支气管哮喘患儿治疗前后血清GM-CSF、IL-8和IL-6联检的临床意义

目的：探讨了支气管哮喘患儿血清GM—CSF、IL-8和IL-6水平的变化及意义。方法：应用放射免疫分析对32例支气管哮喘患儿进行了血清GM—CSF、IL-8和IL-6水平测定，并与30例正常健康儿作比较。结果：支气管哮喘患儿血清GM—CSF、IL-8和IL-6水平非常显著地高于正常儿组（P〈0．01）。经治疗3个月后则与正常儿比较无显著性差异（P〉0．05）。结论：血清GM—CSF、IL-8和IL-6水平的异常升高足支气管哮喘患儿发病的病理因素之一．有重要的临床价值。     

人鼻咽癌细胞系CNE2分泌蛋白质谱的初步建立

目的：建立鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）细胞系CNE2细胞的分泌蛋白质谱。方法：采用无血清培养法培养CNE2细胞，超滤法脱盐并浓缩细胞培养上清制备分泌蛋白质，采用双向凝胶电泳技术（two-dimensional electrophoresis，2-DE)分离蛋白质，应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS)鉴定蛋白质，利用生物信息学资源对所鉴定的蛋白质的功能和亚细胞定位进行分析。结果：建立了CNE2细胞分泌蛋白质的2-DE图谱，鉴定了52种非冗余的CNE2细胞分泌蛋白质，并对52种蛋白质按功能和亚细胞分布进行了初步分类。结论：初步建立CNE2细胞的分泌蛋白质谱，为研究鼻咽癌分泌蛋白质在鼻咽癌发生发展中的作用提供了有意义的资料。     

IGT患者IL-6、TNF-α与胰岛素抵抗的相关性分析

胰岛素抵抗（IR）是2型糖尿病（DM2）和糖耐量低减（IGT）的主要病因之一。近年来发现多种炎性因子如白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、C反应蛋白（CRP）等都参与了糖脂代谢紊乱及动脉硬化的过程，并与胰岛素抵抗的发生发展有密切关系。本文检测了IGT患者血清IL-6、TNF-α水平的变化，并探讨炎性因子与胰岛素抵抗的相关性。     

钙蛋白酶小亚基Capn4在鼻咽癌细胞CNE2中DNA损伤修复的作用

目的　研究钙蛋白酶小亚基Capn4对放射所致的鼻咽癌细胞CNE2在DNA损伤修复中的作用及可能影响的修复通路。 方法　选取鼻咽癌细胞CNE2与293T细胞在37℃、5％CO2条件下培养,Western blot法检测Capn4在不同细胞中蛋白表达水平;构建shRNA下调Capn4表达的CNE2细胞并以Western blot法验证;高内涵细胞成像分析仪分析γ-H2AX在放射后的CNE2细胞及下调Capn4表达的CNE2细胞中的平均荧光强度;非同源末端连接（NHEJ）通路特异性的质粒EJ5-GFP用Fugen6 HD转入空载的CNE2细胞及下调Capn4的CNE2细胞,用高内涵细胞成像分析仪检测GFP的阳性率,观察下调Capn4对放射诱导的鼻咽癌细胞DNA损伤NHEJ修复通路的影响。 结果　Capn4在鼻咽癌细胞系中表达明显高于正常细胞（P<0.01）;shRNA确实下调Capn4在鼻咽癌细胞中的表达;下调Capn4表达对放射造成的CNE2细胞DNA损伤修复有抑制作用（P<0.01）;下调Capn4表达能够抑制CNE2细胞DNA损伤后NHEJ通路的修复（P<0.01）。 结论　Capn4在鼻咽癌细胞CNE2中高表达,下调Capn4的表达能抑制放射所致的DNA损伤修复,这种作用可能是通过抑制NHEJ通路实现的。     

p53沉默对人鼻咽癌细胞株CNE2放射生物学特性的影响

目的：研究p53沉默对鼻咽癌(NPC)细胞株CNE2放射敏感性的影响，探讨NPC中过表达的p53蛋白是否参与了放射诱导的细胞损伤和凋亡过程。方法：以稳定干扰p53基因表达的鼻咽癌细胞株CNE2sip53和对照细胞株CNE2/pSUPER为对象，采用集落存活分析法分析在不同放射剂量照射后的细胞存活分数(SF)并计算放射生物学参数D0, α, β和放射敏感比(SER)；采用MTT法检测放射线对细胞生长的影响；采用流式细胞术检测放射线对细胞周期及凋亡的影响。 结果：CNE2sip53细胞照射后的SF值高于CNE2/pSUPER细胞；与CNE2/pSUPER细胞相比，CNE2sip53细胞D0值和SF2值均增大，而α值, β值和SER均减小； 放射线诱导CNE2sip53细胞凋亡及对细胞增殖的抑制作用弱于其对CNE2/pSUPER细胞的作用；放射线诱导CNE2/pSUPER细胞阻滞于G1期，而诱导CNE2sip53细胞阻滞于G2期。 结论：稳定沉默鼻咽癌细胞中p53基因表达后，细胞对放射的敏感性降低，提示NPC细胞中过表达的p53蛋白参与了放疗诱导的NPC细胞损伤和凋亡过程。     

抗体蛋白质芯片检测卵巢癌耐药细胞株细胞因子改变的研究

目的： 抗体蛋白质芯片初步筛选常见细胞因子在卵巢癌耐药细胞株中的表达。 方法： 对6株卵巢癌细胞分别进行平行药敏试验及细胞因子抗体蛋白质芯片检测，同时筛选78种细胞因子的表达差异，并进行两两比较。 结果： 不同种类卵巢癌细胞系对于ADM的IC50值从高到低前3位依次为SKOV3，OVCAR5，OVCAR4；CBPDA为IGROV1，SKOV3，OVCAR3；TAXOL为OVCAR4，SKOV3，IGROV1；VP16为OVCAR4，OVCAR5，OVCAR8。在对一线化疗药ADM和 CBPDA耐药性较高的SKOV3细胞中GRO，IL-6，IL-8和TIMP-2均较其余5株相对敏感细胞增高，对二线化疗药TAXOL，VP16耐药性较高细胞株OVCAR4中IL-6，IL-8较之IGROV1，OVCAR3，OVCAR5升高。 结论： 在常见分泌型细胞因子中，GRO，IL-6，IL-8和TIMP-2升高与一线化疗药ADM和CBPDA耐药性相关，IL-6，IL-8与二线化疗药TAXOL，VP16耐药性相关，不同来源的卵巢癌细胞分泌型蛋白作用机制可能存在共同的上述几种蛋白参与的调节体系。     

泛素结合酶E2T增强鼻咽癌细胞放疗敏感性的机制研究

目的 探讨泛素结合酶E2T(UBE2T)对鼻咽癌细胞放疗敏感性的影响及相关分子机制。方法 采用qRT-PCR检测鼻咽癌细胞CNE2及正常鼻咽上皮细胞NP69中UBE2T的表达水平。将UBE2T小干扰RNA序列(UBE2T-siRNA)及其阴性对照序列(NC-siRNA)转染至CNE2细胞,联合或不联合放射治疗,并分为Control组、NC-siRNA组、UBE2T-siRNA组、放疗组、NC-siRNA+放疗组、UBE2T-siRNA+放疗组。采用CCK-8检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平。结果 CNE2细胞中UBE2T mRNA表达水平高于NP69细胞(P<0.05);与Control组比较,NC-siRNA组细胞中UBE2T mRNA表达水平无明显变化(P>0.05),UBE2T-siRNA组细胞中UBE2T mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。与Control组比较,放疗组、UBE2T-siRNA组细胞增殖活性均降低,细胞凋亡率均升高(P<0.05);与放...     

负向调控miR-9抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭*

 目的： 探讨负向调控miR-9对人鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭作用。方法: 用脂质体LipofectamineTM 2000转染合成抑制剂的方法抑制鼻咽癌细胞miR-9表达,转染抑制对照剂作为对照组。CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和细胞周期变化;Transwell侵袭实验和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力;免疫印迹实验检测蛋白变化。结果: 抑制鼻咽癌细胞miR-9表达后,肿瘤增殖能力降低（P<0.05）,G0/G1期细胞增多［CNE2:（57.96±1.39）% vs（47.93±1.76）%,P<0.05;CNE1:（51.24±0.88）% vs（48.29±0.39）%,P<0.05］,迁移距离明显缩短［CNE2:（186.50±7.94）μm vs （247.56±15.56）μm,P<0.05;CNE1:（139.06±16.73 ）μm vs（230.66±14.27 ）μm,P<0.01］,CNE2细胞中侵袭细胞数明显减少（43.00±3.17 vs 65.80±5.20,P<0.01）,β-连环蛋白（β-catenin）表达被抑制。结论: 在鼻咽癌细胞中,负向调控miR-9可抑制鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

EBV-LMP2A和β-catenin蛋白在鼻咽癌中的表达关系及意义

目的 探讨EB病毒编码的潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)和β-连环素(β-catenin)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)中的表达关系及其临床意义.方法 应用免疫组化SP法检测LMP2A和β-catenin蛋白在32例鼻咽黏膜慢性炎、56例NPC和18例NPC淋巴结转移灶中的表达,采用Westem blot法和免疫荧光细胞化学染色法观察LMP2A和β-catenin蛋白在CNE2-LMP2A细胞及其对照组CNE2-Vector和CNE2细胞中的表达.结果 (1)LMP2A在NPC及其淋巴结转移灶中的阳性率分别为89.3％ (50/56)和77.8％(14/18),均明显高于鼻咽黏膜慢性炎(37.5％,12/32)(P均＜0.01);β-catenin在NPC及其淋巴结转移灶中的异常表达率分别为62.5％ (35/56)和83.3％(15/18),均明显高于鼻咽黏膜慢性炎(3.1％,1/32)(P均＜0.01);LMP2A与β-catenin正常表达呈负相关(rs=-0.391,P ＜0.01);LMP2A和β-catenin蛋白在鼻咽癌T分期、N分期和临床分期组间表达率的差异均有统计学意义(P ＜0.05或P＜0.01).(2)CNE2-LMP2A细胞中β-catenin蛋白表达水平明显高于CNE2-Vector和CNE2细胞;CNE2-LMP2A细胞中β-catenin胞质和胞核的表达水平明显高于CNE2-Vector和CNE2(P均＜0.01).结论 LMP2A高表达和β-catenin异常表达与鼻咽癌临床生物学行为进展密切相关,其机制可能与LMP2A上调β-catenin蛋白水平并促进其核转位有关.     

鼻咽癌患者放疗前后血清IL-2、IL-6和TNF-α检测的临床意义

目的：探讨鼻咽癌患者放疗前后血清IL-2、IL-6、TNF-α水平的变化及临床意义。方法：应用放射免疫分析对30例鼻咽癌患者进行了放疗前后血清IL-2、IL-6、TNF-α检测。并与35名正常健康人作比较。结果：在放疗前,鼻咽癌患者血清IL-2水平非常显著地低于正常人组（P〈0.01）,而血清IL-6、TNF-α水平又明显高于正常人组（P〈0.01）,放疗后6月则与正常人组比较无显著性差异（P〉0.05）。结论：检测鼻咽癌患者血清IL-2、IL-6、TNF-α水平的变化对了解病情、观察疗效具有重要的临床价值。     

人宫颈鳞状细胞癌Bcl-2的表达与放射治疗敏感性的关系

目的 探讨人宫颈鳞状细胞癌放射治疗的敏感性与治疗前癌组织中Bcl-2表达的关系。方法 32例经活检病理诊断确诊的宫颈鳞状细胞癌患者，照射（40Gy）后行宫颈癌根治切除，并做组织学检查。根据放疗效果分为敏感组与耐受组。采用免疫组织化学染色方法，对其放疗前后癌组织进行Bcl-2检测并对照观察。结果 放疗后，在40．6％（13／32）病例的手术切除标本中无癌组织存留，定为敏感组；另59．4％（19／32）的病例放疗后显示仍有癌组织残留，为耐受组。放疗前活检癌组织Bcl-2的表达在敏感组和耐受组分别为15．4％（2／13）和63．2％（12／19），耐受组明显高于敏感组（P＜0．05）。结论 原发性人宫颈鳞状细胞癌Bcl-2的高表达可导致肿瘤对辐射的耐受，认为Bcl-2的表达状态可能作为预测宫颈鳞状细胞癌放疗敏感性的一项指标。     

受体酪氨酸激酶Axl高表达促进鼻咽癌临床进展

目的:探讨受体酪氨酸激酶anexelekto(Axl)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)中的表达及意义。方法:采用免疫组化法检测78例NPC和32例鼻咽黏膜慢性炎中Axl的表达,分析Axl蛋白表达与NPC患者临床参数的相关性。常规培养NPC细胞,免疫荧光法检测不同分化NPC细胞系CNE1、CNE2Z及C666-1中Axl的蛋白表达情况。应用Axl特异性抑制剂TP-0903处理CNE1和C666-1细胞,CCK-8实验检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞周期的分布,q PCR检测Axl和增殖细胞核抗原(PCNA)的mRNA表达,Western blot检测Axl及p-Axl蛋白的表达。结果:Axl蛋白定位于胞膜和胞质。NPC中Axl高表达阳性率显著高于鼻咽黏膜慢性炎(P0.01)。Axl高表达与患者年龄、性别及M分期无关,与临床分期、T分期和N分期呈正相关(P0.05)。Axl在高分化CNE1细胞中低表达,在低分化CNE2Z细胞和未分化C666-1细胞中表达水平明显增高。TP-0903呈浓度和时间依赖性抑制NPC细胞的活性,2 nmol/L TP-0903即具有显著抑制效应,能阻滞细胞周期于G0期,在降低Axl活性的同时也显著抑制PCNA的表达。结论:Axl高表达可促进NPC的临床进展;TP-0903显著抑制NPC细胞的增殖,提示Axl可能在NPC靶向治疗中具有一定的价值。     

新生儿缺氧缺血性脑病血清中IL-1β,NSE和sICAM-1动态变化的临床意义

目的探讨新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）患者血清中白细胞介素-1β（IL-1β）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）和细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的变化及其对临床的实用价值。方法 HIE患儿60例,分别在急性期、恢复期采血,用ELISA测定IL-1β,NSE和sICAM-1的含量,20例同期出生的健康新生儿作为正常对照组。结果 HIE组急性期血清IL-1β,NSE和sICAM-1水平显著高于正常对照组（P〈0.01）,中、重度HIE组血清IL-1β,NSE和sICAM-1水平与轻度组、对照组比较,差异都有显著意义;恢复期HIE轻度组血清IL-1β,NSE和sICAM-1水平已基本降至正常对照组水平,中、重度组IL-1β,NSE和sICAM-1水平也下降,但仍高于正常对照组和轻度组（P〈0.01）。结论 IL-1β,NSE和sICAM-1可能参与了HIE的发生发展过程,且其水平与HIE的病情程度密切相关。     

白介素-2,白介素-13与输卵管粘膜上皮炎的相关性研究

目的探讨血清炎症因子白细胞介素-2（IL-2）,白细胞介素-13（IL-13）与输卵管粘膜上皮炎的关系。方法运用免疫组化结合病理图像半定量分析方法,检测30例输卵管粘膜上皮炎壶腹部标本（研究组）,30例正常输卵管壶腹部标本（对照组）的表达情况。结果IL-2在研究组输卵管粘膜中阳性表达与对照组比较,有升高趋势,但两组比较无统计学意义（P〉0.05）;IL-13在研究组输卵管粘膜中阳性表达高于对照组,两组比较有统计学差异（P〈0.05）;研究组输卵管炎患者粘膜上皮局部IL-2/IL-13显著下降（P〈0.05）。结论输卵管慢性炎会引起IL-2,IL-13表达增强,IL-2/IL-13比值下降提示可能出现TH1/TH2细胞的免疫功能失衡。     

可视化鼻咽癌细胞模型CNE2-EGFP的建立

目的利用pEGFP-N1质粒转染鼻咽癌细胞株,建立稳定表达绿色荧光蛋白的鼻咽癌细胞株CNE2-EGFP．为整体鼻咽癌可视化研究提供良好的试验材料。方法利用脂质体转染法,将pEGFP—N1质粒转染鼻咽癌细胞株．通过G418抗性筛选、亚克隆扩增获得GFP稳定表达的人鼻咽癌细胞株CNE2-EGFP。结果成功获得多个稳定表达GFP的人鼻咽癌细胞CNE2-EGFP细胞株,比较CNE2和CNE2-EGFP发现,两者生长曲线、细胞周期分布、裸鼠成瘤能力等均无显著性差异。结论建立了非G418依赖、稳定表达GFP且保持母株细胞特性的人鼻咽癌细胞株CNE2-EGFP,为鼻咽癌整体可视化研究打下了坚实的基础。     

Radioresistance of culture-induced augmented natural killer-like activity

Human NK activity is radiosensitive under the control of X-linked genes. We have evaluated the expression of these genes in other forms of cellular cytotoxicity. The NK radioresistant and radiosensitive phenotype is expressed in ADCC. Specific cellular cytotoxicity, generated in a MLC with a radiosensitive donor as responder, was radioresistant. NK-like activity recruited from nonadherent cells of radiosensitive subjects stimulated with allogenic cells, mitogens (PHA, Con A or PWM), or recall antigens (TT or PPD) was radioresistant. The acquisition of radioresistance was relatively rapid, beginning within 24 hr after exposure to PHA, prior to detectable proliferation. Radioresistance of MLR augmented NK-like activity was maximal 3 days after initiation of the culture. MLR augmented NK-like activity was spared by the immunosuppressive polypeptide antibiotic CsA at doses up to 1 micrometer/ml. CsA did, however, reduce acquisition of radioresistance by the NK-like activity at doses above 0.01 mu gm/ml, a concentration which does not inhibit uptake of 3H-thymidine but does reduce the level of specific CML. These data suggest that mitogens and antigens, including allogeneic cells, are recruiting radioresistant NK-like activity which can be distinguished from the radiosensitive spontaneous NK activity of the cell donor. Further, in the MLR, both radiosensitive and radioresistant NK-like activity may be recruited.     

Reversal effect of GnT-V on the radioresistance of human nasopharyngeal carcinoma cells by alteration β1, 6-GlcNAc branched N-glycans

Radiotherapy is the primary treatment for human nasopharyngeal carcinoma (NPC), yet radioresistance remains a major obstacle to successful treatment in many cases. N-acetylglucosaminyltransferase V (GnT-V), which synthesizes β1, 6-GlcNAc branched N-glycans, is closely related to the radiosensitivity of NPC cells. However, a better understanding of the functional role of GnT-V in NPC radioresistance and the related mechanisms is urgently needed. In the present study, a radioresistant NPC cell line, CNE-2R, was established by repeated γ-irradiation. We found that GnT-V levels, as well as β1, 6-GlcNAc branched N-glycans were significantly increased in the CNE-2R cells as compared with that in the parental cells. Meanwhile, knockdown of GnT-V in the CNE-2R cells enhanced cell radiosensitivity and inhibited the formation of β1, 6-branched N-glycans. In addition, the regulated expression of GnT-V in the CNE-2R cells converted the heterogeneous N-glycosylated forms of CD147. Furthermore, swainsonine, an inhibitor of N-glycan biosynthesis, was also able to reverse the radioresistance of the CNE-2R cells. Taken together, the present study revealed a novel mechanism of GnT-V as a regulator of radioresistance in NPC cells, which may be useful for fully understanding the biological role of N-glycans in NPC radioresistance.     

舒芬太尼对IL-1β诱导的椎间盘退变的作用研究

目的 探究舒芬太尼(sufentanil)对白细胞介素(IL)-1β诱导的椎间盘退变的作用.方法 无菌分离SD大鼠髓核细胞(NPC)进行传代培养,并分为对照组,IL-1β组,IL-1β+Sufentanil低、中、高浓度组(0.125、0.25、0.5μmol/L).CCK-8检测NPC增殖能力;流式细胞和Hoechast 33258染色检测NPC凋亡,Western印迹检测凋亡蛋白、基质金属蛋白酶1(MMP-1)、MMP-13、环氧合酶2(COX-2)、金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和IL-10的表达;ELISA检测炎性因子水平.结果 Sufentanil 0.5μmol/L浓度内对NPC无显著毒性,选择sufentanil 0.125,0.25,0.5μmol/L进行后续实验.与对照组比较,IL-1β诱导NPC的凋亡,MMP-1、COX-2和MMP-13的表达及炎性因子水平显著上调(P<0.05),TIMP-1的表达显著下调(P<0.05).与IL-1β组比较,sufentanil抑制NPC凋亡及凋亡蛋白的表达(P<0.05),下调MMP-1,COX-2和MMP-13的表达及TNF-α和IL-1β水平(P<0.05),上调TIMP-1的表达及IL-10水平(P<0.05).结论 Sufentanil能够抑制IL-1β诱导的NPC凋亡,细胞外基质(ECM)的降解和炎性反应.     

不同浓度的瘦素在胚胎着床中对细胞间粘附分子-1和金属蛋白酶9的影响

目的建立体外子宫内膜培养模型,观察不同浓度瘦素（即leptin）对与着床密切相关的细胞间粘附分子-1（Intercellular Adhesion Molecule-1,即ICAM-1）、金属蛋白酶9（Matrix Metalloproteinase9,即MMP9）的影响,进而探讨leptin对胚胎早期着床的的调节作用。方法采用免疫细胞化学方法检测子宫内膜中ICAM-1和MMP9的表达;采用ELISA方法分别检测经leptin干预培养模型后培养液中ICAM-1和MMP9的表达。结果免疫细胞化学方法：ICAM-1主要在腺体细胞中有表达,基质细胞仅有少量的表达,而MMP9在子宫内膜基质细胞和腺体细胞中均有表达;ELISA结果显示：与对照组相比,ICAM-1经100ng/ml的leptin干预后表达上调（P〈0.05）,而经1ng/ml、10ng/ml的leptin干预后表达无显著性差异（P〉0.05）;MMP9分别经1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml的leptin干预后表达上调（P〈0.05）。结论一定量的leptin可以增加体外培养模型中ICAM-1和MMP9表达。     

Livin在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的：探讨鼻咽癌组织中凋亡抑制基因Livin的表达及其与鼻咽癌临床指标间的关系.方法：研究组为鼻咽癌患者56例,其中TNM分期早期患者（Ⅰ期＋Ⅱ期）39例,晚期（Ⅲ期＋Ⅳ期）17例 伴有淋巴结转移36例,无淋巴结转移20例.对照组为鼻咽部慢性炎症患者30例.采用半定量RT - PCR法分析两组之间Livin mRNA的表达情况,以及研究组内不同分期、有无淋巴结转移等情况下Livin mRNA表达的变化.结果：RT- PCR显示鼻咽癌组织中Livin mRNA呈阳性表达（阳性率91.1% ）,而鼻咽部慢性炎症组织中无表达,两组间相对表达量差异有统计学意义（P＜0.05）.研究组中有淋巴结转移组Livin mRNA相对表达量高于无淋巴转移组（P＜0.05） 不同TNM分期患者的Livin mRNA相对表达量,早期患者（Ⅰ期＋Ⅱ期）的阳性表达率为89.7%,明显低于晚期患者（Ⅲ期＋ Ⅳ期）阳性率94.1%,两组间差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：Livin在鼻咽癌的发生、发展与转移中扮演重要角色,可能成为鼻咽癌早期诊断的分子指标及分子靶向治疗的新靶点.