二种核酸检测法诊断幽门螺杆菌感染的临床比较

目的:二种核酸检测法诊断幽门螺杆菌(HP)感染的临床诊断价值,用以向临床日常实践中推荐使用。方法:117例胃炎、胃溃疡和胃癌患者胃黏膜活组织标本采用HP恒温扩增-防污染核酸试纸条和实时荧光定量PCR进行HP检测,并比较二种检测方法的特异性、灵敏度等。同时以组织学染色和细菌培养二种"金标准"法作为比较。结果:二种"金标准"法诊断了HP感染的阳性66例,阴性51例;66例"金标准"检测法诊断HP阳性的标本中,其中有62例HP恒温扩增-防污染核酸试纸条检测阳性,60例实时荧光定量PCR检测阳性;51例"金标准"检测法诊断HP阴性的标本中,其中有49例HP恒温扩增-防污染核酸试纸条检测阴性,50例实时荧光定量PCR检测阴性,据此HP恒温扩增-防污染核酸试纸条检测HP的诊断敏感性为93.9%(62/66),特异性为96.1%(49/51);实时荧光定量PCR检测HP的诊断敏感性为90.9%(60/66),特异性为98.0%(50/51)。结论:HP恒温扩增-防污染核酸试纸条和实时荧光定量PCR检测技术相当,但HP恒温扩增-防污染核酸试纸条检测不需要昂贵的仪器设备,结果便于阅读,操作方法简单,适宜于作为HP感染筛查的基础。     

FQ-PCR检测不孕不育患者解脲支原体和沙眼衣原体

目的观察解脲支原体和沙眼衣原体的感染与不孕不育的关系。探讨实时荧光定量PCR技术在不孕不育患者的诊断和治疗中的作用。方法采用实时荧光定量PCR技术检测45对不孕不育夫妇女性宫颈分泌物、男性精液或前列腺标本中的解脲支原体-DNA和沙眼衣原体-DNA含量。结果不孕不育患者解脲支原体-DNA阳性率37.78%,沙眼衣原体-DNA阳性率28.89%,解脲支原体或沙眼衣原体的总感染率为52.22%,正常对照组则分别为15.00%、8.33%、20.00%,两组间有显著性差异。不孕不育组中解脲支原体的感染率明显高于沙眼衣原体（P〈0.05）。女性患者解脲支原体DNA载量和沙眼衣原体-DNA载量均高于男性患者（P〈0.05）。结论解脲支原体和沙眼衣原体是引起男女不孕不育的重要原因之一。荧光定量PCR技术用于诊断引起不孕不育的解脲支原体或沙眼衣原体泌尿生殖道感染是完全可靠的。     

五株隐孢子虫18S rRNA部分基因克隆和序列分析

设计Nested PCR引物扩增牛源微小隐孢子虫Cryptospordium parvum、羊源微小隐孢子虫C. parvum、牛源安氏隐孢子虫C. andersoni、鸡源贝氏隐孢子虫C. baileyi及猪源隐孢子虫C. suis 18S rRNA基因突变区,PCR产物经克隆测序,其片段大小分别为212、213、213、213和210 bp.将测得的序列用DNAStar软件分析并与NCBI数据库中相同与相近种株序列进行相似性比较, 进行相似性分析并用TREECON软件绘制系统发育进化树.结果表明测得的5株隐孢子虫与各自相同种相似性为98.1%～100%,与其他种相似性为90.1%～98.6%.分析显示在此突变区设置特异酶切位点能区分开C. parvum, C. andersoni, C. baileyi与C. suis,位点分别是TaqI、BstUI、MseI.本研究为我国隐孢子虫分类、分子流行病学研究提供了新的方法.     

基于LAMP技术建立解脲支原体基因试纸条检测方法

目的 建立一种灵敏度高、特异性强、检测速度快的方法检测解脲支原体.方法 基于环介导恒温扩增技术(LAMP),根据解脲支原体序列特征设计3对引物进行解脲支原体DNA切口酶核酸恒温扩增,扩增过程在一对引物中标记生物素,随着扩增的进行生物素直接引入扩增片段中,扩增结束后产物在密闭装置中进行免疫试纸条显色反应,根据显色卡的颜色判定结果的阴阳性.结果 该技术检测解脲支原体较实时荧光PCR技术灵敏度要高10倍以上,其它病原体检测均阴性该方法特异性与实时荧光PCR技术相当.结论 恒温扩增联合试纸条技术检测解脲支原体具有较高的敏感性和特异性,检测速度快,适合各医院开展.     

荧光定量PCR对不育症患者解脲支原体和沙眼衣原体感染情况的研究

目的用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)定量检测不孕不育患者解脲支原体(UU)、沙眼衣原体(CT)基因,观察UU、CT感染情况与不孕不育的关系,探讨实时荧光定量PCR在不孕不育患者诊断和治疗中作用。方法采用FQ-PCR技术检测标本402份。结果 UU阳性率是32.8%,其中男性UU阳性率是21.4%,女性UU阳性率是44.3%。CT阳性率是16.2%,其中男性CT率是11.4%,女性CT率是20.9%。UU感染率在男性、女性患者有极显著性差异(P<0.01),而CT感染率在性别之间有显著性差异(P>0.05)。结论解脲支原体(UU)、沙眼衣原体(CT)是引起男女不育的主要原因之一,实时荧光定量PCR检测UU、CT基因具有操作简单、反应时间短、重复性好、结果客观准确、敏感性和特异性好等优点,其结果对临床诊断、治疗有一定指导意义。     

人附红细胞体病机体免疫功能变化的研究

<正>目的:通过对人附红细胞体(eperythrozoon,EH)重度感染患者的血浆中CD35、CD58、CD59免疫相关因子和IgM的测定,观察人附红细胞体对红细胞免疫功能的影响。通过对NO、SOD和MDA指标的检测,观察人附红细胞体对机体抗氧化能力的影响。方法:采集内蒙古国际蒙医院患者的血液,用光学显微镜、透射电镜观察以及PCR检测的方法,鉴定并筛选出30名重     

液相芯片技术与实时荧光定量PCR在检测儿童感染性腹泻病原体的比较

目的研究液相芯片检测儿童感染性腹泻病原体的效率,为感染性腹泻病的临床快速诊断提供依据。方法收集96例婴幼儿及儿童腹泻患者粪便样本,运用Luminex液相芯片进行检测,并与实时荧光定量PCR检测结果比较。结果液相芯片技术共检测出7种病原体,阳性检出率为65.63%(63/96),其中沙门氏菌的检出率最高,为50.00%(48/96);单病原感染的阳性率为39.58%(38/96),混合感染的阳性率为26.04%(25/96)。与实时荧光定量PCR相比,液相芯片检测腹泻病原体的敏感度和特异度分别为100.00%和71.74%,阴性预测值和阳性预测值分别为100.00%和79.37%(P<0.05)。结论与实时荧光定量PCR相比,液相芯片技术具有高通量、快速、可靠等特点,有利于感染性腹泻病原体的临床检测。     

解脲支原体实验方法的探讨

本文选择了180例门诊泌尿生殖系感染患者,同时用PCR和培养法检测角脲支原体。其阳性率分别为31.1%,20.0%。培养法阳性率下降可能与临床用药有关,表明检测解脲支原体,PCR方法更占有优势,如为首诊病人,PCR结合培养更能提高解脲支原体感染的检测水平。     

恒温扩增试纸条法检测解脲支原体方法的构建及临床应用

生殖道解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,Uu)感染是人类生殖道疾病最常见、多发的病原体之一,解脲支原体感染可引起男性泌尿道感染,女性生殖道炎症、盆腔炎等,严重者可引起男女不孕不育[J].早期诊断对解脲支原体感染的治疗有着深远意义.目前实验室检测多以培养和荧光定量PCR为主,而培养需要48 h,同时对标本的采集、运输有较高的要求,不适合于快速诊断.荧光定量PCR技术可以在2h内报告结果,可是需要昂贵的定量PCR仪和标准的实验室才能完成,同时定量PCR仪操作为批量式操作,不能达到随到随检测的目的.本文采用了基因扩增技术和免疫层析技术相结合建立一种新型的检测解脲支原体的方法.现介绍如下.     

荧光定量PCR检测稽留流产患者沙眼衣原体和解脲支原体结果分析

目的探讨沙眼衣原体（CT）和解脲支原体（UU）感染与孕妇稽留流产的相关性,以及荧光定量PCR在稽留流产病因检测中的应用价值。方法采用荧光定量PCR检测稽留流产患者宫颈分泌物标本中的CT-DNA和UU-DNA的含量。结果 138例稽留流产患者中72例感染CT或UU,总检出率53.62%,其中CT阳性率21.74%,UU阳性率42.03%,混合感染10.14%。与正常人群对照差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论泌尿生殖系统CT和UU的感染与稽留流产有密切相关性,荧光定量PCR对稽留流产患者CT和UU的检测简单、快速、准确。     

不孕不育与解脲支原体和沙眼衣原体感染关系的研究

目的探讨解脲支原体、沙眼衣原体感染与不孕不育的相关性。方法应用PE5700扩增仪PCR荧光定量法检测解脲支原体、沙眼衣原体。结果不孕不育组解脲支原体阳性率为47.83%,对照组阳性率4.00%,沙眼衣原体阳性率为6.55%,对照组阳性率2.00%,其中女性不孕组解脲支原体阳性率58.40%,男性不育组阳性率34.5%,女性不孕组沙眼衣原体阳性率2.41%,男性不育组阳性率11.34%。结论解脲支原体、沙眼衣原体在不孕不育患者中感染率较高,尤以解脲支原体感染率高,解脲支原体、沙眼衣原体感染可能是导致不孕不育的因素,应引起注意。     

微小隐孢子虫18S rRNA部分基因克隆和序列分析

分别从长春小白鼠、徐州人和南京黄牛的粪便中分离纯化了3株微小隐孢子虫(C.parvum)卵囊,根据C.parvum 18S rRNA基因序列设计合成引物,用PCR扩增卵囊基因组DNA,其大小为586bp的片段,PCR产物用试剂盒回收纯化后直接测序.将测得的序列用DNASTAR软件分析并与国外已发表的相应序列进行同源性比较,并绘制系统发育进化树.结果表明,徐州人源株与长春鼠源株及徐州人源株与南京黄牛源株同源性均为97.6%;长春鼠源株与南京黄牛源株相应序列同源性为99.6%.此3株C.parvum与国外株相应序列同源性为81.4%～100.0%.限制性内切酶酶切位点分析仅发现徐州株有1个特殊的Dde Ⅰ位点.本研究为人源及动物源微小隐孢子虫病诊断及人隐孢子虫感染来源和该病分子流行病学研究提供重要依据.     

早产低体重儿与支原体感染关系的初步研究

支原体（Mycoplasma,M)是一群大小介于病毒和细菌之间的原核生物。目前已证实至少五种支原体被认为是致病或条件致病菌。即肺炎支原体（Mpn)、解脲脲原体（Uu)、人型支原体（Mh)、生殖支原体（Mg)和发酵支原体（Mf)。研究表明早产低出生体重儿与支原体感染有一定关系。本研究运用5种支原体联合分子检测（试剂为无锡克隆遗传技术研究所提供的病原性支原体PCR检测试剂盒）,对本院新生儿病区早产低体重儿80例和母婴同室正常新生儿50例作比较,结果表明早产儿支原体检测阳性率较高,其中Mpn、Uu、NMh阳性率分别为43．75％、80．0％、46．25％,而正常对照组除Mg阳性率为18．0％,与病理组无显著差异外,其他4种支原体阳性率明显较病理组为低,统计学处理有非常显著差异。另早产儿存在多种支原体混合感染,其中以Mpn Uu及Uu Mh混合感染为多,分别占23．75％（19／80）、27．5％（22／80）,另有5例早产儿五种支原体均阳性。说明支原体感染与早产的发生有一定关系。本文还讨论了支原体致病的有关机制。通过本研究初步表明,支原体感染可引起孕产妇感染导致早产低体重,而五种支原体联合分子检测可提高支原体感染的检出率,从而达到早期诊断、及时治疗的目的。     

支气管肺泡灌洗液与咽拭子荧光定量PCR法检测成人肺炎支原体感染的对比研究

目的 用实时荧光定量PCR方法对肺部感染危重患者的咽拭子样本和支气管肺泡灌洗液（BALF）进行检测,探讨不同样本对检测结果的影响.方法 450例肺部感染危重患者纳入临床研究,用实时荧光定量PCR方法检测患者咽拭子样本和BALF样本,对检测结果进行比较.结果 在450例肺部感染危重患者中,肺炎支原体肺炎（MPP）患者1 15例,占25.6％.BALF样本检测的阳性率为69.56％,咽拭子样本检测的阳性率为13.04％.肺炎支原体（MP）感染的年龄段主要在20～39和50 ～59岁,以50-59岁年龄段人数最多.结论 MP是肺部感染主要病原体之一,采集BALF标本用实时荧光PCR检测MPP阳性率更高,是MPP诊断的有效手段.     

解脲支原体感染与精子形态改变相关性探讨

目的探讨解脲支原体感染与精子畸形相关性探讨。方法对420例男性不育患者采用精子形态检测系统下人工修正方法分析精子形态,PCR—DNA荧光定量方法检测精液中解脲支原体。结果解脲支原体阴性组的精子畸形率明显低于解脲支原体阳性组,两组差异显著（P〈0．05）。结论解脲支原体感染可影响精子形态,导致男性不育。     

肺炎支原体感染在BALB/c小鼠肺组织不同时间炎症的变化

目的了解肺炎支原体感染的不同时期肺组织的病理变化、用PCR的方法检测肺炎支原体出现时间、阳性率的变化情况。方法建立肺炎支原体经呼吸道感染的BALB/c小鼠模型,对感染后3、7、14、21 d的小鼠的肺组织进行病理变化、肺湿重、PCR检测肺炎支原体出现时间的研究。结果肺炎支原体经呼吸道感染的BALB/c小鼠肺组织变大重量增加,肺指数同正常对照组相比,P﹤0.01,差异有统计学意义;呼吸道感染的BALB/c小鼠肺组织在3、7 d时,肺组织的病理变化最明显,14 d炎症减轻,21 d炎症基本消退;用PCR的方法检测支气管肺泡灌洗液肺炎支原体7 d时全部为阳性。结论肺炎肺炎支原体感染BALB/c小鼠模型制作成功,感染后7 d时肺部炎症最明显。     

实时荧光定量PCR检测幼儿腹泻腺病毒

目的:建立实时荧光定量PCR方法,并检测腺病毒Ad40或Ad41感染的粪便标本。方法:用T-A克隆技术构建含腺病毒基因的载体作为标准模板,采用Taqman探针标记技术,建立实时荧光定量PCR方法。采集幼儿腹泻标本248例,分别用直接免疫荧光法和实时荧光定量PCR检测腺病毒Ad40和Ad41,比较两种方法的阳性检出率。结果:实时荧光定量PCR灵敏度和准确度(95.60%和96.80%)均高于直接免疫荧光法(78.5%和82.40%)(P0.05),而两者特异度差异无统计学意义(97.30%vs 96.70%,P0.05)。248例待检样本,直接免疫荧光法检出率为2.42%(6/248),实时荧光定量PCR检出率为7.66%(19/248),明显高于直接免疫荧光法(χ2=3.675,P0.05)。结论:成功建立实时荧光定量PCR检测腺病毒Ad40或Ad41方法。其灵敏度、准确度和阳性检出率经均优于直接免疫荧光法,且简便快速。     

绍兴地区不育症患者精液支原体检测及药敏分析

目的探讨男性不育症患者精液支原体感染及药敏情况。方法应用法国生物梅里埃Biomerieux公司Myco-plsasma IST试剂盒,按说明书进行操作,对男性不育症患者精液进行支原体检测,同时测定其对抗菌药物的耐药性。结果 262份精液标本中支原体感染率为38.93%（102例）,其中单纯解脲脲原体（U u）感染率为30.15%（79例）,单纯人型支原体（M h）感染率为3.05%（8例）,U u＋M h混合感染率为5.73%（15例）。9种抗菌药物药敏试验结果显示耐药率最高的是环丙沙星和氧氟沙星,其耐药率超过70%。结论男性不育症患者精液支原体的感染已相当普遍,治疗支原体感染宜选用大环内酯类、四环素类药物。     

2005-2008年上海分离肺炎支原体对抗菌药物的敏感性及对大环内酯类的耐药机制研究

目的 了解目前上海分离肺炎支原体对常用抗菌药的敏感性,明确对红霉素耐药株的耐药机制.方法 采用微量稀释法测定102株肺炎支原体对大环内酯类、四环素类和氟喹诺酮类的药物敏感性.对肺炎支原体核糖体23S rRNA全序列进行扩增及测序.采用限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)对肺炎支原体进行分型.结果 四环素类及氟喹诺酮类对肺炎支原体具有良好活性.肺炎支原体临床分离株对红霉素敏感性低,MIC_(50)和MIC_(90)均>128μg/ml.81.4%(83/102)临床株对红霉素耐药(MIC均>128 mg/L).红霉素耐药肺炎支原体均存在A2063G的核苷酸位点突变.85.3%(87/102)临床分离株属于RFLP 1型.结论 上海分离肺炎支原体对红霉素耐药率高,核糖体23S rRNA的A2063G核苷酸点突变是导致耐药的原因.     

荧光定量PCR检测新疆地区不孕不育患者UU、CT结果分析

目的利用实时荧光定量PCR技术了解新疆地区不孕不育患者解脲支原体（UU）和沙眼衣原体（CT）感染情况,通过对实验结果的统计学处理分析不孕不育与UU、CT感染率及感染量之间的关系,方法采用实时荧光定量PCR技术检测新疆地区不孕不育患者及能正常生育人群解脲支原体-DNA和沙眼衣原体-DNA含量并进行统计学分析。结果不孕不育患者UU-DNA阳性率52.18%,CT-DNA阳性率3.65%,正常对照组则分别为46.08%、1.00%,两组间的差异显著性有统计学上的意义,不孕不育组UU和CT的感染率明显高于对照组（P〈0.05）。不同性别,不用民族的UU阳性检出率不同。结论新疆地区不孕不育患者中UU和CT感染是引起男女不孕不育的重要原因之一,且女性UU阳性率高于男性,维吾尔族UU阳性率高于其它民族。