重组人血清白蛋白/干扰素α2a融合蛋白的药效学、药代动力学及安全性评价

目的对具有独立自主知识产权的注射用重组人血清白蛋白/干扰素α2a融合蛋白新药的临床前药效学、药代动力学和安全性评价进行研究。方法通过重组人血清白蛋白/干扰素α2a融合蛋白(rHSA/IFNα2a)对HepG22.2.15分泌乙型肝炎病毒(HBV)细胞作用产生的抗病毒进行体外药效学评价;以给药后的食蟹猴体内2'-5'寡腺苷酸合成酶活性作为干扰素药效学标志基因表达考察药效动力学指标;药代动力学观察了不同剂量的125I-rHSA/IFNα2a单次皮下注射给予小鼠、大鼠后,各组织器官的分布、排泄情况及rHSA/IFNα2a单次和多次皮下注射给予食蟹猴后其体内的代谢情况;安全性评价中,安全药理学研究观察了rHSA/IFNα2a对小鼠中枢神经系统及对狗呼吸和心血管系统功能的影响;毒理学研究观察了rHSA/IFNα2a单次注射给予小鼠(皮下和静脉)、食蟹猴(皮下)的毒性反应,及反复皮下注射给予大鼠和食蟹猴的毒性反应,食蟹猴反复给药的毒性试验中还伴行了毒代动力学的研究。妊娠Wistar大鼠皮下注射给予rHSA/IFNα2a对孕鼠生殖能力及胎仔的影响。结果试验药物rHSA/IFNα2a和阳性对照品(PEG-rhIFNα2a)的最大无毒剂量为3.13×103IU/ml,当以低于最大无毒剂量的rHSA/IFNα2a和阳性对照品处理HepG22.2.15细胞,显示细胞分泌HBV病毒的能力受到抑制。细胞上清液中的HBV核酸量随时间而减少,HBV的s抗原和e抗原表达也同步受到抑制,与PEG-rhIFNα2a对HBV病毒分泌的相对抑制率检测结果相同。药代动力学研究结果显示静脉rHSA/IFNα2a给药组和对照组的t1/2分别为(88.88±9.65)h和(35.81±4.91)h;食蟹猴皮下注射末端半衰期较长为61.20~83.57h。安全药理学研究表明单次皮下注射重组人血清白蛋白/干扰素α2a融合蛋白在100、300、600μg/kg剂量范围内对小鼠中枢神经系统无明显影响,与戊巴比妥钠无协同作用;在50、200μg/kg剂量范围内对狗呼吸和心血管系统无明显影响。rHSA/IFNα2a单次皮下和静脉给予小鼠的最大耐受量≥50mg/kg,单次皮下注射给予食蟹猴的耐受剂量≥10mg/kg。以100、300和1000μg/kg剂量反复皮下注射rHSA/IFNα2a给予大鼠,以50、150和500μg/kg反复皮下注射给予食蟹猴,每周给药1次,连续13周,基本安全剂量分别为1000μg/kg和500μg/kg,注射局部仅见可逆的轻度刺激性反应;多次给药后,动物体内产生抗rHSA/IFNα2a和IFNα2a的抗体,且抗体具有中和rHSA/IFNα2a活性的作用,且停药4周后,抗体滴度明显降低。多次给药后由于中和抗体的产生,血浆中的抗原量低于检测限。单次给药食蟹猴各代谢动力学参数呈现线性动力学特征。当给药剂量高达1000μg/kg时未见孕鼠母体毒性和胎仔毒性,提示rHSA/IFNα2a无致畸作用。结论获得的大量药效学、药代动力学、毒理学试验数据显示rHSA/IFNα2a具有较好的安全性、成药性和长效性,研究结果可供正在开展的临床试验研究参考。     

重组人血清白蛋白/粒细胞刺激因子融合蛋白的药效学、药理学和毒理学研究

目的对重组人血清白蛋白/粒细胞刺激因子融合蛋白(rHSA/GCSF)开展药效学、药理学和毒理学动物评价研究,以确认其安全性和有效性。方法①对rHSA/GCSF开展的药效学研究内容主要有:以恒河猴骨髓细胞为研究系统,在体外条件下培养骨髓粒细胞-巨噬细胞集落(CFU-GM),计数不同浓度的rHSA/GCSF对CFU-GM数的影响的体外药效学评价;以小鼠~(60)Coγ照射、氟尿嘧啶注射液所致的鼠白细胞低下和对~(60)Coγ射线照射致食蟹猴白细胞低下的治疗作用。②药理学研究观察了rHSA/GCSF对小鼠中枢神经系统和狗呼吸及心血管系统功能的影响。③毒理学研究考察了rHSA/GCSF静脉和皮下给予小鼠、食蟹猴的急性毒性反应,以及长期和反复给药对大鼠和食蟹猴的安全性做出评价。④rHSA/GCSF的药代/毒代试验则是对~(125)I-rHSA/GCSF不同剂量单次皮下注射给予小鼠、大鼠后,rHSA/GCSF在各器官的分布、总放射性和TCA沉淀放射性的动力学参数测定,以及对不同剂量rHSA/GCSF连续给药食蟹猴后的血浆药物浓度及代谢动力学参数开展了考察。结果①rHSA/GCSF可以使骨髓的粒白细胞系(粒系)增生活跃,骨髓粒系造血细胞及成熟中性粒细胞均明显增多;对氟尿嘧啶所致小鼠白细胞减少症有明显的治疗作用,在使用化疗药早期,可以减缓白细胞的降低,特别是可以使粒白细胞提前恢复到正常水平;rHSA/GCSF可显著缩短食蟹猴白细胞减少症放疗模型产生的白细胞低下持续时间,使外周血白细胞加速恢复,尤其以中性粒细胞的增加为主,同时对红细胞和血小板的影响不大。②从获得的PD/PK数据t_(1/2)来看:rHSA/GCSF半衰期平均值约为38.6 h;单次皮下注射rHSA/GCSF,在500、1500、3000μg/kg剂量范围内对小鼠中枢神经系统无影响,与戊巴比妥钠无协同作用;单次皮下注射rHSA/GCSF在50、200μg/kg剂量范围内对狗呼吸和心血管系统无明显影响。实验表明rHSA/GCSF单次皮下和静脉注射给予小鼠的最大耐受量(MTD)≥37.5 mg/kg,单次皮下注射给予食蟹猴的最大耐受剂量为11.6 mg/kg:长期反复给药对大鼠的基本安全剂量为300μg/kg,对食蟹猴则是≥150μg/kg。结论 rHSA/GCSF融合蛋白每4天给药1次,对放、化疗所致的动物外周血白细胞减少症具有治疗作用,与市售常规rhGCsF每天注射1次相比具有长效作用。所获得的大量药效学、药代动力学、毒理学、毒代动力学的试验数据可供正在开展的临床试验研究参考,并具有很好的指导意义。     

食蟹猴皮下注射重组人甲状旁腺素rh-PTH(1-34)毒性研究

目的:采用重组人甲状旁腺素rh2PTH(1234)对食蟹猴进行皮下注射给药六个月,停药恢复一个月长期毒性试验。旨在观察连续皮下注射给予甲状旁腺素rh2PTH(1234)对试验动物所产生的毒性反应,中毒症状,毒性作用靶器官,确定无毒性反应剂量,为临床安全用药提供参考。方法:健康成年食蟹猴24只,雌12只,雄12只,随机分为生理盐水对照组、rh2PTH(1234)5.0ug/kg/d、15.0ug/kg/d、45.0ug/kg/d体重三个剂量组。分别在给药前,给药中期,给药末期和停药恢复期进行心电图检测以及血液学、血清生化学、尿液、粪便、骨髓象及脏器病理组织学检查,并取股骨,椎骨进…     

食蟹猴皮下注射重组人甲状旁腺素rh—PTH（1—34）毒性研究

目的：采用重组人甲状旁腺素rh-PTH(1-34)对食蟹猴进行皮下注射给药六个月．停药恢复一个月长期毒性试验。旨在观察连续皮下注射给予甲状旁腺素rh-PTH(1-34)对试验动物所产生的毒性反应，中毒症状，毒性作用靶器官．确定无毒性反应剂量．为临床安全用药提供参考。方法：健康成年食蟹猴24只．雌12只．雄12只。随机分为生理盐水对照组、rh-PTH(1．34)5．0ug/kg／d、15．0ug/kg/d、45．0ug/kg／d体重三个剂量组。     

Ad5-HIVgag免疫的食蟹猴中腺病毒中和抗体与Gag特异性细胞免疫反应的研究

目的 观察不同剂量的重组腺病毒疫苗Ad5-HIVgag反复肌内注射免疫食蟹猴后,食蟹猴体内产生的腺病毒中和抗体水平及Gag特异性细胞免疫反应水平,初步探讨腺病毒中和抗体的产生对Gag特异性细胞免疫反应的影响.方法 将24只食蟹猴随机分为4组：对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组.每3周免疫1次,连续免疫5次.免疫前及免疫后不同时间点用中和实验检测动物体内腺病毒中和抗体水平,用Elispot方法检测Gag特异性细胞免疫反应水平.结果 初次免疫后3周3个实验组动物都检测到了较高水平的腺病毒中和抗体,在初次免疫后8周达到高峰,恢复期结束时略有下降.初次免疫后5周三个实验组动物都检测到了Gag特异性细胞免疫反应,除初次免疫后12周反应水平有所下降,其他时间点细胞反应呈逐渐增高趋势,但各剂量组间未见明显的量效关系.结论 在一定的剂量范围内反复多次应用Ad5-HIVgag免疫食蟹猴后,可产生针对腺病毒的中和抗体,随着免疫次数的增多Gag特异性细胞免疫反应有增高趋势,Ad5疫苗免疫后中和抗体的产生对Ad5疫苗反复应用诱导的Gag特异性细胞免疫反应抑制作用并不明显.     

不同推拿手法对食蟹猴轻度颈动脉粥样硬化模型的影响

目的　探讨不同颈椎推拿手法对食蟹猴轻度颈动脉粥样硬化（CAS）模型稳定性的影响。 方法　将18只食蟹猴建立轻度CAS模型,并以高脂饲料喂养8周,用彩超证实其造模成功。再将18只食蟹猴随机分为3组（每组6只）,分别是：颈椎旋转组、推桥弓组和模型对照组。分别对颈椎旋转组和推桥弓组的食蟹猴进行相应的手法干预,共干预30 d,模型对照组不做特殊干预。最后将动物麻醉后处死,取颈总动脉分别进行HE染色、拉曼实验和压力实验。 结果　HE染色可见颈总动脉血管内壁损伤严重,有斑块形成。拉曼试验中,3组均有明显的1450 及1660 脂质特征峰,但三组特征峰的相对强度差异无显著性意义（P > 0.05）。压力实验中,三组中食蟹猴颈动脉斑块破裂压力检测结果显示无显著性意义（P > 0.05）。 结论　在食蟹猴轻度CAS病变中,短期内施用颈椎旋转手法和推桥弓手法并不会改变斑块的稳定性。     

重组病毒炎症蛋白Ⅱ长期静脉注射对食蟹猴免疫系统的影响

目的：研究重组vMIP-Ⅱ在体内对食蟹猴免疫系统的影响。方法：食蟹猴随机分为阴性对照组（静脉注射人白蛋白）和实验组（分别连续13周静脉注射50、250和1250μg／kg剂量的重组vMIP-Ⅱ），于不同时间采集血液（给药前、给药6周、给药13周和恢复期2周）及各器官、淋巴组织（给药13周和恢复期2周）样品。ELISA测定血清中重组vMIP-Ⅱ抗体，分离外周血单个核细胞（PBMCs），FACS计数CD3^＋、CD4^＋以及CD8^＋细胞并测定淋巴细胞转化率；各器官及淋巴组织样品做病理学检查，并采用末端转移酶介导的缺口标记（TUNEL）法检测淋巴组织细胞凋亡指数。结果：长期大剂量静脉注射重组vMIP-Ⅱ并不引起食蟹猴产生中和抗体；在用药期间动物外周血CD3^＋T细胞、CD4^＋以及CD8^＋T细胞计数显著性增强（P〈0．05），CD4^＋／CD8^＋比值仍属正常，同时体外观察到淋巴细胞转化率增加（P〈0．05）；各器官无病理学改变，淋巴组织出现增生，并且重组vMIP-Ⅱ注射组食蟹猴增生的淋巴组织细胞凋亡指数与阴性对照组相比无明显改变；在恢复期以上指标均有所降低。结论：在重组vMIP-Ⅱ对食蟹猴免疫原性不明显的情况下，长期大剂量注射重组vMIP-Ⅱ具有刺激食蟹猴免疫系统、T淋巴细胞增生和增加T淋巴细胞功能的作用。     

应用PeriCam PSI血流灌注散斑成像仪对食蟹猴模型舌象的初探研究

目的探索运用PeriCam PSI血流灌注散斑成像仪检测食蟹猴模型舌部血液灌注量的方法并分析其可行性及应用价值。方法 (1)5只雌性食蟹猴行宫颈环扎术,制备食蟹猴子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)疾病模型,1只雌性食蟹猴开腹仅观察盆腔情况。(2)分别于术前、手术当月及术后1、2、3个月运用PeriCam PSI血流灌注散斑成像仪测量所有食蟹猴舌面、舌底血液灌注量,采用与之配套的PIMSoft软件进行数据采集与分析。结果 (1)成功检测6只食蟹猴在不同时间段的舌部血液灌注量,宫颈环扎组食蟹猴术后的血液灌注量均呈现显著上升或下降,差异有统计学意义。(2)术后2月轻-中度盆腔粘连的食蟹猴舌面及舌底的血液灌注量均显著高于无粘连组,差异有统计学意义。结论运用PeriCam PSI血流灌注散斑成像仪测量食蟹猴舌部血液灌注量的方法稳定可行,可能成为疾病病证结合模型舌象的量化评价方法。     

食蟹猴创伤后应激障碍动物模型的建立及行为和神经生物学变化

目的:建立食蟹猴创伤后应激障碍(PTSD)动物模型的评价方法,探讨PTSD食蟹猴的皮质醇、多巴胺、脑源性神经营养因子、5-羟色胺等神经生理学指标在食蟹猴PTSD动物模型差异。方法:选取成年雌性食蟹猴60只,按照随机数字表法分为对照组(n=30)和实验组(n=30)。实验组食蟹猴,采用幽闭+电刺激制作食蟹猴PTSD实验动物模型,两组拘禁笼中拘禁100天,单笼喂养,同居一室。定时观察并记录两组动物行为学指标,期间并注意有无外伤、疾病发生。分别在拘禁前、半个月、1个月、3个月采集静脉血,检测两组神经生理学指标。所有观察数据统计分析前进行正态分布性检验,如果为正态分布,使用独立样本t检验,或多样本方差分析,如果显示数据为非正态分布,采用非参数Wilcoxon秩和检验,进行统计分析,显著性水平为α=0.05。结果:与对照组相比,实验组食蟹猴活动、好奇和恐惧行为、应激行为持续时间和次数显著差异(P0.05);实验组食蟹猴血浆中肾上腺皮质激素和皮质醇的水平与对照组相比是上升的,差异存在显著性(t=0.345,7.137,4.529,4.180;P0.05)。实验组食蟹猴BDNF及5-HT含量降低,与对照组相比显著差异(P0.05);实验组TNF-α含量逐渐升高,与对照组相比同样有显著差异(P0.05)。结论:实验食蟹猴易出现心理压力产生持久的PTSD样生理和行为异常与其机体"创伤性"暴露和缺乏社会支持有关;肾上腺皮质激素、皮质醇和BDNF、5-HT、NF-α水平的变化与失调的下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴的应激影响有关。     

甲型肝炎灭活疫苗(SH株)接种食蟹猴的免疫原性研究

目的 研究甲型肝炎灭活疫苗(SH株)食蟹猴的免疫原性.方法 甲型肝炎病毒SH株接种人胚肺二倍体细胞(MRC-5),培养、收获的病毒液,经纯化、灭活后铝佐剂吸附制成甲型肝炎灭活疫苗.采用食蟹猴进行疫苗的免疫原性研究.结果 接种疫苗后的食蟹猴,体内产生抗HAV抗体和中和抗体,抗核抗体结果为阴性.结论该疫苗具有良好的免疫原性.     

帕金森病猴模型生化指标及肾上腺的改变

目的　探究食蟹猴1-甲基- 4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP )慢性帕金森病（parkinson’s disease,PD）造模后生化指标、肾上腺组织的改变。 方法　将8只雄性食蟹猴随机分为两组,对照组3只,造模组5只,用MPTP造模30 d。记录观察两组的行为学变化。食蟹猴造模成功后,抽血检测肾功能、葡萄糖、胆固醇、甘油三酯。动物麻醉安乐死后,取肾上腺组织,进行HE、α-突触核蛋白(α-synuclein)、多巴胺受体D2染色并观察病理学改变。 结果　食蟹猴PD模型成功建立模型组和对照组比较,生化指标葡萄糖（glucose,GLU）、胆固醇（cholesterol,CH）有统计学差异（P<0.05）,肾功能无明显差异。模型组肾上腺组织有损害,可见炎性细胞浸润,被膜与各带、髓质之间分界基本不清,皮质层变薄,部分呈局灶性坏死。α-synuclein在肾上腺的表达明显高于对照组,而髓质区多巴胺受体D2明显减少,免疫组化半定量分析,两组有统计学差异（P<0.05）。 结论　食蟹猴PD模型代谢指标明显下降;其肾上腺结构功能的改变可能与PD发病有一定的相关性;通过检测外周生物学指标可为PD前期诊断提供新思路。     

长期亚麻醉剂量氯胺酮对青少年期食蟹猴前额叶和海马脑源性神经营养因子水平的影响

目的:探讨长期亚麻醉剂量氯胺酮对青少年食蟹猴自发活动、前额叶和海马脑源性神经营养因子(Brainderived neurotrophic factor,BDNF)和环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)的影响。方法:36只雄性食蟹猴(3.7-4.8岁)随机分为对照组,1个月、3个月和6个月氯胺酮组,氯胺酮组每日静脉注射氯胺酮(1mg/kg),对照组注射同体积生理盐水。比较给药前,给药1个月,3个月,6个月后动物的自发活动、前额叶和海马神经元形态及BDNF和CREB水平。结果:1个月氯胺酮组移动显著多于对照组;3个月组行走显著多于对照组;6个月组移动和攀爬显著低于对照组。氯胺酮导致前额叶和海马神经元数量减少,细胞排列紊乱,细胞间隙疏松、增大,部分细胞核固缩。氯胺酮组前额叶BDNF表达水平显著低于对照组;CREB表达水平在3个月组和6个月组显著低于对照组和1个月组。海马CREB表达水平在6个月组显著低于对照组、1个月组和3个月组。结论:长期亚麻醉剂量氯胺酮导致青少年食蟹猴自发活动由兴奋到抑制、前额叶和海马神经元损伤、BDNF和CREB表达降低。     

少阳主骨方对食蟹猴自然退变膝关节骨性关节炎模型p16/Rb信号通路的影响

目的　根据中医“少阳主骨”理论,研究少阳主骨方延缓关节软骨细胞衰老和退变的作用机制。 方法　通过X线选取13只膝关节退变的老年食蟹猴作为动物模型,随机选取1只进行病理学观察,其余食蟹猴随机分为少阳主骨方组、氨糖美辛组、生理盐水组,每组4只,连续灌胃8周后处死所有食蟹猴,对关节软骨进行病理学观察,RT-qPCR、Western-blot检测关节软骨中p16、Rb基因与蛋白的表达。 结果　老年食蟹猴KOA模型关节软骨病理改变符合KOA病理变化特点,三组食蟹猴Mankin评分少阳主骨方组(7.5±0.53)分、氨糖美辛组(7.75±0.71)分、生理盐水组(8.25±0.46)分,少阳主骨方组与生理盐水组间具有统计学差异（P<0.05）;p16基因与蛋白的表达少阳主骨方组<氨糖美辛组<生理盐水组,具有统计学差异（P<0.05）;Rb基因与蛋白的表达少阳主骨方组>氨糖美辛组>生理盐水组,具有统计学差异（P<0.05）。 结论　少阳主骨方可以通过p16/Rb途径延缓关节软骨细胞衰老,从而延缓关节软骨退变。     

定量检测PD-1单克隆抗体ELISA法的建立

目的建立一种高特异、高灵敏、新型的定量检测食蟹猴血清中PD-1单克隆抗体质量浓度的ELISA方法。方法用重组人PD-1作为抗原包被到96孔板上,加入系列浓度标准品(PD-1单克隆抗体)和稀释的食蟹猴血清,再加入稀释的猴血清吸附的羊抗人Ig G-HRP(二抗),二抗与结合到抗原上的PD-1单克隆抗体特异性结合,加入底物显色剂,用硫酸终止,在450 nm下读数。结果在40~0.625 ng/ml范围内,PD-1单克隆抗体质量浓度的对数值与吸光值呈S形曲线,方法灵敏度为0.625 ng/ml,TNF-α、r HSA、PEG-GH和受试品PD-1单克隆抗体均无交叉反应,方法的回收率为94.5%~98.0%,板内精密度波动在-4.1%~-0.1%,板间精密度波动在-5.0%~-1.0%。结论本方法符合新生物制品临床前药代动力学研究指导原则的要求,可用于食蟹猴体内PD-1单克隆抗体的定量检测。     

猴对吗啡依赖性模型形成试验

对猴皮下注射吗啡1～4周,剂量递增为3、6、9、12mg/kg,第29和30天给药量为15mg/kg,共给药30天,观察停药后动物体重明显下降,表现出非常明显的戒断症状.对猴连续30天皮下注射吗啡,可以形成吗啡赖依赖性模型.     

1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶对食蟹猴嗅球多巴胺能神经元的影响

目的 建立食蟹猴1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)帕金森病系统性模型,探讨嗅球中多巴胺（DA）及多巴胺/cAMP调节磷蛋白（DARPP32）的表达情况。
方法 3只成年健康食蟹猴,静脉注射MPTP,建立帕金森病系统性模型,取出嗅球,切片,免疫组织化学染色DA和DARPP32,摄片并观察DA和DARPP32在食蟹猴嗅球中的分布及表达情况,采用Image Pro-Plus软件,半定量分析模型组和正常组之间DA和DARPP32的表达差异。 结果 食蟹猴嗅球中DA和DARPP32神经元集中分布于突触小球层,DA神经纤维分布于突触小球层,而DARPP32神经纤维分布于嗅球各层,以突触小球层（GL）和外网状层（EPL）最为密集。MPTP损伤后,与正常对照组比较,DA和DARPP32神经元及神经纤维均减少,以DA神经元及神经纤维减少明显。 结论 食蟹猴嗅球中DA神经元和神经纤维分布于突触小球层。食蟹猴MPTP帕金森病系统性模型的嗅球DA能神经元和纤维明显减少,可能与帕金森病嗅觉障碍有关。     

灵长类动物子宫内膜异位症病证结合模型构建初探

目的　探索食蟹猴子宫内膜异位症（简称内异症）病证结合模型构建的方法。 方法　（1）6只雌性食蟹猴随机分为实验组5只、对照组1只,实验组开腹行宫颈环扎术,对照组仅开腹。（2）于术前、术中及术后第1、2、3个月运用PSI测量猴舌血液灌注量。（3）术后3个月腹腔镜探查,因均未见内异症病灶,改进建模方法：将猴分为实验组4只、对照组2只,实验组月经期收集子宫内膜组织盆腔内注射,连续使用3个月免疫抑制剂,对照组不作处理。 结果　（1）宫颈环扎后3个月后腹腔镜探查,两组均未见内异症病灶。（2）猴子术后2月舌部血液灌注量明显高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。（3）每只猴的舌面及舌底血液灌注量变化趋势一致。（4）改进建模方案后3个月腹腔镜探查示,实验组重度盆腔粘连、子宫表面血管增生并充血明显,一只猴可见内异症病灶,对照组则无。 结论　收集子宫内膜盆腔内注射、加用免疫抑制剂可以构建食蟹猴内异症模型。运用PSI测量猴舌部血液灌注量的方法稳定可行,有望成为疾病病证结合模型舌象的量化评价方法。     

免疫复合物型乙型肝炎疫苗的免疫原性分析北大核心CSCD

目的：分析免疫复合物型乙型肝炎疫苗在小鼠体内和食蟹猴体内的免疫原性。方法免疫复合物型乙型肝炎疫苗单次免疫小鼠,不同时间点采血进行anti-HBs滴度动态检测;不同免疫程序免疫小鼠,进行anti-HBs滴度检测;肌肉注射5μg/只免疫小鼠,ELISPOT方法检测IFN-γ形成斑点数并进行阳转率统计;测定稳定性试验样品的ED50;分别以20μg/只和100μg/只剂量免疫食蟹猴,不同时间点采血检测anti-HBs滴度。结果免疫复合物型乙型肝炎疫苗动态检测anti-HBs滴度均高于重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）;免疫复合物型乙型肝炎免疫2针次anti-HBs滴度可达到重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）免疫3针次水平;免疫复合物型乙型肝炎疫苗细胞免疫检测IFN-γ斑点形成细胞（ SFC）及阳转率高于重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）及酿酒乙型肝炎疫苗国家参考品;免疫复合物型乙型肝炎疫苗长期稳定性优于酿酒酵母乙肝疫苗,ED50值低于后者,高低两种剂量免疫食蟹猴,均可诱导高滴度anti-HBs,且持续性良好。结论免疫复合物型乙型肝炎疫苗有较好的免疫原性,其体液免疫和细胞免疫水平均优于重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）。     

灵长类动物子宫内膜异位症病证结合模型构建初探

目的　探索食蟹猴子宫内膜异位症（简称内异症）病证结合模型构建的方法。 方法　（1）6只雌性食蟹猴随机分为实验组5只、对照组1只,实验组开腹行宫颈环扎术,对照组仅开腹。（2）于术前、术中及术后第1、2、3个月运用PSI测量猴舌血液灌注量。（3）术后3个月腹腔镜探查,因均未见内异症病灶,改进建模方法：将猴分为实验组4只、对照组2只,实验组月经期收集子宫内膜组织盆腔内注射,连续使用3个月免疫抑制剂,对照组不作处理。 结果　（1）宫颈环扎后3个月后腹腔镜探查,两组均未见内异症病灶。（2）猴子术后2月舌部血液灌注量明显高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。（3）每只猴的舌面及舌底血液灌注量变化趋势一致。（4）改进建模方案后3个月腹腔镜探查示,实验组重度盆腔粘连、子宫表面血管增生并充血明显,一只猴可见内异症病灶,对照组则无。 结论　收集子宫内膜盆腔内注射、加用免疫抑制剂可以构建食蟹猴内异症模型。运用PSI测量猴舌部血液灌注量的方法稳定可行,有望成为疾病病证结合模型舌象的量化评价方法。     

重组人LFA3-Ig融和蛋白体内外生物活性研究

LFA3-Ig融合蛋白是由人淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3)与CD2结合的部分与人IgG1的Fc段构成的融合蛋白,采用基因工程技术大量制备,可用于治疗银屑病等自身免疫性疾病。实验利用体外细胞模型及正常食蟹猴作为体内模型,研究了上海市抗体工程技术研究中心研制和中试生产LFA3-Ig的生物学效应。结果表明:rhLFA3-Ig可通过特异性地结合淋巴细胞表面的CD2,抑制T淋巴细胞的活化,其体外活性与国外同类产品相比无显著差异;食蟹猴重复应用rhLFA3-Ig后,高剂量组外周血淋巴细胞有显著下降,于给药后48 h即降至最低,为给药前的76.1%;给药期间高剂量组外周血淋巴细胞波动于给药前的80%左右,至恢复期末,淋巴细胞恢复至给药前的90%左右。给药后,各剂量组CD2+、CD3+、CD4+及CD8+淋巴细胞计数均有不同程度的下降,且具有剂量相关性,停药后可恢复。上述结果为该重组融合蛋白提供了必要的临床前药效学资料,可作为其临床试验的重要参考。