韩国人CYP450 1A1、CYP450 2E1和GSTM1、GSTT1、GSTP1基因座遗传多态性分析

目的 调查代谢相关的CYP4501A1、CYP4502E1和GSTM1、GSIT1、GSTP1基因座在韩国人群中的遗传多态性分布状况。方法 采用多重聚合酶链式反应、聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术，分析300名韩国健康大学生的CYP1A1基因3′端限制性内切酶Msp Ⅰ位点、CYP2E1基因5′端转录调节区Pst Ⅰ位点和GSTM1、GSTT1缺失与存在、GSTP1基因第5外显子BsmA Ⅰ位点的基因型，计算基因型和基因频率。结果 CYP1A1基因型频率为ml／ml型39．7％、ml／m2型49．7％、m2／m2型10．7％，基因频率为ml 0．645、m2 0．355。CYP2E1基因型频率为cl／cl型66．7％、cl／c2型30％、c2／c2型3．3％，基因频率为C1 0．818、C2 0．182。GSTM1基因缺失型频率为53．3％。GSTT1基因缺失型频率为54．7％。GSTP1基因型频率为Ile／Ile型62％、Ile／Val型34．3％、VaL／Val型3．7％，基因频率为Ile 0．792、Val 0．208。基因分布符合Hardy-Weirtberg平衡定律。结论 韩国人CYP1A1、CYP2E1、GSTM1、GSTT1基因分布与我国人群较为相近，半数以上人缺乏GSTM1和GSTT1基因，纯合缺失型频率超过印度人的3倍。     

PGC-1β调节大鼠ALAS-1基因表达机制的初步探讨

目的 检测PGC-1β在人肝癌细胞（Hep G2）和大鼠肝原代细胞中调节大鼠ALAS-1基因表达。方法 在Hep G2细胞中瞬时转染PGC-1β,用双荧光报告系统,检测过表达PGC-1β时,大鼠ALAS-1启动子报告基因的活性变化。同时构建了5'端顺式元件系列截短和突变的ALAS-1启动子报告基因,检测并分析介导PGC-1β作用的转录因子结合元件。分离肝原代细胞并检测PGC-1β对ALAS-1转录的影响。构建干扰NRF-1基因的siRNA腺病毒,证明,NRF-1介导PGC-1β激活ALAS-1启动子转录的作用。结果 在Hep G2细胞中,过表达PGC-1β显著促进ALAS-1表达。分别构建了FoxA2和NRF1结合元件突变的ALAS-1启动子,发现PGC-1β对NRF1突变的ALAS-1启动子的激活作用显著下降,而FoxA2作用不明显。在肝原代细胞中过表达PGC-1β促进了ALAS-1的转录。当用小RNA干扰NRF-1的表达后,则抑制了PGC-1β对ALAS-1转录的促进作用。结论 在Hep G2 和大鼠肝原代细胞中,PGC-1β能够促进ALAS-1基因的表达,并且这种作用是通过NRF-1介导完成的。     

流感病毒H1N1感染后宿主细胞MTH1基因表达的研究

目的观察H1N1型流感病毒诱导的MDCK细胞抗氧化相关修复基因MTH1表达量的变化。方法 MDCK细胞培养后,H1N1型流感病毒感染0、1、3、6、12、24、48h,在各时间点经RT-PCR反应检测细胞内MTH1基因的相对表达量。结果甲型H1N1流感病毒感染后0、6、12h,MTH1基因的表达量与正常对照组差异无统计学意义;感染后1、3hMTH1基因的表达量显著高于正常对照组;感染后24、48h表达量显著低于正常对照组。结论 H1N1流感病毒感染细胞的MTH1基因表达的增加,可能增加细胞对DNA氧化损伤的修复能力,在流感发生和防御机制中起到作用。     

FoxO1 基因对Jurkat 细胞FoxO1-KLF2-S1P1 通路的调节作用

目的:通过构建FoxO1 表达和干扰慢病毒载体,建立细胞内FoxO1-KLF2-S1P1 信号通路调控研究模型,观察FoxO1 过表达、干扰表达在Jurkat 细胞内对其下游分子表达及功能的影响。方法:构建FoxO1 表达和干扰表达慢病毒载体,分别感染Jurkat 细胞,采用荧光定量PCR、Western blot 和流式细胞术检测S1P1、CD62L、CCR7、CD69 mRNA 水平和蛋白分子的表达。结果:FoxO1 过表达组于感染后120 h FoxO1、KLF2、S1P1 和CD62L mRNA 水平显著增高(P<0.05),FoxO1、FoxO1-p 和KLF2 胞浆蛋白水平增高,S1P1+细胞和CD62L+ 细胞比率增高(P<0.05),CCR7+ 细胞和CD69+ 细胞未见显著改变(P>0.05)。FoxO1 干扰组于转染后120 h FoxO1、KLF2、S1P1 和CD62L mRNA 水平降低(P<0.05),FoxO1、FoxO1-p 和KLF2 胞浆蛋白水平低于对照组,S1P1+细胞百分比增多(P<0.05) ,但S1P1+细胞和CD62L+细胞在72 h 时减少(P<0.05)。结论:FoxO1 表达和干扰慢病毒载体转染Jurkat 细胞并调节KLF2、S1P1 和CD62L 等分子的表达,为开展细胞内FoxO1-KLF2-S1P1 信号通路调控和细胞相关功能的研究打下了基础。     

C1q、C1r和C1s的快速分离

建立了一种同时快速分离纯化C1q及酶原形式C1r和C1s的方法。用IgG Sepharose 4B亲和层析将C1q与C1r2 s2 分离 ,接着用DEAE Sephacel离子交换层析将C1r和C1s分离 ,用C1qMcAb Sepharose 4B亲和层析将C1q进一步纯化。在分离Clr和C1s的整个过程中加入蛋白水解抑制剂PMSF和NPGB ,并控制温度在 4℃、pH 6 1、无二价阳离子的条件下 ,得到高度纯化的C1q、C1r和C1s。     

注射甲型H1N1流感疫苗引起亚急性甲状腺炎1例报告

亚急性甲状腺炎（subacute thyroiditis,SAT）简称亚甲炎,由De Quervain于1940年首先描述,是临床上较为常见的甲状腺疾病.亚急性甲状腺炎的发病机制虽然尚未明了,但一般认为与感染有关,最常见的病因是由于各种病毒感染所致,病原菌包括流感病毒、柯萨奇病毒、腺病毒、腮腺炎病毒等.近年来认为该病与病毒感染后引起的免疫功能紊乱有关,属免疫反应性疾病.由注射疫苗引发的亚甲炎国内外罕见报导,现将一例注射甲型H1N1流感疫苗引发的亚甲炎报告如下.     

Foxo1-KLF2-S1P1在MG患者胸腺组织的表达

目的 通过探讨Foxo1-KLF2-S1P1在MG患者胸腺的表达,分析其对胸腺T细胞输出的影响。方法 取MG患者及对照组胸腺组织,提取总RNA,通过荧光定量RT-PCR检测Foxo1、KLF2、S1P1及CD62L、CCR7、CD69的表达;制作胸腺组织切片,通过免疫组化了解Foxo1、S1P1、CD62L、CD69、CCR7在胸腺组织的分布与表达。结果 免疫组化显示Foxo1、S1P1、CCR7在MG患者及对照组胸腺都有表达,主要分布在髓质区,MG患者胸腺组织髓质区扩大,Foxo1、S1P1、CCR7表达显著高于对照组;荧光定量PCR结果显示MG胸腺组织Foxo1、KLF2、S1P1、CCR7、CD69的m RNA的水平表达显著增高(分别是5.36±0.728、1.43±2.71、6.1±1.033、5.0±0.932、4.97±1.112,与对照组相比P<0.05)。结论 MG患者Foxo1-KLF2-S1P1高表达可能是MG患者胸腺细胞的异常输出的原因。     

结直肠癌中HSF1、SIRT1与MDR1蛋白表达的相关性及其临床病理意义

目的探讨结直肠癌组织中热休克转录因子HSF1与SIRT1、MDR1蛋白表达的相关性及其临床病理意义。方法应用免疫组化和Western blot检测结直肠癌组织和正常结直肠黏膜组织中HSF1、SIRT1、MDR1的表达,分析三者之间的相关性及其与临床病理特征、预后的关系。结果 (1)结直肠癌组织中HSF1、SIRT1、MDR1的表达水平高于正常结直肠黏膜组织,差异有显著性(P0.05);(2)HSF1阳性组的结直肠癌中,MDR1的表达高于HSF1阴性组,差异有统计学意义(P0.01),Spearman相关分析显示,HSF1与MDR1的表达呈正相关(r=0.478,P0.01);(3)HSF1与SIRT1均阳性的结直肠癌组中MDR1的表达高于其他组,差异有显著性(P0.01),Spearman相关分析显示,HSF1阳性组中MDR1的表达与SIRT1呈正相关(r=0.316,P0.01);(4)HSF1、SIRT1的表达水平与肿瘤分化程度、淋巴结转移有相关性,且HSF1的表达与肿瘤的浸润深度相关;三者均是结直肠癌预后的独立危险因素。结论结直肠癌中HSF1与MDR1的表达有相关性,参与肿瘤多药耐药性;SIRT1可影响HSF1对MDR1的调控;HSF1、SIRT1的表达与肿瘤的生物学行为有关,三者可作为评估结直肠癌患者预后及个性化治疗的潜在分子标志物。     

COL1A1/COL1A2基因突变分析与成骨不全的产前基因诊断

目的对有成骨不全(Osteogenesis Imperfecta,OI)孕史的患者,进行系统B超及COL1A1/COL1A2基因检测,希望建立OI患儿产前诊断方案,为OI患儿进行产前诊断提供技术保障。方法对于有OI孕史的孕妇,进行系统B超监测;根据胎儿股骨、长骨的超声影像学表现,初诊为成骨不全。抽取羊水,采用直接测序法对羊水DNA的COL1A1和COL1A2基因全编码外显子及启动子区域进行突变位点检测。检出的新突变,对孕妇夫妇及家系其他成员直接测序证实。产前诊断标本均需做母血污染鉴定。结果胎儿超声影像学表现为股骨短小,胫腓骨弯曲成角,颅骨变薄且发现多处骨折,考虑OI。STR法鉴定,羊水无母血污染。DNA序列分析结果显示COL1A1基因鉴定出19个SNP位点,没有鉴定出突变位点;COL1A2基因鉴定出13个SNP位点及第36外显子的第2180位置碱基发生错义突变位点(c.2180G>A,p.Gly727Asp)。孕妇在COL1A2基因的第36外显子亦存在错义突变位点(c.2180G>A,p.Gly727Asp),但其临床特征不一致。其他成员均未检测到Gly727Asp突变。结论有OI孕史的孕妇,采取B超和COL1A1/COL1A2基因诊断技术,可以快速、有效对高危胎儿做出确诊,为预防患病胎儿出生提供技术保障。     

云南汉族系统性红斑狼疮与HLA-DRB1、DQA1、 DQB1相关性研究

系统性红斑狼疮 (systemic lupus erythem atosus,SL E)发病机理极为复杂。由于 HL A- 类抗原在免疫应答及调节中的重要作用 ,近年来 HL A基因多态性与疾病相关性一直是研究的热点。有研究显示 HL A- DR、DQ基因位点与 SL E的发病及某些类型自身抗体的形成密切相关 [1 ] 。我们采用 PCR-序列特异性引物 (sequence specific primer,SSP)技术进行 HL A-DRB1、DQA1、DQB1基因分型 ,研究云南汉族 SL E与以上等位基因的相关性 ,为进一步探讨 SL E发病机理提供重要的遗传学依据。1　对象与方法1.1　研究对象　病例组为云南籍汉…     

IL—1受体相关激酶—1和—2协同调控IL—1诱导的AP—1的活化

目的研究白介素 - 1受体相关激酶 - 1(IRAK- 1)和 IRAK- 2在白介素 - 1(IL - 1)诱导 AP- 1活化中的作用。方法L ipofectin介导反义 IRAK- 1寡核苷酸和反义 IRAK- 2寡核苷酸转染 Hep G2细胞。用逆转录 PCR法检测 IRAK - 1和 IRAK- 2m RNA表达水平 ;Western blot分析 IRAK- 1和 IRAK - 2蛋白表达水平。以 Sandwich EL ISA法检测 AP- 1的活化。结果反义IRAK- 1寡核苷酸和反义 IRAK- 2寡核苷酸通过抑制各自靶基因 m RNA和蛋白表达抑制 IL- 1诱导的 AP- 1活化 ;反义 IRAK-1寡核苷酸与反义 IRAK- 2寡核苷酸共转染 Hep G2细胞对 AP- 1的抑制作用较两者单独转染明显增强。结论 IRAK- 1和 I-RAK- 2在调控白介素 - 1诱导的 AP- 1活化时协同作用。     

转录因子Ets-1对P21WAF1/CIP1启动子的影响

目的：研究转录因子Ets-1对P21WAF1/CIP1启动子的调控作用。 方法:应用瞬时转染、荧光素酶活性测定的方法分析Ets-1对P21WAF1/CIP1启动子荧光素酶报告重组体活性的影响。 结果:荧光素酶活性测定发现Ets-1可以上调P21WAF1/CIP1转录。缺乏激活结构域的Ets-1不能激活P21WAF1/CIP1启动子。Ets-1选择性地作用于P21WAF1/CIP1启动子中-1350GGAA-1347 Ets元件，该元件的序列突变可降低基础表达和Ets-1诱导的P21WAF1/CIP1启动子依赖的表达。-1577GGAT-1574元件介导基础表达，但不介导Ets-1激活的P21WAF1/CIP1启动子依赖的表达。 结论:Ets-1通过-1350GGAA-1347元件调控P21WAF1/CIP1启动子转录。     

人参皂甙Rg1和Rb1药理作用的比较

人参作为一味珍贵的中药,在中医临床已有二千多年的应用历史。历经几个世纪的化学和药理研究,大量科学数据已无可辩驳地证明,人参及其有效成分具有广泛的生物活性和医疗用途。除中国、韩国、日本外,欧洲、北美、前苏联等国家的医药工作者均颇为重视,对人参的独特作用表现出了越来越大的兴趣和热情。当今世界,每隔几年就要举行一次国际人参研究学术讨论会,数十个国家近千名科学家与会发表论文,使人参的药理学研究进入了细胞、亚细胞、分子水平,因而人参的许多新的药理作用及其机制也逐渐被阐明。人参中的有效成分包括皂甙类、非皂甙…     

甲型H1N1流感病毒非结构蛋白NS1真核表达载体的构建与表达

目的:构建甲型H1N1流感病毒非结构蛋白NS1真核表达载体并表达其编码蛋白(转染293T细胞)。方法:从江苏首例甲型H1N1流感病毒毒株(A/Nan jing/1/2009(H1N1))提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增NS1全长基因,将其克隆至pMD18-T Vector中构建pMD18-T-NS1质粒,双酶切pMD18-T-NS1与PXJ40-HA后,构建真核表达载体PXJ40-HA-NS1,经酶切及测序鉴定后将质粒转染到293T细胞中,通过Western blot鉴定NS1蛋白的表达。结果:经双酶切、测序鉴定证实NS1基因的真核表达载体构建成功。West-ern blot法可见NS1基因编码蛋白的成功表达。结论:成功克隆NS1全长基因,并构建了其真核表达载体,该表达载体的构建为后期建立稳定表达NS1蛋白的细胞模型和NS1蛋白功能研究提供了材料。     

子宫颈癌中Plk1和Cyclin B1、p21 WAF1的表达及其临床意义

目的：探讨Plk1(polo-like kinase1)和Cyclin B1、p21WAF1在子宫颈癌中的表达及其与临床病理因素之间的关系。方法利用组织芯片技术,结合免疫组化EliVision 法对102例子宫颈癌、20例子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)、20例正常子宫颈组织中Plk1和Cyclin B1、p21WAF1的表达进行检测,并分析相关数据。结果 Plk1在子宫颈癌、CIN 中的阳性率分别为70．5%、55．0%,明显高于正常子宫颈组织(10%),差异有统计学意义(P <0．01)。Cyclin B1在子宫颈癌、 CIN 中的阳性率分别为52．9%,30．0%,明显高于正常子宫颈组织(10．0%),差异有统计学意义(P <0．01)。p21WAF1在子宫颈癌、CIN 中的阳性率分别为23．5%、10．0%,明显高于正常子宫颈组织(0),差异有统计学意义(P <0．05)。Plk1、Cyclin B1和 p21WAF1在子宫颈癌、CIN 中的表达差异均无统计学意义(P >0．05)。Plk1表达与子宫颈癌间质浸润深度相关(P <0．05)。Cyclin B1表达与子宫颈癌间质浸润深度及淋巴结转移相关(P <0．05)。p21WAF1在子宫颈癌中的表达与组织学分级相关(P <0．01)。组织学分级低的子宫颈癌中p21WAF1阳性率高。Plk1和Cyclin B1在子宫颈癌中的表达呈正相关(rs =0．297,P =0．002)。Plk1和p21WAF1在子宫颈癌中的表达呈负相关(rs =-0．403,P <0．001)。结论 Plk1、Cyclin B1和p21WAF1的表达与子宫颈癌的发生、发展相关,且前两者与子宫颈癌预后相关,三者联合检测有可能成为子宫颈癌临床治疗的新靶点。     

甲1(H1N1)亚型流感病毒相变异分子生物学基础的研究

目的 阐明甲１（Ｈ１Ｎ１）亚型株相变异的分子生物学基础。方法 病毒ＲＮＡ经逆转录合成ｃＤＮＡ,利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）进行扩增,产物纯化,采用双脱链末端终止法进行核苷酸序列测定,最后用ＤＮＡ ＳＴＡＲ公司出口的分析软件ＭｅｇＡｌｉｎｇ（１．０３版）和Ｅｄｉｔｓｅｑ（３．６９版０对核苷酸序列进行分析。结果 见不到“Ｏ”、“Ｄ”相毒株ＨＡ１蛋白分子间有特殊氨基酸的差异。但１９９５年前后毒株在－２,－     

AhR途径,CYP1A1、CYP1B1,雌激素代谢及作用过程中的调节

多环芳烃和多卤化烃是环境中广泛分布的有害物质,可通过与细胞芳烃受体结合,从而影响外来化合物代谢酶系如细胞色素氧化酶P450 1A1、1B1的表达,并通过这些酶的催化作用调控雌激素的代谢及作用,进而部分决定了雌激素对机体的作用效应。上述复杂的过程可受到多种因素的影响。     

中国人CYP1A1和GSTM1基因多态性及其对个体肺癌易感性的联合效应

目的 在中国江苏肺癌患者和对照人群中,检测CYP1A1 Ile/Val,GSTM1 /0遗传多态性的各基因型及其联合基因型的分布,探讨这些基因型与肺癌个体易感性的关系。方法 配对的病例－对照组各106例,静脉血制备DNA。分别应用等位基因特异性（allele-specific,AS)-PCR和多重差别（multidifferential,MD)-PCR,检测CYP1A1 Ile/Val和GSTM1＋／0的等位基因型。结果 CYP1A1少见等位基因Val/Val纯合子及其与GSTM1基因缺失纯合子（0／0）的联合基因个体,与对照常见基因型个体相比,增加了对肺癌的易感性,其相对危险度（odds ratio,OR)分别为4．02（P＝0．03）和9．38（P＝0．04）;GSTM10／0纯合子及其与CYP1A1 Ile/Val杂合子的联合基因型个体,显著增加了肺癌易感性,其OR值分别是1．92（P＝0．019）和3．27（P＝0．01）。结论 中国江苏人群中,少见基因型CYP1A1 Val/Val,GSTM10/0增加了个体肺癌易感性,在肺癌发生中,上述两种易感基因型间存在协同或相乘作用。     

中国甲型H1N1流感疫苗质量分析

目的 通过对甲型H1N1流感疫苗批签发中的检测数据进行分析和比较,了解我国甲型H1N1流感疫苗的总体质量状况.方法 按照各企业注册标准对甲型H1N1流感疫苗进行资料审查和全项检定,对关键项目检测结果进行分析和比较.结果 甲型H1N1流感疫苗批签发总体合格率为99.8%,有效成分血凝素含量在标示量的90%～103%范围内,甲醛、卵清蛋白和内毒素含量等安全性指标均符合规定.结论 我国甲型H1N1流感疫苗各项检测总体情况良好,能充分保证疫苗的安全性和有效性,中国食品药品检定研究院的独立检验和批签发对保证上市疫苗的质量发挥了重要作用.

Abstract：

Objective To analyze the laboratory testing data of 2009 pandemic influenza A (H1N1) vaccines during lot release procedure, thus to know the overall quality status of this vaccines.Methods National Institutes for Food and Drug Control(NIFDC) carried out the laboratory test according to the specifications of each manufacture, and the results was analyzed and compared between manufacturer and NIFDC. Results 99.8% of vaccines batches were released by NIFDC, haemagglutinin contents were between 90% to 103 % of labeled values, and testing results slightly differ between manufactures and NIFDC,other items related to safety were all meet specifications. Conclusion The quality of H1N1 vaccines in China were satisfying, the lot release and independent test by NIFDC play important roles to ensure the vaccines' quality.