哇巴因诱导ECV304细胞凋亡与p120ctn mRNA的表达

目的研究哇巴因对ECV304细胞的作用及相关机制。方法应用MTT法检测哇巴因对细胞生长抑制作用,Hoechst33342/PI双荧光染色分析细胞死亡特征,透射电镜和光镜观察细胞形态结构变化,半定量RT-PCR法检测P120ctn 1A和P120ctn 3A mRNA的表达。结果哇巴因以浓度和作用时间依赖的方式抑制ECV304细胞生长;荧光显微镜下可见30%以上细胞为凋亡细胞,20%细胞为晚期凋亡细胞的形态学改变;透射电镜下可见核染色质凝集、边移、凋亡小体形成等细胞形态学变化;RT-PCR结果显示P120ctn 1A mRNA表达较对照组明显降低,P120ctn 3A mRNA表达较对照组明显增强。结论哇巴因能抑制ECV304细胞增殖和诱导其凋亡,并下调P120ctn 1A和上调P120ctn3A mRNA表达。     

从噬菌体7肽库中筛选的哇巴因结合肽对血管内皮细胞的保护作用

目的:寻找与哇巴因高亲和力结合并抑制其生物功能的相关小分子肽,为治疗原发性高血压提供新策略.方法:以哇巴因为筛选分子,应用M13噬菌体呈现随机7肽库进行筛选.经过3轮生物淘筛,并通过ELISA法鉴定,对噬菌体阳性克隆ssDNA电泳鉴定和基因测序分析.委托合成筛选获得哇巴因结合肽,采用放射配基受体结合法检测其结合活性;MTT法检测血管内皮细胞的增殖抑制率,Hoechst33342/PI双荧光染色检测细胞形态学变化;利用RT-PCR和细胞免疫荧光检测钠泵α1、β1的表达水平;荧光探针检测细胞内游离Na+浓度变化.结果:筛选获得14个阳性克隆,基因测序显示:哇巴因结合肽一致率达64.3%(9/14).委托合成肽(Arg-Cys-Met-Thr-Ser-Arg-Ser).放射性配基受体结合法检测显示,合成的哇巴因结合肽能够与哇巴因结合.哇巴因结合肽+哇巴因的EAhy926细胞组增殖抑制率小于哇巴因组(P<0.05);Hoechst33342/PI双荧光染色显示细胞死亡数量减少;RT-PCR和免疫细胞化学检测钠泵α1、β1亚单位转录和翻译水平,显示哇巴因结合肽能拈抗哇巴因所引起钠泵α1亚单位表达的上调、β1亚单位的下调作用;荧光探针显示哇巴因结合肽能够拮抗哇巴因对钠泵的抑制作用.结论:哇巴因特异性结合肽能够阻抑哇巴因对血管内皮细胞的抑制增殖和诱导死亡作用,为研究哇巴因与钠泵的相互作用机制及进一步研究抗哇巴因的分子药物奠定基础.     

活性氧对ECV304细胞生长和凋亡的相关基因表达谱研究

目的： 探讨活性氧（ROS）对ECV304细胞生长和凋亡作用的相关基因表达谱。 方法： 采用MTT法分别观察不同浓度AngⅡ在4 h、12 h和24 h时对ECV304细胞生长率和ROS生成量的影响。应用基因芯片技术和光镜分别检测0.0625和1 μmol/L AngⅡ作用12 h时ECV304细胞生长作用的相关基因表达谱和细胞形态学变化。 结果： 一定浓度的AngⅡ作用12 h时ECV304细胞生长率明显增加（P<0.05）；基因芯片技术分析显示，在0.0625 μmol/L AngⅡ作用ECV304细胞12 h时，与细胞生长相关的ERK、CDK、CCN、PCNA等25个基因普遍上调，而与细胞凋亡相关的DR6、caspase-6、BAK1、PDCD8等12个基因普遍下调，在1 μmol/L AngⅡ作用12 h时，呈相反结果。 结论： AngⅡ是ECV304细胞产生ROS(·OH)的诱导剂，可引起多种与ECV304细胞生长和凋亡的靶基因表达；N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine，NAC）可以明显抑制AngⅡ对ECV304细胞的生长作用；ROS(·OH)可能是AngⅡ诱导ECV304细胞生长和凋亡的主要信号转导分子和基因表达调节分子。     

风疹病毒野生株感染ECV304血管内皮样细胞的细胞病变效应

目的通过体外培养和风疹病毒野生株感染ECV304血管内皮样细胞,初步探讨中国大陆流行的风疹病毒野生株的致病变性特征.方法常规方法培养ECV304血管内皮样细胞和病毒接种,RT-PCR和间接免疫荧光法检测风疹病毒包膜糖蛋白E1基因的表达,相差显微镜及电子显微镜下观察细胞受病毒感染后形态变化,脱氧核糖核酸末端转移酶法（TUNEL）检测细胞凋亡.结果感染后2～3 d即可检测到风疹病毒包膜糖蛋白E1基因表达;感染后4 d,相差显微镜观察呈现明显的细胞病变效应,即细胞悬浮脱壁、细胞体变圆缩小、细胞膜皱缩、染色质浓缩等;电镜下观察可见明显病毒颗粒,核染色质浓集、边缘化,线粒体聚集于细胞核周围呈溶酶体化、空泡化和自噬现象.TUNEL法检测细胞凋亡指数（AI）在病毒感染组与对照组间有显著性差异（P＜0.01）.结论风疹病毒野生株在ECV304细胞中有明显的致细胞病变效应,在体外细胞培养下可诱导ECV304血管内皮样细胞凋亡.     

HIV-1Nef调节内皮细胞黏附分子ICAM-1的表达

目的研究HIV-1的调节基因Nef对ECV304细胞ICAM-1表达的影响,从而为分析HIV-1感染引起内皮细胞生物学活性的变化,以及为阐明Nef参与HIV-1致病的分子机制奠定基础。方法应用本实验室已经建立保存的HIV-1Nef基因在内皮细胞的稳定表达细胞株ECV304-Nef和其阴性对照细胞株ECV304 pcDNA 3.1(+),通过RT-PCR、实时定量PCR(real-time PCR)、Western blot、FCM和细胞黏附试验分析ECV304-Nef细胞ICAM-1的表达水平。结果 RT-PCR、real-time PCR结果显示ECV304-Nef细胞ICAM-1 mRNA表达水平明显升高,为对照组的(4.3±0.2)倍;Western blot结果示ECV304-Nef细胞I-CAM-1蛋白的表达水平高于对照组;FCM分析显示ECV304-Nef细胞和对照组细胞ICAM-1阳性细胞百分率分别为(35.3±2.2)%和(12.5±0.8)%(P0.01),两组间ICAM-1表达有显著差异。细胞黏附实验观察到ECV304-Nef细胞黏附的Jurkat细胞数明显多于对照组,荧光仪定量分析结果显示ECV304-Nef细胞黏附的Jurkat细胞的荧光强度值显著高与对照组(P0.05)。结论本实验证实了HIV-1Nef基因可以上调血管内皮细胞细胞黏附分子ICAM-1的表达。     

连环蛋白家族成员P120ctn的作用及相关机制

连环蛋白P120可在细胞连接处与E-钙黏蛋白结合形成连环蛋白-钙黏蛋白复合体,调控钙黏蛋白介导的细胞黏附作用;在胞质内可与Rho家族GTP酶相互作用调节细胞骨架的运动;在细胞核内可与核转录因子NF-κB和转录抑制因子Kaiso结合,影响炎性反应和细胞增殖.P120对细胞黏附、细胞动力、炎性反应和细胞增殖的影响使其与损伤...     

β-连环蛋白在转染p120ctn同工蛋白3A的肝癌细胞中的表达变化

目的观察β-连环蛋白在转染p120ctn同工蛋白3A的肝癌细胞中的表达变化；为通过这一途径实施肿瘤的基因治疗提供实验依据。方法对BEL-7404人肝癌细胞进行稳定转染p120ctn同工蛋白3A，然后用激光共聚焦显微镜和免疫印迹技术，检测B一连环蛋白在细胞中的表达情况，同时检测细胞黏附、细胞迁移以及增殖能力的改变。结果肝癌细胞转染p120ctn同工蛋白3A后，促进了β-连环蛋白与上皮钙黏蛋白的结合，表现为其与上皮钙黏蛋白的沉淀量增加，在细胞膜上的表达增强，在细胞核中的表达趋向减弱；细胞黏附能力增强，迁移及增殖能力下降。结论转染p120ctn同工蛋白3A，能弱化β-连环蛋白在细胞核中的表达量，削弱了BEL-7404人肝癌细胞的恶性行为，是调控β-连环蛋白癌基因表达的有效途径之一。     

创伤弧菌溶细胞素融合蛋白细胞毒活性相关分子机制研究

目的 研究创伤弧菌溶细胞素融合蛋白(rVVC)诱导人ECV304细胞(人脐静脉内皮细胞)凋亡过程中Caspase-3,-8,-9活性变化.方法 应用MTT法、Hochest33342/PI荧光双染、流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳分析rVVC对人ECV304细胞诱导凋亡的影响;比色法测定rVVC诱导人ECV304凋亡过程中Caspase-3,-8,-9活性变化.结果 MTT结果显示rVVC具有降低人ECV304细胞的存活率活性;浓度为2.0溶血单位(HU)/ml的rVVC作用人ECV304 12 h后,其诱导凋亡的活性高于对照组和浓度为0.5 HU/ml的 rVVC处理组,具有剂量依赖性;浓度为2.0 HU/ml rVVC处理组加40 μmol/L Caspase全酶抑制剂(Z-VAD-FMK)后凋亡率较2.0 HU/ml rVVC处理组有一定程度降低.浓度为2.0 HU/ml rVVC处理人ECV304细胞0.5 h后Caspase-3活性开始增高,于3 h达高峰,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),Caspase-8,-9活性无明显变化.结论 rVVC对人ECV304具有凋亡诱导的生物学活性,Caspase-3可能与活性rVVC诱导的人ECV304凋亡有关.     

P120 连环蛋白参与细胞炎症反应的研究进展

P120 连环蛋白(p120ctn)属于犰狳重复结构域蛋白亚家族的原型成员,与内皮钙黏蛋白(E-cadherin)胞质域 结合,促进内皮细胞间黏附连接的完整性,是内皮细胞和其他极化贴壁细胞黏附连接必不可少的组成部分。此外,p120ctn 还 在胚胎发育、细胞增殖与极性、肿瘤细胞迁移和恶性肿瘤进展中起着重要的作用。近年来,研究认为p120ctn 可能是一种内源 性抗炎介质,在细胞先天免疫和感染相关的炎症反应中扮演重要作用,但相关机制仍不清楚。本文就p120ctn 与免疫炎症反 应的相关研究作一综述。     

同种异体NK细胞对人脐静脉内皮细胞ECV304的杀伤活性差异及分子机制探讨

目的 探讨供者KIR分子表达差异对NK细胞杀伤人脐血内皮细胞系ECV304活性的影响,并观察参与杀伤的活化信号通路.方法 RT-PCR及流式细胞仪检测ECV304细胞NKG2D配体MICA/B、ULBP1-3表达,PCR-SSP法行HLA-A、B、Cw分型.自8例健康供者分离外周血NK细胞,流式细胞仪检测KIR2DL1的表达率,LDH释放法测定NK细胞在效靶比20∶1时对ECV304细胞的杀伤活性及anti-KIR2DL1mAb对NK细胞杀伤活性的影响.结果 ECV30细胞在mRNA水平表达MICA/B、ULBP1-3,但在膜蛋白水平均不表达.HLA分型表明,ECV304表达KIR2DL1的配体,而不表达KIR2DL2/3、KIR3DL1的配体.8例健康供者NK细胞KIR2DL1表达率有较大差异,对ECV304细胞的杀伤活性也有不同,双变量相关分析示个体KIR2DL1表达率与NK细胞对ECV304的杀伤率存在负相关(rS=-0.994,P=0.000).anti-KIR2DL1 mAb明显增强NK细胞对ECV304的杀伤活性(t=-4.860,P=0.002).结论 NK细胞对ECV304细胞的杀伤分子机制主要为HLA-KIR信号系统错配,目前已知的NKG2D配体MICMB、ULBP1-3并不参与,这有助于临床活体器官移植时在遗传指导下选择供体.     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Recovery of responsiveness of cells of lateral geniculate nucleus of rat

1. Recovery of responsiveness of single cells in lateral geniculate nucleus of rat has been determined in both P and I cells. There are three types of recovery curve among P cells; (a) early recovery, (b) early partial recovery followed by depression and then complete recovery, (c) prolonged depression followed by cyclic recovery. Type (c) is by far the commonest recovery curve. In contrast to the spike in a P cell, the synaptic potential recovers to its full amplitude in about 20 msec. All I cells exhibit similar rapid recovery curves after a prolonged depression.2. Conditioning stimuli applied to visual cortex also produce a prolonged depression in most P cells but I cells can be re-excited at short intervals from cortex. Decortication does not prevent the prolonged depression of the multineuronal response produced by optic nerve stimulation.3. A neuronal model is proposed to explain these observations. It is supposed that I cells (interneurones) are innervated by axon collaterals of the P cells (principal cells, projecting to visual cortex) and that the I cells exert an inhibitory influence on the P cells.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.

     

Evaluation of antibacterial activity of extracts of five species of wood-colonizing fungi

Screening new organisms for antibacterial activity and searching for new antibacterial drugs is important due to the constant generation of new antibiotic-resistant strains of pathogenic bacteria. An E. coli broth microdilution test was used to evaluate the results of the Vibrio fischeri bioluminescence test in five of the most antibacterially active species of wood-colonizing fungi. Serpula lacrymans was found to be a potential source of thermostable antibiotic(s) and the Vibrio fischeri bioluminescence test was confirmed to be a useful method for screening for antibacterial activity.