四种核酸荧光染料在琼脂糖凝胶中染色特性的比较分析

目的比较几种核酸染料(Genefinder、Geneview、SYBER greenI)对于琼脂糖凝胶中DNA/RNA的染色效果并分析其取代溴化乙锭(EB)用于常规电泳后凝胶中核酸染色的可能性。方法分别使用四种核酸染料对凝胶中的RNA/DNA进行染色并对结果进行比较分析。结果四种染料对RNA/DNA染色结果无明显差异(P>0.05)。结论新型核酸染料Genefinder、Geneview和SYBER greenI能够代替EB,用于常规凝胶中的DNA/RNA染色。     

微量蛋白聚丙烯酰胺凝胶的复染法

本文介绍一种先用考马斯亮兰染色后，再用银染色可对微量蛋白聚丙烯酰胺电泳凝胶复染的方法，结果表明：核基质蛋白电泳凝胶经ＣＢＢ染色，仅见几条区带，将此胶再行银染，则显示５０余条清晰蛋白区带，这种复染方法适用于各种微量蛋白电泳凝胶的染色，所得区带清晰，重复性好。     

链霉亲和素突变体凝胶柱的制备及生物素修饰蛋白纯化

目的对链霉亲和素(SA)进行定点突变,降低与生物素之间的亲和力,制备SA突变体琼脂糖凝胶柱,并摸索最适洗脱条件,以达到纯化生物素修饰蛋白的目的。方法原核表达SA突变体蛋白使用Ni-NTA纯化树脂进行纯化,将SA突变体蛋白与溴化氰活化琼脂糖凝胶4FF(CNBr-activated Bestarose TM 4FF)偶联制备凝胶柱。生物素修饰蛋白与凝胶柱孵育后,以不同浓度NaOH对生物素修饰蛋白进行洗脱回收,ELISA检测SA突变体蛋白亲和力。通过Western blot法、考马斯亮蓝染色检测纯化效果。结果成功表达并纯化五种SA突变体,并制备凝胶柱。ELISA结果计算得到SA突变体对生物素修饰蛋白的亲和常数相较野生型SA均有所降低。将生物素修饰蛋白与五种凝胶柱相结合,通过Western blot法和考马斯亮蓝染色结果筛选出SA突变体M2凝胶柱可以在10 mmol/L NaOH洗脱条件下,纯化出生物素修饰蛋白,并且SA突变体M2凝胶柱能够对生物素修饰蛋白进行再次纯化。结论成功制备了SA突变体琼脂糖凝胶柱,为生物素修饰蛋白的纯化提供了可行性方案。     

纤维蛋白凝胶与几丁质对骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的影响

目的 比较纤维蛋白凝胶与几丁质对骨髓间充质干细胞（BMSCs）向软骨细胞分化的影响,探讨三维支架与软骨组织工程种子细胞BMSCs分化的关系。 方法 BMSCs与几丁质、纤维蛋白凝胶形成复合物,分别体外培养及植入大鼠关节软骨缺损部位。体外培养14d后,进行HE染色、甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色;体内培养2周、4周、6周后,对移植物进行形态学观察,表达软骨特异蛋白分析及BMSCs体内示踪。统计学分析BMSCs向软骨分化情况。 结果 体外培养部分,BMSCs纤维蛋白凝胶组和BMSCs几丁质组的Ⅱ型胶原免疫组织化学染色阳性率与对照组无显著差异;体内移植部分,BMSCs-纤维蛋白凝胶组的甲苯胺蓝染色与Ⅱ型胶原免疫组织化学染色积分吸光度（IA）变化率与对照组有显著差异,其他组别软骨分化与对照组无显著差异。 结论 在体外纤维蛋白凝胶或几丁质诱导BMSCs向软骨细胞分化的作用很弱,在体内BMSC-纤维蛋白凝胶可促进BMSCs分化成类软骨细胞。     

用于肿瘤靶向治疗的EGF-IL-18融合蛋白在昆虫细胞中的表达及活性鉴定

目的：制备能用于肿瘤靶向治疗的重组表皮生长因子受体干扰序列-白细胞介素18(EGF-IL-18)融合蛋白，并鉴定其生物学活性。方法：利用Bac-to-Bae表达系统在昆虫细胞Sf9中表达融合蛋白，用离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析等方法纯化表达产物，并以IFN-γ诱导实验和EGFR竞争结合实验初步评价融合蛋白的生物活性。结果：经SDS-PAGE和Westem blot检测，Sf9细胞中表达的重组蛋白与预期的EGF-IL-18融合蛋白分子量一致，纯化后融合蛋白具有较高纯度和良好的免疫原性。IFN-γ诱导实验和EGFR竞争结合实验显示，该融合蛋白具有肿瘤导向性和抗肿瘤活性。结论：成功表达并纯化了具有肿瘤导向性的抗肿瘤蛋白——EGF-IL-18融合蛋白，该蛋白具有较好的肿瘤导向性和抗肿瘤活性，可用于肿瘤的生物治疗研究。     

微量琼脂糖弥散法抗菌试验的建立及应用

作者建立了两种微量而敏感的抗菌试验，可用于鉴定存在于细胞及组织中的抗菌蛋白或多肽。（１）琼脂糖弥散法，用其检测抗蛋白的抗菌活性，具有操作简便，样品用量少（ｎｓ水平），可同时检测多个样品及定量检测等优点；（２）电泳凝胶琼脂糖弥散法，该法在微量样品未经纯化的情况下，可直接确定存在于ＰＡＧＥ凝胶中抗菌蛋白条带。应用这两种方法作者首次鉴定出大鼠膀胱粘膜，人膀胱膜以及大鼠子宫内膜存在抗菌蛋白。     

不同种属钩端螺旋体疏水外膜蛋白的特征研究

研究钩端螺旋体外膜蛋白的结构和抗原特征，对不同种属钩端螺旋体疏水外膜蛋白进行了比较研究。方法 用Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１１１４抽提１０株同种属钩体疏水外膜蛋白用不连续缓冲系统制备５％浓缩胶和１２％的分离胶，行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，在恒压下１８０Ｖ电泳５小时，考巴斯亮兰Ｇ－２５０染色。     

盐酸,乙醇对大鼠胃粘膜表面疏水性的影响及机理

我们观察了０．３ｍｏｌ／Ｌ盐酸及无水乙醇致清醒大鼠胃粘膜损伤后其表面疏水性及粘液凝胶层中磷脂含量的改变，发现表面接触角变小；粘膜刮取物与疏水探针混合液萤光强度减弱，这种减弱主要由于疏水基团总量的减少，而非单个基团的疏水性改变所致；刮取物中总磷脂含量减少及蛋白含量下降。     

接枝Nogo-A抗体和多聚赖氨酸的透明质酸水凝胶支架的制备及其与培养海马神经元相容性的研究

为探讨同时接枝Nogo-A受体(NgR)的抗体和多聚赖氨酸(PLL)的透明质酸(HA)水凝胶用于中枢神经系统损伤修复的可行性,本研究在碳二亚胺盐酸盐的介导下用己二酸二酰肼交联的方法制备HA水凝胶,并接枝PLL和NgR抗体。取新生大鼠海马神经元接种于水凝胶支架材料上,分为HA-NgR抗体-PLL水凝胶组和纯HA水凝胶组。培养7d后,用吖啶橙(AO)染色、抗神经丝蛋白(NF)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色和扫描电镜观察两组细胞的生长情况。结果显示:纯HA水凝胶不利于神经细胞在材料上粘附和突起生长;HA-NgR抗体-PLL水凝胶可以显著增加海马神经元的粘附数量、促进神经元突起形成,同时也能使星形胶质细胞在材料表面生长。上述结果提示:接枝NgR抗体和PLL的HA水凝胶与海马神经元相容性良好,为中枢神经系统损伤修复提供了一种较理想的支架材料。     

胶原凝胶人工皮肤的体外构建

目的 探讨以胶原凝胶为支架材料构建组织工程皮肤的方法.方法 体外分离、培养人皮肤表皮细胞和成纤维细胞,利用本研究所自制胶原蛋白,制备胶原凝胶作为组织工程支架材料;在成功构建人工真皮的基础上,种植表皮细胞,构建人工复合皮肤,运用HE染色与免疫组织化学进行组织学检测.结果 HE染色可见构建的人工复合皮肤具有表皮和真皮双层结构,免疫组织化学染色显示Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白和层粘连蛋白阳性,在形态结构上与正常皮肤相似.结论 培养的人表皮细胞和成纤维细胞种植于胶原凝胶支架行气-液界面培养可构建出具有类似正常皮肤结构的组织工程皮肤.     

低聚乙二醇富马酸酯水凝胶中骨髓来源间充质干细胞的生物学行为

文章快速阅读：  文题释义：水凝胶：是以水为分散介质的凝胶,具有网状交联结构的水溶性高分子中引入一部分疏水基团和亲水残基,亲水残基与水分子结合,将水分子连接在网状内部,而疏水残基遇水膨胀的交联聚合物。是一种高分子网络体系,性质柔软,能保持一定的形状,能吸收大量的水。凡是水溶性或亲水性的高分子,通过一定的化学交联或物理交联,都可以形成水凝胶。这些高分子按其来源可分为天然和合成两大类。天然的亲水性高分子包括多糖类(淀粉、纤维素、海藻酸、透明质酸,壳聚糖等)和多肽类(胶原、聚L-赖氨酸、聚L-谷胺酸等)。合成的亲水高分子包括醇、 丙烯酸及其衍生物类(聚丙烯酸,聚甲基丙烯酸,聚丙烯酰胺,聚N-聚代丙烯酰胺等)。低聚乙二醇富马酸酯水凝胶：是由聚乙二醇和延胡索酸酯与聚乙二醇二丙烯酸酯化学交联而成,具有良好的组织相容性和生物可降解性。实验证明低聚乙二醇富马酸酯水凝胶随着相对分子质量的升高其溶胀度降增加,溶胀比增加引起水凝胶降解速度加快及力学强度减弱。故研制与筛选具有合适溶胀比的低聚乙二醇富马酸酯水凝胶材料是进行骨组织工程支架材料研究的前提。   背景：低聚乙二醇富马酸酯水凝胶是一种具有良好生物相容性及可注射性和可降解性的生物材料。不同相对分子质量水凝胶之间的特性有所差异,将骨髓间充质干细胞包裹其中并诱导细胞成骨分化,相对分子质量相当的水凝胶更有利于细胞增殖和分化,所以采用该材料为骨组织工程支架提供了新的选择。目的：探讨不同相对分子质量的低聚乙二醇富马酸酯水凝胶材料体外包裹大鼠骨髓间充质干细胞的增殖和分化的影响。方法：低聚乙二醇富马酸酯通过氧化还原基团引发系统产生交联,制备出相对分子质量为1000,3000,10000,35 000的低聚乙二醇富马酸酯水凝胶,对水凝胶的溶胀和降解性能进行检测。将骨髓间充质干细胞包裹到4种相对分子质量的水凝胶中,在成骨培养液中诱导1-3周,通过组织学染色(苏木精-伊红染色和茜素红染色)和免疫荧光染色检测水凝胶材料对骨髓间充质干细胞形态的影响以及成骨分化的效果。 结果与结论：①随着水凝胶相对分子质量的增加,成胶时间变短,凝胶的溶胀度明显增加,且随着时间的推移,水凝胶的降解速率与相对分子质量成正比;②细胞复合水凝胶支架材料的组织学与免疫荧光染色结果表明,细胞经过诱导后,在具有适当溶胀与降解特性的相对分子质量为3 000与10 000的水凝胶中所形成的矿化结节数量显著多于在其它两种相对分子质量中的,说明有利于细胞的增殖与分化;③结果表明,低聚乙二醇富马酸酯水凝胶具有良好的生物相容性,且相对分子质量为3 000与     10 000的水凝胶对间充质干细胞的成骨分化有一定的良性调节作用。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程 ORCID:0000-0002-0616-3754(魏丽君)     

淀粉凝胶保存和扫描的一种简便方法

淀粉凝胶是电泳中最常用的支持介质,与丙烯酰胺凝胶相比,它的优点是制备简便,容易切成几层薄片以用于对不同的酶进行染色。但淀粉凝胶干燥时常易卷缩和干裂,不易保存,且透明度不高,不能对一些染色较淡的部分作光电扫描。本文提供了制备完全透明、柔性好的淀粉凝胶干片的简便方法。凝胶先用金属线切成1～2毫米的薄片,染色,然后放在7%醋酸溶液中,用水洗去剩留的试剂,在5%甘油中放置15～30     

抗人胃癌相关蛋白GCRG224多克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的: 制备胃癌相关蛋白GCRG224的多克隆抗体.方法: 在大肠杆菌中表达Thioredoxin/GCRG224融合蛋白,并以所获蛋白免疫新西兰白兔,制备抗GCRG224的多克隆抗体.ELISA、 Western blot法鉴定抗体的效价及特异性.免疫组化染色观察GCRG224在胃癌和正常组织中的表达.结果: 在大肠杆菌中高效表达出相对分子质量(Mr)约为16 800的Thioredoxin/GCRG224融合蛋白,经凝胶回收法得到纯度近100%的蛋白产品.制备了抗GCRG224多克隆抗体.ELISA法检测抗体的效价达到1∶256 000,Western blot证实该抗体可与原核表达的GCRG224蛋白特异性结合.免疫组化染色显示GCRG224在胃癌组织中的表达明显强于正常胃黏膜组织.结论: GCRG224多克隆抗体的成功制备,为进一步深入研究GCRG224的生物学功能及其在胃癌发生发展中的作用奠定了基础.     

中医证侯血浆蛋白质双向凝胶电泳方法的建立及优化

目的建立中医证侯血浆蛋白质双向凝胶电泳（2-DE）方法并对其进行优化。方法以正常人血浆样品为研究对象,对白蛋白/IgG球蛋白去除后血浆样品、全血浆和热SDS法全血浆样品进行pH梯度2-DE分离,凝胶经硝酸银染色后,利用PDQuest软件对2-DE图谱进行重复性分析,并对不同处理方法的全血浆2-DE图像的结果进行比较。结果与全血浆直接上样2-DE凝胶图谱比较,白蛋白/IgG球蛋白去除后血浆上样双向电泳蛋白有所增多,但由于白蛋白/IgG球蛋白去除过程中的非特异性吸附,造成了同一样品在蛋白质图谱上的明显差异;与全血浆直接上样和白蛋白/IgG球蛋白去除后血浆样品上样2-DE凝胶图谱比较,热SDS法处理血浆样品可以得到更多的蛋白质,且重复性好（P〈0.05）,凝胶硝酸银染色显示蛋白质点染色深、分散清楚。结论热SDS法全血浆上样2-DE分析法具有蛋白丢失少、操作简便、重复性好的特性,是证侯血浆蛋白质组学研究的有效手段。     

基因工程β型干扰素的分离纯化

人β型干扰素工程菌经发酵培养、裂解后，用硫酸铵分级分离及有机溶剂抽提-酸沉淀两种方法对粗制品进行部分纯化，然后用疏水层析、凝胶过滤和旋转等电聚焦电泳对部分纯化品再纯化，结果显示：部分纯化的基因工程人β型干扰素经疏水层析、凝胶过滤后，有较高的回收率（前者为９３．３６％，后者为８０．６％）；经旋转等电聚焦电泳，一步纯化３１．７５倍，回收率为５６．２５％，比活性达１．０２×１０~７Ｕ／ｍｇ蛋白。     

可注射生物降解型复合淀粉水凝胶修复关节骨-软骨缺损的应用研究

目的 开发一种可注射和生物降解型的水凝胶,并研究该水凝胶对软骨细胞增殖和功能表达的影响,以及在大鼠膝关节骨-软骨缺损模型中的修复效果。方法 以硅酸钙溶液和淀粉为主要原料加入添加剂后制备复合淀粉水凝胶,通过流变学测试、注射器推出实验和体外浸泡实验对其流变学性能、可注射性和降解性能进行表征。分离提取幼年大鼠膝关节软骨细胞并与材料浸提液进行共培养,通过CCK-8细胞增殖测试和细胞Live/Dead染色方法测定细胞毒性和活性,并通过PCR定量测试成软骨相关基因的表达量。构建大鼠膝关节骨-软骨缺损模型,通过局部注射复合淀粉水凝胶进行干预,在2周、4周和6周取大鼠膝关节标本行宏观、组织学染色评估和分析。结果 复合淀粉水凝胶具有介于固态和液态之间的流变学特征,在15 N外力下可从22 G针头中稳定推出,在PBS溶液中浸泡10 d后质量损失率为38wt.%。复合淀粉水凝胶浸提液对软骨细胞增殖无抑制作用,并提高了其Ⅱ型胶原基因和SOX-9基因的表达量。动物实验显示治疗4周和6周后复合淀粉水凝胶组的组织学评分高于未治疗组,组织学染色也显示该水凝胶可促进软骨细胞外基质合成。结论 复合淀粉水凝胶具有良好的可注射性、可降解性和生物相容性,可以提升软骨细胞Ⅱ型胶原基因和SOX-9基因的表达量,并可在体内促进骨-软骨缺损修复。     

基于分层策略的凝胶图像间蛋白点匹配算法

凝胶图像间蛋白点比对分析是蛋白质组学研究的重要方法,针对凝胶图像间蛋白点人工比对工作量大和易出错等问题,提出一种基于分层策略的凝胶图像间蛋白点自动匹配算法。首先将每张凝胶图像中的蛋白点按不同灰度等级划分到对应层级中;然后根据蛋白点的灰度相关性,采用归一化互相关法对各层级蛋白点进行粗匹配;最后以粗匹配蛋白点点对作为标记特征点,采用几何相关法和相似性准则,实现蛋白点间的精确匹配。通过对国际凝胶图和Bio-Rad公司测试图等不同图源的凝胶图像进行蛋白点匹配实验,结果表明,该算法具有较高的匹配精度,其匹配误差小于4%,对不同来源和不同图像形变的凝胶图像都具有较好的稳定性。     

含IKVAV肽体内诱导血管生成的实验研究*

目的探讨含IKVAV肽体内自组装成凝胶材料诱导血管生成的可行性。方法实验组:配制1%的肽溶液,pH=9．0。对照组:配制16．67%的明胶,pH=7．4。各取1毫升,分别注射植入大鼠背部脊柱两侧皮下。观察植入后一周内鼠的全身反应及植入部位的皮肤变化。结果二周后取材,固定,常规HE染色及VEGF免疫组织化学染色。术后一周实验动物存活良好,无全身不良反应,植入部位皮肤无红肿、无坏死。实验组:植入点的1%的肽自组装成凝胶,HE染色显示,凝胶与周围组织间整合好,无炎性细胞浸润,周围有血管长入凝胶内部,血管腔内可发现红细胞,术后两周,VEGF免疫组织化学染色阳性。对照组:HE染色,明胶与组织的相容性好,在明胶内未发现血管;VEGF免疫组织化学染色阴性。结论含IKVAV肽体内可自组装成凝胶,并且可诱导新生血管在凝胶内生成。     

应用微机处理聚丙烯酰胺凝胶电泳银染色图像结果

聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)是核酸研究中的重要实验技术。以 PAGE为基础的聚合酶链反应结合单链构象多态性分析 (PCR- SSCP)技术已成为筛查基因突变的基本方法〔1 - 3〕,特别是以硝酸银染色显示结果的非同位素 PCR-SSCP技术受到国内科研工作者的喜爱〔4,5〕。银染色使凝胶中的 DNA条带肉眼可见 ,因此银染凝胶片是重要的原始资料 ,常用吸水纸〔4〕将凝胶制成干胶片后保存 ,拍照记录结果 ,但较为麻烦。最近我们在采用银染色 PCR- SSCP技术筛检胃癌组织 p5 3基因突变时 ,直接应用微机对 PAGE银染色图象结果进行处理和保存 ,简便…     

疏水电荷诱导层析用于抗体纯化的研究进展

单克隆抗体、多克隆抗体及抗体片段在科学研究和医药领域中的位置越来越重要,抗体的纯化技术也在不断发展.疏水电荷诱导层析是最近几年发展起来的一项新技术,该技术的基础是一种双模式的配基,这种配基对盐离子的浓度没有依赖.在中性pH条件下,通过疏水相互作用与蛋白结合,在酸性条件下与蛋白分离.由于该技术在抗体纯化方面具有操作简单、费用低、纯度高等优点而被迅速用于抗体的分离和纯化.了解疏水电荷诱导层析的基本原理、发展概况以及在抗体纯化方面的应用很重要.