BMSC-Exo通过Wnt/β-catenin途径参与股骨头坏死大鼠软骨细胞增殖、迁移和凋亡的机制研究北大核心CSCD

目的:探究骨髓间充质干细胞(BMSCs)-外泌体(Exo)通过Wnt/β-catenin途径参与股骨头坏死(FHN)大鼠软骨细胞迁移、增殖和凋亡的机制。方法:通过注射地塞米松和强迫跑步的方法构建FHN大鼠模型。将收集到的FHN软骨细胞分为对照组、BMSCs-Exo 50组、BMSCs-Exo 100组,其培养基中BMSCs-Exo的浓度分别为0、50和100μg/ml。检测各组细胞增殖、迁移和凋亡情况。评估各组Wnt/β-catenin通路表达水平。结果:三组细胞上述各项指标比较差异有统计学意义(P<0.05)。BMSCs-Exo 50组的OD值为0.78±0.07,划痕前缘迁移距离百分比为(45.59±1.45)%,Wnt、β-catenin mRNA和蛋白水平显著高于对照组,凋亡率[(2.55±0.24)%]显著低于对照组(P<0.05)。BMSCs-Exo 100组的OD值为0.89±0.08,划痕前缘迁移距离百分比为(61.44±1.76)%,Wnt、β-catenin mRNA和蛋白水平显著高于对照组和BMSCs-Exo 50组,凋亡率[(1.03±0.01)%]显著低于对照组和BMSCs-Exo 50组(P<0.05)。结论:BMSCs-Exo可能通过激活Wnt/β-catenin通路促进FHN大鼠软骨细胞的增殖和迁移,并抑制凋亡,从而促进软骨生成治疗FHN。     

补肾调经方和逍遥丸对超促排卵小鼠子宫内膜细胞Wnt通路的影响

目的观察补肾调经方和逍遥丸对超促排卵小鼠子宫内膜Wnt通路的影响。方法将90只雌性小鼠随机分为6组:补肾高、低剂量组,疏肝高、低剂量组,控制性超促排卵组(COH)和空白对照组,每组15只。各组每日腹腔注射生理盐水,连续8 d;第9天,除空白对照组腹腔注射生理盐水外,各组注射孕马血清,48 h后注射人绒毛膜促性腺激素。各组小鼠分别与雄鼠按1:1合笼,次晨观察妊娠情况后给药。补肾高、低剂量组分别给予补肾调经方口服液(5.4和2.7 g/ml),疏肝高、低剂量组分别给予逍遥丸混悬液(0.6和0.3 g/ml),COH组和空白对照组给予生理盐水,连续4 d。处死小鼠并取材,应用RT-PCR方法分别测定小鼠子宫Wnt7a和β-catenin的表达情况。结果与空白对照组比较,COH组Wnt7a和β-catenin表达降低;与COH组比较,补肾高剂量组和疏肝高剂量组Wnt7a和β-catenin表达增加(P0.05);补肾高剂量组与疏肝高剂量组间比较无统计学意义(P0.05)。结论补肾调经方、逍遥丸改善小鼠子宫内膜容受性,促进胚胎着床,其机制与上调Wnt7a和β-catenin表达水平,激活Wnt/β-catenin信号转导通路有关。     

CD4^(+)/CD8^(+)和自噬蛋白Beclin-1与子宫内膜容受性改变和不孕发生相关性探究北大核心CSCD

目的:研究CD4^(+)/CD8^(+)和自噬蛋白Beclin-1与子宫内膜容受性改变和不孕发生的相关性。方法:选取2019年2月至2021年4月青海省人民医院收治的137例不孕症患者作为研究对象,另选同期体检的60例健康女性作为对照。流式细胞术检测外周血CD4^(+)、CD8^(+)水平,并计算CD4^(+)/CD8^(+);免疫组化染色法检测Beclin-1表达;阴道彩色多普勒超声诊断仪检测子宫内膜容受性(血流阻力指数、搏动指数、子宫内膜厚度与容积)变化。Spearman分析CD4^(+)/CD8^(+)、Beclin-1阳性表达与子宫内膜容受性相关指标的关系。结果:不孕组CD4^(+)水平、CD4^(+)/CD8^(+)高于健康组,CD8^(+)水平低于健康组(P<0.05)。健康组Beclin-1阳性表达58例,不孕组阳性表达101例,不孕组阳性率(73.72%)低于健康组(96.67%,P<0.05)。不孕组血流阻力指数、搏动指数高于健康组,子宫内膜厚度与容积低于健康组(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,CD4^(+)/CD8^(+)与血流阻力指数、搏动指数呈正相关,与子宫内膜厚度与容积呈负相关(P<0.05);Beclin-1阳性表达与血流阻力指数、搏动指数呈负相关,与子宫内膜厚度与容积呈正相关(P<0.05)。结论:不孕症女性外周血CD4^(+)/CD8^(+)显著升高,自噬蛋白Beclin-1阳性表达下调,可能与机体子宫内膜容受性变化与不孕发生密切相关。     

NKT细胞在MRSA感染性肺炎中作用的初步研究北大核心CSCD

目的:初步探讨NKT细胞在耐甲氧西林金葡菌(MRSA)感染性肺炎模型中的作用。方法:MRSA经鼻黏膜感染C57BL/6野生型(WT)小鼠和CD1d^(-/-)小鼠。观察小鼠生存率,检测肺组织中细菌载量,ELISA检测肺组织中细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-17、IL-6含量,流式细胞术检测肺组织中CD3^(+)CD8^(+)T细胞、NK细胞和NKT细胞百分比。结果:MRSA致死剂量感染5 d,WT小鼠生存率显著低于CD1d^(-/-)小鼠(46.2%vs 90.0%,P<0.05)。感染12~48 h,WT小鼠肺组织中细菌载量显著高于CD1d^(-/-)小鼠(P<0.01);WT小鼠肺组织中TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-17含量较CD1d^(-/-)小鼠明显增高(P<0.01)。MRSA感染24 h,WT小鼠肺组织中NKT细胞、NK细胞百分比显著高于CD1d^(-/-)小鼠(P<0.01),而CD3^(+)CD8^(+)T细胞百分比低于CD1d^(-/-)小鼠(P<0.01)。结论:在MRSA肺炎中,NKT细胞被激活,从而加重肺部炎症反应,降低生存率,减缓细菌清除。     

IL-35对慢性阻塞性肺疾病患者Treg/Th17平衡的影响北大核心CSCD

目的:观察IL-35在慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血中的表达及其对CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg和辅助性T细胞17(Th17)的调控作用。方法:选取44例COPD患者和25例健康对照者,分离血浆和外周血单个核细胞(PBMC),ELISA检测血浆IL-35水平,流式细胞术检测PBMC中CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg和Th17水平,计算Treg/Th17。重组人IL-35刺激COPD患者PBMC,流式细胞术检测CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg和Th17比例,ELISA检测培养上清中IL-10、IL-17和IL-22水平,RT-PCR检测FoxP3和RORγt mRNA表达。磁力分选COPD患者PBMC中的CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg,重组人IL-35刺激后与自体PBMC共培养,CCK-8检测细胞增殖。结果:与对照组相比,COPD组血浆IL-35水平降低[(108.20±12.13)pg/ml vs(133.30±22.91)pg/ml,t=5.980,P<0.000 1],CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg比例降低[(4.71±1.00)%vs(6.07±1.03)%,t=5.362,P<0.000 1],Th17比例升高[(2.97±0.72)%vs(2.28±0.61)%,t=4.060,P=0.000 1],Treg/Th17降低(1.69±0.60 vs 2.86±0.91,t=6.279,P<0.000 1)。重组人IL-35刺激后,CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg比例升高(P=0.000 2),Treg/Th17升高(P=0.015 0),而Th17比例无明显变化(P=0.391 0),培养上清中IL-10水平升高[(145.10±24.40)pg/ml vs(123.50±24.11)pg/ml,t=4.520,P<0.000 1],而IL-17和IL-22水平均无明显变化(P>0.05),FoxP3 mRNA表达显著升高(1.27±0.19 vs 0.96±0.10,t=7.600,P<0.000 1),而RORγt mRNA表达无明显变化(P=0.447 0)。重组人IL-35刺激COPD患者分选的CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg免疫抑制活性增强。结论:IL-35主要通过提高CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg比例和活性影响Treg/Th17平衡,在COPD过程中可能发挥免疫保护作用。     

解毒祛瘀滋阴方对系统性红斑狼疮小鼠的作用及Wnt / β-catenin 信号通路的影响

目的:观察解毒祛瘀滋阴方对系统性红斑狼疮小鼠的作用及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:将40只系统性红斑狼疮MRL/lpr小鼠随机分为模型组与药物组,药物组灌胃给予25 g/(kg·d)的解毒祛瘀滋阴方,模型组灌胃给予等量的生理盐水,连续给药21 d;将20只C57BL/6小鼠作为正常组,常规饲养。给药21 d后,检测血清尿素氮、肌酐和抗双链DNA抗体水平及炎性因子浓度,CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞阳性率,脾脏辅助性T细胞亚群及Wnt3a、β-catenin蛋白表达,以及肾脏组织病理观察。结果:与正常组比较,模型组尿素氮、肌酐和抗双链DNA抗体水平及IL-4浓度升高,IL-2、干扰素γ(IFN-γ)、IL-10浓度降低,CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞阳性率降低,Th1细胞比例及Th1/Th2降低,Wnt3a、β-catenin蛋白表达升高,肾脏病理损伤较严重;与模型组比较,药物组尿素氮、肌酐和抗双链DNA抗体水平及IL-4浓度显著降低,IL-2、IFN-γ、IL-10浓度升高,CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞阳性率升高,Th1细胞比例及Th1/Th2升高,Wnt3a、β-catenin蛋白表达降低,肾脏病理损伤减轻。结论:解毒祛瘀滋阴方可改善系统性红斑狼疮小鼠的免疫功能与肾损害,其机制可能与调节Wnt/β-catenin信号通路有关。     

黄芪多糖对结肠炎小鼠树突状细胞亚群的调节作用北大核心CSCD

目的:探讨黄芪多糖(APS)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎小鼠树突状细胞(DCs)分化的影响及其可能的作用机制。方法:将32只SPF级BALB/c雄性小鼠随机选取8只作为正常组,其余24只采用3%DSS溶液复制结肠炎小鼠模型,造模成功后,随机均分成3组,分别为模型组、APS组和美沙拉嗪组。观察各组小鼠体质量、结肠质量、结肠质量指数、结肠长度及单位结肠质量指数等情况;HE染色后进行病理损伤评分;流式细胞术检测小鼠外周血中总DCs(CD11c^(+)CD103^(+)、CD11c-CD103^(+)、CD11c^(+)CD103-、CD11c-CD103-细胞)、炎症DCs(CD11c^(+)CD103^(+)i NOS^(+)、CD11c^(+)CD103^(+)TNF-α^(+)、CD11c^(+)CD103^(+)E-Cadherin^(+)细胞)、滤泡性DCs(CD11c^(+)CD103^(+)CXCR5^(+)细胞)水平;Western blot法分析结肠组织中PI3K/Akt信号通路相关分子的表达水平。结果:与模型组相比,各治疗组小鼠在给药治疗后体质量明显增加,结肠长度明显增长,结肠质量、结肠质量指数、单位结肠质量指数及病理组织学评分显著下降(P<0.05或P<0.01);同时,经APS治疗后,结肠炎小鼠外周血中炎症DCs数量如CD11c^(+)CD103^(+)INOS^(+),CD11c^(+)CD103^(+)TNF-α^(+)、CD11c^(+)CD103^(+)E-cadherin^(+)和滤泡性DCs(CD11c^(+)CXCR5^(+)CD103^(+),DC-Tfh)数量明显下调(P<0.05或P<0.01)。各治疗组结肠组织中PI3K、p-Akt、Rheb和Kif2α蛋白表达水平有所降低(P<0.05或P<0.01)。结论:APS有效缓解小鼠结肠炎与下调小鼠炎症、滤泡性DCs数量以及抑制PI3K/Akt信号通路活化密切相关。     

双氢青蒿素通过调节TGF-β/Smad通路改善小鼠接触性皮炎北大核心CSCD

目的:探讨双氢青蒿素(DHA)对小鼠接触性皮炎(CHS)的抑制作用及机制。方法:0.5%2,4-二硝基氟苯(DNFB)涂抹小鼠腹部连续2 d致敏,5 d后用0.25%DNFB涂抹左耳发敏,右耳涂抹丙酮和橄榄油混合液作为对照,于致敏前2 d灌胃给予DHA处理。HE染色观察小鼠皮肤组织病理学变化,免疫组化染色观察小鼠耳部皮肤CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞浸润情况,测定脾脏指数。ELISA检测血清IL-6、IFN-γ、IL-10、TGF-β和单核细胞趋化蛋白(MCP)-1变化,Western blot检测皮肤Smad2和Smad3磷酸化水平,流式细胞术检测皮肤和脾脏免疫细胞浸润情况。结果:DHA可显著改善CHS小鼠耳朵肿胀、皮肤红斑及脾脏指数(P<0.05)。组织病理学结果显示,DHA处理可明显抑制CHS小鼠皮肤增厚和炎症细胞浸润。流式细胞术结果显示,DHA处理后皮肤和脾脏中浸润的CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、树突状细胞和巨噬细胞显著减少(P<0.05)。ELISA结果显示,相对于模型组,DHA处理组血清IL-6、IFN-γ、TGF-β和MCP-1水平明显降低(P<0.05)。Western blot结果表明DHA处理显著抑制皮肤Smad2和Smad3磷酸化水平(P<0.05)。结论:DHA通过减少免疫细胞浸润和调节TGF-β/Smad信号传导抑制CHS,为治疗CHS提供了新的药物选择和实验依据。     

红芪多糖介导STAT3通路抑制卵巢癌小鼠肿瘤细胞免疫逃逸北大核心CSCD

目的探讨红芪多糖(HPS)介导信号转导子与转录激活子3(STAT3)通路抑制卵巢癌小鼠肿瘤细胞免疫逃逸的作用。方法取40只Balb/c小鼠通过皮下注射卵巢癌SKOV3细胞建立卵巢癌小鼠模型,将建模成功的小鼠随机分为模型组、米非司酮(MIF)组、HPS组、HPS^(+)MIF联合组。HPS组灌胃给予HPS(200 mg·kg^(-1)·d^(-1)),MIF组灌胃给予MIF(40 mg·kg^(-1)·d^(-1)),HPS^(+)MIF联合组灌胃给予HPS(200 mg·kg^(-1)·d^(-1))和MIF(40 mg·kg^(-1)·d^(-1)),模型组灌胃给予等量无菌生理盐水,连续干预14 d。观察记录各组小鼠瘤体积、瘤质量并计算抑瘤率;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测小鼠外周血白介素-2(IL-2)、白介素-10(IL-10)、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平;流式细胞术检测各组小鼠肿瘤组织中CD4^(+)、CD4^(+)CD25^(+)叉头框蛋白P3(^(+)Foxp3^(+))调节性T细胞(Treg)水平;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组小鼠肿瘤组织STAT3、程序性死亡配体-1(PD-L1)、程序性死亡受体1(PD-1)信使核糖核糖酸(mRNA)表达;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1、PD-1蛋白表达。结果与模型组比,MIF组、HPS组、HPS^(+)MIF联合组小鼠瘤体积和瘤质量、外周血IL-2、IL-10、TGF-β1水平以及肿瘤组织CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞水平降低,肿瘤组织中CD4^(+)细胞水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与MIF组和HPS组比,HPS^(+)MIF联合组小鼠瘤体积和瘤质量、外周血IL-2、IL-10、TGF-β1水平以及肿瘤组织CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞水平降低,肿瘤组织中CD4^(+)细胞水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比,MIF组、HPS组、HPS^(+)MIF联合组小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1、PD-1 mRNA及蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与MIF组和HPS组比,HPS^(+)MIF联合组小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1、PD-1 mRNA及蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论HPS对卵巢癌小鼠肿瘤细胞免疫逃逸有一定抑制作用,推测可能是通过介导STAT3信号通路抑制STAT3、PD-L1、PD-1的表达实现上述作用的。     

桑色素对ALI大鼠免疫功能、肺组织病理及IKKα蛋白水平的影响北大核心CSCD

目的:探究桑色素对急性肺损伤(ALI)大鼠免疫功能、肺组织病理及IKKα蛋白水平的影响。方法:将30只实验大鼠分为NC组、ALI组和Morin组,每组10只。对各组大鼠肺组织湿/干重比、肺组织含水量、血清中氧化指标SOD及MDA、炎症因子IL-1β和IL-18及免疫功能指标CD4^(+)、CD8^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞亚群分别进行分析比较;HE染色比较肺组织病理变化;Western blot检测肺组织中IKKα、NF-κB p65蛋白表达。结果:ALI组大鼠肺组织湿/干重比较NC组明显上升,且肺组织含水量较NC组显著提高(P<0.05);与ALI组相比,Morin组肺组织湿/干重比及含水量均显著降低(P<0.05)。氧化指标SOD活性ALI组较NC组明显降低,MDA含量ALI组较NC组明显升高(P<0.05);干预后的Morin组大鼠氧化指标得到明显改善,SOD活性升高,MDA含量降低(P<0.05)。与NC组相比,ALI组血清中IL-1β、IL-18水平均显著升高(P<0.05);干预后的Morin组大鼠血清中IL-1β、IL-18水平较ALI组明显降低(P<0.05)。与NC组相比,ALI组大鼠CD4^(+)水平、CD4^(+)/CD8^(+)明显降低,CD8^(+)明显升高(P<0.05);ALI组大鼠肺损伤评分为10.38±1.31,较NC组明显升高;干预后的Morin组大鼠肺组织损伤得到明显改善,且损伤评分明显低于ALI组(P<0.05);与NC组相比,ALI组肺组织中IKKα和NF-κB p65显著升高(P<0.05);干预后的Morin组大鼠肺组织中IKKα和NF-κB p65受到明显抑制,低于ALI组(P<0.05)。结论:桑色素可改善ALI大鼠的免疫功能和肺组织病理改变,同时抑制IKKα蛋白表达,进而抑制肺组织中的炎症反应,减轻肺损伤。     

幽门螺杆菌Lpp20核酸疫苗的构建及其免疫活性的初步研究

目的 构建幽门螺杆菌脂蛋白Lpp20基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/Lpp20,并在HeLa细胞中进行表达.通过肌肉注射免疫C57BL/6小鼠,观察其诱导小鼠产生的体液免疫和细胞免疫应答水平.方法 用PCR法扩增Lpp20全基因,再将Lpp20基因克隆至pcDNA3.1(+)真核细胞表达载体构建pcDNA3.1(+)/Lpp20重组体,观察其在HeLa细胞中的表达.将核酸疫苗PcDNA3.1(+)/Lpp20、对照空质粒pcDNA3.1(+)及PBS分组通过肌肉注射免疫6周龄C57BL/6小鼠.隔2周免疫一次,共免疫4次.间接ELISA法测定小鼠血清中抗Lpp20 IgG抗体水平,双抗体夹心ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ水平,MTT比色法检测脾淋巴细胞增殖反应.通过PCR法检测小鼠肌细胞中Lpp20基因的存在.结果 小鼠接种pcDNA3.1(+)/Lpp20核酸疫苗后能产生特异性IgG抗体,6周后ELISA测定血清抗体A450值为0.74,效价为1:1024.核酸疫苗免疫组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后,培养上清中IFN-γ含量明显升高[(410.36±56.23)ps/ml],与空质粒组[(25.26±10.85)pg/ml]之间差异有统计学意义(P<0.01).脾淋巴细胞增殖反应测定,核酸疫苗组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后,刺激指数(2.37±0.22)明显高于空质粒组(1.53±0.47)和PBS组(1.20±0.13),P<0.01.PCR检测Lpp20基因可在小鼠肌细胞中存在.结论 成功构建了pcDNA3.1(+)/Lpp20核酸疫苗,且其在小鼠体内可诱导较强的特异性体液免疫和细胞免疫应答.为进一步研究该疫苗的免疫保护作用提供实验依据.     

淫羊藿苷抑制β-catenin 和NF-κB p65 的活性对小鼠胰腺癌皮下移植瘤生长和运动的调节

目的:研究淫羊藿苷调控小鼠胰腺癌皮下移植瘤生长和运动的机制。方法:建立BALB/c小鼠皮下胰腺癌移植瘤模型后,分别给予生理盐水(对照组)、10 mg/kg淫羊藿苷(低剂量组)、20 mg/kg淫羊藿苷(中剂量组)、40 mg/kg淫羊藿苷(高剂量组)、5 mg/kg阿霉素(阿霉素组)腹腔给药干预,干预25 d后取出瘤体,检测瘤体重量和体积,并根据小鼠存活情况绘制生存曲线;TUNEL染色观察瘤组织凋亡情况,免疫组化检测Ki67、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白阳性表达率;qRT-PCR检测瘤组织中生长和运动标记分子基因相对表达情况,Western blot检测Wnt/β-catenin和核因子κB(NF-κB) p65信号通路关键蛋白表达情况。结果:与对照组相比,中、高剂量淫羊藿苷及阿霉素干预后,移植瘤的重量、体积,瘤组织中Ki67、VEGF的阳性表达率,Ki67、VEGF、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的mRNA相对表达量,β-catenin蛋白表达量、NF-κB p65蛋白磷酸化水平均显著降低(P0.05),小鼠的25 d存活率、瘤组织细胞凋亡率以及Caspase-3的mRNA相对表达量均显著升高(P0.05)。结论:淫羊藿苷可能通过抑制β-catenin和NF-κB p65的活性下调增殖及运动相关基因表达,上调凋亡相关基因表达从而调节小鼠胰腺癌皮下移植瘤的生长和运动。     

Tau195-213肽段对阿尔茨海默病小鼠的免疫治疗作用及对Wnt/β-catenin通路相关因子表达的影响

目的探讨Tau195-213肽段对阿尔茨海默病小鼠(JNPL3小鼠)的免疫治疗作用,同时探究其对Wnt/β-catenin通路相关因子表达的影响。方法 JNPL3转基因小鼠30只,随机分为对照组(C组)、佐剂CFA-PT免疫组(CFA组)、tau195-213(P202/205)肽段免疫组(tau组),每组10只,3组小鼠每3周免疫1次,共进行5次免疫,每次免疫前取血清,ELISA检测tau抗体的滴度、检测IFN-γ和IL-4含量;Morris水迷宫检测小鼠的空间学习记忆功能;Western检测Wnt/β-catenin通路相关因子的表达。结果 tau195-213(P202/205)肽段免疫的小鼠血清中能够诱导出较高滴度的抗tau抗体,其免疫的小鼠体外脾细胞培养上清液中IL-4含量较高(P0.05,VS C组和CFA组),IFN-γ含量未见明显差异(P0.05)。Tau组小鼠平均逃避潜伏期低于CFA组和C组,而在目标象限花费的时间多于CFA组。Tau195-213(P202/205)肽段可以激活机体脑组织β-catenin、c-Myc蛋白的表达升高,降低GSK-3β蛋白表达。结论 Tau195-213(P202/205)肽段免疫JNPL3小鼠后,产生了具有治疗水平的抗体,并且该抗体可通过血脑屏障,其机制与Wnt/β-catenin通路相关。     

小鼠毛囊再生与胸腺素β4的促进效应

背景:近年来研究表明,胸腺素β4与毛囊的生长发育和毛发的生长周期有着密切关系,但其作用机制尚不清楚。目的:探讨胸腺素β4通过Wnt信号通路作用于毛囊干细胞对毛囊再生的促进作用。方法:将实验小鼠随机分为低剂量胸腺素β4组、高剂量胸腺素β4组和对照组,使用松香/石蜡混合制剂建立脱毛模型。低剂量胸腺素β4组和高剂量胸腺素β4组给药浓度分别为0.3μg/50μL和3μg/50μL,对照组给予等量PBS,每隔12 h给药1次,均匀涂抹于小鼠脱毛背部。应用大体照相、苏木精-伊红染色、免疫组化及原位杂交技术,观察毛发生长情况,检测不同时间点和不同给药浓度下小鼠毛囊根部细胞β-catenin、LEF-1 mRNA的表达水平。结果与结论:低剂量胸腺素β4组毛发再生速度高于高剂量胸腺素β4组和对照组。苏木精-伊红染色显示在脱毛初期,各组小鼠真皮和皮下脂肪层有一定炎性细胞浸润,9 d时,低剂量胸腺素β4组生长期毛囊数量明显多于高剂量胸腺素β4组和对照组。免疫组织化学和原位杂交结果分别显示β-catenin和LEF-1 mRNA主要表达于毛囊隆突部和外根鞘处细胞的胞浆中,经积分吸光度分析发现低剂量胸腺素β4组阳性细胞数量和染色强度高于高剂量胸腺素β4组和对照组(P0.05),高剂量胸腺素β4组与对照组间差异无显著性意义。结果显示低剂量的胸腺素β4可以增加部分毛囊外根鞘处细胞内β-catenin和LEF-1 mRNA的表达。胸腺素β4可以促进毛囊再生的机制可能与影响Wnt信号通路有关。     

D-半乳糖致衰老小鼠脾脏T细胞亚群的改变及其意义

目的:探讨D-半乳糖所致亚急性衰老小鼠脾脏T细胞亚群的改变及其意义。方法:运用100 g/L D-半乳糖溶液建立小鼠亚急性衰老模型,并对此衰老模型进行生物学鉴定。ELISA检测模型小鼠血清中IFN-γ和IL-4的含量;流式细胞术检测模型小鼠脾脏中初始、活化及调节性T细胞相关分子的改变。结果:模型组小鼠血清中IFN-γ和IL-4含量分别为(82.93±2.74)pg/mL和(125.41±3.16)pg/mL,与对照组[(125.41±3.16)pg/mL和(8.28±2.47)pg/mL]相比含量降低(P<0.01)。脾脏中初始T细胞相关分子CD45RA表达下降[模型组:(4.46±1.21)%,对照组:(7.38±1.03)%,P<0.01];活化T细胞相关分子CD25表达下降[模型组:(6.74±0.81)%,对照组:(5.14±1.25)%,P<0.05];Foxp3在CD4+CD25+T细胞中表达上升[模型组:(18.32±1.44)%,对照组:(10.14±1.52)%,P<0.05]。结论:机体衰老时脾脏中初始和活化T细胞减少,CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Tr)增多,T细胞活化及免疫调节能力下降。     

山柰酚通过Wnt/β-catenin信号通路抑制HBx-HepG2细胞增殖、侵袭及迁移

目的:探讨山柰酚对HBx-HepG2细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并研究其潜在分子作用机制。方法:利用实时荧光定量PCR检测相关基因的表达水平,利用蛋白印迹实验检测相关蛋白的水平,流式细胞术检测细胞的凋亡率,MTT实验和平板集落形成实验检测细胞的增殖,Transwell侵袭实验和划痕愈合实验检测细胞的侵袭和转移。结果:山柰酚(10~200μmol/L)能够剂量和时间依赖性地抑制HBx-HepG2细胞的增殖。山柰酚(100μmol/L)能显著抑制HBx-HepG2细胞的集落形成数量、细胞侵袭能力以及细胞愈合率,诱导HBx-HepG2细胞凋亡,引起cleaved caspase-3、cleaved caspase-9及Bax蛋白水平上升,Bcl-2蛋白水平下降,降低β-catenin、c-Myc和cyclin D1 mRNA及蛋白的表达水平。山柰酚(100μmol/L)同时能够降低p-GSK-3β蛋白水平以及细胞质和细胞核中的β-catenin蛋白水平,对GSK-3β蛋白水平没有影响。Li Cl处理能够反转山柰酚(100μmol/L)对HBx-HepG2细胞的增殖、侵袭以及迁移抑制作用。结论:山柰酚对HBx-HepG2细胞的增殖、侵袭及转移有显著的抑制作用,这种抑制作用很有可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性来实现的。     

小鼠Skint6基因突变对脾脏淋巴细胞亚群的影响北大核心CSCD

目的:制备Skint6基因突变小鼠模型,探究Skint6基因突变对小鼠脾脏各淋巴细胞亚群的影响。方法:利用CRISPR/Cas9技术定点突变小鼠Skint6基因,高分辨率熔解曲线(HRM)和DNA测序鉴定Skint6基因突变小鼠(B6-Skint6^(M));取6月龄B6-WT小鼠和B6-Skint6^(M)小鼠,qRT-PCR检测小鼠皮肤Skint6基因mRNA水平,考马斯亮蓝G-250法测定小鼠尿蛋白水平;计算小鼠体质量、脾脏指数和总细胞数并通过流式细胞术(FACS)检测其脾脏中各淋巴细胞亚群比例并计算细胞绝对数。结果:DNA测序结果显示B6-Skint6^(M)小鼠模型制备成功;qRT-PCR结果表明Skint6基因突变不影响皮肤Skint6 mRNA表达。B6-Skint6^(M)小鼠尿蛋白含量明显高于B6-WT小鼠(P<0.05)。Skint6基因突变对小鼠体质量、脾脏指数无显著影响(P>0.05)。FACS结果表明,与B6-WT组小鼠相比,B6-Skint6^(M)小鼠脾脏细胞数及淋巴细胞数明显增多(P<0.01);CD3^(+)T细胞比例及细胞绝对数明显上升(P<0.01,P<0.05),CD19^(+)B细胞比例下降(P<0.05);CD3^(+)T淋巴细胞亚群中CD8^(+)T细胞比例降低(P<0.01),双阴性T细胞(DNeg)比例及细胞绝对数明显上升(P<0.01,P<0.05);CD4^(+)CD69^(+)活化T细胞比例及细胞绝对数上升(P<0.05,P<0.01),CD4^(+)CD44^(hi)T细胞比例及细胞绝对数上升(P<0.01);Treg比例及细胞绝对数明显下降(P<0.001);Tfh细胞比例及细胞绝对数上升(P<0.05);Breg比例及细胞绝对数上升(P<0.05);CD3^(+)T淋巴细胞亚群中非典型CD3^(+)B220^(+)T细胞比例及其细胞绝对数增高(P<0.001)。结论:Skint6基因突变不影响皮肤中Skint6 mRNA表达,但可影响小鼠脾脏淋巴细胞亚群比例、细胞绝对数和活化状态,从而引起小鼠免疫功能紊乱。     

microRNA-588通过调控USP22基因表达对神经母细胞瘤增殖和迁移的影响及机制研究北大核心CSCD

目的:探究miR-588通过调控泛素特异性蛋白酶22(USP22)表达对神经母细胞瘤(NB)增殖和迁移的影响及机制。方法:通过双荧光素酶报告验证miR-588与USP22的靶向关系。将SK-N-SH细胞分为NC组、miR-588组、miR-588^(+)USP22组和USP22组,通过转染miR-588 mimic和/或USP22质粒过表达其水平。通过qPCR和Western blot检测USP22 mRNA和蛋白水平验证靶向关系。检测各组细胞的增殖、迁移、侵袭能力。通过ELISA检测免疫抑制相关指标肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)水平。结果:miR-588与USP22 mRNA 3’端的非翻译区域(3’-UTR)通过碱基互补配对的方式结合。miR-588组USP22 mRNA和蛋白显著低于NC组(P<0.05),miR-588^(+)USP22组USP22 mRNA和蛋白水平显著高于miR-588组而低于USP22组(P<0.05)。与NC组比较,miR-588组细胞增殖、迁移、侵袭能力显著升高(P<0.05)。USP22作用与miR-588相反(P<0.05),并且miR-588^(+)USP22组增殖、迁移、侵袭能力显著高于miR-588组而低于USP22组(P<0.05)。与NC组比较,miR-588组TNF-α[(8.97±0.90)pg/ml]和sIL-2R[(6.68±0.75)pg/ml]水平显著升高,USP22组TNF-α[(2.04±0.31)pg/ml]和sIL-2R[(1.48±0.19)pg/ml]水平显著降低(P<0.05),miR-588^(+)USP22组TNF-α[(4.16±0.49)pg/ml]和sIL-2R[(3.21±0.41)pg/ml]水平显著低于mi R-588组但高于USP22组(P<0.05)。结论:miR-588可靶向抑制USP22表达诱导TNF-α和sIL-2R分泌,从而缓解免疫抑制,进而抑制NB细胞增殖和转移。     

shRNA沉默β-catenin基因表达对人食管癌细胞生物学特性的影响

目的 构建稳定抑制β-catenin表达的食管癌细胞克隆,观察shRNA介导的β-catenin基因沉默对人食管癌细胞生物学特性的影响,为以β-catenin为靶的食管癌基因治疗提供理论和实验依据.方法 通过细菌转化、酶切、测序鉴定和基因重组等方法构建针对β-catenin的RNA干扰质粒pGen-3-CTNNB1和阴性对照质粒pGen-3-con.利用脂质体介导转染技术转染人食管癌细胞系Eca-109,经G418筛选得到稳定抑制β-catenin表达的食管癌细胞模型(pGen-3-CTNNB1细胞);逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、细胞免疫荧光和Western blot检测RNA干扰组(pGen-3-CTNNB1)、阴性对照组(pGen-3-con)及未转染组(Eca-109)3组细胞中β-catenin的表达;建立裸鼠皮下移植瘤模型,观察抑制β-catenin表达在活体内对肿瘤细胞生长能力的影响,免疫组织化学检测移植瘤组织中β-catenin的表达水平;体外浸润实验、迁移实验检测各组细胞的侵袭转移能力.结果 成功构建了针对β-catenin基因的RNA干扰载体pGen-3-CTNNB1,建立了稳定抑制β-catenin基因表达的食管癌细胞模型;与阴性对照组[(1.18±0.13)g]和未转染组[(1.38±0.21)g]比较,RNA干扰组[(0.42±0.09)g]移植瘤重量明显减轻(P＜0.05);瘤组织中β-catenin的表达水平明显降低;抑制β-catenin基因表达后,食管癌细胞的浸润能力显著降低,阴性对照组浸润细胞数为(81±5)个/HPF、未转染组为(77±6)个/HPF、RNA干扰组为(41±4)个/HPF(P＜0.01);迁移能力也显著下降,阴性对照组迁移细胞数为(73±5)个/HPF、未转染组为(69±5)个/HPF、RNA干扰组为(38±4)个/HPF(P＜0.05).结论 在人食管癌细胞Eca-109中存在β-catenin表达异常和Wnt信号通路的异常激活,抑制β-catenin基因的表达可以在裸鼠体内显著抑制食管癌细胞的生长,并降低其侵袭转移的能力.     

中亚苦蒿醇提物大孔树脂30%乙醇洗脱部位免疫功能研究

目的探讨中亚苦蒿醇提物大孔树脂30%乙醇洗脱部位(AAEM-30%)对小鼠树突状细胞(DC)和免疫功能的作用。方法中亚苦蒿醇提物经AB-8型大孔树脂分离得到AAEM-30%,对其多糖、黄酮和萜类含量进行测定。体外通过流式细胞术检测AAEM-30%对DC表面分子分化簇(CD)40、CD80和CD86的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测DC细胞因子白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达;体内通过不同给药剂量(50、100 mg/kg)和不同给药方式(皮下注射、腹腔注射、灌胃)检测AAEM-30%对ICR小鼠免疫功能的影响。结果AAEM-30%中多糖、黄酮、萜类的质量分数分别为24.30%、22.50%、28.19%。体外能够增强小鼠DC表面分子CD40、CD86以及DC细胞因子IL-6和TNF-α的表达(均P<0.001)。与对照组比较,3种给药方式的小鼠体质量比较差异均无统计学意义(均P>0.05);50、100 mg/kg AAEM-30%腹腔注射组的胸腺指数和50 mg/kg AAEM-30%灌胃组的脾脏指数均增加(均P<0.05)。100 mg/kg AAEM-30%腹腔注射组的CD19^(+)细胞数量增加(P<0.01),50 mg/kg AAEM-30%灌胃组的CD19^(+)细胞数量增加(P<0.05)。100 mg/kg AAEM-30%灌胃组的CD11b^(+)和CD11c^(+)数量增加(P<0.05)。灌胃和腹腔注射2种给药方式均能增加CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞的数量(均P<0.05)。结论AAEM-30%能够促进小鼠DC的成熟,增强小鼠免疫功能。