普通肝素通过降低肺组织Rho激酶活性缓解脓毒症小鼠的肺损伤

目的探讨普通肝素对腹腔注射脂多糖(LPS)所致脓毒症小鼠肺组织Rho激酶活性以及肺损伤的影响。方法腹腔注射LPS制作小鼠脓毒症模型,将小鼠随机分为对照组、LPS组和LPS+肝素治疗组。分别于造模后3h和6h收集血液标本和肺组织。ELISA法分别测定血清TNF-α、IL-1β浓度;取肺组织进行HE染色,测定肺水含量;用Westernblot法观察肺组织中p-MYPT1蛋白表达变化。结果 LPS组和肝素治疗组3h和6h的血浆TNF-α和IL-1β含量均显著高于正常对照组(P<0.05);与LPS组比较,肝素组3h和6h的血浆TNF-α和IL-1β含量均有显著降低(P<0.05);肝素可以缓解脓毒症小鼠肺损伤程度(6h),降低肺水含量(6h),下调肺组织p-MYPT1蛋白表达(3h,6h)。结论普通肝素缓解脓毒症小鼠的肺损伤可能与降低肺组织Rho激酶活性相关。     

二甲双胍对小鼠急性肺损伤的保护作用及可能机制研究

目的:探讨二甲双胍对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用及可能的机制。方法:体重20～25 g的小鼠15只随机分3组:①对照组(Con):气管内滴注PBS;②LPS模型组(LPS):气管内滴注1 mg/ml LPS 60μl,作用24 h;③二甲双胍治疗组(Met+LPS):于滴注LPS前0.5 h给予二甲双胍(250 mg/kg)腹腔注射,再气管内滴注LPS作用24 h;观察各组小鼠肺组织病理学变化,肺泡灌洗液中细胞总数及中性粒细胞比例变化,测定肺组织匀浆内丙二醛(MDA)含量和SOD活力变化。Western blot方法检测肺组织中SOD1变化。结果:在LPS刺激的小鼠模型中,肺泡灌洗液中细胞总数及中性粒细胞比例明显增高,肺组织内MDA含量显著升高,SOD活力明显降低。而以二甲双胍预处理小鼠可明显抑制LPS诱发的上述变化,同时二甲双胍预处理小鼠肺组织SOD1的表达明显增加。结论:二甲双胍可对LPS诱导的急性肺损伤发挥保护作用,这种保护作用可能与上调SOD1的表达有关。     

移植骨髓间充质干细胞减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤

目的 观察移植骨髓间充质干细胞 （MSCs） 对脂多糖 （LPS） 诱导小鼠急性肺损伤 （ALI）的治疗修复作用。方法 全骨髓培养法培养小鼠骨髓MSCs;细胞免疫化学染色鉴定MSCs特异表面标记;小鼠咽后壁吸入LPS制造小鼠肺损伤;尾静脉注射引入MSCs;称重计算肺水肿指数;肺组织切片HE染色观察组织病理改变;ELISA检测肺泡灌洗液和肺组织匀浆中IL-1β含量;Brdu（5-Bromo-2-Deoxyuridine）标记供体MSCs,免疫组织化学染色及双染色观察移植细胞的迁移和分化状态。结果 培养的MSCs细胞表面标记CD44阳性,而造血系表面标记CD34阴性。吸入LPS后,小鼠出现典型的肺损伤病理改变,肺水肿指数和肺组织匀浆IL-1β含量明显增加。标记的MSCs移植入同种异体的肺损伤小鼠,其肺部出现标记的MSCs,并表达上皮细胞标志抗原-细胞角蛋白（CK）。治疗后小鼠的肺水肿指数和肺组织匀浆IL-1β含量下降。结论 外源性MSCs移植到肺损伤小鼠体内,可迁移至肺损伤部位,并表达上皮细胞标志;减轻肺水肿程度,减少炎症因子释放。     

藤黄酸减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤

目的探讨藤黄酸(GA)对脂多糖(LPS)所致小鼠急性肺损伤的保护作用及其机制。方法采用尾静脉注射LPS(4 mg/kg)建立小鼠急性肺损伤模型。实验将小鼠随机分为对照组(control组)、模型组(model组)、藤黄酸组(GA组)和藤黄酸预处理组(GA+LPS组),6 h后测定肺湿/干重比值(W/D);检测髓过氧化物酶(MPO)活性;检测肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量和白细胞计数;ELISA检测肺匀浆中白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果模型组小鼠肺W/D、MPO活性、BALF中蛋白含量和白细胞数量均增加,肺组织IL-1β和TNF-α水平升高(均P0.01);藤黄酸预处理可减轻LPS引起的以上指标变化(均P0.05)。结论 GA可减轻LPS诱导的急性肺损伤,其机制可能与降低肺组织IL-1β和TNF-α的含量、抑制中性粒细胞在肺部的聚集和减轻肺部水肿相关。     

IL-18在脓毒症肺损伤发生发展过程中的作用及机制研究北大核心CSCD

目的:研究IL-18在脓毒症肺损伤发展过程中的作用及调控机制。方法:成年雄性野生型C57BL/6(WT)和IL-18基因敲除(IL-18-/-)小鼠分为野生型小鼠对照组(WT组)、脂多糖(LPS)处理的野生型小鼠组(WT LPS组)、IL-18基因敲除的小鼠对照组(IL-18-/-组)、LPS处理的IL-18基因敲除小鼠组(IL-18-/-LPS组)。腹腔注射LPS(15 mg/kg)建立小鼠脓毒症模型,对照组注射等量生理盐水。观察各组小鼠72 h生存率并处死小鼠,HE染色观察肺部病理组织变化,RT-PCR及Western blot检测各组小鼠肺组织IL-18 mRNA及蛋白表达,免疫荧光检测肺组织IL-18表达及定位,TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡,流式细胞术检测肺组织Treg/Th17比例,ELISA检测炎症因子TNF-α、IL-17A、TGF-1β、IL-10表达。Western blot检测各组小鼠肺组织RORγt、FoxP3蛋白表达及STAT3磷酸化水平。结果:LPS诱导后,小鼠肺组织高表达IL-18。与WT LPS组相比,IL-18-/-LPS组小鼠生存率显著提高,肺组织病理损伤减轻,凋亡细胞显著减少,Treg/Th17比例提高,抑炎因子TGF-1β、IL-10表达增加,而促炎因子TNF-α、IL-17A表达明显减少,肺组织RORγt蛋白表达增加,而STAT3磷酸化水平降低。结论:IL-18可通过上调STAT3磷酸化水平,促进Treg/Th17免疫失衡及炎症因子分泌,从而加剧脓毒症急性肺损伤。     

丹酚酸B减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤

目的研究丹酚酸B(SAB)能否减轻脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤。方法将48只小鼠随机分为对照组、模型组(气管滴注LPS)、SAB低/中/高剂量干预组、莱菔硫烷阳性对照组,检测肺湿/干重比(W/D)值;检测肺泡灌洗液(BALF)中蛋白浓度;HE染色法评价肺组织病理损伤;ELISA检测BALF中TNF-α、 IL-1β和IL-6的含量,检测肺组织MPO、SOD的活性和MDA含量;Western blot检测肺组织中Nrf2、NQO1、HO1、Keap1、NF-κB及p-NF-κB的蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组小鼠肺组织产生病理性变化,W/D值、BALF中蛋白质浓度、炎性细胞因子含量明显升高(P0.05),急性肺损伤模型建立成功。与模型组比较,SAB干预组的各指标值发生显著变化(P0.05);减轻LPS诱导的急性肺损伤小鼠氧化应激,且呈浓度依赖性增强,同时降低Keap1的表达(P0.01);升高Nrf2、NQO1和HO1的表达(P0.01);抑制LPS诱导的NF-κB的表达和NF-κB的磷酸化。结论 SAB可以减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤。     

L-精氨酸对大鼠脂多糖致急性肺损伤的影响及机理

目的:探讨L-精氨酸对大鼠急性肺损伤的影响及机理.方法:采用尾静脉注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)制备大鼠急性肺损伤模型.将45只大鼠随机分为三组:生理盐水对照组(NS组)、急性肺损伤模型组(LPS组)和L-精氨酸预处理组(L-Arg组)(n=15),再各分为2、6、24 h三个时间点.LPS组尾静脉注射LPS(6 mg/kg)制备急性肺损伤模型,L-Arg组在造模前0.5 h腹腔注射L-Arg 500 mg/kg.测定各组大鼠不同时间点的动脉血气分析,肺组织湿/干重(W/D)比,肺组织HE病理切片,ELISA法测定血清TNF-α,硝酸还原酶法测定血清NO,Real Time-PCR法测定肺组织iNOSmRNA.结果:LPS组动脉血氧降低、W/D增高、血清TNF-α及NO增高、肺组织iNOSmRNA增高,且与对照组比较有显著差异(P<0.05),肺组织HE病理切片有肺损伤改变.L-Arg组肺损伤有改善,上述检测指标与LPS组有显著差异(P<0.05).结论:L-精氨酸预处理对LPS致大鼠急性肺损伤有保护作用.     

1-磷酸鞘氨醇受体2抑制脂多糖诱导的急性肺损伤

 目的: 探讨1-磷酸鞘氨醇受体2(S1P2R)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)中的作用及机制。方法: 野生小鼠和S1pr2^-/-小鼠经气管滴注LPS,建立急性肺损伤动物模型。LPS注射24 h时观察肺组织的病理改变,测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中的蛋白浓度、总细胞数、中性粒细胞的比值及TNF-α、IL-6细胞因子的表达。为了观察S1P2R在肺损伤中的作用机制,LPS注射10 min前野生小鼠和S1pr2^-/-小鼠经尾静脉注射一氧化氮合酶抑制剂L-NAME,LPS注射12 h时,再观察肺的病理组织学变化以及BALF中的蛋白浓度,总细胞数及TNF-α、IL-6细胞因子表达的变化。结果: 与野生小鼠比较,S1pr2^-/-小鼠恶化LPS诱导的急性肺损伤,BALF中的蛋白浓度、总细胞数,中性粒细胞比值及炎症细胞因子表达显著增加。而L-NAME的预处理显著抑制在S1pr2^-/-小鼠LPS诱导加重的急性肺损伤。结论: S1P2R通过抑制NO合成,维持血管屏障,从而抑制急性肺损伤。     

N-乙酰半胱氨酸通过抑制ROS-NLRP3信号通路诱导巨噬细胞的M2型分化改善脓毒症肺损伤

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对脓毒症肺损伤的作用及机制。方法 48只Balb/c小鼠随机分为对照组、模型组、NAC低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性药组(n=8)。给予LPS前1 h,腹腔注射药物干预研究。给予LPS 6 h后麻醉,收集肺泡灌洗液(BALF)和血清。苏木精-伊红染色检测肺损伤病理变化;ELISA检测BALF和血清中TNF-α、IL-6和IL-1β含量;Western blot检测组织中NLRP3、Caspase1和ASC蛋白水平;流式细胞术分析M2型巨噬细胞表型;商用试剂盒测量组织中MDA、MPO、SOD、GSH和ROS含量。结果与模型组比较,NAC组小鼠肺损伤显著缓解,且BALF和血清中TNF-α、IL-6和IL-1β含量减少。NAC组较模型组小鼠BALF中M2型巨噬细胞表型增强,且NLRP3、Caspase1和ASC蛋白下调。NAC组小鼠肺组织中MDA、MPO和ROS含量减少,同时,SOD和GSH含量增加。结论 N-乙酰半胱氨酸对急性肺损伤具有保护作用,且可能与抑制ROS-NLRP3信号通路诱导巨噬细胞的M2型分化有关。     

SARS-CoV的S蛋白引起小鼠急性肺损伤

目的： 研究严重急性呼吸综合征冠状病毒（SARS-CoV）的S蛋白作用于小鼠发生的免疫和病理变化,试图揭示S蛋白引起急性肺损伤的可能机制。方法: 将BALB/c小鼠随机分为PBS空白对照组、S蛋白组和γ-干扰素可诱导的10 kD蛋白（IP-10）组,分别经气管滴注、尾静脉注射的途径注入,观察其临床症状、死亡率;称取双肺湿重,进行HE染色和免疫荧光方法检测肺组织中IP-10的表达。结果: 经气管滴注或尾静脉注射S蛋白均可导致小鼠出现呼吸急促症状,甚至死亡,肺脏湿重增加,显微镜下可见肺泡正常结构破坏,间质增厚,炎性细胞浸润,上皮细胞和血管内皮细胞的肿胀脱落,小鼠肺内气管上皮细胞和血管内皮细胞均强阳性表达IP-10。经气管滴注小鼠IP-10蛋白小鼠出现上述类似的肺损伤表现。结论: （1）SARS-CoV的S蛋白引起小鼠急性肺损伤。（2）SARS-CoV的 S蛋白可诱导小鼠肺组织表达IP-10。（3）经气管滴注小鼠IP-10可引起小鼠肺损伤。     

人参皂甙RB2 抑制NF-κB 的激活对LPS 诱导的新生小鼠急性肺损伤的免疫调节作用

目的:研究人参皂苷RB2对脂多糖(LPS)诱导的新生小鼠急性肺损伤的免疫功能的影响及相关分子机制。方法:将新生小鼠随机分为四组:健康组(Ctrl);人参皂苷单独处理组(GR2):健康小鼠腹腔注射GR2 50 mg/kg BW; LPS诱导组(LPS):腹腔注射0. 6 mg/kg BW的LPS,连续5 d; LPS+GR2组:模型小鼠腹腔注射人参皂苷50 mg/kg BW。HE染色观察肺组织损伤情况; TUNEL染色观察肺组织细胞凋亡; Western blot检测Caspase-3和Caspase-9的表达; ELISA检测炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α和IL-10的含量; Western blot检测高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和NF-κBp 65的表达水平。结果:LPS组与对照组相比,肺组织出现明显的损伤,肺泡壁明显增厚,出现大量炎性细胞浸润;染色呈阳性的凋亡细胞比率显著提高; Caspase-3和Caspase-9的表达水平显著上调;炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的含量显著上升,IL-10的含量没有明显变化; HMGB1和MIF的表达显著上调;磷酸化的NF-κB p65的表达显著上调。LPS+GR2组与LPS组相比,肺组织损伤明显得到缓解,多数肺泡结构完整,仅有少量炎性细胞浸润;凋亡细胞的比率显著下降; Caspase-3和Caspase-9的表达水平显著下调;炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的含量显著下降,IL-10的含量没有明显的变化; HMGB1和MIF的表达显著下调;磷酸化的NF-κB p65的表达显著下调。结论:人参皂苷RB2抑制NF-κB的激活,进而调节LPS诱导的新生小鼠急性肺损伤的免疫反应。     

亚硝酸钠减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤

目的:明确亚硝酸钠对急性肺损伤(ALI)的治疗作用及可能机制。方法:用脂多糖(LPS4mg/kg)气道滴入制备小鼠ALI模型。随机分为生理盐水组、LPS模型组、亚硝酸钠4.8nmol/L、48nmol/L、480nmol/L治疗组。测定肺湿/干重比值、肺通透性,常规细胞形态学检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞数量变化,苏木精曙红染色观察肺组织病理改变,用试剂盒检测肺组织白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性。结果:腹腔注射4.8nmol/L、48nmol/L亚硝酸钠可明显降低LPS诱导的ALI小鼠肺湿/干重比值;减少BALF中的白细胞总数及中性粒细胞的比例;降低肺毛细血管通透性;改善肺组织病理变化;降低肺组织TNF-α/IL-10比值、抑制总NOS活性及诱导型NOS(iNOS)活性的增加。480nmol/L亚硝酸钠对LPS诱导的ALI小鼠肺组织上述指标除NOS活性外,均无显著影响(P0.05)。与对照组相比,480nmol/L亚硝酸钠显著增加了肺组织NO水平。结论:低、中剂量亚硝酸钠能够对抗LPS诱导的小鼠急性肺损伤,低剂量亚硝酸钠还原产生的NO对iNOS活性的抑制及下调TNF-α/IL-10比值可能在ALI中起重要作用。     

水通道蛋白1、5在LPS诱导大鼠急性肺损伤组织中的表达

目的探讨水通道蛋白1、5(AQP1、AQP5)在脂多糖(LPS)诱导大鼠急性肺损伤(ALI)组织中的表达变化及意义。方法将Wistar大鼠48只随机分为对照组(NC)和急性肺损伤(ALI)组,ALI组通过尾静脉注射脂多糖(LPS),分别于2、6、12和24 h采集标本。HE染色观察肺组织病理;测定肺湿/干重比(W/D)、肺通透指数;ELISA检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)水平;Western blot、免疫组化和real-time PCR法检测肺AQP1、AQP5蛋白和mRNA变化。结果与对照组比较,ALI组TNF-α、MIP-1α均有显著性升高(P0.05),至24 h点逐渐恢复。注射LPS后2 h出现肺泡和间质水肿,炎性细胞浸润,以12 h最明显;肺W/D比、肺泡灌洗(BALF)蛋白含量、肺通透指数均较对照组明显升高(P0.05),12 h点达峰值。ALI组各时间点肺AQP1及AQP5mRNA及蛋白表达均较对照组明显下调(P0.01),以12 h点下降最明显。肺AQP1、AQP5 mRNA表达与肺W/D比、血清TNF-α,MIP-1α存在明显负相关。结论脂多糖诱导大鼠急性肺损伤,其肺水肿的形成可能与AQP1、AQP5的表达下调有关。     

白藜芦醇减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤

目的观察白藜芦醇在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)小鼠中的作用,以及白藜芦醇对小鼠肺组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)表达的影响。方法将小鼠分为对照组,ALI模型组(经气管滴注5 mg/kg的LPS建立小鼠ALI模型),白藜芦醇干预组(经腹腔注射30 mg/kg白藜芦醇,2 h后,经气管滴注5 mg/kg的LPS)。检测小鼠呼吸功能;HE染色及病理评分观察小鼠肺组织形态的变化;检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白、总细胞数及中性粒细胞数目,并观察中性粒细胞的活化; ELISA检测BALF中IL-1β和IL-18的蛋白水平;real-time PCR检测小鼠肺组织IL-1β、IL-18、nlrp3、asc及pro-caspase-1 mRNA的表达;Western blot检测肺组织IκB的蛋白表达。结果白藜芦醇可改善ALI小鼠的呼吸功能;减轻LPS诱导的肺部病理损伤;降低ALI小鼠BALF中IL-1β和IL-18的蛋白水平(P0.05);减少ALI小鼠肺组织NLRP3、ASC、pro-caspase-1的表达,增加IκB的蛋白表达(P0.05)。结论白藜芦醇可能抑制NLPR3炎性反应小体活化后产物的表达,最终可减轻LPS诱导的小鼠ALI。     

HSP70与TLR-NF-κB信号途径在急性肺损伤发病机制中作用的实验研究

目的:探讨HSP70与Toll-NF-κB信号途径在急性肺损伤发病机制中的相互作用.方法:大鼠尾静脉注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)制备急性肺损伤模型.将32只大鼠随机分为两组:生理盐水对照组(NS组,8只)、急性肺损伤模型组(LPS组,32只),LPS组再细分为2、6、24 h三个亚组(各8只).LPS组尾静脉注射LPS(浓度6 mg/kg)制备急性肺损伤模型.测定各组大鼠不同时间点的动脉血气分析、肺组织湿/干重(W/D)比,ELISA法测定血清TNF-α、IL-6、IL-10,Real Time-PCR法测定肺组织HSP70、TLR及NF-κB水平并观测肺组织结构变化情况.结果:NS组大鼠各项指标无明显波动,LPS组大鼠血气分析提示存在进行性低氧、二氧化碳潴留,肺组织湿/干重(W/D)比、TNF-α、IL-6、IL-10提示逐渐升高,肺组织HSP70与TLR、NF-κB间提示随时间点推进存在正相关性(P<0.05).结论:大鼠急性肺损伤病理过程中,HSP70与TLR、NF-κB通路间存在互相促进关系.     

罗哌卡因通过 HMGB1 / NF-κB 通路减轻 LPS 诱导的小鼠急性 肺损伤

目的 探讨罗哌卡因 ( ropivacaine, Rop) 对脂多糖 ( lipopolysaccharide, LPS) 诱导的小鼠急性 肺损伤 (acute lung injury, ALI) 的作用及其机制。 方法 气管内滴注 LPS 诱导肺损伤小鼠模型, 并将小鼠 随机分为 6 组: 对照组、 LPS 组、 罗哌卡因 0. 25、 0. 5、 1 μmol / L 组和右美托咪定 (dexmedetomidine, Dex) 100 μg / kg 组。 Hematoxylin-eosin (H&E) 染色评估肺组织的组织病理学变化; ELISA 法测定肺组织中髓过 氧化物酶 (myeloperoxidase, MPO)、 丙二醛 ( malondialdehyde, MDA)、 超氧化物歧化酶 ( superoxide dismutase, SOD) 和谷胱甘肽过氧化物酶 ( glutathione peroxidase, GSH-Px) 的活性; 检测血清中 IL-6、 IL-1β 和肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α) 的表达; Western 印迹检测 HMGB1 / NF-κB 通路相关蛋 白的表达。 结果 与对照组比较, LPS 诱导肺泡外膜增厚、 出血和肺水肿; 肺损伤评分和肺含水量增加; MPO 和 MDA 活性增加, SOD 和 GSH-Px 水平降低; IL-6、 IL-1β 和 TNF-α 水平升高; HMGB1 蛋白和 NF-κB P65 磷酸化水平升高, 有显著性差异 (P< 0. 05)。 与 LPS 组比较, 罗哌卡因 0. 5、 1 μmol / L 组小鼠肺损伤 程度明显减轻; MPO 和 MDA 活性降低, SOD 和 GSH-Px 水平升高; IL-6、 IL-1β 和 TNF-α 水平降低; HMGB1 蛋白和 NF-κB P65 磷酸化水平降低, 有显著性差异 (P< 0. 05)。 结论 罗哌卡因通过抑制 HMGB1 / NF-κB 通路, 有效减弱了 LPS 引起的肺组织损伤。     

白杨素对脓毒症急性肺损伤大鼠COX-2和NOS表达的影响

目的探讨白杨素对脓毒症大鼠肺组织环氧合酶-2(COX-2)和一氧化氮合酶(NOS)表达的影响。方法将72只健康Wistar大鼠随机分为三组:假手术组、脓毒症急性肺损伤组和白杨素干预组。通过腹腔内注射10mg/kg的脂多糖(LPS)制备脓毒症急性肺损伤大鼠模型。白杨素治疗组大鼠在注射LPS 1h后给予腹腔内注射白杨素20mg/kg,假手术组则注射等量的生理盐水。给予LPS 24h后,水合氯醛麻醉,处死大鼠,检测肺组织湿/干质量比(W/D),应用肺细胞灌洗术方法来进行肺通透指数测定,免疫组织化学方法和Western blot方法检测肺组织COX-2和NOS蛋白的表达。结果白杨素降低了脓毒症急性肺损伤大鼠的肺水肿及肺血管通透性。LPS诱导后,脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织COX-2和NOS蛋白表达的平均光密度值显著升高(P0.01);而给于白杨素治疗后,肺组织COX-2和NOS蛋白表达的平均光密度值显著降低(P0.01)。结论白杨素减轻脓毒症大鼠的肺损伤可能与抑制COX-2和NOS的表达相关     

重楼皂苷Ⅰ对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用研究北大核心CSCD

目的:探究重楼皂苷Ⅰ(PPⅠ)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)的作用机制。方法:将小鼠随机分为对照(Control)组、LPS组、PPⅠ5 mg/kg组、PPⅠ10 mg/kg组、PPⅠ20 mg/kg组和地塞米松(DEX)组,每组8只。PPⅠ各组小鼠灌胃相应剂量PPⅠ,DEX组灌胃2 mg/kg DEX,对照组灌胃生理盐水预处理7 d,鼻腔滴入LPS(5 mg/kg)建立小鼠ALI模型。24 h后处死小鼠,收集肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF),检测肺湿/干重(W/D)值;HE染色观察肺组织损伤情况并评分;检测BALF中总蛋白含量、白细胞和巨噬细胞数;试剂盒检测一氧化氮(NO)、髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量;ELISA检测TNF-α、IL-1β、IL-6水平;Western blot检测小鼠肺组织中p38和AMPK的磷酸化及NLRP3、caspase-1、Nrf2和KEAP1的蛋白表达。结果:与对照组相比,LPS组小鼠肺组织发生病理性变化,肺损伤评分、W/D值、BALF中总蛋白含量、炎症细胞、氧化应激水平和炎症细胞因子含量明显升高(P<0.05,P<0.01),p38磷酸化水平、NLRP3、caspase-1和KEAP1蛋白表达显著上调(P<0.01),AMPK磷酸化水平和Nrf2蛋白表达显著下调(P<0.01)。与LPS组比较,PPⅠ(10 mg/kg和20 mg/kg)和DEX减轻了LPS诱导的ALI,肺损伤评分、W/D值、BALF中总蛋白含量、炎症细胞、氧化应激水平和炎症细胞因子含量明显降低(P<0.05,P<0.01),p38磷酸化水平、NLRP3、caspase-1和KEAP1蛋白表达显著下调(P<0.05,P<0.01),AMPK磷酸化水平和Nrf2蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01)。结论:PPⅠ能够减轻LPS诱导的小鼠ALI,可能与p38-NLRP3/caspase-1和AMPK-Nrf2/KEAP1信号途径有关。     

小窝蛋白1脚手架区多肽减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤

目的:探究人工合成的小窝蛋白1(caveolin-1,Cav-1)脚手架区多肽cavtratin对血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)活性及脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤的作用。方法:成年雄性BALB/c小鼠随机分为6组,每组8~10只,实验分为对照(control)组、触足肽内化序列(Antennapedia internalization sequence,AP)组、LPS组、LPS+血晶素(hemin)组、LPS+hemin+cavtratin组和LPS+hemin+cavtratin+锌原卟啉(zinc protoporphyrin IX,Zn PP)组。小鼠气管滴注LPS 24 h后,苏木素-伊红染色观察肺组织病理形态变化;检测肺组织湿/干重比、肺泡灌洗液中细胞数和血清中乳酸脱氢酶活性。免疫荧光观察HO-1和Cav-1的结合情况并检测HO-1活性;实时荧光定量PCR检测炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1和i NOS)的mRNA水平。结果:组织免疫荧光以及HO-1活性检测发现,与LPS组比较,LPS+hemin+cavtratin组HO-1与细胞膜Cav-1的结合减少,HO-1的活性增高(P0.05);与LPS组比较,LPS+hemin+cavtratin组肺组织受损程度明显减轻,肺湿/干重比、肺泡灌洗液细胞数和血清中乳酸脱氢酶活性显著降低(P0.05);与LPS组比较,LPS+hemin+cavtratin组炎症因子的mRNA表达降低(P0.05);HO-1活性抑制剂Zn PP可以消除cavtratin的保护作用。结论:Cavtratin可以通过减少HO-1与细胞膜Cav-1的结合使得HO-1活性增加,进而减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤。     

CCN1在脂多糖诱导急性肺损伤中的表达调控和在炎症反应中的作用

目的:体内观察富半胱氨酸蛋白61(CYR61/CCN1)在正常肺组织中的表达定位和在脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤中的表达变化,体外研究LPS调控CCN1表达的分子机制和CCN1在LPS诱导炎症介质表达中的作用。方法:分别通过免疫组化(IHC)染色及免疫荧光法观察CCN1在小鼠肺组织和气道上皮细胞16HBE中的表达定位;气道滴注LPS建立小鼠急性肺损伤模型,IHC观察CCN1在肺组织中的表达变化;体外研究中,分别予气道上皮16HBE细胞以ERK1/2、JNK、P38和PI3K信号通路特异性抑制剂预处理2 h后加入LPS刺激,通过RT-qPCR和Western blot检测CCN1的mRNA和蛋白表达变化;分别通过CCN1-siRNA和重组CCN1蛋白刺激16HBE细胞,qPCR检测炎症介质白细胞介素6(IL-6)、IL-8、转化生长因子β(TGF-β)和血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA水平。结果:CCN1在正常肺组织中以气道上皮表达为主,在LPS诱导的急性肺损伤小鼠气道上皮细胞中CCN1表达升高;LPS可刺激16HBE细胞中CCN1的表达水平升高,其中ERK1/2、JNK、P38和PI3K信号通路特异性抑制剂可以不同程度逆转LPS诱导的CCN1表达升高。重组CCN1蛋白可以诱导16HBE细胞中IL-6、IL-8、TGF-β和VEGF的mRNA合成,干扰CCN1可以部分逆转LPS刺激后IL-6、IL-8、TGF-β和VEGF的mRNA合成。结论:气道上皮来源的CCN1在急性肺损伤中表达升高,其表达调控涉及ERK1/2、JNK、P38和PI3K信号通路;CCN1在介导LPS诱导的炎症介质表达过程中发挥了重要作用。本研究为未来急性肺损伤诊治的潜在靶点提供了一定的理论基础。