肤鳞状细胞癌细胞株A431生长的影响

目的 观察转染反义微小RNA?155（miRNA?155）对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株增殖、凋亡以及细胞迁移和侵袭的影响。方法 A431细胞分为3组,采用脂质体介导法转染无义序列miRNA?155（无义序列组）、反义序列 miRNA?155（反义序列组）或仅用含Lipofectamine 2000的DMEM（空白对照组）处理。实时定量聚合酶链反应检测转染后各组A431细胞miRNA?155的表达水平,噻唑蓝法检测转染后24、36、72、96、120 h细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期变化和凋亡情况,Transwell法检测细胞迁移与侵袭力。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD?t检验。结果 转染后,无义序列组、反义序列组与空白对照组中A431细胞miRNA?155相对表达量分别为0.98 ± 0.02、0.28 ± 0.18、1.00 ± 0.01,3组差异有统计学意义（F = 634.57,P < 0.001）,反义序列组低于空白对照组和无义序列组,均P < 0.05。孵育72、96、120 h时,3组细胞存活率差异均有统计学意义（均P < 0.05）,反义序列组细胞存活率在3个时间点均低于空白对照组和无义序列组（均P < 0.05）;3组细胞G0/G1期细胞比例、S期细胞比例、细胞增殖指数差异均有统计学意义（F = 23.46、36.81、19.35,P < 0.01）。反义序列组G0/G1期细胞比例（74.63% ± 2.13%）高于空白对照组（62.92% ± 2.56%）和无义序列组（63.75% ± 3.06%）,均P < 0.05;S期细胞比例及细胞增殖指数（9.88% ± 1.83%、25.36 ± 2.13）低于空白对照组（18.86% ± 2.78%、37.08 ± 2.56）和无义序列组（18.33% ± 3.72%、36.25 ± 3.06）,均P < 0.05;反义序列组迁移细胞数和侵袭细胞数低于空白对照组和无义序列组（均P < 0.05）。结论 皮肤鳞状细胞癌A431细胞转染反义miRNA?155可减少miRNA?155的表达,有效抑制A431细胞增殖、迁移、侵袭,促进其凋亡。     

姜黄挥发油联合顺铂对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的 探讨姜黄挥发油（TVO）联合顺铂对人皮肤鳞状细胞癌（鳞癌）A431细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法 取对数生长期A431细胞,用5、10、20、40、80 mg/L TVO处理,对照组用含有1％二甲基亚砜（DMSO）的DMEM高糖培养基处理,24 h后,CCK8法检测细胞增殖情况。另取部分A431细胞,分为4组,分别用含1％ DMSO的DMEM高糖培养基（对照组）、40 mg/L TVO（TVO组）、10 mg/L顺铂（顺铂组）、40 mg/L TVO和10 mg/L顺铂（TVO + 顺铂组）处理24 h后,利用CCK8法检测细胞增殖活性;倒置显微镜观察细胞形态变化;吖啶橙（AO）/溴化乙锭（EB）双染色荧光显微镜观察细胞凋亡情况;比色法检测Caspase?3、Caspase?9酶活性;Western印迹检测Caspase?3、P糖蛋白表达。结果 5、10、20、40、80 mg/L TVO作用A431细胞24 h,对细胞增殖抑制率分别是（12.83 ± 6.4）%、（16.27 ± 11.4）%、（21.61 ± 9.1）%、（33.11 ± 2.0）%和（46.00 ± 3.3）%,与对照组（4.03 ± 1.4）%比较差异均有统计学意义（P < 0.05）;24 h时抑制50%细胞增殖的TVO浓度为（61.66 ± 1.03） mg/L;TVO组、顺铂组及TVO + 顺铂组细胞增殖抑制率显著上升,与对照组比较差异均有统计学意义（P < 0.05）,联合用药有协同作用,联合指数（CI）为1.366（P < 0.05）。TVO组、顺铂组细胞均不同程度变圆并出现凋亡,TVO + 顺铂组细胞明显减少,出现大量细胞碎片。TVO组、顺铂组及TVO + 顺铂组细胞Caspase?3酶活性分别是1.117 ± 0.095、1.381 ± 0.089、1.520 ± 0.115,Caspase?9酶活性分别是1.259 ± 0.059、1.829 ± 0.171、2.760 ± 0.297,Caspase?3蛋白表达量分别是1.156 ± 0.006、1.296 ± 0.021、1.482 ± 0.016,P糖蛋白表达量分别是1.311 ± 0.011、1.169 ± 0.012、0.528 ± 0.014,其中TVO + 顺铂组细胞Caspase?3、Caspase?9酶活性及Caspase?3蛋白表达量显著高于TVO组和顺铂组,P糖蛋白表达量显著低于TVO组和顺铂组,差异均有统计学意义（P < 0.01）。结论 姜黄挥发油与顺铂联用可协同抑制人皮肤鳞癌A431细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与活化Caspase系统并降低P糖蛋白表达相关。     

miRNA-188-5p表达下调通过调控PTEN/Akt途径抑制皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭能力

【摘要】 目的 探讨miRNA-188-5p（miR-188-5p）在皮肤鳞状细胞癌（鳞癌）组织和细胞中的表达，分析其表达下调对皮肤鳞癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法 2012年11月至2018年10月在河南省新乡医学院第一附属医院收集50例手术切除的皮肤鳞癌组织及50例癌旁正常皮肤组织。实时荧光定量PCR（qPCR）检测皮肤鳞癌组织、癌旁正常皮肤组织、皮肤鳞癌细胞系SCL-1、A431、HSC-5和人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞中miR-188-5p的表达。培养的A431和HSC-5细胞分别分为2组：miR-188-5p抑制剂组和阴性对照组，对转染miR-188-5p抑制剂的细胞和阴性对照组细胞，通过qPCR检测miR-188-5p的相对表达（2-△△Ct），并以CCK8法和Transwell小室分别检测各组细胞的增殖活性和侵袭能力。双荧光素酶报告实验检测miR-188-5p和PTEN的相互作用，Western印迹法检测PTEN、总Akt（t-Akt）和磷酸化Akt（p-Akt）的表达。两独立样本比较采用t检验。结果 皮肤鳞癌组织中miR-188-5p的相对表达（5.213 ± 3.138）显著高于癌旁正常皮肤组织（1.010 ± 0.364，t = 9.187，P < 0.001）。SCL-1、A431和HSC-5细胞中miR-188-5p的表达（3.858 ± 0.163、7.068 ± 0.262和4.572 ± 0.413）均显著高于HaCaT细胞（1.079 ± 0.300，t = 17.890、21.110和8.737，均P < 0.05）。与阴性对照组相比，miR-188-5p抑制剂组A431和HSC-5细胞miR-188-5p表达显著下调（均P < 0.01），细胞增殖和侵袭能力下降（均P < 0.05）。双荧光素酶报告实验显示，miR-188-5p表达下调显著上调A431和HSC-5细胞中PTEN的表达，但抑制p-Akt的表达。结论 miR-188-5p在皮肤鳞癌组织和细胞中高表达，且miR-188-5p表达下调可能通过调控PTEN/Akt途径，抑制皮肤鳞癌细胞增殖活性和侵袭能力。     

聚乙交酯丙交酯纳米粒装载氨基酮戊酸光动力疗法对A431细胞的杀伤效应

【摘要】 目的 制备装载氨基酮戊酸（ALA）的聚乙交酯丙交酯纳米粒（PLGA NP）,增强ALA光动力体外杀伤人皮肤鳞癌A431细胞的效应。方法 改良复乳溶剂挥发法制备ALA PLGA NP,并对其粒径、包封率、载药量和形态进行表征。用透射电镜观察体外培养的A431细胞吸收ALA PLGA NP后的形态;用多功能酶标仪测定24 h内0.1 mmol/L ALA组、1 mmol/L ALA组、ALA PLGA NP组（含0.1 mmol/L ALA）、PLGA NP组生成的原卟啉IX（PpIX）荧光强度变化以确定最佳孵育时间。将培养A431细胞分为对照组、0.1 mmol/L ALA避光组、1 mmol/L ALA避光组、ALA PLGA NP避光组、PLGA NP避光组、单纯照光组、0.1 mmol/L ALA PDT组、1 mmol/L ALA PDT组、ALA PLGA NP PDT组、PLGA NP PDT组,对照组及各避光组严格避光,PDT组及单纯照光组用He-Ne激光照射,用噻唑蓝法测定其细胞杀伤效应。将A431细胞分为对照组、ALA PDT组、ALA PLGA NP PDT组,对照组避光,PDT组采用He-Ne激光照射,12、24 h后用流式细胞仪分析细胞凋亡情况。 结果 ALA PLGA NP呈球形,平均粒径为（65.6 ± 26.0） nm,包封率为（65.8 ± 7.2）%,载药量为（0.62 ± 0.27）%。ALA PLGA NP能被A431细胞吸收并聚集于细胞质中。PpIX荧光动力学检测显示24 h内ALA组、ALA PLGA NP组荧光强度随时间增加而上升。当孵育6 h、24 h时,ALA PLGA NP组生成的PpIX荧光强度均高于0.1 mmol/L ALA（均P < 0.01）。ALA PLGA NP PDT组对A431细胞的杀伤效应也明显强于0.1 mmol/L ALA PDT（6 h：t = 35.685,P < 0.01;24 h：t = 5.262,P < 0.01）。ALA PLGA NP PDT组细胞的凋亡率也高于ALA PDT组（12 h：t = 9.074,P < 0.01;24 h：t = 9.095,P < 0.01）。 结论 ALA PLGA NP能提高PpIX生成量,增强ALA PDT对A431细胞的体外杀伤效应以及ALA PDT诱导肿瘤细胞凋亡的效应。 【关键词】 肿瘤,鳞状细胞; 光化学疗法; 氨基酮戊酸; 纳米粒子     

葡萄糖转运蛋白3在皮肤鳞状细胞癌中的表达及其对A431细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的探究葡萄糖转运蛋白3(GLUT3)在皮肤鳞状细胞癌(cSCC)中的表达及其对cSCC细胞系A431的影响。方法收集2016年6月至2020年12月经北京大学第三医院皮肤科病理确诊为cSCC患者的石蜡组织标本22份, 皮肤科手术中废弃的正常皮肤组织20份作为对照, 采用免疫组化法检测cSCC和正常皮肤组织中GLUT3的表达。将A431细胞分为GLUT3过表达组和阴性对照组, 分别转染携带SLC2A3基因的慢病毒载体和慢病毒空载体。实时荧光定量PCR及Western印迹法检测各组细胞中GLUT3 mRNA及蛋白的表达水平, MTS法检测各组细胞增殖活力, 动态细胞成像分析系统Incucyte S3实时检测各组细胞的迁移和侵袭能力。分别用葡萄糖及乳酸试剂盒检测并比较各组细胞48 h葡萄糖消耗量及乳酸产生量。两组间比较采用两独立样本t检验, 多组间比较采用单因素方差分析。结果 cSCC组织中GLUT3的表达[免疫组化评分:(9.39 ± 2.56)分]显著高于正常皮肤组织[(2.30 ± 2.60)分], t = 8.91, P<0.05。与A431细胞阴性对照组相比, GLUT3过...     

MAPK/ERK信号转导通路在白藜芦醇抑制A431细胞株裸鼠移植瘤生长中的作用机制研究

目的 探讨白藜芦醇对人皮肤鳞状细胞癌（简称鳞癌）A431细胞株裸鼠移植瘤生长的影响。 方法　取对数生长期A431细胞株接种于Balb/c （nu/nu）裸鼠左腋下造模,7 ～ 8 d后将A431裸鼠移植瘤模型按随机数字表法分为空白组、阴性对照组（生理氯化钠溶液组）、环磷酰胺（CTX）阳性对照组、白藜芦醇高、中、低剂量组,每组10只。通过终末瘤质量计算白藜芦醇的抑瘤率,观察各组移植瘤组织病理形态学变化,原位末端标记技术检测细胞凋亡,Western印迹检测各组移植瘤组织中P-ERK、p53、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase3）的表达。SPSS13.0统计软件对结果进行方差分析及Pearson相关分析。 结果　CTX组、白藜芦醇高、中、低剂量组、阴性对照组、空白组裸鼠移植瘤体积分别为（1153.56 ± 255.41）、（1001.69 ± 115.08）、（1206.80 ± 175.88）、（1342.28 ± 211.12）、（1642.34 ± 225.85）、（1564.32 ± 156.49） mm3,各组差异有统计学意义（F = 16.00,P < 0.05）;各组瘤质量差异亦有统计学意义（F = 19.15,P < 0.05）,白藜芦醇高、中、低剂量组抑瘤率分别为45.57%、37.97%、15.51%。CTX组、白藜芦醇高、中、低剂量组、阴性对照组、空白组肿瘤组织的凋亡指数分别为36.79 ± 8.86、33.15 ± 6.00、18.09 ± 3.92、10.53 ± 4.20、3.87 ± 1.63、2.73 ± 1.61,白藜芦醇各组均高于阴性对照组及空白组（F = 93.26,P < 0.05）。各组肿瘤组织中P-ERK/β肌动蛋白、p53/β肌动蛋白caspase3/β肌动蛋白比值经方差分析,F值分别为6.65、6.78、11.56,均P < 0.05,白藜芦醇各组P-ERK、p53、caspase3蛋白的表达均高于阴性对照组及空白组。经Pearson相关分析,裸鼠移植瘤P-ERK 与p53、p53与caspase3表达具有显著相关性（r分别0.68和0.56,均P < 0.05）。 结论　白藜芦醇对A431荷瘤裸鼠移植瘤的生长具有抑制作用,其机制之一可能与活化肿瘤组织中MAPK/ERK信号传导通路,进而活化p53,诱导肿瘤细胞凋亡有关。 【关键词】 癌,鳞状细胞; 丝裂原激活蛋白激酶激酶类; 肿瘤抑制蛋白质p53; 细胞系,肿瘤; 白藜芦醇     

siRNA干扰水通道蛋白3和磷脂酶D2表达对A431细胞株生长和凋亡的影响

目的 探讨水通道蛋白3（AQP3）和磷脂酶D2（PLD2）在人皮肤鳞状细胞癌细胞株A431细胞增殖和凋亡中的作用。 方法 针对AQP3和PLD2各设计3条siRNA,用脂质体转染法将siRNA导入A431细胞。用荧光定量PCR方法筛选出其中干扰效果最佳的AQP3-siRNA和PLD2-siRNA,Western印迹法检测转染后AQP3和PLD2蛋白的表达水平。将A431细胞分为5组：正常培养组（不加任何处理）,转染试剂组（加入转染试剂）,阴性对照组（转染阴性对照siRNA）,AQP3-siRNA组（转染AQP3-siRNA）,PLD2-siRNA组（转染PLD2-siRNA）。CCK8法检测AQP3和PLD2表达下调对A431细胞增殖的影响,膜联蛋白-V-异硫氰酸荧光素/碘化丙锭双染色后用流式细胞仪检测细胞凋亡。 结果 用脂质体转染法将siRNA导入A431细胞后,AQP3和PLD2的mRNA和蛋白表达均较阴性对照组明显下降。与阴性对照组比较,转染AQP3-siRNA后A431细胞增殖在24、48、72 h均受到明显抑制（t值分别为24.10、11.00、9.54,均P < 0.01）;转染PLD2-siRNA后,A431细胞增殖同样在24、48、72 h均受到明显抑制（t值分别为30.47、7.02、8.73,均P < 0.01）。与阴性对照组比较,转染AQP3-siRNA后,A431细胞凋亡在48 h和72 h均明显增加（t值分别为11.36、20.91,均P < 0.01）;转染PLD2-siRNA后,A431细胞凋亡在72 h明显增加（t值为4.86,P < 0.05）。 结论 siRNA下调AQP3或PLD2表达可抑制A431细胞增殖,诱导A431细胞凋亡。