附睾上皮细胞表达功能性的TLR-2和TLR-4

目的:研究附睾上皮细胞中功能性TLR2和,TLR4的表达情况.方法:采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western blot和免疫荧光方法探索原代培养大鼠附睾上皮细胞中TLR2和,TLR4的表达情况,同时利用ELISA分别以磷壁酸(LTA)和细菌脂多糖(LPS)对附睾上皮细胞进行功能性检测.结果:TLR2和TLR4在mRNA水平、蛋白水平和细胞水平上在附睾上皮细胞均有表达,TLR2和TLR4的配体LTA和LPS均能激活附睾上皮细胞的天然免疫反应,产生炎症因子TNF-α和IL-1β,差异有统计学意义.结论:附睾上皮细胞表达功能性的TLR2和,TLR4.     

TLR-9在狼疮发病与治疗中的作用

Toll样受体（Toll-like receptor，TLR）通过与配体结合能有效激活天然免疫进而获得特异性免疫。其中TLR-9与其特异性配体结合是导致狼疮发病的重要因素。对TLR-9与其配体的特征及两者之间的交互作用、以及其随后对浆细胞样树突状细胞（plasmacytoid dendritic cell，pDC）、B,T细胞的激活从而释放抗体和细胞因子的过程进行研究，将有助于发展特异性的干扰策略，从而提高狼疮的治疗水平。     

青蒿琥酯对哮喘大鼠肺组织TLR-4及TGF-β1表达的影响

目的 通过对大鼠肺组织中Toll样受体4(TLR-4)和转化生长因子β1 (TGF-β1)表达影响的研究及对大鼠肺组织病理形态的观察,评价青蒿琥酯对哮喘大鼠的药理作用.方法　清洁级SD雄性大鼠32只,随机分为对照组、哮喘组、地塞米松组和青蒿琥酯组,采用激发和雾化吸入的方法建立哮喘模型.观察各组大鼠肺组织病理改变;取相关...     

TLR-9胞外功能域裂解产生功能受体

哺乳动物的TLR-3、TLR-7、TLR-8、TLR-9可以识别微生物核酸,并引起天然免疫反应。另一方面,这也可能由于识别自身核酸而导致自身免疫反应。TLR-9是Ⅰ型膜蛋白,主要功能域有胞外富含亮氨酸重复域,跨膜区和胞内TIR结构。其胞内域可以加强对病毒核酸的识别和保持对自身核酸的耐受,但细胞对其调节转运和定位还不是很清楚。     

Evaluation of the expression of TLR-2, Dectin-1 and TNF-α level in invasive aspergillosis in cancer mice

Aspergillus fumigatus (A. fumigatus) is an opportunistic fungal pathogen that can cause life-threatening invasive fungal disease (invasive aspergillosis (IA)) in immuno-compromised individuals. In this study, we explored whether the innate resistance to IA in cancer mice has resulted in altered expression of TLR-2 and Dectin-1 in macrophages (flow cytometry) and production of tumour necrosis factor alpha (TNF-α; ELISA) as well as overall mortality. The data demonstrated significant increases in Dectin-1 and TLR-2 on peritoneal macrophages and mortality in cancer mice intravenously infected with A. fumigatus. TNF-α levels were not significantly increased in this group. Probably, IA causes some disorganization in inflammatory responses. We hypothesize that concomitance of IA and cancer may change the micro-environment for local or systemic immune responses. Other complementary studies are required to support our hypothesis.     

热应激对小鼠TLR-4表达的影响及相关研究

目的:探讨热应激对小鼠Toll样受体4(TLR-4)表达的影响及TLR-4表达与脾脏指数的关系。方法:采用ELISA法检测35℃、42℃热应激小白鼠血液TLR-4蛋白含量,并计算脾脏指数,HE染色、观察其组织病理学变化。结果:在35℃及42℃热应激组均有TLR-4的表达,35℃组2 h达到最高水平,与对照组相比差异显著(P<0.05),然后随应激时间延长而降低,42℃5 h达到最高水平,与对照组差异不显著(P>0.05)。35℃及42℃应激组脾脏指数均较正常组明显降低(P<0.05),组织病理学观察白髓比例减小,脾小体有不同程度的缩小、分布及结构不规则。结论:轻度、短时热应激促进TLR-4的表达;免疫功能的降低与脾脏变化有一定关系。     

人TLR-2胞外肽段的分段表达及其活性鉴定

为深入研究TLR-2胞外肽段不同区域在配基识别过程中的功能,对TLR-2a(7M-225E)、TLR-2b(185L-392L)、TLR-2c(436E-595C)三个小片段进行克隆及原核表达,其中TLR-2a和TLR-2c得到成功克隆和表达,活性鉴定结果显示TLR-2a与商品抗TLR-2(179L-204I)多抗和抗His单抗反应良好,TLR-2c可以与抗His单抗反应,在配基结合实验中TLR-2a和TLR-2c都可与PGN和LTA结合,提示TLR-2对配基的识别为构像识别。     

高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠TLR-4信号通路的影响

目的探讨高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠TLR-4信号通路的影响。方法选取36只7日龄SD新生大鼠,随机分为3组:假手术组(n=12),缺氧缺血性脑损伤组(n=12),高压氧治疗组(n=12)。采用Rice法制作新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,假手术组大鼠分离左颈总动脉后不结扎直接缝合皮肤,高压氧治疗组大鼠在模型制作成功后,给予高压氧治疗,1 h/d,连续7 d。测定各组大鼠体质量增长率与左/右脑重量比值;应用TUNEL法检测脑组织神经细胞凋亡情况,Western Blot方法与real time PCR方法分别检测各组新生大鼠脑组织TLR-4、MyD88与NF-κB蛋白与mRNA的表达。结果高压氧治疗可使缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的体质量增长率和左/右脑重量比值增加(P0.05)。与假手术组相比,缺氧缺血性脑损伤组新生大鼠脑组织的神经细胞凋亡数目、Toll样受体-4(TLR-4)、髓样分化因子(MyD88)与核转录因子-κB (NF-κB)蛋白与mRNA的表达均显著升高(P0.01);与缺氧缺血性脑损伤组相比,高压氧治疗组新生大鼠脑组织的神经细胞凋亡数目、TLR-4、MyD88与NF-κB蛋白与mRNA的表达均显著降低(P0.01)。结论高压氧减轻缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的脑组织损伤可能与抑制TLR-4信号通路相关。     

TLR-2 Arg753Gln基因多态性与早产的病例对照研究

目的探讨TLR-2(Toll-like receptor-2)的基因多态性与早产的关系。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)检测分析75例早产儿(早产组)和75例足月儿(对照组)TLR-2 Arg753Gln(RS5743708)基因AA型、AG型和GG型3种基因型及其等位基因的分布频率。结果 TLR-2 Arg753Gln基因GG型、GA型和AA型的基因型和等位基因分布频率在早产组和对照组间比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 TLR-2 Arg753Gln基因多态性与早产有相关性。     

BLys和TLR-4在系统性红斑狼疮转基因小鼠模型中的作用及可能机制

目的研究Toll样受体-4(Toll-like receptors-4,TLR-4)与B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLys)在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)转基因小鼠模型中的作用及可能机制,为SLE的治疗提供新靶点。方法选择SPF级EB病毒膜抗原BLLF1转基因雌性小鼠共30只,随机分成空白对照组、BLys阻断剂组和TLR-4阻断剂组各10只,选择SPF级野生型小鼠为野生对照组。BLys阻断剂组应用抗BR3单克隆抗体500 mg/d,腹腔注射连续10 d,TLR-4阻断剂组应用抗人TLR-4抗体250 mg/d,腹腔注射连续10 d,野生对照组和空白对照组腹腔注射等量生理盐水。继续喂养10 d后无菌取尾静脉血,RT-PCR法检测TLR-4 m RNA水平,ELISA法检测白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-17、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)和IL-2水平,金标免疫斑点法检测抗ds DNA抗体滴度,常规生化法检测补体C3(complement 3)、血沉(erythrocyte sedimentation rate,ESR)和C反应蛋白(C-reaction protein,CRP)水平,对小鼠肾脏进行HE和Masson染色。结果野生对照组和BLys阻断剂组,空白对照组和TLR-4阻断剂组外周血中单个核细胞(PBMC)的BLys无统计学差异(P0.05);与野生对照组和BLys阻断剂组比,空白对照组和TLR-4阻断剂组PBMC的BLys明显增高(P0.05)。提示EB病毒膜抗原BLLF1转基因小鼠为SLE模型,BLys阻断剂可阻断PBMC的BLys的表达。野生对照组和空白对照组干预前后的TLR-4 m RNA、IL-6、IL-17、TNF-α、IL-2、抗ds DNA抗体、C3、ESR和CRP表达无明显差异(P0.05);空白对照组、BLys阻断剂组和TLR-4阻断剂组干预前外周血TLR-4 m RNA、IL-6、IL-17、TNF-α、抗ds DNA抗体、C3、ESR和CRP表达无明显差异(P0.05)。干预后,BLys阻断剂组和TLR-4阻断剂组的TLR-4 m RNA、IL-6、IL-17、TNF-α、抗ds DNA抗体、C3、ESR和CRP较干预前明显降低(P0.05),IL-2较干预前明显增高(P0.05)。与野生对照组比,其余组别的TLR-4 m RNA、IL-6、IL-17、TNF-α、IL-2、C3、ESR和CRP表达干预前后均存在差异(P0.05)。与空白对照组比,BLys阻断剂和TLR-4阻断剂组HE和Masson染色均有明显改善。结论BLys和TLR-4可能是参与SLE的发生发展,机理可能与调节免疫炎症反应有关。     

托样受体3( TLR-3) 信号通路介导的病毒免疫逃逸

<正>天然免疫是机体抵御病毒入侵的首道防线,对病原快速有效地识别是激发天然免疫的前提。动物的天然免疫依赖一类能够识别微生物特定组分的模式识别受体(Pattern recognition receptors,PRRs)。其中,托样受体3(Toll like receptor-3,TLR3)通过识别病毒感染时产生的dsRNA,启动下游的信号转导,上调Ⅰ型干扰素α和β(Interferonα/β,IFNα/β)的表达,Ⅰ型干扰素能够诱导细胞产生抗病毒蛋白(Antivirus protein,AVP),同时也有助于激发机体的适应性免疫~([1])。     

双歧四联活菌辅助替诺福韦对老年乙肝肝硬化患者肝纤维化程度、血清sICAM-1、TLR-4水平的影响

目的:探讨双歧四联活菌辅助替诺福韦对老年乙肝肝硬化(Hepatitis B cirrhosis,HBC)患者肝纤维化程度、炎性免疫相关因子水平的影响.方法:选取2020年1月～2021年12月本院收治的83例老年HBC患者作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组(n=41)和观察组(n=42).对照组口服替诺福韦治疗,观察组在对照组基础上增加口服双歧四联活菌治疗.对比分析两组患者临床疗效及治疗前后肠道菌群数量、肝功能指标、肝纤维化指标、炎性免疫相关因子水平.结果:观察组总有效率明显高于对照组(P<0.05);治疗后,观察组双歧杆菌、乳酸杆菌较对照组增多,肠杆菌、肠球菌较对照组减少(P<0.05);观察组丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase,AST)、总胆红素(Total bilirubin,TBIL)、透明质酸(Hyaluronic acid,HA)、Ⅳ型胶原(Collagen type IV,C-Ⅳ)、层粘连蛋白(Laminin,LN)、可溶性细胞间黏附分子-1(Soluble intercellular adhesion molecule-1,sICAM-1)、Tol样受体4(Tol-like receptor 4,TLR-4)水平明显低于对照组,白蛋白(Albumin,ALB)水平明显高于对照组(P<0.05).结论:老年HBC患者应用双歧四联活菌辅助替诺福韦治疗效果确切,可调节肠道菌群,改善其肝功能,抑制肝纤维化进程,其作用机制可能与降低血清sICAM-1、TLR-4水平有关.     

TLR-4信号转导通路介导层流切应力诱导血管内皮细胞IL-8基因表达的研究

目的: 观察TLR-4信号转导通路在层流低切应力诱导血管内皮细胞IL-8基因表达中的作用。方法: 设计突变引物, 用RT-PCR技术从血管内皮细胞扩增出胞内区段缺失突变TLR4 cDNA, 用PCR技术从其DNA中扩增出IL-8上游调控序列(IL-8USCS), 分别克隆于真核表达质粒pcDNA3及绿色荧光增强蛋白报告基因pEGFP1质粒,构建出重组TLR-4缺失突变基因真核表达质粒pcDNA3-mTLR4和IL-8报告基因表达质粒pEGFP1-IL8USCS。用pEGFP1-IL8USCS转染或pcDNA3-mTLR4和pEGFP1-IL8USCS共转染ECV304细胞, 用4.2 dyne/cm²层流切应力刺激3 h, 流式细胞仪观察荧光蛋白表达强度变化。细胞裂解物IκB免疫印迹和NF-κB p65免疫荧光细胞化学染色检测IκB的磷酸化及降解和NF-κB的活化。结果: 用pEGFP1-IL8USCS转染细胞, 经层流切应力刺激3 h后荧光蛋白表达增强(1.06:2.71), 同样用pcDNA3-mTLR4和pEGFP1-IL8USCS共转染细胞, 层流切应力刺激3 h后荧光蛋白表达未明显增强。细胞裂解物免疫印迹显示, 刺激10 min时磷酸化IκB即显著增强, 1 h后磷酸化IκB印迹强度几乎降到基线水平, 而IκB随刺激时间延长而逐渐降低, 1 h后几乎测不到IκB。NF-κB p65免疫荧光细胞化学染色显示, 切应力刺激0.5 h, 胞核即出现阳性反应, 刺激1.5 h、2 h后, 胞核呈强阳性染色。结论: 本研究提示, TLR4/NF-κB信号转导通路可能介导层流切应力诱导血管内皮细胞IL-8基因的表达。     

新型隐球菌甘露糖蛋白及TLR-9配体CpG-ODN对树突状细胞的激活作用

新型隐球菌病越来越引起医学界的关注。目前还没有一种针对新型隐球菌的人体疫苗。鉴别可作为候选疫苗的有免疫保护作用的隐球菌抗原已成为必要。鼠模型显示机体对新型隐球菌感染的防御主要由细胞免疫介导。其中CD4^＋L，l细胞起着积极的调节作用，而TH2细胞则起着消极的调节作用。CpG的寡聚核苷酸（CpG-ODN）在体内可作为佐剂介导TH1型免疫反应。为了探讨CpG-ODN在抗新型隐球菌免疫反应中的作用，我们将新型隐球菌和CpG-ODN接种于实验鼠，取气管旁淋巴节细胞与经甘露糖蛋白（mannoprotein，MP）刺激过的DC共培养可诱导淋巴细胞产生IFN-γ。实验结果提示隐球菌的MP通过DC诱导了TH1型反应并作为抗原激活了新型隐球菌特异的TH1细胞。     

蛋氨酸脑啡肽对GM-CSF诱导小鼠骨髓来源树突状细胞成熟及TLR-4表达的协同作用

观察蛋氨酸脑啡肽(MENK)对巨噬细胞-粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导的小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)成熟及TLR-4表达的影响,探讨蛋氨酸脑啡肽对小鼠骨髓来源DCs免疫功能的调节机制。体外制备小鼠骨髓细胞用GM-CSF协同MENK诱导培养7d后用RT-PCR法检测TLR-4的mRNA表达,用western-blot检测TLR-4蛋白的表达,同时用流式细胞仪(FACS)分析DC表型特征,混合淋巴细胞反应(MLR)检测DC的功能。结果显示MENK协同诱导组树突状细胞TLR-4和共刺激分子的表达高于正常对照组(P<0.01)和GM-CSF诱导组(P<0.05)并具有强的激发MLR的能力。提示MENK可以促进DC成熟及TLR-4的表达,增强DC免疫功能。     

左卡尼汀联合前列地尔治疗ESDN的效果及其对肾功能及TLR-4水平的影响

目的:探究左卡尼汀联合前列地尔治疗终末期糖尿病肾病(End-stage diabetic nephropathy,ESDN)患者的效果.方法:选取2018年8月至2020年8月期间我科接治的109例ESDN患者作为研究对象,所有患者按照随机数字表法分为对照组(n=54)和观察组(n=55).对照组采用前列地尔治疗,观察组在对照组基础上联合使用左卡尼汀.对比两组患者临床疗效、肾功能、炎性因子水平.结果:对照组总有效率明显较观察组低(P<0.05);血肌酐(Serum creatinine,SCr)、尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)明显高于观察组(P<0.05),肾小球滤过率(Estimated Glomerular Filtration Rate,eGFR)明显低于观察组(P<0.05);血清Toll样受体-4(Toll-like receptor-4,TLR-4)、白介素-18(Interleukin-18,IL-18)、肿瘤坏死因子-α(Tumour necrosis factor-α,TNF-α)水平明显高于观察组(P<0.05).结论:左卡尼汀与前列地尔联合可有效提高肾功能,降低炎性因子水平,提高临床疗效.     

基因突变和转基因技术评价TLR-4信号受体在流体切应力诱导血管内皮细胞IL-8基因转录激活中的作用

用基因突变和转基因技术，评价TLR-4信号受体在层流低切应力刺激诱导血管内皮细胞IL-8基因转录激活中的作用，RT-PCR，Northern杂交和免疫荧光细胞化学染色均显示脐静脉血管内皮细胞表达TLR-4，同时RT-PCR和Northern杂交显示，层流切应力刺激1h后血管内皮细胞TLR-4表达增强，用RT-PCR技术从血管内皮细胞扩增出胞内区段缺失突变TLR-4cDNA，用PCR技术从其基因组DNA中扩增出IL-8上游调控序列，分别克隆于真核表达质粒pcDNA3和绿色荧光增强蛋白报告基因pEGFP1质粒，构建出重组TLR-4缺失突变基因真核表达质粒pcDNA3-mTLR4和IL-8报告基因表达质粒pEGFP1-IL8USCS。用pEGFP1-IL8USCS转染或pcD-NA3-mTLR4和pEGFP1-IL8USCS共转染ECV304细胞，4.2dyne/cm^2层流切应力刺激3h后，流式细胞仪观察荧光蛋白表达强度变化，用pEGFP1-IL8USCS转染细胞，经层流切应力刺激3h后荧光蛋白表达增强（1.06:2.71)，同样用pcDNA3-mTLR4和pEGFP1-IL8USCS共转染细胞，层流切应力刺激3h后荧光蛋白表达未明显增强，提示TLR4/NF-кB信号传导通路可能介导层流切应力诱导血管内皮细胞IL-8基因的表达。