人T淋巴细胞的分化与功能

近年来,在以下四个方面的研究已取得进展:(1)通过细胞表面标记,建立了体外鉴定人T淋巴细胞的方法;(2)依靠细胞表面标记,建立了一些新技术可分离到高纯度的人T淋巴细胞亚群;(3)已建立了体外技术,可用于区别分离到的T淋巴细胞群与其它细胞(即B细胞、裸细胞和巨噬细     

抗激活小鼠T细胞抗原单抗抑制同种移植物排斥反应的作用及其机理

为阐明活化 T 细胞主动免疫同系小鼠诱导同种移植物存活期延长的机理,利用本室制备的抗活化小鼠 T 细胞抗原单克隆抗体(2H_3)观察它对同种免疫反应的影响;结果表明给接受同种移植物的受者转输2H_3能显著地延长同种心肌移植物的存活时间;在 ConA 诱导的淋巴细胞增生反应、混合淋巴细胞反应和诱导同种 T 杀伤性细胞的体外实验中加入2H_3,观察到2H_3对上述反应的明显抑制作用。提示活化 T细胞主动免疫同系小鼠诱导同种移植物存活期延长的机理,可能与免疫动物体内产生了相应的抗体,抑制了同种免疫反应的进行有关。     

小儿单纯性肾病抑制性T细胞活性改变

<正> 单纯性肾病为小儿常见肾脏疾病,其病因及发病机理仍不清楚。近年,T细胞功能紊乱学说受到重视。国内这方面的研究较少,特别是有关抑制性T细胞(T_s)活性改变尚未见报道。为此,我们观察了30例单纯性肾病患儿T_s的活性改变并总结于下。     

模拟微重力对肺T淋巴细胞激活功能的影响

目的 探讨模拟微重力对肺T淋巴细胞活化功能的影响及机理.方法分离肺T淋巴细胞,利用的旋转式细胞组织培养系统(RCCS,即旋转生物反应器)模拟微重力条件.培养T淋巴细胞后,采用PepTag非放射性PKC检测试剂盒测定PKC活性;采用免疫组织化学染色观察表达核因子-cB(NF-κB);酶联免疫吸附技术(双抗体夹心ELISA法)测定白介素-2(IL-2)生成;采用流式细胞技术检测表面抗原CD25.结果普通细胞培养容器组培养的T淋巴细胞,刀豆素蛋白A(ConA)组与对照组比较,T淋巴细胞PKC活性增强,NF-κB的免疫组化染色阳性细胞的百分比增加,IL-2生成增加,表面表达CD25的细胞增多(P＜0.01);模拟微重力条件下,与普通细胞培养容器培养的T淋巴细胞相比较,ConA刺激后,PKC活性降低,NF-κB免疫组化染色阳性细胞百分比减低,IL-2生成下降,表面表达CD25细胞减少(P＜0.01);模拟微重力条件下,加入PKC特异的激动剂PMA,和ConA共同培养的T淋巴细胞组,与同样条件下ConA组相比,PKC活性略增强、NF-κB的免疫组化染色阳性细胞百分比、IL-2生成的量、表面表达CD25增加(P＜0.01).结论 模拟微重力条件下,T淋巴细胞的激活受到抑制;PKC的活性降低,表达NF-κB细胞数减少,表面表达CD25的细胞数降低,T淋巴细胞分泌的IL-2降低;同样条件下,PMA对T淋巴细胞的上述指标有部分恢复作用.     

间充质干细胞体外对ITP患者T淋巴细胞分泌功能的影响

目的： 体外观察间充质干细胞（MSCs）对特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者T淋巴细胞分泌细胞因子功能的影响。方法: 采用Ficoll分离和体外贴壁、传代培养,扩增出骨髓MSCs;通过Ficoll分离法和尼龙棉柱法获取ITP患者外周血T淋巴细胞。以经丝裂霉素（MMC）处理后不同数量（2×103、1×104、5×104 cells/well）的MSCs作为基底层细胞,接种体外分离纯化的异体ITP患者T淋巴细胞,分别于2 d、4 d、6 d后各自收集培养上清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法动态测定T淋巴细胞分泌白细胞介素2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素10(IL-10)水平的变化。结果: ITP患者T淋巴细胞分泌细胞因子IL-2、IFN-γ较正常人高(P<0.05),IL-4、IL-10较正常人低(P<0.05)。MSCs可显著抑制ITP患者或正常对照组T淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ(P<0.05),且随MSCs数量的增加,抑制增强(P<0.05),共培养4 d、6 d时作用明显强于2 d时(P<0.05);MSCs可促进ITP患者T淋巴细胞分泌IL-4、IL-10 (P<0.05),且随MSCs量的增加,促进作用增强(P<0.05),对IL-10的作用随时间延长而增强(P<0.05),但对IL-4的作用在培养第2 d、4 d、6 d时无显著差异(P>0.05);在正常对照组,当MSCs数量>1×104可以促进T淋巴细胞分泌IL-4 与IL-10 (P<0.05),且随MSCs数量的增加,作用增强(P<0.05),共培养4 d、6 d时作用明显强于2 d时(P<0.05)。结论: MSCs能够在体外调节ITP患者辅助性T细胞1 (Thl)和辅助性T细胞2 (Th2)反应平衡,可使ITP患者Th1极化状态部分改善。     

Cimetidine对癌症患者的迟发型过敏反应的影响

作者曾研究了H_2受体拮抗剂对各种癌症患者末梢血淋巴细胞(PBL)的PHA 所致的母细胞转化反应的影响,证明该制剂可能增强癌症患者PBL 中的H_2受体阳性抑制细胞的活性,从而提出它可能是癌症患者的免疫抑制的一个原因。     

淋巴细胞趋化因子增强肝癌树突状细胞融合瘤苗体外免疫作用

目的：观察淋巴细胞趋化因子(lymphotactin, Lptn)基因修饰的肝癌树突状细胞(dendritic cells, DC)融合瘤苗的体外生物学特征和免疫作用。方法： 以重组Lptn基因修饰小鼠骨髓来源的DC，在聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)作用下与H22小鼠肝癌细胞融合，分别以RT-PCR及ELISA方法检测Lptn mRNA及蛋白水平表达，流式细胞仪分析细胞表面免疫分子表达。MTT法检测Lptn基因修饰的肝癌树突状细胞融合瘤苗(DCLptn/H22)对同种异体T淋巴细胞的体外刺激作用。LDH法检测DCLptn/H22融合瘤苗诱导产生的杀伤性T淋巴细胞活性。结果： Lptn基因修饰的DC能分泌较高浓度的淋巴细胞趋化因子，并且具有明显的趋化淋巴细胞功能。DCLptn/H22不但增强融合瘤苗刺激同种异体T淋巴细胞增殖, 而且能增强杀伤性T淋巴细胞活性。结论： 淋巴细胞趋化因子基因修饰能增强融合瘤苗体外免疫刺激作用。     

经自身肿瘤细胞或同种异体淋巴细胞刺激的外周血淋巴细胞IL-2受体的表达

体外试验曾揭示肿瘤患者的淋巴细胞能识别、杀伤自身肿瘤细胞。因此设想:在肿瘤局部分离出肿瘤特异性的淋巴细胞,并扩增此肿瘤反应性淋巴细胞群以杀灭此肿瘤。现已有实验证实肿瘤反应性T 细胞的存在,此种T 细胞最重要的特点是具有选择性。它对自身肿瘤的溶解,除了需识别MHC 抗原外,还需瘤细胞表达粘附分子ICAM-1,而抗原特异的细胞群的扩增则需要高亲合力的IL-2受体(IL-2R)的表达,同种异体抗原的刺激对T 细胞上的IL-2R 水平有正调节作用。本工作证实了淋巴细胞体外接触自身瘤细胞或同种异体淋巴细胞后,其细胞上     

AR-A014418对γδT细胞增殖、凋亡及杀伤功能的影响

目的:观察糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)选择性抑制剂AR-A014418对体外扩增的γδT细胞的细胞活性包括增殖、凋亡和杀伤功能的影响。方法:采用人淋巴细胞分离液分离健康人外周血中单个核细胞,在γδT细胞完全培养基中培养获得γδT细胞。用不同浓度的AR-A014418诱导培养γδT细胞72 h后,用流式细胞术检测各诱导处理组γδT细胞的增殖、凋亡和杀伤能力;用Western blot检测γδT细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3表达情况。结果:AR-A014418浓度在0. 3～10μmol/L时能促进γδT细胞的增殖并抑制其凋亡。同时促凋亡蛋白Cleaved caspase-3和Bax表达逐渐减弱,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达逐渐增强。尤其是在3μmol/L时,γδT细胞增殖活性最强,而且体外杀伤人肝癌HepG2细胞和人胃癌SGC-7901细胞活性也显著提高。结论:GSK-3β抑制剂AR-A014418在3μmol/L浓度时,可以抑制体外扩增γδT细胞的凋亡,并能增强其体外增殖和杀伤肿瘤活性,提示AR-A014418具有一定的免疫调节功能,为今后用于体外扩增γδT细胞提供实验依据。     

间充质干细胞对混合淋巴细胞反应体系中T淋巴细胞的免疫调节作用

目的:探讨间充质干细胞(MSC)在体外对T淋巴细胞免疫调节作用的特点。方法:通过Ficoll梯度密度离心法分离出正常人骨髓单个核细胞,体外培养扩增MSC,获取第3代细胞。将其按照不同的比例加入双向混合淋巴细胞培养(MLC)体系中,在第3、5天,采用MTT比色法检测各组MLC中的T淋巴细胞的增殖情况,再用流式细胞术分析其与MSC共孵育前后细胞表面标记的变化情况。结果:加入了MSC的MLC体系中,MSC对T淋巴细胞的增殖抑制具有剂量依赖性,且随着时间延长,抑制程度增强;其中,CD4 T细胞亚群受抑不如CD8 T细胞亚群显著;另外,T淋巴细胞表面CD25的表达虽然较对照组有所下降,但是CD4、CD25共表达的细胞却较对照组有明显的上升趋势。T淋巴细胞表面活化抗原HLA-DR的表达较对照组有轻度减低。结论:MSC在体外能够明显抑制T淋巴细胞的增殖,其主要是针对CD8 T细胞(CTL)。另外,它还能下调活化T淋巴细胞上一些较特异的表面标记CD25和HLA-DR的表达。     

重组IL-2直接促进人单核细胞的细胞毒作用

IL-2是维持T细胞体外繁殖的生长因子,是一种结构已清楚的糖蛋白激素。T、B淋巴细胞以及具有杀伤活性的大颗粒淋巴细胞(NK细胞)都能对IL-2起反应,IL-2的作用似乎仅限于淋巴细胞。本文的实验结果提示重组IL-2可以促进人末梢血中的单核细胞对瘤细胞T_(24)的溶解作用。作者用抗淋巴细胞单克隆抗体、CAMP-ATHI以及同种血清作为补体来源对IL-2诱导杀伤性T细胞(LAK细胞)进行处理,发现可以消除LAK细胞的细胞毒活性,但对IL-2诱导的单核细胞的细胞毒活性则无影响。为了研究单核细胞的细胞毒活性是否直接由IL-2介导,作者用T_(24)瘤细胞作为靶细胞,结果看到该细胞的特点是能抵抗NK。细     

体外有丝分裂原诱导人T淋巴细胞增殖过程中有非特异性自然抑制细胞与放大细胞的相互作用

淋巴细胞在体外培养,其增殖可被异种抑制细胞群所抑制。这些调节细胞亚群中有一种在体外培养是短命的,而且是非特异性自然抑制细胞(NSSC)。人外周血单个核细胞(MC)在体外培养12—18小时,NS-SC消失,而淋巴细胞增殖应答增强。本文报告从MC中有选择地除去某些细胞群后加以培养,观察NSSC功能活性的结果,以及观察NSSC和辅助性非T细胞对人T细胞增殖的影响。     

维持性血液透析患者IL-2和IL-2R的动态观察及临床意义

本文检测了23例维持性血液透析(血透)患者T淋巴细胞产生的白细胞介素2(IL-2)和白细胞介素2受体(IL-2R)活性。结果23例患者IL-2和IL-2R活性显著低于正常对照组(n=40):11例患者血透后IL-2及IL-2R活性比透析前增加,10例患者经3个月规律血透后,IL-2和IL-2R活性无显著变化。结果表明:维持性血透患者细胞免疫受损,包括T细胞产生IL-2能力和IL-2R活性低下,充分透析能提高IL-2和IL-2R活性,但长期血透无助于改善IL-2和IL-2R活性。     

添加细胞因子优化人外周血γδ T细胞的体外扩增培养体系

目的从添加细胞因子角度,优化用于肿瘤过继免疫治疗的γδ T细胞体外扩增培养方案。方法在固相化抗TCRγδ抗体加IL-2扩增人外周血γδ T细胞的体系基础上,添加其他的γ链受体家族细胞因子,包括IL-7、IL-15或IL-21,单独或联合使用、长期使用或短时添加,通过流式细胞术检测γδ T细胞纯度、细胞增殖及细胞毒活性相关分子的表达,计算γδ T细胞扩增效率;乳酸脱氢酶法检测γδ T细胞对人Burkitt's淋巴瘤细胞系Daudi的细胞毒活性。结果单独使用IL-7或IL-21不能有效扩增γδ T细胞,但单独使用IL-15可以使γδ T细胞纯度、扩增效率及细胞毒活性均达到与单独使用IL-2相当的水平;IL-2与IL-15联合使用,可促进γδ T细胞表达CD69,从而显著提高其扩增效率(P0.05);而IL-2与IL-21联合使用,可通过促进γδ T细胞颗粒酶A的表达,增强其对Daudi细胞的细胞毒活性(P0.001);IL-2、IL-15和IL-21联合使用可以显著提高γδ T细胞的细胞毒活性,但是会影响其扩增效率;而仅在效应前短时间添加IL-21,同样可以有效增强γδ T细胞对肿瘤细胞的细胞毒活性(P0.05)。结论在用固相化TCRγδ抗体加IL-2体外扩增培养γδ T细胞体系中,使用IL-15,而在回输效应前短时间添加IL-21,显著提高γδ T细胞扩增效率及对肿瘤细胞的细胞毒活性,此为目前最优化的γδ T细胞体外扩增培养方案。     

γ氨基丁酸对人IL-2和IFN-γ诱导的杀伤细胞的作用研究

为研究γ氨基丁酸(GABA)及A受体激动剂(THIP)对人细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)的增殖、T细胞亚群和杀瘤活性的影响和作用机制;在体外用不同浓度的GABA和THIP与人CIK细胞作用后,用MTT比色法和流式细胞仪(FCM)以及乳酸脱氢酶(LDH)法分别检测人CIK细胞的增殖能力、T细胞亚群和杀伤活性的变化。结果显示,GABA能显著的抑制CIK细胞的生长(P<0.01),并具有浓度依赖性,THIP对GABA的抑制细胞增殖有明显促进作用;GABA显著降低CIK细胞表面分子CD28分子的表达,降低CD8+T细胞的百分比,抑制CIK细胞对人结肠癌细胞株SW480的杀伤活性,THIP能够增强GABA的作用。上述结果提示,GABA能显著抑制CIK细胞的增殖,降低其细胞表面CD28分子的表达,降低CD8+T细胞的百分比,抑制CIK细胞的杀伤活性,这些作用主要是通过T淋巴细胞上的GABAA受体介导。     

硒对LAK细胞活性的影响及其机理研究

研究了硒在体外对LAK细胞活性的影响及作用机理,结果证明在LAK细胞的诱导阶段加入10~5～10mol/L亚硒酸纳能增强LAK细胞的杀伤和增殖活性。采用流式细胞仪测Tac(IL—2Rα)表达,Slot-Blot检测硒对LAK细胞的IL—2RαmRNA水平的影响,结果表明硒能增强LAK细胞的Tac抗原表达和IL-2RαmRNA的水平,提示硒可能通过促进Tac的表达增强了LAK细胞对IL—2的敏感性,从而提高了LAK细胞的增殖及杀伤活性。因此硒可望作为一种新型的免疫调节剂用于抗肿瘤治疗。     

慢性肺心病急性发作期淋巴细胞IL-2R及转铁蛋白受体的变化

应用Wu系列单克隆抗体(McAb),对25例慢性肺心病急性发作期患者淋巴细胞白细胞介素2受体(IL-2R)、转铁蛋白受体(TfR)及T淋巴细胞亚群进行检测。结果表明,慢性肺心病急性发作期患者IL-2R与TfR均低于正常对照组(P<0.001,P<0.05),其CD_4细胞亦较正常对照组为低(P<0.005),CD_8细胞在两者间无明显差异(P>0.10)。患者PaO_2与IL-2R的表达是高度正相关(r=0.82,P<0.001),提示血氧水平可影响淋巴细胞IL-2R的表达。慢性肺心病急性发作期IL-2R、TfR降低及CD_4细胞减少的意义有待进一步研究。     

凝血与抗凝血中T细胞活性的分析

目的探索凝血块中提取淋巴细胞的方法 ,分析抗凝血与凝血块中T细胞的活性。方法剥离凝血块并转移至过滤网上,生理盐水湿润并在滤网上轻柔研磨凝血块,收集滤过细胞。淋巴细胞分层液分别分离抗凝血与等量血凝块研磨过滤细胞,获取PBMC,流式细胞术检测并比较T细胞表面CD分子表达情况。T细胞增殖试验检测并比较抗凝血与凝血块放置不同时间(4,8,12和24 h)所得PBMC中T细胞的增殖活性。结果 2种血样所得T细胞表面CD标志的百分率无差别(P0.05)。血液凝固12 h内不影响所得T细胞的活性(各组SI比较,P0.05)。结论获得了凝血块提取淋巴细胞的方法,并证明此方法不影响凝血12 h内所得T细胞的活性。     

间充质干细胞体外对ITP患者CD4+CD25+T细胞影响

目的:体外观察间充质干细胞(MSCs)对免疫性血小板减少症(ITP)患者CD4+ CD25+T细胞比例的影响.方法:采用Ficoll分离骨髓单个核细胞,通过体外培养,扩增出MSCs,通过Ficoll分离法和尼龙棉柱法获取正常人及ITP患者外周血T淋巴细胞,并应用流式细胞术检测T细胞中CD4+ CD25+T细胞比例;MSCs经丝裂霉素MMC处理后按不同数量(2×103、1×104、5×104个细胞/孔)接种培养板作为基底层细胞,然后分别接种体外分离纯化的异体ITP及正常人T淋巴细胞,于2、4、6天后各自收集T淋巴细胞及培养上清,用流式细胞术检测接种于骨髓MSCs的ITP患者CD4+ CD25+T细胞比例.结果:ITP患者外周血CD4+ CD25+T细胞数量及CD4+ CD25+/CD4+比值均明显低于正常对照组(P＜0.05);在PHA作用下,数量＞1×104的骨髓MSCs与T淋巴细胞共培养4天后,与正常对照组相比,MSCs可显著上调ITP患者及正常人T淋巴细胞中CD4+ CD25+T淋巴细胞比例及CD4+ CD25 +/CD4+比值(P＜0.05),且随MSCs量的增加,作用增强(P＜0.05).体外骨髓MSCs对ITP患者CD4+ CD25+T淋巴细胞具有上调作用,以上这种机制可使ITP患者的细胞因子及CD4+ CD25+T淋巴细胞逐渐接近于正常人但仍达不到正常人水平(P＜0.05).结论:MSCs在体外可能通过上调CD4+ CD25+调节性T细胞,进而诱导ITP患者免疫耐受形成.     

新生儿脐血淋巴细胞IL-2R的表达

白细胞介素2(IL-2)及其受体(IL-2R)系统在免疫调节中发挥着重要的作用。本研究采用间接免疫荧光技术检测了新生儿脐血淋巴细胞IL-2R表达情况及其T细胞亚类水平。结果表明健康足月新生儿脐血Tac阳性细胞百分率明显低于正常成人,且异常新生儿的减低更为明显;而健康足月新生儿脐血CD_4阳性细胞和CD_4 CD_8比值却明显高于正常成人。说明尽管新生儿具有足够数量的T细胞(CD_3阳性细胞)和辅助性T细胞(CD_4阳性细胞),且CD_4/CD_3比值还高于成人,但其活化淋巴细胞上IL-2R的表达不足,故影响IL-2作用的发挥;加之新生儿细胞表面CD抗原标志与自身功能发育的非同步性,导致其细胞免疫功能低下。