慢性缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞胞内钙的影响及其机制研究

目的:研究慢性缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)胞内钙浓度(［Ca²⁺］_i)的影响及L-型钙通道和胞内钙库的作用,为缺氧性肺动脉高压(HPH)发病机制的进一步研究提供理论依据。 方法:复制大鼠缺氧性肺动脉高压动物模型，利用Fura－2/AM钙离子成像方法测定PASMCs在不同钙离子浓度细胞外液及L-型钙通道阻滞剂nifedipine和IP3R钙通道抑制剂肝素干预前后 ［Ca²⁺］_i变化。 结果:(1)缺氧＋含钙外液组PASMCs ［Ca²⁺］_i 显著高于对照＋含钙外液组（P<0.05）。缺氧＋含钙外液组PASMCs ［Ca²⁺］_i显著高于缺氧＋无钙外液组（P<0.05）。(2)缺氧nifedipine组PASMCs［Ca²⁺］_i在加药前后无显著差异（P>0.05）。（3）缺氧未干预组与缺氧肝素组PASMCs ［Ca²⁺］_i无明显差异（P>0.05）。 结论:慢性缺氧可使PASMCs的［Ca²⁺］_i增加。慢性缺氧引起［Ca²⁺］_i增加可能与细胞外钙内流有关，L-型钙通道和IP3R钙通道在调节［Ca²⁺］_i的过程中可能不独立发挥作用。     

［Ca2+］i对大鼠肺动脉平滑肌细胞膜钙激活氯离子通道的调节作用

目的： 探讨细胞浆内游离钙离子浓度（［Ca²⁺］_i）在常氧、急性和慢性低氧条件下对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)膜钙激活氯离子通道（Cl_Ca）的调节作用。 方法: 常规离体血管灌流法检测急性低氧时肺动脉环张力变化；钙荧光探针(Fura-2/AM)负载培养PASMCs，观察常氧和慢性低氧条件下［Ca²⁺］_i的变化并由此对Cl_Ca的影响；同时用四唑盐(MTT)比色法观察当［Ca²⁺］_i变化时Cl_Ca对PASMCs增殖的影响。 结果: (1) Cl_Ca阻断剂尼氟灭酸（NFA）和indaryloxyacetic acid (IAA-94)可以舒张急性低氧引起的肺动脉环收缩。(2) 慢性低氧时［Ca²⁺］_i升高：常氧状态下, PASMCs ［Ca²⁺］_i为(123.63±18.98)nmol/L，低氧时为(281.75±16.48)nmol/L (P<0.01)。(3) 常氧时，NFA和IAA-94对［Ca²⁺］_i 无明显影响(P>0.05)。(4) 慢性低氧时, NFA和IAA-94使PASMCs ［Ca²⁺］_i由(281.75±16.48)nmol/L降低到(117.66±15.36)nmol/L (P<0.01)。(5)MTT比色法中，慢性低氧状态下NFA和IAA-94引起升高的吸光度(A)值降低，由0.459±0.058到0.224±0.025 (P<0.01)。 结论: 低氧引起［Ca²⁺］_i升高，这可能激活Cl_Ca，对［Ca²⁺］_i起正反馈作用，Cl_Ca可能在低氧肺动脉高压中起作用；慢性低氧条件下Cl_Ca可能参与促进大鼠PASMCs的增殖。     

钙蛋白酶调节致心肌细胞肥大的信号转导

目的： 探讨钙敏感的calpain对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）介导的致心肌细胞肥大的钙调神经磷酸酶（CaN）信号通路的调节。方法: 原代培养的乳鼠心肌细胞为模型，AngⅡ刺激细胞Ca2+内流和（或）内贮细胞Ca2+释放， ［3H］-Leu掺入法反映心肌细胞蛋白合成速率，Fura-2/AM比率荧光成像分析细胞内钙信号变化，免疫印迹检测心肌细胞μ-calpain、m-calpain、CaN磷酸化及蛋白表达。结果: Ang Ⅱ呈浓度依赖性（10^-8-10^-5 mol·L^-1）促心肌细胞［Ca2+］i增加,各刺激组［Ca2+］i与对照组差异显著(P<0.01或P<0.05)。AngⅡ（10-7 mol·L^-1）剌激心肌细胞15 min后, μ-calpain的磷酸化明显增加，但其蛋白表达量无显著改变（P>0.05）, m-calpain蛋白表达及磷酸化量显著差异，CaN的蛋白表达量无显著改变，但其磷酸化增强, 环孢素A（CsA）抑制CaN的磷酸化。AngⅡ可使无血清培养新生大鼠心肌细胞［3H］-Leu掺入率随时间增加而增加，与对照组差异显著(P<0.01或P<0.05)，且在10^-8-10^-5 mol·L^-1范围内呈量效依赖关系。结论: AngⅡ剌激细胞外Ca2+跨膜内流和（或）内贮Ca2+的释放导致μ-calpain的激活，进一步激活钙敏感的CaN信号通路，在心肌肥厚的病理过程中起重要作用。     

缺氧促进人脐静脉内皮细胞血红素氧合酶表达及［Ca2+］i变化

目的:　观察低氧培养诱导人脐静脉内皮细胞增殖和血红素氧合酶表达，以及对细胞内游离钙离子浓度［Ca²⁺］_i）的影响。方法:　采用四唑盐(MTT)比色法和流式细胞技术检测人脐静脉内皮细胞增殖；逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测缺氧与血红素氧合酶表达间的关系；钙荧光探针(Fura-2/AM)负载培养的人脐静脉内皮细胞, 观察常氧、低氧条件下［Ca²⁺］_i的变化。结果:　缺氧可促进脐静脉内皮细胞增殖和上调血红素氧合酶的表达，且与血红素氧合酶表达量间具有一定时间范围内的依赖性；同时促进［Ca²⁺］_i升高。结论:　缺氧促进人脐静脉内皮细胞增殖并上调血红素氧合酶的表达、细胞内游离钙离子水平升高，三者可能共同参与血管张力的调节。     

卡托普利对缺氧/复氧乳鼠心室肌细胞游离钙的影响及其离子通道机制

目的：观察卡托普利晚期预处理对缺氧/复氧乳鼠心室肌细胞游离钙的影响及其离子通道机制。方法:建立培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型。设正常对照组、缺氧/复氧组、缺氧预适应组和卡托普利组。经Flou-3/AM负载染色后，采用流式细胞分析技术，测定细胞内钙离子浓度(［Ca²⁺］i)；利用膜片钳技术，观察L-型钙通道和钠钙交换电流的变化。结果:（1）缺氧/复氧时，［Ca²⁺］i和Na⁺/Ca²⁺交换电流高于正常对照组（P<0.01），L-型钙电流（I_Ca-L）峰值下降，I-V曲线上移，半数失活电压(V_0.5)减小，ICa-L失活曲线左移。（2）晚期预处理和卡托普利使缺氧/复氧时［Ca²⁺］i低于缺氧/复氧组（P<0.01）；I_Ca-L增加，I-V曲线下移，V_0.5增大及稳态失活曲线右移；Na⁺/Ca²⁺ 交换电流减少；但［Ca²⁺］i和Na⁺/Ca²⁺交换电流高于对照组（P<0.05）。（3）卡托普利组与缺氧预适应组比较上述指标均无显著差异 。结论：心肌细胞缺氧/复氧，通过Na⁺/Ca²⁺交换电流的异常增加可引起［Ca²⁺］i的异常升高及其钙超载；卡托普利通过轻度增加Na⁺/Ca²⁺交换电流及其［Ca²⁺］i而触发晚期预处理，抑制后续缺氧/复氧引起的Na⁺/Ca²⁺交换电流及其［Ca²⁺］i的异常增加。     

高脂饮食兔肺泡巨噬细胞［Ca2+］i及ACE活性变化

目的： 了解高脂饮食对兔肺泡巨噬细胞胞浆游离钙浓度(［Ca²⁺］_i)及血管紧张素Ⅰ转换酶 (ACE) 活性的影响，探索哮喘与高脂饮食相关的可能机制。方法: 高胆固醇饮食法建立高脂兔模型(ｎ=6)，8周后离体支气管肺泡灌洗；Fura2/am测定肺泡巨噬细胞［Ca²⁺］_i,紫外法检测ACE活性。结果: 高脂组肺泡巨噬细胞［Ca²⁺］_i显著高于正常组 (P＜0.01)；其支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺泡巨噬细胞上清液中ACE活性显著高于正常组 (均P＜0.01)；高脂组BALF中肺泡巨噬细胞数、肺泡巨噬细胞［Ca²⁺］_i 及肺泡巨噬细胞培养上清液ACE活性均与血清总胆固醇含量呈正相关，r分别为0.851、0.840、0.847(均P＜0.05)。结论: 高脂饮食导致兔肺泡巨噬细胞活化，活性增高的肺泡巨噬细胞处于易激状态。     

血管生成素-1激活tyrosine kinase/PI3K增加血管内皮细胞［Mg2+］i

目的：探讨血管生成素-1（Ang-1）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）内游离镁离子浓度（［Mg²⁺］_i）的调节机制。方法:我们采用荧光指示剂mag-fura-2，运用PTi 阳离子测定系统动态测HUVECs的［Mg²⁺］_i。结果:Ang-1诱导的［Mg²⁺］_i增加与细胞外Mg2+浓度无关。Ang-1诱导的［Mg²⁺］_i增加与细胞内Ca2+浓度无关。经酪氨酸激酶阻断剂(tyrphostin A23 和 genistein), 磷脂酰3激酶阻断剂 (wortmannin和LY294002)预处理，均显著阻断Ang-1诱导的［Mg²⁺］_i增加。但经活化丝裂原激活激酶阻断剂(SB202190和PD98059) 预处理，不能阻断Ang-1诱导的［Mg²⁺］_i增加。结论:Ang-1通过酪氨酸激酶/磷脂酰3激酶信号传递途径使细胞内的Mg2+库释放Mg2+，从而增加HUVECs的［Mg²⁺］_i。     

雌激素对内皮素诱导心肌细胞肥大反应的影响及其机制

目的： 探讨雌激素（E₂）对内皮素-1（ET-1）诱导心肌细胞肥大反应的影响及其机制。方法： 以ET-1刺激体外培养的新生大鼠心肌细胞，建立心肌肥大细胞模型；观察E₂对ET-1诱导心肌细胞肥大反应的影响，并检测心肌细胞中ERK1/2活性的变化。结果： ET-1可使心肌细胞蛋白质含量、表面积和［³H］^-亮氨酸掺入显著增加，这些作用可被E₂明显抑制。E₂预处理抑制ET-1诱导的心肌细胞ERK1/2活性的增加。雌激素受体拮抗剂他莫昔芬（Ta）可抑制E₂对ET-1诱导的心肌细胞［³H］^-亮氨酸（［³H］^-Leu）掺入和ERK1/2活性的作用。MEK1/2抑制剂PD98059预处理使ET-1诱导的心肌细胞［³H］^-Leu掺入减少，使E2对ET-1诱导的心肌细胞肥大反应的抑制作用加强。结论： E₂通过雌激素受体抑制ET-1诱导的心肌细胞肥大反应，这一过程与ERK1/2信号转导途径有关。     

细胞内钙信号对锌指转录因子及胚心标志基因的调控

目的：探讨心肌细胞内游离钙离子浓度（［Ca2+］i）变化对锌指转录因子及胚心标志基因的影响。 方法: 以原代培养的乳鼠心肌细胞为模型，血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）及雷尼丁(RY)剌激心肌细胞跨膜钙内流及细胞内钙释放; Fura-2/AM比率荧光成像系统分析细胞内钙信号；免疫印迹(Western blotting)检测心肌细胞钙调神经磷酸酶(CaN)、活化T细胞核因子（NFAT3）、锌指转录因子（GATA4）、α-actin蛋白表达，RT-PCR 检测心肌球蛋白重链（β-MHC）mRNA表达。 结果: AngⅡ及RY均可使心肌细胞内［Ca2+］i增加，与对照组相比差异显著（P<0.01）。AngⅡ、RY刺激1、3 d，心肌细胞CaN、NFAT3、GATA4、α-actin蛋白表达及β-MHC mRNA表达明显高于对照组(P<0.05或P<0.01)。 结论: 细胞内钙信号的变化可能通过影响CaN及ERK信号通路，增加心肌细胞胚心标志基因的表达,在心肌细胞肥大的病理过程中起重要作用。     

钙调神经磷酸酶参与心衰患者心肌重构的信号转导

目的：探讨血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)介导的钙调神经磷酸酶（CaN）信号通路参与心力衰竭（CHF）患者心肌重塑的机制。方法:选择因瓣膜性心脏病接受二尖瓣置换术的CHF病人39例，正常对照38例(其中8例来自意外伤亡的器官捐献者)。彩色多普勒超声心动图仪检测心脏扩大和心功能参数。放免法检测血浆及心肌组织Ang Ⅱ浓度，免疫沉淀法测心肌组织CaN、活化T细胞核因子(NFAT₃）、锌指转录因子(GATA₄)磷酸化及蛋白表达，RT-PCR检测肌球蛋白重链（β-MHC）mRNA表达。结果:AngⅡ分别与心脏扩大参数呈显著正相关，而与心功能参数呈显著负相关。CHF患者心肌组织CaN蛋白表达、CaN磷酸化、GATA^₄蛋白表达及β-MHC mRNA表达明显高于对照组，随心功能恶化其表达逐渐增加；NFAT₃磷酸化随心功能恶化而减弱。结论：肾素血管紧张素系统（RAS）激活的CaN信号通路在CHF患者心肌重构机制中可能起重要作用。     

钙调神经磷酸酶在cTnI基因Asp128Tyr突变致心肌肥大中的作用*

 目的：探讨钙调神经磷酸酶（CaN）在心肌钙蛋白I（cTnI）基因第128位天冬氨酸→酪氨酸（Asp128Tyr）突变致心肌肥大中的作用。方法：乳鼠心肌细胞,以心钠素（ANF）、脑钠肽(BNP) mRNA表达作为心肌肥大指标,观察含cTnI Asp128Tyr突变基因的腺病毒转染对心肌细胞的作用,并观察CaN抑制剂环孢菌素A（CsA）或FK506对突变基因转染的影响。Real-time PCR检测ANF、BNP和CaN mRNA表达变化, 同时行CaN活性测定。结果：转染含cTnI Asp128Tyr突变基因腺病毒的心肌细胞增大,胞内ANF和BNP 的mRNA表达较空白对照组、不含任何目的基因的阴性对照腺病毒转染组和转染含野生型cTnI基因的腺病毒组增高（P<0.05）。与含野生型cTnI基因的腺病毒组相比,转染含cTnI Asp128Tyr突变基因的腺病毒组在ANF和BNP mRNA表达升高的同时存在CaN活性升高和CaN mRNA表达上调（P<0.05）。转染含cTnI Asp128Tyr突变基因的腺病毒并用CsA或FK506干预后,心肌细胞缩小,胞内ANF和BNP mRNA表达量较单纯转染含cTnI Asp128Tyr突变基因的腺病毒组降低（P<0.05）,同时心肌细胞内CaN活性显著下降（P<0.05）,CaN mRNA表达下调（P<0.05）。结论：cTnI Asp128Tyr突变可引起心肌细胞肥大;CaN信号通路参与了cTnI Asp128Tyr突变致心肌肥大过程的调控。     

维生素E对D-半乳糖诱致衰老小鼠脑抗氧化能力、钙稳态和线粒体DNA（mtDNA）损伤的影响

目的：探讨维生素E（Vit-E）对D-半乳糖诱致衰老小鼠脑抗氧化能力、胞浆游离Ca²⁺（［Ca²⁺］i）稳态和线粒体DNA（mtDNA）损伤的影响。方法:小鼠连续皮下注射（sc）D-半乳糖（1 000 mg·k^-1·d^-1）8周制备衰老模型，并于第3周开始给予维生素E（100 mg· kg^-1；250 mg· kg^-1）处理；8周后采用水迷宫测定小鼠学习记忆能力，并取脑组织测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和琥珀酸脱氢酶（SDH）活性，测定一氧化氮（NO）含量和一氧化氮合酶（NOS）活性。Fura-2/AM负载法和PCR方法分别测定海马神经细胞［Ca²⁺］i浓度和mtDNA缺失突变。结果:维生素E处理能明显改善D-半乳糖诱致衰老小鼠学习记忆障碍，抑制脑组织NOS活性，降低NO含量，提高GSH-Px和SDH活性，降低［Ca²⁺］i水平（P＜0.01， P＜0.05），并防止mtDNA缺失突变的发生。结论:维生素E具有提高衰老小鼠脑抗氧化能力和调节［Ca²⁺］i稳态的作用，并抑制氧化应激引起的mtDNA损伤，从而改善衰老动物学习记忆障碍。     

Gax基因转染对低氧性PASMCs增殖及原癌基因表达的影响

目的： 探讨生长终止特异性同源盒Gax基因转染对低氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)中原癌基因c-fos、c-jun mRNA表达及细胞增殖的影响。方法：腺病毒介导Gax基因(Ad-Gax)转染PASMCs。在常氧（21％O₂）和低氧（2.5％O₂）12 h条件下，利用RT-PCR和免疫细胞化学法分别测定转染组和未转染组PASMCs中Gax mRNA和蛋白表达，以及c-fos、c-jun mRNA表达变化；［³H］-TdR掺入法检测各组PASMCs增殖情况。结果：RT-PCR和免疫细胞化学法证实Gax基因转染后PASMCs中Gax能稳定过表达；转染组细胞c-fos、c-jun mRNA表达水平在常氧和低氧均低于未转染组细胞（P<0.05,P<0.01）；未转染组低氧时［³H］-TdR掺入量比常氧时高（P<0.01）；在常氧和低氧时转染组［³H］-TdR掺入量均低于未转染组（P<0.05，P<0.01）。结论：Gax基因过表达可能通过下调c-fos、c-jun基因的表达来抑制低氧性PASMCs的增殖。     

硫化氢对体外大鼠肝星状细胞内Ca2+浓度变化及细胞增殖的影响

目的 研究硫化氢(H₂ S)对大鼠肝星状细胞-T6(HSC-T6) Ca²⁺浓度、细胞增殖的影响及其机制。 方法 活化HSC-T6用含10%小牛血清DMEM培养液制备为1×10⁵个肝星状细胞(HSC)悬液。钙离子荧光探针Fluo-3/AM负载细胞后，在不同刺激条件下，利用激光扫描共焦显微镜动态扫描HSC-T6细胞内Ca²⁺荧光强度（FI）变化，FI表示细胞内Ca²⁺浓度。四唑盐比色法，观察不同浓度H₂S供体——NaSH对HSC-T6细胞增殖的影响。 结果 低浓度H₂S（100μmol/L）明显降低HSC-T6细胞内Ca²⁺浓度（P<0.05)，而细胞增殖增加（增殖率为116%）；K_ATP通道阻断剂——格列本脲可阻断H2S的作用。高浓度H₂S（1mmol/L）刺激HSC-T6细胞内Ca₂₊浓度增加，但细胞增殖无明显变化(P＞0.05)。 结论 低浓度H₂S通过激活HSC-T6细胞K_ATP通道降低细胞内Ca²⁺浓度，可能通过调节细胞氧化应激促进细胞增殖；高浓度H2S刺激HSC-T6细胞内Ca₂₊浓度增加。提示H₂S在肝硬化门脉高压症的发生机制中具有双重作用。     

PGF2α促进NIT-1β细胞葡萄糖刺激性胰岛素分泌的相关机制研究

目的:探讨PGF₂α促进葡萄糖刺激性胰岛素分泌的作用机制。 方法:运用放免方法检测PGF₂α在不同情况下对NIT-1β细胞葡萄糖刺激性胰岛素分泌量的变化，并以Fluo-3AM为探针，利用激光共聚焦显微镜检测细胞内钙的改变。 结果:在0和5.5 mmol/L葡萄糖时，5 μmol/L的PGF₂α使NIT-1β细胞胰岛素分泌无明显增加；但在16.5 mmol/L葡萄糖时，PGF₂α明显增加胰岛素分泌（P<0.01）；ddA或Ly-83583对PGF₂α增强的胰岛素分泌没有显著影响（均P<0.01），预先给予U-73122抑制了PGF₂α促进的胰岛素分泌（P<0.01）；预先给予calphostin C，PGF₂α也不能进一步诱导增强胰岛素的分泌（P<0.05）。另外，PGF2α能够引起β细胞内钙升高，预先给予ddA或Ly-83583，均不能阻断其作用，而预先给予U-73122则抑制了PGF₂α引起的β细胞内钙升高。 结论:PGF₂α增强高浓度葡萄糖刺激下的胰岛素分泌，可能是通过激活PLC双信号途径，诱导细胞内钙升高和激活PKC途径发挥作用。另外，PGF₂α的作用与cAMP/PKA或cGMP/PKG信息通路可能没有关系。     

西红花酸对H2O2诱发心肌细胞凋亡及相关调控蛋白caspase-3、Bcl-2表达改变的影响

目的：探讨西红花酸对过氧化氢（H₂O₂）诱导的培养心肌细胞凋亡及相关调控蛋白caspase-3、Bcl-2表达改变的作用。 方法： 通过光镜观察细胞形态、碘化丙啶（PI）染色法和流式细胞术相结合检测培养细胞凋亡率、免疫荧光染色法和流式细胞术相结合检测细胞中caspase-3、Bcl-2蛋白。 结果： 在本实验使用浓度范围内，各浓度H₂O₂组细胞形态明显改变、凋亡率明显高于正常对照组，1×10^-4 mol·L^-1 H₂O₂可使培养心肌细胞Bcl-2蛋白表达明显减少，而caspase-3表达明显增多；各剂量西红花酸组细胞形态学改变减少、凋亡率明显低于1×10^-4 mol·L^-1 H₂O₂组，细胞中Bcl-2蛋白减少幅度与caspase-3增加幅度均减小，且较高浓度（5×10^-5 mol·L^-1）西红花酸组比较低浓度（5×10^-7 mol·L^-1）西红花酸组作用也更明显（P<0.05）。 结论： 西红花酸能够减轻H₂O₂对培养心肌细胞的损伤性凋亡作用，可能与稳定细胞内凋亡相关调控蛋白caspase-3、Bcl-2的功能有关。     

内洋地黄素拮抗剂上调缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞膜钠泵亚基的表达

目的： 观察内洋地黄素特异性拮抗剂地高辛抗血清对心肌缺血再灌注（MIR）损伤大鼠心肌组织内洋地黄素水平、钠泵活性、线粒体总钙浓度以及钠泵各亚基基因表达的影响，探讨内洋地黄素在心肌缺血再灌注损伤中的作用及其机制。方法: 将56只雄性SD大鼠随机分成7组，每组8只。假手术对照组（sham）：丝线穿过左冠状动脉前降支，但不结扎；缺血再灌注组（MIR）：结扎左冠状动脉前降支30 min，再灌注45 min；生理盐水组（NS）、维拉帕米组（Ver）、小剂量、中剂量、大剂量地高辛抗血清组（ADA）：于再灌注前5 min经股静脉分别注射生理盐水、维拉帕米5 mg·kg^-1、地高辛抗血清8.6 mg·kg^-1、 17.3 mg·kg^-1、34.5 mg·kg^-1，容积均为5 mL·kg^-1，5 min内注射完毕，其余同MIR模型组。再灌注结束后，立即取缺血区左室心肌检测心肌匀浆内洋地黄素水平、心肌细胞膜Na+ K+_ATP酶和Ca2+_Mg2+_ATP酶活性、线粒体总钙浓度；分别采用RT-PCR及Western blotting方法和免疫组化方法检测心肌钠泵α₁、α₂、α₃和β₁亚基mRNA及蛋白水平基因表达的改变。结果: 心肌缺血再灌注损伤时，心肌组织内洋地黄素水平明显升高，心肌细胞膜钠泵和Ca2+_Mg2+_ATP酶活性显著下降，线粒体总钙浓度升高，钠泵α₁、α₂、α₃和β₁亚基在mRNA及蛋白水平基因表达均明显下降；维拉帕米除具有降低线粒体总钙浓度外，对其它各项指标无明显影响。地高辛抗血清呈剂量依赖性地显著降低心肌组织内洋地黄素水平，恢复细胞膜钠泵和Ca2+_Mg2+_ATP酶活性，降低线粒体总钙浓度，上调钠泵α₁、α₂、α₃和β₁亚基mRNA及蛋白水平的基因表达。结论: 心肌缺血再灌注促进机体内洋地黄素分泌增加，后者通过下调心肌细胞膜上的钠泵α₁、α₂、α₃和β₁亚基基因表达抑制钠泵活性，进而抑制Ca2+_Mg2+_ATP酶活性，导致线粒体内钙超载，介导心肌缺血再灌注损伤。内洋地黄素特异性拮抗剂地高辛抗血清通过阻断内洋地黄素的生物学作用，上调钠泵各亚基的基因表达，发挥其抗心肌缺血再灌注损伤的作用。     

甘氨酸受体在甘氨酸抗心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用机制研究

目的：探讨甘氨酸受体在心脏保护中的作用及甘氨酸受体的性质。方法：利用原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞建立心肌缺氧/复氧(A/R)模型，并用甘氨酸受体阻断法和消除细胞外氯离子法, 测定各组培养心肌细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）及一氧化氮（NO）的含量、钙离子浓度和心肌细胞凋亡率。结果：A/R组用甘氨酸处理后SOD活性、NO含量升高，MDA含量、［Ca²⁺］_i、细胞凋亡率降低，与A/R组比较显著差异。分别用甘氨酸受体阻断剂士的宁和消除细胞外氯离子处理后，甘氨酸的上述保护作用明显减弱，与A/R组比较无显著差异。结论：甘氨酸能抑制缺氧/复氧乳鼠心肌细胞的自由基生成、抑制钙超载，减轻心肌细胞的凋亡并增加细胞内SOD等保护蛋白和NO的合成而发挥细胞保护作用。甘氨酸的细胞保护作用可能是通过甘氨酸受体发挥作用的，甘氨酸受体的本质可能是甘氨酸门控氯离子通道。     

普罗布考抑制bFGF和H2O2引起的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖

目的： 研究普罗布考抑制碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和H2O2促大鼠主动脉平滑肌细胞（RASMCs）增殖的机制。方法: 采用MTT、［³H］-TdR掺入法、流式细胞术和RT-PCR观察普罗布考对bFGF和H₂O₂刺激条件下细胞周期、细胞增殖和凋亡的影响。结果: ①普罗布考抑制bFGF和H₂O₂刺激RASMCs增殖。细胞计数、A值和［³H］-TdR掺入量分别下降了40.0%、39.1%、45.5%和46.9%、45.0%、39.5%（P<0.05，P<0.01）。②普罗布考使RASMCs生长停滞在G₀/G₁期，抑制bFGF刺激的细胞增殖，通过诱导细胞凋亡和抑制细胞生长2种方式抑制H₂O₂刺激的细胞增殖。③bFGF和H₂O₂分别使ERK1mRNA表达量增加近4倍和6倍，MKP-1mRNA表达量下降了62.4%和82.2%。普罗布考抑制ERK1mRNA表达，使H₂O₂诱导的MKP-1表达下降上调，而对bFGF诱导MKP-1表达下降无明显影响。结论: 普罗布考通过降低ERK1mRNA表达抑制细胞周期运转和诱导RASMCs凋亡，从而抑制bFGF和H₂O₂刺激引起的细胞增殖。     

环胞霉素A抑制神经肽Y诱导大鼠心肌细胞肥大效应

目的:观察Ca²⁺/CaM依赖的钙调神经磷酸酶(CaN)抑制剂环胞素A(CsA)对神经肽Y诱导心肌细胞肥大效应的影响。方法:用神经肽Y(NPY)刺激Wistar乳鼠心肌细胞,并用环胞素A加以干预。应用氚-亮氨酸([³H]-Leu)掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率、RT-PCR法测心肌细胞c-junmRNA表达。结果:(1)心肌细胞氚-亮氨酸([³H]-Leu)掺入量测定:与对照组相比,NPY10nmol/L组氚-亮氨酸([³H]-Leu)掺入量有所增高,但与对照组比无显著差别,而NPY100nmol/L组心肌细胞氚[³H]-Leu掺入量较对照组明显增高(P＜0.05)。CsA组和对照组相比无显著差别。(2)心肌细胞内c-junmRNA表达:NPY组心肌细胞c-junmRNA的RT-PCR产物量明显高于对照组和CsA组(P＜0.01),对照组和CsA组间无显著差别。结论:NPY刺激心肌细胞蛋白质合成增加、心肌细胞原癌基因(肥大早期反应基因)c-junmRNA表达,提示NPY可诱导心肌细胞肥大;CaN抑制剂CsA可阻断NPY上述效应,说明Ca²⁺/CaM依赖的CaN信号途径在其中起重要作用。