重组腺病毒介导的BCL-Xl基因过表达治疗急性肝衰竭大鼠的研究

目的 明确肝细胞凋亡与急性大鼠肝衰竭模型肝组织损伤程度的关系;明确BCL-Xl过表达对急性肝衰竭大鼠肝脏的治疗保护作用.方法 将60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、处理组三组.正常对照组及模型组给予门静脉注射生理盐水,处理组予门静脉注射重组BCL-Xl腺病毒.预处理7 d后模型组及处理组予D-氨基半乳糖+脂多糖建立肝衰竭模型,观察各组大鼠的BCL-Xl蛋白的表达、ALT、AST水平、肝细胞凋亡率及死亡率.结果 BCL-Xl基因在处理组的表达高于在模型组中的表达;建立大鼠肝衰竭后6 h,处理组的血清ALT、AsT水平低于模型组(P<0.05).处理组的肝细胞凋亡率低于模型组(P<0.05).处理组的大鼠死亡率低于模型组(P<0.05).结论 在急性肝衰竭大鼠中,肝细胞的凋亡率与大鼠的死亡率呈正相关;BCL-Xl在肝组织中的过表达能减少急性肝衰竭模型大鼠的肝细胞凋亡率,降低急性肝衰竭大鼠的死亡率.     

重组腺病毒介导的BCL-Xl基因过表达治疗急性肝衰竭大鼠的研究

目的 明确肝细胞凋亡与急性大鼠肝衰竭模型肝组织损伤程度的关系;明确BCL-Xl过表达对急性肝衰竭大鼠肝脏的治疗保护作用.方法 将60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、处理组三组.正常对照组及模型组给予门静脉注射生理盐水,处理组予门静脉注射重组BCL-Xl腺病毒.预处理7 d后模型组及处理组予D-氨基半乳糖+脂多糖建立肝衰竭模型,观察各组大鼠的BCL-Xl蛋白的表达、ALT、AST水平、肝细胞凋亡率及死亡率.结果 BCL-Xl基因在处理组的表达高于在模型组中的表达;建立大鼠肝衰竭后6 h,处理组的血清ALT、AsT水平低于模型组(P<0.05).处理组的肝细胞凋亡率低于模型组(P<0.05).处理组的大鼠死亡率低于模型组(P<0.05).结论 在急性肝衰竭大鼠中,肝细胞的凋亡率与大鼠的死亡率呈正相关;BCL-Xl在肝组织中的过表达能减少急性肝衰竭模型大鼠的肝细胞凋亡率,降低急性肝衰竭大鼠的死亡率.     

重组腺病毒介导的BCL-X1基因过表达治疗急性肝衰竭大鼠的研究

目的明确肝细胞凋亡与急性大鼠肝衰竭模型肝组织损伤程度的关系;明确BCL—X1过表达对急性肝衰竭大鼠肝脏的治疗保护作用。方法将60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、处理组三组。正常对照组及模型组给予门静脉注射生理盐水,处理组予门静脉注射重组BCL-Xl腺病毒。预处理7d后模型组及处理组予D-氨基半乳糖＋脂多糖建立肝衰竭模型,观察各组大鼠的BCL-X1蛋白的表达、ALT、AST水平、肝细胞凋亡率及死亡率。结果BCL．XI基因在处理组的表达高于在模型组中的表达;建立大鼠肝衰竭后6h,处理组的血清ALT、AST水平低于模型组（P〈0．05）。处理组的肝细胞凋亡率低于模型组（P〈0．05）。处理组的大鼠死亡率低于模型组（P〈0．05）。结论在急性肝衰竭大鼠中,肝细胞的凋亡率与大鼠的死亡率呈正相关;BCL-XI在肝组织中的过表达能减少急性肝衰竭模型大鼠的肝细胞凋亡率,降低急性肝衰竭大鼠的死亡率。     

Hyper-IL-6重组腺病毒治疗大鼠急性肝衰竭的实验研究

目的 探讨重组腺病毒介导的超级白细胞介素6(Hyper-IL-6)对大鼠急性肝衰竭的治疗作用及机制.方法 80只急性肝衰竭模型大鼠随机分为:未感染组、AdO组、AdlL-6组、AdHIL-6组,分别予腹腔注射生理盐水、AdO、AdIL-6、AdHIL-6,后进行肝功能指标、肝脏病理学及肝细胞原位凋亡检测,并观察增殖细胞核抗原(PCNA)、caspase-3在肝组织中的表达情况及大鼠14 d存活率.结果 AdHIL-6组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TB)含量及凋亡指数明显降低,而肝组织PCNA表达明显增高(P<0.01),肝组织病变减轻,caspase-3表达阳性,14 d存活率较高.结论 Hyper-IL-6对急性肝衰竭大鼠有明显的促肝细胞增殖及抗肝细胞凋亡效应,能有效改善肝功能及肝组织学状况,提高肝衰竭大鼠存活率.     

两种脂肪因子对急性肝损伤小鼠肝细胞凋亡的作用

目的 探讨两种脂肪因子--脂联素和瘦素对急性肝损伤小鼠肝细胞凋亡的干预作用.方法 雄性BALB/c小鼠26只随机分为4组:刀豆蛋白A(ConA)组8只:静脉注射ConA;脂联素组5只:在静脉注射ConA前腹腔内注射脂联素;瘦素组5只:在静脉注射ConA前腹腔内注射瘦素;对照组8只:静脉注射生理盐水.注射ConA 8 h后处死小鼠,HE染色观察肝组织的炎症程度,TUNEL法和流式细胞术检测肝细胞凋亡率.结果 与ConA组比较,脂联素组肝组织炎症程度明显减轻,血清ALT水平和肝细胞凋亡率均降低(P<0.01),瘦素组肝细胞凋亡率升高(P<0.01),而肝组织炎症变化及血清ALT水平两组无差异.结论 脂联素可抑制肝细胞凋亡,减轻急性肝损伤;而瘦素则促进肝细胞凋亡,对炎症无明显影响.     

骨髓间充质干细胞移植肝衰竭大鼠CD163和白细胞介素10的表达

背景:研究显示骨髓间充质干细胞具有持久生成肝细胞和胆管细胞的能力,在肝损伤后的修复过程中,参与补充因损伤而减少的肝细胞数量,参与修复因损伤破坏的肝组织结构。目的:探讨骨髓间充质干细胞移植治疗急性肝衰竭大鼠的疗效以及对急性肝衰竭大鼠血清和肝组织CD163、白细胞介素10表达的影响。方法:选取60只SD大鼠,腹腔注射D-氨基半乳糖/脂多糖制备急性肝衰竭模型。随机分为2组,骨髓间充质干细胞移植组尾静脉移植第3代骨髓间充质干细胞,对照组尾静脉注射等体积生理盐水。于移植后24,120,168 h收集血清和肝组织标本。结果与结论:在移植后120,168 h,骨髓间充质干细胞移植组大鼠血清谷丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶活性显著低于对照组(P0.05)。骨髓间充质干细胞移植组细胞凋亡指数显著低于对照组(P0.05)。骨髓间充质干细胞移植组大鼠血清及肝组织中CD163和白细胞介素10水平与对照组比较明显下降(P0.05),且二者的表达有明显的相关性(P0.01)。结果可见骨髓间充质干细胞对急性肝衰竭大鼠有一定的治疗作用,CD163、白细胞介素10的基础水平以及治疗过程中的变化趋势可以在一定程度上反映急性肝衰竭的治疗效果。     

缺血预处理对肝硬化大鼠肝脏缺血再灌注中肝细胞凋亡的影响

目的:探讨缺血预处理(IPC)在肝硬化大鼠肝缺血再灌注(I/R)损伤的拮抗作用及其机理。方法:Pringle法复制肝I/R模型,将肝硬化大鼠随机分为3组:A组:肝缺血前给予1个IPC处理(缺血5min,灌注5min);B组:肝缺血前给予1个IPC处理(缺血10min,灌注10min);C组:对照组,单纯肝门血流阻断。肝缺血时间为30min,再灌注6h。测定各组的血清谷丙转氨酶(ALT)、肝组织Fas-mRNA表达、caspase-3活性和肝细胞凋亡。结果:经IPC处理后,大鼠7d生存率为100%,而无IPC处理组即为62.5%。再灌注6h,A、B2组的ALT明显低于C组,P＜0.01,A组的ALT亦明显低于B组,P＜0.01。检测A、C2组的肝组织Fas-mRNA表达、caspase-3活性和肝细胞凋亡发现,A组的上述指标均比C组低,P＜0.01。结论:IPC对肝硬化大鼠肝I/R损伤有显著的对抗作用,其中以缺血5min和灌注5min的IPC的作用较强。IPC的保护机理是通过下调Fas-mRNA的表达、抑制caspase-3活性,从而减少肝细胞凋亡来实现的。     

谷氨酰胺对急性肝损伤大鼠肠黏膜屏障的作用

目的 探讨谷氨酰胺(glutamine,GLN)对急性肝损伤大鼠肠黏膜屏障的作用.方法 61只清洁级Wistar大鼠随机分为3组:对照组、模型组、GLN干预组.采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和D-半乳糖胺(D-galactosamine,D-Gal)腹腔注射法建立急性肝损伤大鼠模型.检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和总胆红素(TBiL)水平;光镜下及电镜下观察大鼠肝脏及肠道病理学改变;末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的缺口末端标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡;高压液相离子色谱仪(HPLC-PED)检测大鼠肠黏膜通透性的改变.结果 模型组及GLN干预组大鼠死亡率差异无统计学意义(P>0.05);模型组及GLN干预组大鼠血清ALT、AST和TBIL水平差异无统计学意义(P>0.05);三组肠黏膜通透性差异无统计学意义(P>0.05);光镜下GLN干预组与模型组大鼠肝脏损伤程度差异无统计学意义;肠道未见明显病变;透射电镜下模型组和GLN干预组大鼠肝脏和肠道出现线粒体和细胞核等损伤,GLN干预组较模型组大鼠损伤轻;GLN干预组肝脏和肠道的凋亡指数(Apoptosis index,AI)显著低于模型组(P<0.05).结论 脂多糖可以造成D-半乳糖胺致敏大鼠急性肝损伤模型,造模前给予谷胺酰胺干预可能对于改善肝功能,保护肠黏膜的通透性,降低死亡率没有显著性作用.     

脂肪因子对急性肝损伤小鼠肝细胞凋亡的作用

目的 探讨脂肪因子--脂联素和瘦素对急性肝损伤小鼠肝细胞凋亡的干预作用。方法 雄性BALB/c小鼠26只随机分为4组：刀豆蛋白A(ConA)组8只：静脉注射ConA；脂联素组5只：在静脉注射ConA前腹腔内注射脂联素；瘦素组5只：在静脉注射ConA前腹腔内注射瘦素；对照组8只：静脉注射生理盐水。注射ConA8h后处死小鼠，HE染色观察肝组织的炎症程度，TUNEL法和流式细胞术检测肝细胞凋亡率。结果 与ConA组比较，脂联素组肝组织炎症程度明显减轻，血清ALT水平和肝细胞凋亡率均降低（p<0.01），瘦素组肝细胞凋亡率升高（p<0.01），而肝组织炎症变化及血清ALT水平两组无差异。结论 脂联素可抑制肝细胞凋亡、减轻急性肝损伤，而瘦素则促进肝细胞凋亡，对炎症无明显影响。     

金属硫蛋白降低GRP78和CHOP蛋白表达减轻大鼠砷中毒肝细胞凋亡

目的 研究葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)在金属硫蛋白(MT)减轻大鼠砷中毒肝细胞凋亡中的作用.方法 建立MT治疗亚砷酸钠(NaAsO2)诱导的大鼠砷中毒肝损伤模型,用MT治疗2周,以TUNEL法检测肝细胞凋亡,免疫组化法、Western blot检测大鼠肝脏GRP78、CHOP蛋白表达.结果 砷中毒模型组大鼠肝细胞凋亡、肝组织GRP78和CHOP蛋白表达较对照组显著升高(P＜0.05),MT治疗组肝细胞凋亡、肝组织GRP78和CHOP蛋白表达明显回降(P＜0.05),但仍然高于对照组(P＜0.05).结论 MT可通过降低GRP78和CHOP蛋白表达减轻大鼠砷中毒所致的肝细胞凋亡.     

淫羊藿苷对ConA诱导的小鼠肝脏损伤保护机理的研究

目的:利用刀豆蛋白A(ConA)诱导建立小鼠肝炎模型,观察淫羊藿苷对该损伤模型保护作用的细胞免疫学和分子免疫学机制。方法:采用C57BL/6雄性小鼠,随机分为淫羊藿苷+ConA组、生理盐水+ConA组、淫羊藿苷+生理盐水组。小鼠尾静脉注射ConA,建立T细胞介导的免疫性肝脏损伤模型;采用转氨酶试剂盒测定各组小鼠血液中转氨酶含量;组织病理学观察实验小鼠肝脏组织和肝细胞坏死变化;采用ELISA试剂盒测定血清中炎性细胞因子IFN-γ、TNF-α含量;流式细胞术观察注射ConA后肝脏淋巴细胞的活化变化。结果:与ConA对照组相比,淫羊藿苷干预组小鼠血液中ALT和AST水平明显降低,P<0.01;IFN-γ、TNF-α含量明显降低,P<0.05;H&E染色可见淫羊藿苷干预组小鼠肝细胞核完整,未见炎性细胞的浸润,而ConA对照组小鼠肝细胞核固缩,部分核膜破裂,肝组织内有炎症细胞和红细胞浸润;流式细胞技术发现淫羊藿苷可明显延缓由ConA引起的肝脏NKT细胞的活化,减弱T细胞的浸润。结论:淫羊藿苷对ConA诱导的小鼠肝脏损伤有明显的保护作用,其机理可能与淫羊藿苷降低血液中IFN-γ、TNF-α表达及影响肝脏NKT细胞的活化有关。     

生长抑素及奥曲肽的肝细胞保护作用及其机制研究

目的： 探讨生长抑素（SST）及其类似物奥曲肽（OCT）对大鼠肝细胞的保护作用及其机制。方法: 以原代培养肝细胞建立无水乙醇/四氯化碳（CCl4）细胞损伤模型，观察SST及OCT预处理对培养上清液中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）含量的影响。此外，将75只SD大鼠随机分为正常对照组、肝纤维化模型组及大、中、小剂量SST治疗组。除正常对照组外均以40％CCl4皮下注射8周，期间各SST治疗组分别给予SST 200 μg·kg-1·d-1、100 μg·kg-1·d-1、50 μg·kg-1·d-1。采用酶试剂法、末端核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷原位缺口末端标记法（TUNEL）分别检测肝功能及肝细胞凋亡指数。结果: 经SST（10-8-10-6 mol/L）及OCT（10-7-10-5 mol/L）预处理后，损伤模型组肝细胞的培养上清液中ALT、AST水平显著下降。不同剂量SST治疗还能明显降低肝纤维化大鼠的血清ALT、AST、碱性磷酸酶（ALP）及总胆红素（TBIL）水平，提高血清清蛋白（ALB）水平，抑制肝细胞凋亡，其中小剂量SST治疗组最佳。结论: SST及OCT可减轻CCl4引起的肝细胞损伤，改善肝功能，并抑制肝细胞凋亡，可能在肝纤维化的防治中发挥重要作用。     

骨髓间充质干细胞移植后的肝功能重建

背景：细胞移植是治疗肝功能衰竭的一种有效方法,而理想的细胞源和最佳的移植途径一直是各实验室不断研究的目标。 目的：观察骨髓间充质干细胞移植对急性肝衰竭大鼠肝功能重建的影响和最佳移植途径。 方法：以D-氨基半乳糖胺作为肝脏毒剂,构建雌性SD大鼠急性肝衰竭模型。以雄性SD大鼠骨髓间充质干细胞为细胞源,通过腹股沟静脉和脾内移植两种途径植入肝衰竭大鼠,动态检测多项肝功能血生化指标。并以sry基因为分子标志,采用PCR技术检测骨髓间充质干细胞在肝脏内的存活状态。 结果与结论：骨髓间充质干细胞经腹股沟静脉和脾内移植均可降低血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素水平,提高白蛋白合成能力,改善肝功能,降低动物死亡率。经腹股沟静脉移植组死亡率低于经脾内移植组。移植后7~30 d在受体大鼠肝脏内均能检测到sry基因阳性细胞的存在,而相应对照组未能检测到sry基因阳性细胞。结果表明①骨髓间充质干细胞移植可改善急性肝衰竭大鼠的肝功能。②骨髓间充质干细胞可在受体肝脏内存活。③经腹股沟静脉移植操作简便易行,死亡率较低,是较好的细胞移植途径。     

重组腺病毒Ad-HGF-hIL10基因治疗大鼠肝纤维化

目的 探讨人IL-10和HGF双表达的重组腺病毒hIL10-HGF对大鼠肝纤维化的治疗效果,以期为肝纤维化的基因治疗提供实验基础.方法 建立SD大鼠肝纤维化模型后,将1.5×108 PFU的Ad-HGF、Ad-hIL10和Ad-HGF-hIL10经尾静脉注射入大鼠体内,模型组和对照组注射同剂量的0.9％氯化钠注射液.第15天心脏采血,检测血清的肝功能指标,并取肝组织做HE染色,观察各组大鼠肝脏的病理形态.结果 与模型组大鼠相比,治疗组大鼠的肝组织损伤程度减轻,汇管区看不到明显的纤维增生.各治疗组的TBIL、ALT、AST显著低于模型组(P＜0.01),而ALB显著升高(P＜0.01),肝功能得到了明显的改善,而Ad-HGF-hIL10双基因治疗组与Ad-HGF、Ad-hIL-10单基因治疗组相比,ALT、AST显著降低(P＜0.05),白球比(0.83±0.11)与其他两个单基因治疗组Ad-HGF (0.74±0.05)和Ad-hIL-10(0.73±0.05)相比显著上升(P＜0.01).结论 用HGF和hIL-10双基因的腺病毒载体治疗大鼠肝纤维化,肝功能的改善效果明显优于单基因治疗组.     

肝细胞生长因子治疗小鼠中毒性肝炎的实验研究

本文研究了肝细胞生长因子粗制品(hHGF-1),及经三步纯化的肝细胞生长因子(hHGF-3)对小鼠中毒性肝炎的治疗作用。两者腹腔注射使中毒性肝炎小鼠的死亡率从对照的60%分别降至11%和0,并能促进肝细胞DNA合成,使升高的血清胆红素和血清谷丙转氨酶在96hr内恢复或接近正常。组织学检查发现hHGF-1和hHGF-3有保护肝细胞、促进肝细胞再生和治疗肝损伤的作用,hHGF静脉注射对中毒性肝炎的治疗作用更明显。我们认为肝细胞生长因子是起上述治疗作用的有效成份,也是胎肝细胞输注治疗重症肝炎的主要有效物质。     

Splenic transposition is superior to caudal shunt as a model of murine total hepatic ischemia

Murine total hepatic ischemia (THI) followed by reperfusion without shunting of the portal vein induces significant lethality in rodents due to intestinal congestion. Two methods have been promulgated to study THI and reperfusion in mice without intestinal congestion: subcutaneous splenic transposition which creates a portosystemic shunt via epigastric vessels, and a caudal shunt with 30% hepatectomy, which creates a portosystemic shunt via the small remnant of remaining caudal lobe. We compared outcome, inflammatory response and hepatic injury due to THI and reperfusion in these two models. Female C57BL/6 mice underwent ST, caudal shunt or no surgery prior to having 30 min of total hepatic ischemia followed by 60 min of reperfusion. Survival, surgical complications, serum AST/ALT and IL-6 were determined. Apoptotic and necrotic hepatocytes were identified by morphological criteria. Complication rates for the ST and caudal shunt procedures were 6.7 and 20%, respectively. Subsequent mortality rates following THI and 60 min reperfusion were 5.9 and 50% in mice with ST and caudal shunt, respectively. Both groups had elevated serum AST/ALT concentrations. However, in mice undergoing caudal shunt, AST/ALT levels were also significantly increased even without THI. The number of apoptotic hepatocytes after THI and reperfusion in mice following caudal shunt was significantly higher compared with those of ST (P<0.001). Both ST and caudal shunt can be used in models of THI and reperfusion to prevent significant lethality due to intestinal congestion. However, ST is a simple, safe and suitable model, whereas caudal shunt requires manipulation of the liver, and is associated with significant hepatic injury and morbidity.