siRNA沉默染色质解旋酶DNA结合蛋白1对卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的:探究siRNA沉默染色质解旋酶DNA结合蛋白1(CHD1L)对卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移及相关分子如核因子κB(NF-κB)、基质金属蛋白酶(MMP)的影响。方法:将si-CHD1L、si-NC质粒转染至卵巢癌HO-8910PM细胞,命名为si-CHD1L组、si-NC组,以未经转染细胞作为对照组,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞CHD1L mRNA表达; CCK-8法检测细胞增殖抑制情况;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室系统检测细胞迁移、侵袭能力;蛋白免疫印迹(WB)检测NF-κB、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果:与对照组、si-NC组比较,si-CHD1L组细胞CHD1L mRNA表达降低(P0.05),细胞增殖抑制率升高,细胞迁移能力降低,迁移、侵袭数量降低(P0.05)。与对照组、si-NC组相比,si-CHD1L组NF-κB、MMP-2、MMP-9蛋白表达降低(P0.05)。结论:siRNA沉默CHD1L能够抑制卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移,并能抑制NF-κB、MMP蛋白的表达,为卵巢癌的靶向治疗提供一定的理论依据。     

乙型肝炎病毒反式激活因子XTP4促进肝癌细胞系迁移和侵袭

目的探讨在肝癌细胞系Hep G2中过表达或干扰XTP4表达对细胞迁移和侵袭能力的影响。方法实验分对照组、过表达组和干扰组,将构建成功的XTP4质粒和化学合成的XTP4小干扰RNA(siRNA)瞬时转染入Hep G2,培养48 h后,实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和蛋白印迹(Western blot)检测细胞内XTP4 mRNA和蛋白表达; Snail和NF-κB以及上皮间质转化(EMT)相关分子的表达。并通过细胞划痕愈合实验、Transwell迁移侵袭实验观察细胞迁移侵袭能力。结果成功重培养并提取出XTP4质粒;过表达组XTP4的转录水平和翻译水平均明显高于对照组(P0. 05);迁移和侵袭能力明显增加(P0. 05);下游分子NF-κB、Snail和MMP-9表达均增加(P0. 05);干扰组XTP4的转录水平和翻译水平较对照组均明显降低(P0. 05);迁移和侵袭能力也明显降低(P0. 05);NF-κB、Snail和MMP-9表达减少(P0. 05)。结论乙型肝炎病毒反式激活因子XTP4可促进Hep G2迁移和侵袭,与NF-κB、Snail和MMP-9调节相关,EMT相关分子E-cadherin、N-cadherin可能参与其中。     

右美托咪定对骨巨细胞瘤细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的探究右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)对骨巨细胞瘤细胞增殖、侵袭及迁移的影响.方法将细胞分Control、DEX 0.01、0.1及1μmol/L组.BrdU检测细胞增殖,transwell检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移,免疫印迹检测Ki67、PCNA、Bcl-2、VEGF、MMP-2、MMP-9、NF-κB p65及其下游蛋白表达水平、p38 MAPK表达及其下游蛋白磷酸化比值.结果与Control组比较,DEX 0.1、1μmol/L组BrdU阳性细胞百分比、侵袭细胞数、划痕闭合率和Ki67、PCNA、Bcl-2、VEGF、MMP-2、MMP-9表达水平显著降低,抑制p38 MAPK、NF-κB信号通路的激活.结论DEX通过调控p38 MAPK及NF-κB表达抑制骨巨细胞瘤细胞增殖、侵袭及迁移.     

BML-111对PM2.5诱导外周血Th1/Th2及ILC2失调的影响

本文主要探究PM2.5对小鼠外周血Th1/Th2及ILC2水平的影响以及BML-111的作用。通过分离培养小鼠PBMC,采用不同剂量PM2.5处理细胞,检测细胞增殖活性,筛选PM2.5适宜剂量。同时将细胞随机分为NC组、PM2.5组、BML-111组和拮抗剂Boc-2组,分别使用0 μg/mL PM2.5、50 μg/mL PM2.5、10 μmol/L BML-111和10 μmol/L Boc-2处理细胞,检测炎性因子的含量、Th1和Th2以及ILC2百分比、T-bet和GATA3的mRNA表达。结果发现,不同剂量PM2.5均能抑制PBMC的增殖率;PM2.5能够促使PBMC释放炎性因子,增加T-bet和GATA3的mRNA表达,诱导Th2分化,导致Th1/Th2失衡,同时提高ILC2水平。BML-111可降低炎性因子水平,抑制T-bet和GATA3的mRNA表达,降低免疫细胞水平,恢复Th1/Th2平衡,但拮抗剂Boc-2能部分逆转BML-111的作用。因此,脂氧素受体激动剂BML-111能够对PM2.5诱导的免疫炎性反应发挥有效抑制作用,这一作用可能是通过降低炎性因子的表达和ILC2百分比并维持免疫细胞Th1/Th2平衡来实现的。     

ADAM33基因在过氧化氢诱导的支气管上皮细胞凋亡及氧化损伤中的作用研究

目的:探讨ADAM33基因对过氧化氢诱导的支气管上皮细胞活力、凋亡率、免疫因子表达及氧化损伤的影响及机制。方法:25、50、100、200、400μmol/L的H2O2处理人支气管上皮16HBE细胞2 h,CCK8法检测各浓度H_2O_2对16HBE细胞活力的影响。16HBE细胞分为对照组、NC组和H_2O_2+si-ADAM33组,CCK8检测各组细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率及ROS水平; Western blot检测ADAM33、VEGF、COX-2、NF-κB p65和IKKα的蛋白表达。结果:25μmol/L和50μmol/L的H_2O_2不影响16HBE细胞活力(P0. 05),而100～400μmol/L的H_2O_2可明显抑制16HBE细胞活力,与对照组比较差异具有统计学意义(P0. 05)。与NC组比较,H_2O_2组细胞活力显著降低,细胞凋亡率、ROS水平及VEGF、COX-2、NF-κB p65和IKKα的蛋白表达均显著升高(P0. 05),与H_2O_2组比较,H_2O_2+si-ADAM33组细胞活力显著升高,细胞凋亡率、ROS水平及VEGF、COX-2、NF-κB p65和IKKα的蛋白表达均显著降低(P0. 05)。结论:ADAM33基因表达抑制可降低由H_2O_2诱导的支气管上皮细胞凋亡、氧化损伤及免疫抑制,机制可能与下调NF-κB信号有关。     

TRAF6基因对宫颈癌细胞体外生物学行为的影响及其相关机制

目的:探讨肿瘤坏死因子受体相关因子(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)基因对于宫颈癌细胞生长、增殖、凋亡及浸润转移等生物学行为的影响,为将来人宫颈癌的生物治疗提供实验依据.方法:采用Western印迹方法检测TRAF6在宫颈癌细胞系(Hela,SiHa,CaSki和C33A)中的表达,构建TRAF6-shRNA干扰表达载体并转染人宫颈癌Hela细胞,而后使用MTT法、流式细胞仪分析法、Transwell侵袭小室实验法等方法分析TRAF6对Hela细胞活力、周期、凋亡以及迁移等生物学行为的影响,同时检测TRAF6对其靶基因NF-κB表达的影响,以及Cyclin D1,easpase 3和MMP-9等蛋白影响.结果:TRAF6在宫颈癌细胞系(Hela,SiHa,CaSki及C33A)中高表达,TRAF6 shRNA转染组Hela细胞的活力、增殖能力以及迁移能力明显低于阴性对照组和空白对照组Hela细胞(P＜0.05),TRAF6 shRNA转染组发生凋亡的Hela细胞所占比例明显高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),阴性对照组和空白对照组Hela细胞的活力、增殖能力、凋亡情况以及迁移能力无明显差异;TRAF6 shRNA转染组Hela细胞中NF-κB,Cyclin D1和MMP-9蛋白表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),caspase 3蛋白表达水平明显高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),NF-κB,Cyclin D1,caspase 3和MMP-9在阴性对照组和空白对照组表达没有明显变化.结论:TRAF6基因可能具有促进Hela细胞生长增殖及其侵袭迁移能力,抑制Hela细胞凋亡的作用,TRAF6基因的表达下调可能与人宫颈癌Hela细胞迁移能力下降、凋亡能力增加有关.     

川楝素对人卵巢癌细胞侵袭和迁移的影响

目的:探讨川楝素(toosendanin,TSN)对人卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响及相关机制。方法:用不同浓度川楝素处理人卵巢癌CAVO-3和SKVO-3细胞,采用CCK-8法检测TSN处理12、24、48、72和96 h后的细胞存活率;通过细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测TSN对人卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力的影响;采用Western blot法检测核因子κB(NF-κB)p65、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和Snail蛋白的表达情况。结果:TSN抑制CAVO-3和SKVO-3细胞活力(P0.05)。与对照组相比,TSN组CAVO-3细胞的迁移和侵袭能力明显降低,且NF-κB p65和E-cadherin表达升高,N-cadherin、vimentin和Snail表达下降(P0.05);而加入NF-κB抑制剂BAY11-7082至TSN处理的细胞后明显逆转了以上效应,与TSN组相比,TSN+BAY11-7082组CAVO-3细胞的迁移和侵袭能力显著升高,且E-cadherin表达下降,N-cadherin、vimentin和Snail表达升高(P0.05)。结论:川楝素能抑制人卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与抑制由NF-κB/Snail信号通路所介导的上皮-间充质转化过程有关。     

厚果崖豆藤提取物抑制NF-κB p65 的活化对三阴性乳腺癌细胞增殖、凋亡和转移的影响

目的:本研究探索厚果崖豆藤提取物MIL对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖、凋亡和转移的影响。方法:将MDA-MB-231细胞随机分为4组,分别在4组细胞的血清DMEM培养基中加入0、2、4、8μmol/L的MIL继续培养,用CCK8试剂盒检测处理细胞存活率;EDU染色检测细胞增殖状态;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验观察细胞侵袭的情况;RT-PCR检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达;免疫印迹法检测NF-κB p65蛋白表达变化;免疫荧光检测p65的细胞核转位情况。结果:MIL对MDA-MB-231细胞有毒性作用,其毒性作用呈一定的剂量关系(P0.05)MIL浓度大于16μmol/L时,细胞存活率显著降低(P0.05);2、4、8μmol/L MIL三个处理组增殖抑制作用较0μmol/L MIL处理组明显(P0.05); 2、4、8μmol/L MIL三个处理组细胞凋亡率较0μmol/L MIL处理组明显升高,但差异无统计学意义;与对照组比较,MIL加药组显著抑制细胞增殖(P0.05);而对细胞凋亡率无显著影响;4μmol/L和8μmol/L两个浓度的MIL对MDA-MB-231细胞侵袭能力有显著的抑制作用(P0.05);与0μmol/L MIL处理组对照组比较,2μmol/L、4μmol/L和8μmol/L MIL处理MIL加药组组Vimentin mRNA的表达均显著降低(P0.05);4μmol/L和8μmol/L MIL两个处理组E-cadherin mRNA的表达均显著升高(P0.05),N-cadherin mRNA的表达均显著降低(P0.05);4μmol/L和8μmol/L MIL两个处理组p65磷酸化水平较0μmol/L MIL处理组显著降低(P0.05)。4μmol/L和8μmol/L两个浓度的MIL明显抑制p65的核转位(P0.05)。结论:MIL通过抑制NF-κB p65的活化有效抑制MDA-MB-231细胞增殖、侵袭能力并促进其发生凋亡,表明MIL对三阴性乳腺癌有缓解作用。     

NF-κB与COX-2的正相互作用诱导子宫颈癌细胞生长及抗凋亡

目的探讨NF—κB和COX-2通路之间的相互作用对人子宫颈癌细胞株（Hela细胞）的生长及细胞凋亡的影响。方法应用细胞计数盒（CCK-8）检测细胞存活率;Hoechst33258核染色检测凋亡细胞的形态及数量的改变：Westernblot法检测Caspase-3、NF-κB和COX-2蛋白的表达。结果应用NF．KB抑制剂（PDTC）或COX-2抑制剂（NS-398）处理Hela细胞36h能明显地抑制细胞存活率,PDTC或NS-398处理Hela细胞24h能明显地促进Caspase-3表达,并增加凋亡细胞数量。PDTC处理Hela细胞能显著地抑制COX-2表达,另方面,NS-398处理Hela细胞能抑制NF-κB的表达。结论NF-κB和COX-2通路之间的正相互作用诱导Hela细胞生长及抑制细胞凋亡。     

NF-κB p65 siRNA抑制人脐静脉内皮细胞迁移的研究

目的:观察RNA干扰技术(RNAi)特异性抑制人脐带静脉血管内皮细胞( EAhy926)内NF-κB p65基因效果及对细胞迁移力的影响.方法:10 μg/L血管内皮生长因子(VEGF)刺激培养EAhy926细胞,给予转染NF-κB p65 siRNA,同时设立对照组,分别是阴性对照siRNA转染组、空白脂质体组及正常对照组(不给予其他任何处理),48 h后分别采用RT-PCR、 Western blot检测细胞内NF-κB p65 mRNA及蛋白的表达水平,并计算细胞迁移抑制率.结果:与正常对照组比较,NF-κB p65 siRNA组的细胞内NF-κB p65 mRNA及蛋白的表达量均明显减少( P <0.05);而阴性对照siRNA转染组及空白脂质体组的细胞内相应的表达量则无统计学意义.同时,siRNA转染后对细胞的迁移抑制率达64.5%,空白脂质体组和阴性对照siRNA组则仅为7.5%和11.3%.结论:siRNA能通过抑制血管内皮细胞内NF-κB p65的信号通路,抑制细胞的迁移能力,这为今后抗血管生成治疗研究打下了基础.     

杜仲绿原酸对LPS 诱导的视网膜内皮细胞凋亡和免疫反应的调控作用

目的:糖尿病性视网膜病变是糖尿病最常见的并发症之一。本文旨在研究杜仲绿原酸(CA)对脂多糖(LPS)诱导的视网膜内皮细胞(HRECs)凋亡和炎症反应的影响。方法:CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术分析细胞凋亡; ELISA检测炎症因子IL-6、TNF-α和IL-10水平。蛋白印迹检测Ki67、Bcl-2、Caspase-3、Bax、NF-κB P65和P-NF-κB P65蛋白水平。结果:低浓度(50μmol/L)的杜仲绿原酸对HRECs细胞活力无明显影响,高浓度(50μmol/L)的杜仲绿原酸会减低HRECs细胞活力。与对照组相比,LPS组细胞增殖明显降低,细胞凋亡明显上升(P0. 05)。与LPS组相比,20和50μmol/L的杜仲绿原酸组细胞增殖升高,细胞凋亡下降(P0. 05)。LPS组Ki67和Bcl-2表达明显低于对照组,Caspase-3和Bax表达明显高于对照组(P0. 05)。与LPS组相比,20和50μmol/L的杜仲绿原酸组Ki67和Bcl-2表达明显升高; Caspase-3和Bax表达明显降低(P0. 05)。而且,LPS组IL-6和TNF-α水平高于对照组,IL-10水平低于对照组(P0. 05)。与LPS组相比,20和50μmol/L的杜仲绿原酸组IL-6和TNF-α水平下降,IL-10水平上升(P0. 05)。另外,LPS组p-P65/P65比值高于对照组(P0. 05)。杜仲绿原酸(10,20,50μmol/L)组p-P65/P65比值低于LPS组(P0. 05)。结论:杜仲绿原酸通过抑制NF-κB P65活化减弱LPS诱导的HRECs细胞凋亡和炎症反应的增强。     

白桦脂醇对Aβ25-35诱导的小胶质细胞炎症反应的保护作用

目的探讨白桦脂醇对Aβ_(25-35)诱导的小胶质细胞炎症反应的保护作用。方法 MTT法预实验证实10μmol/L Aβ_(25-35)的浓度对细胞活力无影响,但是影响炎症因子分泌,遂以10μmol/L Aβ_(25-35)作用于BV2细胞,实验随机分为对照组、模型组、白桦脂醇5、10和20μmol/L组,采用MTT法检测细胞的存活率、Western blotting检测NF-κB信号通路蛋白(NF-κB P65、IκBα、p-NF-κB P65、p-IκBα)表达水平及炎症诱导酶环氧合酶2(COX-2)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的水平,以及炎症因子白细胞介素1β(IL-1β),肿瘤坏死因子α(TNF-α)及IL-10水平。结果 Aβ_(25-35)浓度为10μmol/L时,对BV2细胞存活率无影响。白桦脂醇浓度在0～20μmol/L时低毒性、细胞活力无变化。白桦脂醇预处理组IκBα、NF-κB P65的蛋白表达水平升高,p-NF-κB P65和p-IκBα的蛋白表达水平显著降低,COX-2、iNOS的水平显著降低,促炎因子IL-1β、TNF-α的表达降低,而抑炎因子IL-10的表达升高。结论白桦脂醇对Aβ_(25-35)诱导的BV2细胞的炎症反应有抑制作用,通过NF-κB信号通路,抑制iNOS及COX-2蛋白表达,并抑制TNF-α和IL-1β水平,提高IL-10水平。     

花姜酮对人口腔鳞癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响

目的探究花姜酮对人口腔鳞癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响。方法将人口腔鳞癌细胞株分为空白组、花姜酮5μmol/L组、花姜酮10μmol/L组和花姜酮20μmol/L组。空白组使用常规细胞培养液培养,其他3组分别使用相对应浓度的花姜酮进行培养,观察4组细胞的增殖、凋亡、侵袭、迁移情况及PI3K、蛋白激酶B(Akt)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)表达水平。结果花姜酮5μmol/L组、花姜酮10μmol/L组、花姜酮20μmol/L组细胞增殖率均低于空白组,且花姜酮20μmol/L组细胞增殖率低于花姜酮5μmol/L组、花姜酮10μmol/L组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。花姜酮5μmol/L组、花姜酮10μmol/L组、花姜酮20μmol/L组细胞凋亡率均高于空白组,且花姜酮20μmol/L组细胞凋亡率高于花姜酮5μmol/L组、花姜酮10μmol/L组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。花姜酮5μmol/L组、花姜酮10μmol/L组、花姜酮20μmol/L组细胞迁移数及侵袭数均低于空白组,且花姜酮20μmol/L组细胞迁移数及侵袭数均低于花姜酮5μmol/L组、花姜酮10μmol/L组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。在花姜酮的干预下,PI3K、Akt、Bcl-2表达水平均出现下调,且随着花姜酮浓度的提升,PI3K、Akt、Bcl-2表达水平下调幅度逐渐增大,差异具有统计学意义(P 0. 05)。结论花姜酮能够促进人口腔鳞癌细胞的凋亡,抑制人口腔鳞癌细胞的增殖及迁移、侵袭,且呈浓度依赖性。     

虫草素增强顺铂诱导的食管癌细胞系Eca109凋亡

目的研究虫草素与顺铂联合用药对食管癌细胞Eca109凋亡的影响及其作用机制。方法将食管癌细胞Eca109分为对照组、不同浓度虫草素处理组、不同浓度顺铂处理组和虫草素(70μg/m L)与顺铂(0.8μg/m L)联合处理组。MTS法检测Eca109细胞增殖;Hoechst 33258染色法及流式细胞术检测Eca109细胞凋亡;Western blot法检测细胞核内NF-κB P65及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平;ELISA法检测细胞核内NF-κB P65与DNA的结合活性。结果虫草素与顺铂联合应用使顺铂对Eca109细胞的抑制率由29.30%增加至70.41%(P0.05),增强了顺铂对Eca109的敏感性;与顺铂单独用药相比,联合用药能够显著增加顺铂诱导的细胞凋亡(P0.05);与对照组相比顺铂能够增加细胞核内NF-κB P65的活性,而虫草素却能抑制NF-κB P65的活性,联合用药后NF-κB P65的活性下调;与虫草素和顺铂单独用药相比,联合用药组能够使抗凋亡蛋白Bcl-2的表达显著降低(P0.05),而促凋亡蛋白Bax表达则显著增高(P0.05)。结论虫草素可能通过抑制NF-κB途径,调节下游信号分子Bcl-2和Bax的表达,增强顺铂对Eca109的凋亡诱导效应。     

CXCL1促进乳腺癌细胞增殖和迁移及其作用机制的研究

目的体外研究CXCL1对乳腺癌细胞增殖和迁移侵袭能力的影响及其作用机制。方法选取人乳腺癌细胞进行分组处理:空白对照组、CXCL1组、anti-CXCR2中和抗体组,用CCK8、克隆形成实验、流式凋亡、细胞划痕及Transwell迁移实验分别对各组细胞增殖活性、凋亡率、迁移侵袭能力进行检测,并用ELISA法对各组细胞内MMP-9蛋白、磷酸化AKT及活化NF-κB水平进行检测。结果 CCK8与克隆形成实验结果显示,与空白对照组相比CXCL1处理组细胞增殖活性提高,细胞克隆形成率增加(P0.05),与空白对照组相比anti-CXCR2处理组细胞增殖活性降低,细胞克隆形成率降低(P0.05);流式凋亡检测结果显示,与空白对照组相比CXCL1处理组细胞凋亡率降低(P0.05),与空白对照组相比anti-CXCR2处理组细胞凋亡率增高(P0.05);细胞划痕、Transwell迁移实验及细胞内MMP-9蛋白表达水平表明,与空白对照组相比CXCL1处理组细胞迁移侵袭能力增强(P0.05),与空白对照组相比anti-CXCR2处理组细胞迁移侵袭能力减弱(P0.05);细胞内p AKT/NF-κB蛋白检测表明,与空白对照组相比CXCL1处理组细胞内AKT磷酸化水平及NF-κB活化水平升高(P0.05),与空白对照组相比anti-CXCR2处理组细胞内AKT磷酸化水平及NF-κB活化水平降低(P0.05)。结论 CXCL1通过与CXCR2结合促进乳腺癌细胞增殖和迁移侵袭,其机制可能是激活了AKT/NF-κB信号转导通路。     

蒙花苷通过调控IKK/NF-κB信号通路抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭

目的:探究蒙花苷(LIN)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨可能的分子机制。方法:用不同浓度(5、 10、 20、 40、 80和160μmol/L)的LIN处理MCF-7、MDA-MB-231和MCF-10A细胞24 h后,CCK-8法和集落形成实验检测细胞的增殖能力,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blot检测Snail、E-cadherin、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκB激酶α/β(p-IKKα/β)和磷酸化p65(p-p65)的蛋白水平。结果:LIN可剂量依赖性地抑制MDA-MB-231细胞活力(P0.05),IC_(50)为55.89μmol/L;20μmol/L LIN作用24 h后,MDA-MB-231细胞集落形成率显著降低(P0.05);与对照组相比,5μmol/L和10μmol/L LIN作用24 h后,MDA-MB-231细胞迁移率和侵袭率显著降低(P0.05),Snail和MMP-9的蛋白水平下调(P0.05),E-cadherin的蛋白水平上调(P0.05),IKKα/β和p65蛋白的磷酸化水平降低,IκBα的蛋白水平上调(P0.05);同时,IKK-16(IKKα/β抑制剂)和PDTC(NF-κB抑制剂)也可下调MDA-MB-231细胞中Snail和MMP-9的蛋白水平(P0.05),并上调E-cadherin的蛋白水平(P0.05)。结论:LIN可能通过抑制IKK/NF-κB信号通路活化而下调Snail和MMP-9蛋白水平并上调E-cadherin蛋白水平,最终导致MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力降低。     

核因子-κB在P-糖蛋白介导卵巢癌细胞多药耐药性中的作用

目的观察卵巢癌中核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)在活化及抑制状态时多药耐药基因1表达产物P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达情况,探讨二者之间的关系。方法用多西他赛(Docetaxel)及NF-κB活化抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)作用于卵巢癌SKOV-3细胞,Western Blot法分析胞核P65蛋白表达,流式细胞仪检测细胞膜P-gp表达及细胞凋亡,MTT法观察细胞生长抑制。结果单用Docetaxel组胞核P65蛋白、胞膜P-gp表达均增多,加用PDTC可逆转此现象;Docetaxel(≥1 mg/L)或PDTC(≥10μmol/L)均明显抑制SKOV-3细胞的生长,引起细胞凋亡;小剂量PDTC(2.5μmol/L、5μmol/L)和Docetaxel(0.01 mg/L)联合应用与单用Docetaxel比较,可明显抑制细胞生长,增加细胞凋亡率。结论P-gp表达可能与NF-κB活化有关;抑制NF-κB活化可增强卵巢癌细胞对Docetaxel的敏感性。     

TLR9的激活对食管鳞癌细胞的增殖侵袭能力及NF-κB表达的影响

目的探索Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)的激活对食管鳞癌细胞的增殖侵袭能力及NF-κB表达的影响。方法流式细胞术检测TLR9在食管鳞癌细胞TE-3、TE-13、TE-15、TE-30中的表达;免疫荧光法检测TLR9在TE-13细胞中的表达;用CpG寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)激活TE-13,实验分为阴性对照组(control)、低剂量CpG-ODN组(1μg/mL)、中剂量CpG-ODN组(3μg/mL)和高剂量CpG-ODN组(12μg/mL)。RT-qPCR检测食管鳞癌细胞TE13中TLR9和NF-κB mRNA相对表达量的变化;采用CCK-8和Transwell法分别检测TLR9的激活对TE-13细胞增殖和侵袭能力的影响。结果①TLR9在TE-13表达量高于其他3种食管鳞癌细胞系。②3、12μg/mL CpGODN作用后TE-13细胞中TLR9被充分激活并且上调NF-κB的表达,TLR9和NF-κB的表达显著均高于阴性对照组(P0.05);低剂量CpG-ODN组与阴性组相比差异无统计学意义(P0.05)。③CCK-8和Transwell法检测发现CpGODN浓度在3、12μg/mL时TLR9的激活可显著增加TE-13细胞的增殖和侵袭能力(P0.05),激活作用具有浓度依赖性。低剂量CpG-ODN组与阴性组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论 CpG-ODN可通过TLR9/NF-κB促进食管鳞癌细胞的增殖和侵袭,提示TLR9可能是治疗食管鳞癌的重要靶点。     

当归多糖通过调节p38 通路抑制宫颈癌Hela 细胞生长、迁移和侵袭

目的:探究当归多糖通过p38通路对宫颈癌Hela细胞生长、迁移和侵袭的影响。方法:宫颈癌Hela组细胞正常培养基培养,阳性对照组细胞用含有10μmol/L顺铂的培养基培养,当归多糖低、中、高剂量组细胞分别用含有100、200、400 mg/L当归多糖的培养基培养,SB203580组细胞用含有10μmol/L SB203580的培养基培养,当归多糖高剂量+SB203580组用含有400 mg/L当归多糖和10μmol/L SB203580的培养基培养;通过MTT检测各组细胞生长情况,通过划痕实验检测细胞迁移能力,通过Transwell检测细胞侵袭情况,通过Western blot检测p-p38、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平。结果:当归多糖呈剂量依赖性抑制宫颈癌Hela细胞的生长和迁移能力,降低划痕闭合率和侵袭细胞数目,下调p-p38、MMP-2和MMP-9蛋白表达;p38信号通路抑制剂SB203580处理后,能够增强当归多糖对MMP-2和MMP-9蛋白表达的下调作用及对宫颈癌Hela细胞的生长、迁移和侵袭的抑制作用。结论:当归多糖能够抑制宫颈癌Hela细胞生长、迁移和侵袭,这种抑制作用可能与其通过调节p38信号通路的活性进一步调节MMP-2和MMP-9来实现。     

槐定碱抑制LPS诱导巨噬细胞株NF-κB表达

 摘 要：目的 观察槐定碱对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞IKKβ,IκBα,NF-κB P65及TNF-α表达的影响,探讨其抗内毒素机制。方法 培养RAW264.7巨噬细胞,分为对照组、槐定碱对照组、LPS组、槐定碱干预组。槐定碱干预组加入LPS100μg/L孵育1h,弃去LPS后加入槐定碱15.63mg/L,作用5、30、60、120min,分别获取细胞与培养液。RT - PCR与Western Blot分别检测NF-κB等的mRNA与蛋白表达,放免法检测培养液中TNF-α含量。结果 LPS组各时间点IKKβ、pIκBα、NF-κB P65 mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均显著高于同时间点对照组(P < 0.01);槐定碱干预组以上因子mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均较同时间点LPS组显著回落(P < 0.01)。结论 槐定碱调控LPS激活的巨噬细胞NF-κB通路IKKβ、IκBα、NF-κB P65等分子的表达,进而抑制下游TNF – α分泌是其抗内毒素作用机制之一。