内源性端粒酶抑制基因遗传不稳定性与胃癌进展的关系

目的 研究8号染色体上D8S277位点的杂合性缺失(LOH)和微卫星不稳定性(MSI)对内源性端粒酶抑制基因(PINX1)蛋白表达的影响,阐明PINX1基因遗传不稳定性与胃癌进展的关系. 方法采用石蜡包埋组织抽提DNA,聚合酶链-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析,常规银染检测D8S277位点的LOH和MSI,采用Envision免疫组织化学染色和Leica-Qwin计算机图像分析等方法. 结果 D8S277位点的LOH发生率在淋巴结转移组(21.15%)明显高于无淋巴结转移组(0,P<0.05);在胃癌TNM Ⅲ Ⅳ期(24.39%)显著高于Ⅰ Ⅱ期(3.33%,P<0.05).PINX1蛋白阳性率在无淋巴结转移组(78.95%)明显高于有淋巴结转移组(48.08%,P<0.05);TNM分期Ⅰ Ⅱ期(73.33%)明显高于Ⅲ Ⅳ期(43.90%,P<0.05);蛋白表达阴性组LOH阳性率为32.28%,明显高于蛋白阳性组的2.50%(P<0.01). 结论 PINX1基因的遗传不稳定性可能导致该抑癌基因突变,是肿瘤发生发展的一个因素,LOH和MSI通过不同的途径调控胃癌的发生和发展.     

肝细胞癌8号染色体微卫星变异及其与临床病理特征的关系

目的　探讨肝细胞癌 (HCC)微卫星变异的特点及其与临床病理表现的相关性。方法采用毛细管电泳DNA分析系统 ,对 5 6例HCC中 8号染色体上 10个微卫星的杂合子丢失 (LOH)、微卫星不稳定性 (MSI)和等位基因失衡 (AI) 3种变异特征进行检测。结果　 5 6例HCC在 8号染色体上 10个基因位点发生LOH的总频率为 6 6 1% (37/ 5 6 ) ,LOH以D8S2 6 1最高为 5 3 5 % (2 3/ 4 3) ,其次为D8S172 1(5 2 5 % )和D8S1771(5 2 5 % )。D8S2 77基因位点 ,血清HBsAg阳性患者的LOH频率显著高于HBsAg阴性者 (P <0 0 1) ,D8S2 6 1、D8S2 98和D8S1733基因位点 ,血清HBsAg阴性患者的LOH频率显著高于HBsAg阳性者 (P <0 0 1) ;D8S2 98和D8S1771基因位点 ,直径 >3cm肿瘤的LOH率明显高于≤ 3cm组 (P <0 0 5和P <0 0 1) ;在D8S172 1基因位点 ,无包膜或包膜不完整的肿瘤的LOH显著高于包膜完整的肿瘤 (P <0 0 1) ;D8S2 98和D8S1771基因位点 ,肝内转移者的LOH明显高于无肝内转移者 (P <0 0 5 )。MSI的频率为 12 5 % (7/ 5 6 ) ,AI的频率为 19 6 % (11/ 5 6 )。结论HCC在 8号染色体上存在广泛的微卫星变异 ,其中LOH方式在HCC的发生和发展过程中起重要作用 ,MSI的作用次之。特定基因位点的LOH与临床和病理学参数有一定的相关性     

人肝癌P57~(kip2)基因失表达的遗传不稳定性

目的探讨肝细胞癌(HCC)P57kip2mRNA表达与遗传不稳定性之间的相互关系,以探索P57kip2基因失表达的机制。方法用原位分子杂交技术检测肝癌组织中P57kip2mRNA表达,用PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染法检测LOH和MSI。结果在正常肝组织未见P57kip2mRNA表达,癌周肝硬化组与肝癌组阳性表达率均为26.7%(8/30)。3个位点均未发生LOH;在2个微卫星位点发生MSI,MSI总阳性率为16.7%。D11S1760位点发生MSI与P57kip2mRNA表达有关联性(P<0.05)。结论P57kip2mRNA表达异常提示其可能在HCC发生过程中起重要作用。MSI可能是肝癌发生过程中P57kip2mRNA表达异常的原因之一。     

散发性胆囊癌nm23-H1基因遗传不稳定性与错配修复基因hMLH1和hMSH2蛋白表达的研究

目的:研究人类17号染色体D17S396位点微卫星不稳定性和杂合性缺失,对nm23-H1蛋白表达的影响,同时检测错配修复基因hMLH1和hMSH2蛋白的表达,为揭示nm23-H1基因、hMLH1和hMSH2基因与肿瘤发生和转移机制提供实验依据.方法:采用石蜡包埋组织抽提DNA、PCR-SSCP、常规银染、Envision免疫组织化学等方法,对50例胆囊癌及其相应的正常组织,进行D17S396位点MSI、LOH的检测和nm23-H1、hMLH1和hMSH2蛋白表达研究.结果:①原发性胆囊癌D17S396位点遗传不稳定发生率为42.55%,LOH的发生率与肿瘤组织分化程度差异显著(P＜0.05);在肝脏侵润和淋巴转移组高于无肝脏侵润和无淋巴转移组(P＜0.01),在NevinⅣ+Ⅴ期高于Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ期(P＜0.01);而MSI发生率则相反;②nm23-H1蛋白阳性率为46.81%,在淋巴转移组低于无淋巴转移组(P＜0.01);NevinⅣ+Ⅴ期低于Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ期(P＜0.05);③hMLH1和hMSH2蛋白阳性率分别为51.06%和42.55%,hMLH1蛋白表达在有无淋巴转移组和Nevin分期有显著差异(P＜0.01),肝脏侵润组低于无肝脏侵润组(P＜0.05);④MSI阳性组中hMLH1蛋白阳性率显著高于MSI阴性组(P＜0.05).LOH阳性组中nm23-H1和hMSH2蛋白阳性率显著低于LOH阴性组(P＜0.05);⑤hMSH2蛋白阳性组中nm23-H1蛋白表达明显高于hMSH2蛋白阴性组(P＜0.05).结论:nm23-H1基因的遗传不稳定性可能是胆囊癌发生、发展的一个重要分子机制.nm23-H1基因的MSI和LOH,通过相互独立的途径调控胆囊癌的发生和转移.hMLH1/hMSH2表达异常可能是胆囊癌的早期分子事件.提高胆囊癌局部nm23-H1、hMLH1和hMSH2蛋白的表达,可减缓肿瘤的侵润转移并提高预后率.     

散发性胆囊癌nm23-H1基因遗传不稳定性与错配修复基因hMLH1和hMSH2蛋白表达的研究

目的： 研究人类17号染色体D17S396位点微卫星不稳定性和杂合性缺失，对nm23-H1蛋白表达的影响，同时检测错配修复基因hMLH1和hMSH2蛋白的表达，为揭示nm23-H1基因、hMLH1和hMSH2基因与肿瘤发生和转移机制提供实验依据。方法: 采用石蜡包埋组织抽提DNA、PCR-SSCP、常规银染、Envision免疫组织化学等方法，对50例胆囊癌及其相应的正常组织，进行D17S396位点MSI、LOH的检测和nm23-H1、hMLH1和hMSH2蛋白表达研究。结果: ①原发性胆囊癌D17S396位点遗传不稳定发生率为42.55%，LOH的发生率与肿瘤组织分化程度差异显著（P <0.05）；在肝脏侵润和淋巴转移组高于无肝脏侵润和无淋巴转移组(P <0.01)，在NevinⅣ+Ⅴ期高于Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ期(P <0.01)；而MSI发生率则相反；②nm23-H1蛋白阳性率为46.81%，在淋巴转移组低于无淋巴转移组(P <0.01)；NevinⅣ+Ⅴ期低于Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ期(P <0.05)；③hMLH1和hMSH2蛋白阳性率分别为51.06%和42.55%，hMLH1蛋白表达在有无淋巴转移组和Nevin分期有显著差异(P <0.01)，肝脏侵润组低于无肝脏侵润组(P <0.05)；④MSI阳性组中hMLH1蛋白阳性率显著高于MSI阴性组(P <0.05)。LOH阳性组中nm23-H1和hMSH2蛋白阳性率显著低于LOH阴性组（P <0.05）；⑤hMSH2蛋白阳性组中nm23-H1蛋白表达明显高于hMSH2蛋白阴性组（P<0.05）。结论:nm23-H1基因的遗传不稳定性可能是胆囊癌发生、发展的一个重要分子机制。nm23-H1基因的MSI和LOH，通过相互独立的途径调控胆囊癌的发生和转移。hMLH1/hMSH2表达异常可能是胆囊癌的早期分子事件。提高胆囊癌局部nm23-H1、hMLH1和hMSH2蛋白的表达，可减缓肿瘤的侵润转移并提高预后率。     

头颈部鳞癌的微卫星不稳定性和杂合性丢失的初步研究

目的:探讨头颈部鳞癌的微卫星不稳定性(MSI)及杂合性丢失(LOH)。方法:选择来自3、5、6、8、9、13、17和18号染色体的15个微卫星标志对36例头颈部鳞癌标本和相应的外周血进行微卫星分析。结果:36例头颈部鳞癌中,27.8%(10/36)分别有1-8个位点存在MSI,MSI发生率较高的位点为:D17S520(22.9%)、D6S105(16.7%)和D8S264(13.9%)。在9p21-p22和3p14等处存在一定的LOH。微卫星异常的检出率与肿瘤分期、分级无相关性。结论:提示MSI是头颈部鳞癌中较为常见的遗传学变化,染色体9p21-p22和3p14区域可能存在与头颈部鳞癌有关的抑癌基因。     

中国人胃癌骨形态发生蛋白3基因遗传的不稳定和甲基化

目的 探讨骨形态发生蛋白3(BMP3)基因遗传不稳定性及异常甲基化与胃癌进展的关系,为揭示BMP3基因作用机制和胃癌发生发展机制提供实验依据. 方法 采用聚合酶链反应-单链构象多态(PCR-SSCP)技术分析中国人胃癌BMP3基因D4S2922、 D4S2964位点微卫星不稳定性(MSI)和杂合性缺失(LOH);使用甲基化特异PCR法检测BMP3基因启动子的甲基化状况. 结果 在本实验中,50例胃癌标本BMP3基因微卫星位点MSI、 LOH的阳性率分别为16.00%和20.00%,并且LOH检出率在胃癌的TNM Ⅲ+Ⅳ期高于Ⅰ+Ⅱ期(P<0.01),并随淋巴转移的发生而增高(P<0.01).45例胃癌标本中BMP3基因启动子区域甲基化阳性率为64.44%,其检出率与胃癌分化程度、浆膜浸润、淋巴转移及TNM分期均无关.此外,MSI阴性组的甲基化阳性率为71.05%, 显著高于MSI阴性组的28.58%(P<0.05). 结论 BMP3基因遗传不稳定和启动子甲基化存在于胃癌的发生发展中.LOH多发生于胃癌的晚期阶段并赋予胃癌高侵袭、预后差的表型.BMP3基因启动子高甲基化可能是胃癌发生因素之一.     

胃肠癌nm23H1基因遗传不稳定性及其与临床病理特性的关系

目的： 研究中国人17号染色体D17S396位点微卫星不稳定性（MSI）和杂合性缺失（LOH），对胃肠癌nm23H1蛋白表达的影响，阐明nm23H1基因遗传不稳定性与胃癌、结肠癌进展的关系，为临床治疗提供实验依据。方法: 采用石蜡包埋组织抽提DNA、PCR-单链构象多态性（SSCP）、常规银染、Envision免疫组织化学和Leica-Qwin计算机图像分析等方法，对40例石蜡包埋胃癌标本和30例石蜡包埋结肠癌标本及其相应的正常组织，进行D17S396位点MSI、LOH的检测和nm23H1蛋白表达研究。 结果: D17S396位点MSI检出率在胃癌、结肠癌的TNM Ⅰ+Ⅱ期高于Ⅲ+Ⅳ期，并且胃癌MSI发生率随着淋巴结转移的发生而降低。LOH检出率在胃癌、结肠癌的TNM Ⅲ+Ⅳ期高于Ⅰ+Ⅱ期，并随淋巴转移的发生而增高。nm23H1蛋白阳性率在胃癌、结肠癌的TNMⅠ+Ⅱ期显著高于Ⅲ+Ⅳ期，无淋巴结转移组显著高于淋巴结转移组。 结论: MSI和LOH通过相互独立的途径调控胃癌、结肠癌的进展。MSI是胃癌、结肠癌的早期分子标志,LOH多发生于胃癌、结肠癌的晚期阶段并赋予癌细胞高侵袭、预后差的表型。     

乳腺癌和导管增生病变与1p染色体不稳定的关系

目的检测乳腺普通型导管增生(usual dutal hyperplasia,UDH)、乳腺不典型增生(atypical dutal hyperplasia,ADH)、乳腺导管原位癌(dutal carcinoma in situ,DCIS)及乳腺浸润性导管癌(invasive dutal carcinoma,IDC)中染色体1p微卫星杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH)/微卫星不稳定(microsatellite instability,MSI)的改变规律,探讨乳腺导管增生病变进展为IDC的遗传学改变特征。方法应用PCR法检测20例UDH、7例ADH、25例DCIS、25例IDC石蜡包埋组织,8%尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染检测染色体1p区间微卫星位点D1S193、D1S463、D1S2881、D1S2885、D1S234、D1S252的LOH/MSI。结果染色体1p的每个位点均发生LOH/MSI,其发生的频率UDH为55.0%、ADH为42.9%、DCIS为64.0%、IDC为72.0%,各组间差异无显著性(P0.05);微卫星位点D1S193、D1S2881、D1S2885、D1S252、D1S234在各组中LOH/MSI的频率差异均无显著性(P0.05)。D1S463的频率在UDH组为5.0%、ADH组为0、DCIS组为45.0%、IDC组为40.0%,其中UDH组与ADH组明显低于DCIS组、IDC组(P0.008)。结论 1p染色体遗传学不稳定是乳腺癌发生的早期事件,D1S463位点的改变可能在乳腺导管增生性病变进展为乳腺癌中起关键作用。     

肝细胞癌nm23H1基因遗传不稳定性与临床病理特征的相关性研究

目的： 研究人类17号染色体D17S396位点微卫星不稳定性和杂合性缺失，对肝细胞癌nm23H1蛋白表达的影响，阐明nm23H1基因遗传不稳定性与肝细胞癌及临床病理特征的关系，为揭示nm23H1基因作用机制和肿瘤发生、转移机理提供实验依据。方法： 采用石蜡包埋组织抽提DNA，PCR-单链构象多态性（PCR-SSCP），常规银染，Envision免疫组织化学和Leica-Qwin计算机图像分析等方法进行nm23H1基因遗传不稳定性研究。 结果： ① 48例肝细胞癌D17S396位点遗传不稳定性的发生率为35.42%。LOH的发生率在有无淋巴结或远处转移和有无肝内转移或门静脉栓的癌组织中有显著差异（P<0.01），临床TNM分期Ⅲ期LOH的发生率显著高于Ⅰ、Ⅱ期（P<0.01）。此外，在侵袭转移高危组LOH的发生率显著高于侵袭转移低危组 (P<0.01)。MSI检出率与肝细胞癌临床病理参数均无关。② nm23H1蛋白阳性率为56.25%，nm23H1蛋白阳性率在Edmondson分级Ⅲ +Ⅳ组低于Ⅰ+ Ⅱ组（P<0.01） ，在有淋巴或远处转移组显著低于无淋巴或远处转移组（P<0.01）,TNM分期Ⅲ期显著低于Ⅰ+Ⅱ期（P<0.01）；在侵袭转移高危组中nm23H1蛋白阳性率显著低于侵袭转移低危组 (P<0.01)。此外，计算机图像定量分析显示，在各临床病理参数影响下，nm23H1蛋白的表达强度没有差异。③ LOH阳性组中nm23H1蛋白阳性率为27.27％，显著低于LOH阴性组64.86％，两者差异显著（P<0.05）。结论： nm23H1基因的MSI和LOH通过相互独立的途径调控肝细胞癌的发生和转移，后者可抑制肝细胞癌局部nm23H1蛋白的表达，并赋予肝细胞癌高转移、预后差的特性。提高肝细胞癌局部nm23H1蛋白的表达，可减缓肿瘤的侵袭转移倾向，并改善预后。     

Involvement of genetic instability in the downregulation of sFRP1 in Chinese patients with hepatocellular carcinoma

Secreted frizzled‐related protein 1 (sFRP1) is a new tumor suppressor based on recent researches, but the correlation of the genetic instability of sFRP1 gene with the clinicopathologic features of the hepatocellular carcinoma (HCC) has not been studied in Chinese people. In this study, 42 pairs of paraffin‐embedded HCC and adjacent non‐carcinoma tissues were examined for the loss of heterozygosity (LOH) and microsatellite instability (MSI) of two microsatellite markers D8S532 and D8S1722 located in the vicinity of the sFRP1 gene. Envision immunohistochemistry was used to assess the expression of sFRP1. We found that the reduced expression of the sFRP1 protein was frequently observed in Chinese patients with HCC, which may at least partially result from the genetic instability, especially LOH. The LOH‐associated sFRP1 downregulation may play an important role in the development of HCC. Anat Rec, 2010. © 2010 Wiley‐Liss, Inc.     

Allelic alterations in nontumorous liver tissues and corresponding hepatocellular carcinomas from chinese patients

Allelic imbalance may play an important in tumor progression in hepatocarcinogenesis, but the genetic background of the corresponding nontumorous liver in hepatocellular carcinoma (HCC) is not well defined. We studied the incidence of loss of heterozygosity (LOH) and microsatellite instability (MSI) by microsatellite analysis in both nontumorous livers and the corresponding tumors, by comparing them with the normal DNA from Chinese patients with resected primary HCCs. We also evaluated the pathologic significance of the alterations. We used 18 highly polymorphic microsatellite markers on chromosomes 1, 3, 4, 7, 8, 9, 13, 16, 17, and 18. Our results showed that 70.6% (24 of 34) of the HCCs exhibited LOH at 1 or more loci, and that the overall fractional allelic loss (FAL) was 0.169. MSI was observed in only 1 tumor. In contrast, the nontumorous livers of the HCCs showed a very low incidence of LOH, with only a single LOH detected in 1 of 34 (2.9%) of the nontumorous livers, with an overall FAL index of 0.005. Tumors with LOH at 1 or more loci had significantly more frequent venous invasion (P = 0.019). Allelic loss at locus D9S199 (9p23) was seen more frequently in larger tumors (P = 0.031), and, less significantly, allelic loss at locus D16S516 (16q24.1) was seen more frequently in larger tumors (P = 0.059). LOH was common in predominantly hepatitis B virus-associated HCCs from Chinese patients. However, LOH or MSI in the corresponding cirrhotic or noncirrhotic livers was uncommon.     

Frequent microsatellite alterations in a predominantly younger age of onset breast cancer population

Microsatellite instability (MSI) and loss of heterozygosity (LOH) was investigated in paired tumour and normal tissue DNA from 108 predominantly premenopausal breast cancer patients (under age 45 years at presentation) for 25 simple repeat loci interspersed across 11 chromosomes. MSI was observed at a single locus in 69 (64%) patients; 41 of these had instability at more than one site. Greatest frequency of MSI was at loci D2S1356 (33%), D2S2739 (22%), D3S1766 (21%) and D13S796 (20%). LOH was seen at a single site in 55% of patients and at two or more sites in 27 patients with greatest frequency at D2S1356 (33%), D2S443 (19%) and D17S1299 (18%). Both mutations were found in the same patient but at different loci. Clearly, choice of loci is a determining factor in assessing genomic instability. The relatively high frequency of MSI may also reflect peculiarities of this younger patient population. Occurrence of MSI or LOH was unrelated to clinical stage, nodal status, tumour size or grade or steroid receptor status. It was independent of mutations detected in exons 5-9 of the p53 gene. There was no significant association with survival. The lack of such correlations reflects a random disabling mechanism that may equally affect genes promoting cell death as well as growth.