姜黄素对ERS诱导NASH大鼠肝细胞保护作用的研究

目的:探讨姜黄素是否通过抑制内质网应激(ERS)来减轻非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝细胞凋亡,从而发挥对肝脏的保护作用。方法:30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(n=10)、模型组(n=10)及姜黄素组(n=10)。模型组和姜黄素组采用高脂饮食喂养4周以建立NASH模型。继续喂养4周,姜黄素组每日给予姜黄素(200 mg/kg)灌胃,模型组与正常对照组给予等量生理盐水。4周后处死大鼠,留取血液及肝脏组织,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平;HE染色观察肝组织病理学变化;Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)蛋白的表达;TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠血清ALT和AST水平均显著升高,姜黄素组大鼠血清ALT和AST较模型组显著降低(P0.05);同时,姜黄素组大鼠的肝细胞脂肪变性及炎性程度均较模型组减轻,未见明显坏死灶。模型组GRP78和CHOP蛋白的表达水平均较正常对照组显著增加,姜黄素组GRP78和CHOP的表达水平较模型组显著降低(P0.01)。TUNEL结果表明,模型组大鼠肝组织内凋亡细胞较正常对照组增多,姜黄素组大鼠的凋亡肝细胞较模型组减少。结论:高脂饮食能诱发肝脏细胞发生过度ERS,从而启动细胞凋亡,导致NASH的发生。姜黄素减轻肝细胞凋亡的作用机制可能与其抑制ERS有关。     

miR-21通过靶向PDCD4减轻小鼠心脏缺血再灌注损伤

目的探讨miR-21对小鼠心脏缺血再灌注损伤的影响及其机制。方法 40只C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、agomiR-21组和antagomiR-21组,结扎心冠状动脉前降支进行缺血再灌注损伤造模。agomiR-21组和antagomiR-21组分别给予miR-21的激动剂和拮抗剂,对照组和模型组给予等体积的生理盐水。给药4周后,Elisa检测血清炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β表达水平;HE染色检测心肌组织病理变化,原位缺口末端转移酶标记法(TUNEL)检测小鼠心肌细胞凋亡水平;Western blot检测各组小鼠心肌组织中程序性细胞死亡因子4(PDCD4)的蛋白表达量;荧光素酶报告实验验证miR-21与PDCD4靶向关系;心肌细胞H9C2体外转染PDCD4的siRNA,然后流式细胞仪检测H9C2细胞凋亡水平。结果与模型组比较,agomiR-21组血清炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著减少(P0.05),antagomiR-21组则显著增加;与模型组相比,agomiR-21组心肌组织病理变化显著缓解,且心肌细胞凋亡显著减少(P0.05),miR-21靶基因PDCD4蛋白表达量显著下调(P0.05),antagomiR-21组心肌组织病变加重,心肌细胞凋亡显著增加(P0.05),PDCD4蛋白表达量显著上调(P0.05);体外抑制PDCD4表达后心肌细胞H9C2凋亡显著减少(P0.05)。结论 miR-21可能通过靶向PDCD4减轻小鼠心脏缺血再灌注损伤。     

过表达miR-122对异氟烷致PC12细胞损伤的保护作用

目的 探讨miR-122在异氟烷导致的PC12细胞损伤中的作用.方法 将PC12细胞分为对照组、异氟烷组、阴性对照组(NC组)和miR-122过表达组,除对照组外,其余组细胞均用2％异氟烷+21％O2+5％CO2处理6h,miR-122过表达组和NC组在用异氟烷处理前通过脂质体2000将miR-122 mimic和mimic-NC转染细胞.通过RT-qPCR检测各组细胞中miR-122表达水平;MTT检测各组细胞处理0、24、48、72h后的细胞活力;ELISA试剂盒检测各组细胞MDA、SOD、GSH-Px水平;通过流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;Western-blot检测各组细胞Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3蛋白表达.结果 与对照组相比,异氟烷组细胞中miR-122相对表达量、24、48、72h细胞吸光度值、Bcl-2蛋白表达、SOD和GSH-Px水平下降(均P<0.05),MDA水平、细胞凋亡率、Bax和cleaved-Caspase-3蛋白表达升高(均P<0.05).与异氟烷组相比,miR-122过表达组miR-122相对表达量、24、48、72h细胞吸光度值、Bcl-2蛋白表达、SOD和GSH-Px水平显著升高(P<0.05),MDA水平、细胞凋亡率、Bax和cleaved-Caspase-3蛋白表达下降(P<0.05).结论 过表达miR-122能够改善异氟烷诱导的PC12细胞活力降低和氧化应激水平,并抑制细胞凋亡.     

下调miR-92a对非小细胞肺癌细胞增殖及血管生成因子表达的影响

目的探讨miR-92a下调对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖及血管生成的影响。方法将NSCLC中A549细胞分为三组培养:A549组(未转染A549细胞)、sc-siRNA组(转染sc-siRNA的A549细胞)、miR-92a-siRNA组(转染miR-92a-siRNA的A549细胞)。分别采用RT-PCR和Western blot检测A549细胞和正常人支气管上皮(human bronchial epithelial,HBE)细胞中miR-92a相对表达量、PTEN、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白相对表达水平。采用活细胞计数法和结晶紫染色实验检测各组A549细胞的增殖能力。结果 miR-92a在A549组细胞中的相对表达量高于HBE细胞(P 0. 05); A549组细胞中PTEN蛋白表达水平低于HBE细胞(P 0. 05),VEGF蛋白表达水平高于HBE细胞(P 0. 05); miR-92a-siRNA组细胞中miR-92a相对表达量降低(P 0. 05),PTEN蛋白表达水平升高(P 0. 05),VEGF蛋白表达水平降低(P 0. 05); miR-92a-siRNA组细胞中PI3K和Akt蛋白表达水平均下降(P 0. 05); miR-92a-siRNA组细胞数目减少,细胞增殖能力减弱。结论 NSCLC中A549细胞的miR-92a表达明显上调,miR-92a基因沉默能明显抑制细胞增殖、血管生成,PTEN和VEGF相关PI3K/Akt信号通路可能在此过程中发挥重要作用。     

胰腺癌中miR-27a靶基因PSMA1的预测及鉴定

目的 软件预测并筛选miR-27a可能的靶基因,结合胰腺癌比较蛋白质组学结果中表达下调的蛋白,进一步检测胰腺癌中miR-27a的靶基因并进行验证.方法 采用生物信息学预测软件TargetScan、PicTar以及miranda预测miR-27a的靶基因,结合前期比较蛋白质组学的结果,筛选出miR-27a的可能靶基因;构建靶基因3'非翻译区(UTR)的表达载体,双荧光素酶报告基因检测系统验证miR-27a对靶基因的靶向作用;胰腺癌肿瘤细胞系PANC-1和BxPC-3中转染miR-27a mimics或微小RNA阴性对照序列,Western blot检测靶蛋白的表达情况.结果 软件预测与蛋白质组学分析结合筛选出miR-27a的靶基因为PSMAl.双荧光素酶报告基因检测系统显示,与对照组相比miR-27a对野生型PSMA1的3'UTR具有靶向作用,实验组较阴性对照组相对活性值下降19.14％,差异具有统计学意义(P=0.016);而对突变型PSMA1 3'UTR的靶向作用消失,实验组与阴性对照组相比差异无统计学意义(P=0.249).Western blot分析显示转染miR-27a mimics组PSMA1蛋白的相对表达量明显低于阴性对照组,PANC-1细胞实验组的PSMA1相对表达量为0.71±0.01;BxPC-3细胞实验组的PSMA1相对表达量为0.58±.0.04,P值均＜0.01.结论 胰腺癌中PSMA1是miR-27a的直接靶基因.     

miR-21调控TIMP-3影响LPS诱导下RAW264.7细胞中MMP-2和MMP-9表达

目的:探讨miR-21对LPS刺激下RAW264. 7中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9表达的影响及机制。方法:对RAW264. 7细胞给予10μg/ml LPS刺激,24 h后采用实时荧光定量PCR法和ELISA法检测miR-21和MMP-2、MMP-9在LPS组与对照组中的表达水平,并运用Pearson分析miR-21和MMP-2、MMP-9表达的相关性。构建外源性miR-21干扰的LPS刺激下RAW264. 7细胞模型,采用Western blot检测miR-21对MMP-2、MMP-9和TIMP-3蛋白表达影响。结果:LPS组miR-21、MMP-2和MMP-9表达水平较对照组上升,两者呈正相关(P0. 05)。通过miR-21模拟物(miR-21 mimic)外源性上调miR-21表达,MMP-2、MMP-9表达升高,TIMP-3表达降低(P0. 05);通过miR-21抑制剂(miR-21 inhibitor)抑制miR-21表达,MMP-2、MMP-9表达降低,TIMP-3表达升高(P0. 05)。结论:miR-21能促进RAW264. 7细胞MMP-2和MMP-9表达,其机制可能与靶向抑制TIMP-3有关。     

丹皮酚通过抑制miR-21表达减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化

目的研究丹皮酚(PAE)通过抑制微小RNA-21(miR-21)减轻博莱霉素(BLM)诱导肺纤维化的相关机制。方法将SD大鼠随机分为对照组、BLM组、阳性对照(PC)组、PAE组,比较各组大鼠的肺纤维化相关指标,miR-21、Smad7的mRNA相对表达水平,及Smad7、TGF-β1、COLIA1、α-SMA蛋白水平;将制备好的纤维细胞分为对照组,TGF-β1组,PAE-L组,PAE-M组,PAE-H组,miR-21抑制剂组,检测各组细胞中miR-21、Smad7的mRNA相对表达水平及Smad7、COLIA1、α-SMA蛋白水平,并验证miR-21与Smad7的靶向关系。结果与对照组相比,BLM组大鼠的肺系数、羟脯氨酸、肺纤维化程度,miR-21mRNA表达水平,TGF-β1、COLIA1、α-SMA蛋白表达水平显著升高均显著升高(P0.01),Smad7的mRNA及蛋白表达水平显著降低(P0.01),与BLM组相比,PC组和PAE组大鼠的肺系数、羟脯氨酸、肺纤维化程度均显著降低(P0.01);与BLM组相比,PC组和PAE组大鼠肺组织中miR-21 mRNA水平,TGF-β1、COLIA1、α-SMA蛋白水平显著降低,Smad7的mRNA及蛋白水平显著升高(P0.01);与对照组相比,TGF-β1组成纤维细胞中miR-21的mRNA及COLIA1、α-SMA蛋白水平显著升高(P0.01),Smad7的m RNA及蛋白水平显著降低(P0.01);与TGF-β1组相比,PAE-L组、PAE-M组、PAE-H组、miR-21 inhibitor组成纤维细胞中miR-21的mRNA水平及COLIA1、α-SMA蛋白水平显著降低(P0.01),Smad7的mRNA及蛋白表达水平显著升高(P0.01);靶基因数据库预测及双荧光素酶报告实验表明,miR-21靶向抑制Smad7。结论 PAE可能通过抑制miR-21表达靶向促进Smad7表达,并抑制TGF-β1表达来减轻BLM诱导的肺纤维化。     

替吉奥下调大鼠胃癌前病变组织Notch1和Jagged1的表达

目的:探讨替吉奥治疗大鼠胃癌前病变的效果以及对Notch信号通路蛋白Notch1和Jagged1表达情况的影响。方法:将60只大鼠随机取等分3组:对照组、模型组、替吉奥治疗组。用100μg/ml的MNNG溶液灌胃,制作大鼠胃癌模型。模型建立成功后治疗组给予替吉奥治疗药物,对照组以及模型组给予等体积的生理盐水。PCR法检测胃癌前病期组织Notch信号通路Notch1和Jagged1的基因表达水平; Western blot检测Notch1和Jagged的蛋白表达量。结果:PCR检测结果显示,Notch1和Jagged1在对照组中仅有少量的表达,与对照组相比,模型组的表达出现了显著增高(P0. 05),相比与模型组,替吉奥治疗组表达有明显下降,仍高于对照组的表达(P0. 05); Western blot检测结果表明,Notch1和Jagged1在对照组中蛋白仅有微量的基础表达,与对照组相比,模型组的两蛋白表达水平明显地上升(P0. 05),同模型组相比,替吉奥治疗组的两蛋白表达均有所下降,但仍高于对照组(P0. 05)。结论:替吉奥治疗可显著降低大鼠胃癌前病变组织Notch1和Jagged1蛋白的表达。     

桑寄生提取物联合miR-375对骨关节炎软骨细胞活力和凋亡的影响

目的:研究桑寄生提取物(SJS)联合微小RNA-375(miR-375)对骨关节炎软骨细胞活力和凋亡的影响及其作用机制。方法:将人原代骨性关节软骨细胞RPOC分为对照组(control)组、白细胞介素1β(IL-1β)组、IL-1β+SJS低剂量(SJS-L)组、IL-1β+SJS中剂量(SJS-M)组、IL-1β+SJS高剂量(SJS-H)组、IL-1β+anti-miR-NC组、IL-1β+anti-miR-375组、IL-1β+SJS-H+miR-NC组、IL-1β+SJS-H+miR-375组。MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,qPCR检测miR-375的表达,Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、P21、Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白的水平。结果:与control组比较,IL-1β组的RPOC活力(24 h、48 h和72 h)及cyclin D1和Bcl-2蛋白表达明显降低(P0. 05),而P21、Bax和caspase-3蛋白的水平、细胞凋亡率及miR-375表达量均显著升高(P0. 05)。与IL-1β组比较,IL-1β+SJS-M组和IL-1β+SJS-H组RPOC的活力(24 h、48 h和72 h)和cyclin D1表达显著升高(P0. 05),P21表达量显著降低(P0. 05);IL-1β+SJS-H组细胞的凋亡率、Bax及caspase-3蛋白水平、miR-375表达量明显减少(P0. 05),Bcl-2蛋白水平显著提高(P0. 05)。与IL-1β+anti-miR-NC组比较,IL-1β+anti-miR-375组RPOC中miR-375表达量、P21、Bax、caspase-3蛋白水平、细胞凋亡率明显下降(P0. 05),cyclin D1、Bcl-2蛋白水平、细胞活力(24 h、48 h和72h)显著升高(P0. 05)。过表达miR-375能逆转SJS对IL-1β作用的RPOC活力、凋亡的影响。结论:桑寄生提取物可以促进IL-1β作用的RPOC活力,并抑制其凋亡,其机制与调控miR-375表达有关。     

miR-150-5p靶向SIRT1提高肝癌细胞系HepG2放疗敏感性

目的探究miR-150-5p靶向SIRT1提高肝癌细胞放射敏感性的作用机制。方法用分次放疗放射递增法诱导建立放射抵抗型细胞株(RR-HepG2);RT-qPCR检测HepG2和RR-HepG2在不同放射剂量下miR-150-5p的表达水平;细胞克隆实验检测相同放射剂量下两种细胞的放疗敏感性;流式细胞计量术和Western blot检测过表达miR-150-5p对HepG2凋亡的影响;双荧光素酶报告基因法检测miR-150-5p与SIRT1的关联;细胞克隆实验和Western blot检测过表达SIRT1后,细胞的放疗敏感性和凋亡蛋白的变化。结果与亲代HepG2比较,相同放射剂量下,RRHepG2组miR-150-5p的表达量均显著降低(P<0. 05);放射处理后,与control、agomiR-NC组比较,agomiR-150-5p组的细胞存活分数显著降低,敏感性高(P<0. 05),Bax、caspase-9蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率显著升高;双荧光素酶报告基因法验证miR-150-5p靶向调控SIRT1。与agomiR-NC组比较,野生型(WT) agomiR-150-5p荧光素酶活性显著降低,SIRT1蛋白水平显著降低(P<0. 05);与anta-agomiR-NC比较,野生型(WT) anta-agomiR-150-5p荧光素酶活性显著升高,SIRT1蛋白水平显著升高(P<0. 05);放射处理后,与agomiR-NC组比较,agomiR-150-5p组的细胞存活分数显著降低,Bax、caspase-9蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0. 05);与agomiR-150-5p+vector组比较,agomiR-150-5p+SIRT1组的细胞存活分数显著升高,Bax、caspase-9蛋白表达水平显著降低,Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0. 05)。结论 miR-150-5p靶向SIRT1,下调其表达,提高肝癌细胞放射敏感性,可为临床肝癌放射治疗增敏提供靶点。     

miR-21通过下调ADAMTS-1表达促进大鼠肺纤维化

目的探讨微小RNA21(miR-21)对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化的影响及相关机制。方法收集特发性肺纤维化(IPF)患者及正常人的外周血各20份,采用荧光实时定量PCR检测miR-21表达。将45只SD大鼠随机分为对照组、miR-21激动剂(miR-21agomir)和miR-21拮抗剂(miR-21antagomir)组,每组15只。经气管内注入博莱霉素A5建立肺纤维化模型后,分别给予生理盐水、miR21 agomir、miR21 antagomir尾静脉注射,第28天处死所有大鼠。取出肺组织,行HE和Masson染色,通过荧光实时定量PCR和Western blot法分别检测含1型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS-1)、1型胶原蛋白(Col1)、Col3 mRNA与蛋白表达,分离血清,ELISA检测血清1型前胶原蛋白羧基端前肽(P1CP)和3型前胶原蛋白氨基端前肽(P3NP)的含量。结果 IPF患者外周血miR-21表达水平明显高于正常人。miR-21 agomir组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度明显重于对照组,而miR-21 antagomir组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度显著轻于对照组。与对照组相比,miR-21 agomir组ADAMTS-1mRNA与蛋白表达水平降低,Col1、Col3的mRNA与蛋白表达水平及血清P1CP、P3NP水平均增加。但miR-21 antagomir组ADAMTS-1 mRNA与蛋白表达水平较对照组升高,Col1、Col3的mRNA与蛋白表达水平及血清P1CP、P3NP含量较对照组减少。结论 miR-21促进博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化进展,其机制可能与下调ADAMTS-1表达及随后增加肺组织Col1、Col3含量有关。     

miR-504靶向CHD1L抑制乳腺癌细胞侵袭的分子机制

目的探讨miR-504靶向染色质解旋酶DNA结合蛋白(chromodomain helicase/ATPase DNA binding protein 1-like gene,CHD1L)抑制乳腺癌细胞侵袭的分子机制。方法 qRT-PCR检测人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)与乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MCF-7)中miR-504的表达量,同时检测miR-504在MDA-MB-231细胞中的转染效率;双荧光素酶实验检测miR-504与CHD1L是否存在结合靶点;qRT-PCR及Western blot法检测CHD1L mRNA和蛋白的表达水平;Transwell侵袭实验检测MDAMB-231细胞的侵袭能力;Western blot法检测p-Akt、MMP-2和MMP-9的表达情况。结果乳腺癌细胞中miR-504的表达量明显低于人正常乳腺上皮细胞(P 0. 05);miR-504在MDA-MB-231/miR-504组中的表达水平明显增高(P 0. 05);双荧光素酶实验检测显示miR-504能与CHD1L mRNA的3'-UTR结合;此外,过表达miR-504后CHD1L mRNA的表达水平无显著变化,但CHD1L蛋白表达水平显著降低(P 0. 05);与MDA-MB-231/NC组相比,MDA-MB-231/miR-504组侵袭能力明显降低,而MDA-MB-231/miR-504+CHD1L组侵袭能力比MDA-MB-231/miR-504+Con组明显增加;用表皮生长因子分别刺激转染不同质粒的MDA-MB-231细胞,与MDA-MB-231/NC组相比,MDA-MB-231/miR-504组中p-Akt、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显降低(P 0. 05),而MDA-MB-231/miR-504+CHD1L组中p-Akt、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平与MDA-MB-231/miR-504+Con组相比明显增加(P 0. 05)。结论 miR-504靶向CHD1L通过PI3K/Akt/MMP信号通路抑制乳腺癌细胞的侵袭。     

姜黄素对急性肺损伤大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶和内皮型一氧化氮合酶表达的影响

目的:探讨姜黄素对内毒素(LPS)致急性肺损伤(ALI)模型大鼠肺组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。方法:雄性SD大鼠采用随机数字表法分为对照组、急性肺损伤模型组及姜黄素治疗组。采用一次性气管内滴注内毒素4 mg/kg制备急性肺损伤模型大鼠,治疗组于造模前15 min腹腔注射姜黄素200 mg/kg,于造模后3、6、12 h及24 h取肺组织,观察并比较各组肺组织形态学改变,并检测肺湿/干重比、肺含水量和肺组织中NO的含量,real-time PCR及免疫印迹法检测iNOS和eNOS的mRNA和蛋白表达。结果:模型组大鼠肺湿/干重比、肺组织含水量及NO含量均较对照组明显升高,iNOS的mRNA和蛋白表达量较对照组显著上调,而eNOS的mRNA和蛋白表达量较对照组显著下调。与模型组相比,姜黄素治疗组肺湿/干重比、肺含水量、NO含量均明显降低,iNOS的mRNA和蛋白表达量明显下调,eNOS的mRNA和蛋白表达量明显上调。结论:姜黄素可下调内毒素致急性肺损伤模型大鼠肺组织iNOS表达,并匕调eNOS表达。     

姜黄素抑制Wnt信号通路增加胃癌细胞对顺铂的敏感性

目的 探讨姜黄素增强胃癌细胞对顺铂化疗敏感性的作用以及Wnt/β-catenin信号通路的调控机制。方法 姜黄素、顺铂单独或联合干预多耐药细胞株BGC-823/5-Fu,并将细胞分为对照组、姜黄素干预组、顺铂干预组、联合干预组。MTT试验及集落形成试验检测各组细胞增殖能力和克隆成瘤能力; Transwell小室试验检测各组细胞迁移能力。Western blot检测各组细胞E-cadherin、Vimentin蛋白及Wnt信号通路相关蛋白表达。结果 干预后72 h,联合干预组OD值低于对照组、姜黄素干预组、顺铂干预组,差异均有统计学意义(P 0. 05)。联合干预组集落形成数、穿膜细胞数均少于姜黄素干预组、顺铂干预组,差异均有统计学意义(P 0. 05)。联合干预组Wnt2及β-catenin蛋白表达低于姜黄素干预组、顺铂干预组; GSK3β蛋白表达高于姜黄素干预组、顺铂干预组,差异均有统计学意义(P 0. 05);联合干预组Vimentin蛋白表达低于姜黄素干预组(P 0. 05),与顺铂干预组比较,差异无统计学意义(P 0. 05);联合干预组E-cadherin蛋白表达与姜黄素干预组和顺铂干预组比较,差异无统计学意义(P 0. 05)。结论 姜黄素下调Wnt/β-catenin信号通路,增强胃癌细胞对顺铂的敏感性,抑制胃癌细胞上皮间质转化。     

大鼠肝脏发育成熟及癌变时miR-100的表达

目的：探讨microRNA-100(miR-100)在大鼠肝脏发育成熟和癌变时的表达。方法取新生SD乳鼠、成年SD大鼠肝组织以及经连续喂饲2-乙酰氨基芴加部分肝切除术(2-AAF/PH)诱导的SD大鼠肝癌组织,分别采用实时荧光定量PCR及FISH技术检测miR-100的表达。结果同新生SD乳鼠相比,miR-100在成年SD大鼠肝组织中表达明显升高( P<0．05)。大鼠肝脏癌变组织的miR-100表达较成年大鼠肝组织明显下降( P<0．05),接近于新生SD乳鼠miR-100的表达水平。结论 miR-100可作为SD大鼠肝脏发育成熟的标志,其表达降低可能与肿瘤形成有关。     

卵巢黏液性交界性肿瘤中K-ras基因突变及p21 ras蛋白的表达

目的：观察卵巢黏液性交界性肿瘤中K-ras基因突变及p21 ras蛋白的表达,探讨卵巢黏液性交界性肿瘤的发病机制及靶基因治疗的可能。方法采用PCR-RFLP法和免疫组化EliVision法分别检测40例卵巢黏液性交界性囊腺瘤、40例卵巢黏液性囊腺癌和20例卵巢黏液性囊腺瘤中K-ras基因突变和p21 ras蛋白的表达。结果 K-ras基因在卵巢黏液性囊腺瘤、黏液性交界性囊腺瘤和黏液性囊腺癌中的突变率分别为0、37.5%、7.5%,交界组突变率明显高于其他两组,差异有统计学意义( P<0.01)。 K-ras基因突变在卵巢黏液性交界性肿瘤年龄分组中突变,差异有统计学意义(P<0.05)。 p21ras蛋白在卵巢黏液性囊腺瘤、黏液性交界性囊腺瘤和黏液性囊腺癌中阳性率分别为5%、45%、10%,交界组阳性率明显高于其他两组,差异有统计学意义(P <0.01)。结论 K-ras基因突变及p21ras蛋白表达可能是卵巢黏液性交界性肿瘤形成的原因之一,有利于卵巢黏液性交界性肿瘤的判断,还可为临床作为靶向治疗药物分析提供病理学基础。     

白藜芦醇通过调节miR-223-3p/NLRP3通路发挥对幼年大鼠脑膜炎模型皮质神经元的保护作用

目的:探究白藜芦醇在大鼠细菌性脑膜炎(BM)模型中对皮质神经元的保护作用及机制。方法:通过小脑延髓池注射B族溶血性链球菌制作BM模型,经鼻滴注白藜芦醇,并经侧脑室注射微小RNA-223-3p(miR-223-3p)antagomir。HE染色观察脑膜炎组织病理结构的改变;Loeffler评分法评估神经功能;TUNEL染色检测神经元凋亡情况;免疫荧光染色检测白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18、胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)和离子钙结合衔接分子1(Iba1)的表达;Western blot检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、cleaved caspase-1、IL-1β和IL-18的表达水平;RT-qPCR检测miR-223-3p的表达水平;利用在线软件TargetScan查询miR-223-3p与NLRP3mRNA中是否存在互补的核苷酸序列。结果:与假手术组比较,BM模型组大鼠的脑膜增厚;神经功能评分明显降低(P0. 05);TUNEL阳性神经元数量明显增多(P0. 05);星形胶质细胞和小胶质细胞被激活;IL-1β和IL-18的免疫荧光强度明显增加(P0. 05);NLRP3、cleaved caspase-1、IL-1β、IL-18和miR-223-3p的表达水平明显升高(P0. 05)。与BM模型组比较,白藜芦醇治疗组大鼠神经功能评分明显升高(P0. 05);TUNEL阳性神经元数量明显减少(P0. 05);星形胶质细胞和小胶质细胞炎症反应被抑制;IL-1β和IL-18荧光强度明显减弱(P0. 05);NLRP3、cleaved caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达明显降低,miR-223-3p的表达水平明显上调(P0. 05)。TargetScan查询显示miR-223-3p的部分核苷酸序列与NLRP3 mRNA 3'-UTR的核苷酸序列互补。在白藜芦醇治疗的BM大鼠脑内,与antagomir对照组比较,miR-223-3p antagomir处理组的NLRP3蛋白表达明显升高(P0. 05)。结论:在幼年大鼠BM模型中,白藜芦醇可能通过调节miR-223-3p/NLRP3通路减少皮质神经元炎性死亡,从而发挥对神经元的保护作用。     

白藜三醇通过下调microRNA-21减轻快速电刺激所致心房肌细胞电重构

目的:研究白藜三醇(resveratrol,RSV)对快速电刺激(rapid electrical stimulation,RES)导致乳鼠心房肌细胞电重构时微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)表达的影响,探讨RSV通过miR-21参与电重构的可能机制。方法:采用胰酶、Ⅰ型胶原酶双酶法及差速贴壁法分离培养乳鼠心房肌细胞。通过RES建立乳鼠心房肌细胞房颤模型,心房肌细胞随机分为4组:空白对照(control)组、RSV组、RES组和RSV+RES组。为了证实RSV是否通过调控miR-21的表达参与电重构,除了上述4组,另增加过表达和沉默miR-21组:RES+阴性对照组(RES+NC组)、RES+miR-21 mimics组、RES+miR-21 mimics+RSV组、RES+miR-21 inhibitor组和RES+miR-21 inhibitor+RSV组。CCK-8法检测心房肌细胞活性以确定RSV最佳作用浓度及时间,q PCR法检测各组细胞内miR-21及L型钙离子通道CACNA1C、CACNB2 mRNA的表达水平,Western blot检测L型钙离子通道Cav1.2和Cavβ_2 的蛋白表达水平。结果:与control组相比,RES组miR-21表达明显上调(P0.05),加入RSV预处理后miR-21表达下调(P0.05)。与RES+miR-21 mimics组相比,RES+miR-21 mimics+RSV组miR-21表达下调(P0.05),而CACNA1C和CACNB2 mRNA及Cav1.2和Cavβ_2 蛋白表达量增加(P0.05)。与RES组比,RES+miR-21 inhibitor和RES+miR-21 inhibitor+RSV组的miR-21表达下调(P0.05),CACNA1C和CACNB2 mRNA及Cav1.2和Cavβ_2 蛋白表达量增加,但RES+miR-21 inhibitor组与RSV+RES组比,miR-21表达、CACNA1C和CACNB2 mRNA及Cav1.2和Cavβ_2 蛋白表达量的差异无统计学显著性。结论:在快速电刺激乳鼠心房肌细胞模拟房颤模型中,RSV干预可能通过下调miR-21表达而调控其下游靶基因这一途径来减轻心房肌细胞电重构。     

胃腺癌组织中miR-23a与转移抑制因子1的表达及意义

目的：探讨miR-23a与转移抑制因子1（MTSS1）在胃腺癌组织中的表达及其临床意义。方法：运用荧光素报告载体系统检测miR-23a直接调控的靶基因并采用Transwell侵袭实验检测miR-23a对人胃腺癌细胞的侵袭能力。收集胃腺癌患者手术标本46例,癌旁组织作为正常对照,分别运用原位杂交,免疫组织化学EnVision法检测胃腺癌组织及癌旁组织中miR-23a,MTSS1的表达水平,并对二者进行相关性分析。结果：MTSS1是miR-23a直接调控的靶基因,miR-23a下调MTSS1蛋白的表达,增强胃癌细胞的侵袭能力。在46例胃腺癌组织中miR-23a阳性表达率为87．0％（40／46）,MTSS1蛋白阳性表达率为17．4％（8／46）,分别与癌旁对照组比,差异有统计学意义（P〈0．01）;miR-23a的表达随胃腺癌临床分期演化（P〈0．05）和浸润深度增加（P〈0．01）,且有淋巴结转移的miR-23a的表达显著高于无淋巴结转移组（P〈0．05）;MTSS1l的表达随胃腺癌临床分期演化（P〈0．05）和浸润深度增加而下调（P〈0．05）,且有淋巴结转移的MTSS1的表达显著低于无淋巴结转移组（P〈0．01）;相关性分析表明,miR-23a表达与MTSS1的表达呈显著负相关（r=-0．594,P〈0．05）。结论：miR-23a通过靶向抑制MTSS1促进胃腺癌细胞生长,侵袭转移;miR-23a的高表达和MTSS1蛋白低表达可能是胃腺上皮恶性转化以及胃癌发生浸润转移的重要生物学标志,检测二者对预测胃癌侵袭及转移有重要意义。     

miR-21在哮喘患儿痰液的表达及对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的探讨miR-21在哮喘患儿及哮喘小鼠中的表达及其对气道炎症的作用。方法应用实时PCR方法检测哮喘患儿和健康儿童痰液,以及卵清蛋白诱导的哮喘小鼠和正常小鼠肺组织中miR-21的表达;化学合成miR-21模拟物与阴性对照,并分别鼻滴至哮喘小鼠,HE染色验证哮喘小鼠模型的成功建立,免疫荧光方法和western blot方法检测各组小鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与核转录因子-κB(NF-κB)的蛋白表达。结果与对照组相比,哮喘患儿痰液及哮喘小鼠肺组织中miR-21表达显著升高(P<0.01);HE染色显示哮喘模型组小鼠炎症细胞浸润明显高于正常对照组,哮喘小鼠模型成功建立。miR-21模拟物滴入后,哮喘小鼠肺组织TNF-α与NF-κB的蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论 miR-21在支气管哮喘患儿及支气管哮喘小鼠模型中高表达,miR-21模拟物能够抑制哮喘小鼠的气道炎症。