上调miR-433表达抑制结直肠癌细胞系增殖

目的研究miR-433在结直肠癌中的表达,并初步探讨其功能。方法选择不同分期结直肠癌癌组织(CRC)、癌旁组织与正常结直肠组织,用实时定量PCR检测miR-433表达并比较;体外培养结直肠癌细胞系HT-29、HCT-116和SW480以及正常结直肠细胞系NCM460,用实时定量PCR检测miR-433表达。随后将miR-433模拟物转染SW480细胞,CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室法检测细胞侵袭;流式细胞测量术检测细胞周期。结果与癌旁组织相比,miR-433在结直肠癌组织中表达显著降低(P0.05)。在结肠癌患者血清中miR-433水平也显著低于健康人群(P0.05)。此外,从TNM分期Ⅰ期～Ⅳ期,结直肠癌组织内miR-433表达逐渐降低(P0.05)。与NCM460相比,HT-29、HCT-116和SW480中,miR-433表达下调(P0.05)。SW480转染miR-433模拟物后,与对照miRNA组相比,在SW480细胞增殖水平明显降低(P0.05),G_2和M期细胞比例增多。上调miR-433后,细胞侵袭和迁移明显减弱(P0.05)。结论 miR-433在结直肠癌中表达降低。在SW480细胞中上调其表达后,可抑制细胞系增殖、侵袭与迁移。     

基因沉默PRDX1 表达对人结直肠癌SW480 细胞侵袭迁移的影响

目的:探讨RNA 干扰过氧化还原酶1(Peroxiredoxin 1,PRDX1)表达对人结直肠癌SW480 细胞侵袭转移能力的影响。方法:筛选RNA 干扰PRDX1 的慢病毒质粒,与阴性对照慢病毒质粒分组转染结直肠癌SW480 细胞,转染后的SW480 细胞可分为PRDX1 基因沉默组(si-PRDX1)和阴性对照组(Vector)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测两组细胞中PRDX1 mRNA 和蛋白表达;采用Transwell 侵袭和迁移实验检测基因沉默PRDX1 表达对结直肠癌细胞侵袭及迁移能力的影响;通过Western blot 检测两组细胞中基质金属蛋白酶(MMP)家族部分蛋白表达水平。结果:基因沉默PRDX1 表达可有效抑制结直肠癌SW480 细胞中PRDX1 mRNA 和蛋白水平的表达,与阴性对照组相比(Vector),差异均具有统计学意义(P<0.01),说明基因沉默PRDX1 的SW480 细胞系构建成功;Transwell 侵袭和迁移实验显示si-PRDX1组细胞的侵袭及迁移能力较对照组均明显降低(P<0.01);Western blot 结果显示,与Vector 组相比,si-PRDX1 组细胞中组织基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)的表达明显增加,而MMP-2 及MMP-9 的表达显著下降,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:基因沉默人结直肠癌SW480 细胞的PRDX1 表达可有效抑制细胞的侵袭、迁移及转移能力,其机制可能会通过调控TIMP-2、MMP-2 及MMP-9 的表达介导。     

IncRNA RAB11B-AS1对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响

目的 探讨IncRNA RAB11B-AS1对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响及可能机制.方法 qRT-PCR方法检测34例结直肠癌组织及相应的癌旁组织、人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460与人结直肠癌细胞株SW480中IncRNA RAB11B-AS1的表达水平.构建稳定过表达RAB11B-AS1的SW480细胞系,MTT方法检测SW480细胞的增殖能力变化;流式细胞术检测SW480细胞凋亡率;Transwell检测SW480细胞侵袭能力变化,划痕实验检测SW480细胞迁移能力变化;Western blot检测SW480细胞中细胞周期蛋白1(cyclin D1)和CDK6的表达水平.结果 RAB11B-AS1在结直肠癌组织中的表达显著低于癌旁组织(P＜O.Ol);在SW480中的表达显著低于NCM460细胞(P＜0.01).RAB11B-AS1过表达后,SW480细胞的增殖、侵袭与迁移能力显著降低,凋亡率显著升高,cyclinDl与CDK6的蛋白表达降低(P＜O.Ol).结论 IncRNA RAB11B-AS1在结直肠癌组织中表达降低,过表达RAB11B-AS1能够抑制SW480细胞的增殖、迁移与侵袭,并促进凋亡.     

分泌型卷曲相关蛋白2抑制人结直肠癌细胞系SW480的增殖和迁移

目的探究分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)抑制人结直肠癌细胞系SW480增殖、迁移的分子机制。方法在人正常结肠上皮细胞HCoEpiC和结直肠癌细胞系SW480中采用Western blot和RT-qPCR检测SFRP2的表达;构建shSERP2稳转SW480细胞株;在shNC SW480和shSFRP2 SW480细胞中采用Western blot和RT-qPCR检测SFRP2、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和Twist的表达;HIF-1α抑制剂(IDF-11774)刺激shSFRP2 SW480细胞后,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移、侵袭。结果 SW480细胞中SFRP2的表达量低于HCoEpic细胞(P0.01);敲降SFRP2后,SW480细胞增殖、迁移、侵袭能力显著提高(P0.001);而细胞内HIF-1α和Twist表达水平显著提高(P0.01);HIF-1α抑制剂(IDF-11774)刺激后,其增殖、迁移、侵袭能力显著回降(P0.001)。结论 SFRP2通过调控HIF-1α-Twist信号轴发挥其抑癌作用。     

长链非编码RNA母系表达基因3对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响

目的:检测长链非编码RNA母系表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)在结直肠癌细胞中的表达,并观察过表达MEG3对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:检测人正常结肠细胞NCM460及结直肠癌细胞SW48、Lo Vo中MEG3的水平,在SW48细胞和Lo Vo细胞中转染MEG3过表达质粒,利用Transwell小室及划痕实验观察过表达MEG3对细胞侵袭和迁移能力的影响,通过Western blotting检测基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)家族相关蛋白的变化。结果:结直肠癌细胞SW48和Lo Vo中MEG3的水平明显低于人正常结肠细胞NCM460;在SW48和Lo Vo细胞中过表达MEG3后能够明显抑制细胞的侵袭和迁移能力;Transwell侵袭实验和迁移实验显示MEG3表达组SW48细胞的穿膜数及Lo Vo细胞的穿膜数与对照组比较明显减少。划痕实验中过表达MEG3后细胞间距较对照组明显增大,提示细胞运动能力减弱。同时过表达MEG3可明显降低细胞中MMP-2及MMP-9的表达,增高金属蛋白酶组织抑制物2(tissue inhibitor of metalloproteinase-2,TIMP-2)的表达。结论:结直肠癌细胞中MEG3水平较正常结直肠细胞明显降低;在结直肠癌中过表达MEG3可抑制细胞的侵袭、迁移运动能力,并且可能通过影响TIMP-2、MMP-2及MMP-9的表达发挥上述功能。     

细丝蛋白A抑制人结肠癌SW480细胞体外侵袭转移能力

 摘要 目的 研究细丝蛋白A（filamin A,FLNa）对人结肠癌SW480细胞侵袭转移行为的影响,并初步探讨其抑癌的机制。方法 将FLNa基因质粒载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO/FLNa,以脂质体介导方式转染SW480细胞。经G418筛选,获得FLNa基因稳定表达的SW480 /FLNa细胞。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot技术检测FLNa基因的导入情况;RT-PCR和Western blot检测了SW480细胞中基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinases-9,MMP-9）的表达水平;MTT法检测细胞的增殖能力;划痕损伤实验、Transwell小室和Matrigel侵袭模型评价FLNa对细胞侵袭和转移能力的影响。结果 RT-PCR和Western blot证实FLNa的表达载体pcDNA3.1/V5-His -TOPO/FLNa在SW480细胞中获得稳定表达;SW480/FLNa细胞MMP-9的mRNA和蛋白表达水平低于野生型SW480细胞;划痕损伤实验、Transwell小室和Matrigel侵袭模型表明FLNa抑制SW480细胞的侵袭和转移。结论 FLNa能够抑制SW480细胞的侵袭和转移能力,其机制可能与降低MMP-9的表达有关。     

USP22 siRNA通过TIMP-2抑制人结肠癌细胞系SW480侵袭

目的探讨泛素特异性蛋白酶22(USP22)调控基质金属蛋白酶组织抑制物-2(TIMP-2)对人结肠癌细胞侵袭的影响。方法 Western blot检测USP22在不同结肠癌细胞系的表达,选定高表达USP22的SW480细胞用于后续实验;将SW480细胞分为对照组(NC siRNA)和转染组;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测对照组及转染组Hif-1α、Hif-1β、cdc42、RhoA、Smad7、TIMP-1和TIMP-2 mRNA表达;RT-qPCR和Western blot检测对照组及2种转染组中USP22及TIMP-2蛋白的表达;Transwell小室法检测细胞的侵袭能力。结果 USP22在SW480细胞中表达量较高(P0.05);与对照组相比敲低USP22基因后,TIMP-2表达及SW480细胞侵袭能力均下降(P0.05);敲低TIMP-2基因后,USP22表达无明显变化,SW480细胞侵袭能力下降(P0.05)。结论 USP22可能通过调控TIMP-2的表达抑制人结肠癌细胞的侵袭与转移。     

VEGF-DsiRNA干扰对人结肠癌细胞增殖及侵袭能力的影响

目的利用人血管内皮生长因子-D(vascular endothelial growth factor-D,VEGF-D)小RNA干扰(siRNA),研究VEGF-D表达下调对人结肠癌细胞增殖和侵袭的影响。方法设立3个细胞组:未处理的人结肠癌SW480细胞作为空白对照组,转染阴性对照siRNA的SW480细胞作为阴性对照组,转染VEGF-D siRNA的SW480细胞作为实验组。RT-PCR和Western-blot检测转染后SW480细胞VEGF-D基因和蛋白的表达,MTT法检测VEGF-D RNA干扰对结肠癌细胞增殖的影响,Transwell小室实验检测VEGF-D RNA干扰对结肠癌细胞侵袭的影响。结果 VEGF-D siRNA转染人结肠癌细胞SW480,VEGF-D基因和蛋白水平表达量明显低于对照组,MTT实验显示体外细胞存活率下降,Transwell小室中穿膜细胞数减少。结论 VEGF-D siRNA显著抑制结肠癌细胞SW480中VEGFD的基因和蛋白表达,明显抑制SW480细胞的体外增殖和侵袭能力。     

外泌体circRPPH1促进结直肠癌增殖和转移北大核心CSCD

目的:探讨外泌体circRPPH1在结直肠癌(CRC)细胞中的生物学功能及潜在作用机制。方法:对GEO数据库GSE126094进行分析,筛选并验证CRC组织差异表达circRNA。SW620和SW480细胞转染circRPPH1 shRNA(sh-circRPPH1)后,MTT、流式细胞术和Transwell实验观察细胞增殖活性、细胞周期、迁移和侵袭能力变化。将转染Oe-circRPPH1质粒和sh-circRPPH1的SW620和SW480细胞(供体细胞)分别与未经处理的SW620和SW480细胞(受体细胞)共培养,qRT-PCR检测供体细胞、细胞外泌体及受体细胞circRPPH1表达。在线生物信息学数据和双荧光素酶报告基因实验预测并验证circRPPH1的靶miRNA及其下游靶基因。结果:circRPPH1在CRC肿瘤组织和癌细胞中高表达;敲除circRPPH1可抑制SW620和SW480细胞增殖、阻滞细胞周期、抑制细胞迁移和侵袭。SW620和SW480细胞可通过外泌体将circRPPH1传递给周围癌细胞。生物信息学和荧光素酶报告基因实验显示,circRPPH1在CRC细胞中起miR-330-5p海绵作用,miR-330-5p在CRC肿瘤组织和癌细胞中均呈低表达;NRAS是miR-330-5p的下游靶基因,在CRC肿瘤组织和癌细胞中均呈高表达。结论:circRPPH1在CRC细胞增殖和转移过程中发挥重要作用,并可能通过海绵miRNA发挥调控作用,提示外泌体circRPPH1在CRC中起致癌作用,可能是CRC的潜在生物标志物。     

结直肠癌组织和SW480细胞系中SKA3蛋白的表达及对PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨结直肠癌组织中SKA3的表达及临床意义,观察转染SKA3-siRNA对结直肠癌SW480细胞增殖、迁徙的影响及在PI3K/AKT信号通路中的作用。方法采用免疫组化法观察69例结直肠癌和癌旁组织中SKA3蛋白的表达水平。结直肠癌SW480细胞转染SKA3-siRNA干扰后,应用Western blot法观察细胞中SKA3蛋白的表达;MTT法和细胞克隆实验观察细胞增殖改变,细胞划痕法观察细胞迁徙改变,Western blot法检测PI3K/AKT信号通路蛋白在细胞中的表达。结果结直肠癌组织中的SKA3表达水平比癌旁组织显著增加(P0.01),且SKA3蛋白表达水平与结直肠癌分化程度、淋巴结转移等有关(P0.05);结直肠癌SW480细胞转染SKA3-siRNA后,SKA3表达水平明显降低(P0.05);同时,结直肠癌SW480细胞增殖能力受抑,迁徙能力降低(P0.05);p-AKT、p-PI3K蛋白水平显著下降(P0.05)。结论 SKA3在结直肠癌中呈高表达,与患者预后相关;敲减SKA3表达可抑制结直肠癌SW480细胞的增殖和迁徙,其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

骨质疏松症患者血清CT、Ca和P的水平观察

目的：为了研究血清降钙素（CT）、钙（Ca）和磷（P）的水平对激素引起男、女性骨质疏松症（OP）的影响。方法：放射免疫分析了血清CT的水平,生化法测定了血钙和血磷,发光免疫分析了性激素水平,并都做了相关性分析。结果：67例男性OP的血清Ca、P和E2均明显高于正常对照组（P均〈0.01）,而血清CT和T较正常对照组明显降低（P〈0.01）。在治疗前,60例女性OP患者血清Ca、P和T均明显高于正常对照组（P均〈0.01）,而血清CT和E2较正常对照组明显降低（P〈0.01）;治疗后女性OP患者血清CT和E2较治疗前明显增高,血清Ca、P和T明显降低,血清CT、E2和T较正常对照组接近（P均〉0.05）,而血清Ca和P较正常对照组仍增高（P〈0.05）。结论：由性激素引起的OP与血清CT、Ca、P和性激素相互之间存在着相关关系。在女性OP治疗时,以CT、E2和T水平为随访的最佳指导。     

脑血栓形成患者LPA、MDA、SOD检测的临床分析

目的:探讨溶血磷脂酸(LPA)和氧自由基在脑血栓形成的病理过程中的作用.方法:通过检测90例脑血栓形成患者(CT组)血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、LPA的浓度情况,并与短暂性脑缺血发作(TIA)组(45例)、对照组(45例)比较.结果:血清中SOD的浓度,CT组(治疗前)低于TIA组和对照组(P<0...     

新生儿缺氧缺血性脑病患者血浆ET、SS测定的临床意义

目的:探讨了新生儿缺氧缺血性脑病患者血浆内皮素(ET)和生长抑素(SS)水平的变化及临床意义.方法:应用放射免疫分析对63例新生儿缺氧缺血性脑病患者进行了血浆ET和SS检测,并与35名正常健康新生儿作比较.结果:病儿组血浆ET水平显著高于正常儿组,而SS水平则显著低于正常儿组(P＜0.01).结论:新生儿缺氧缺血性脑病的发生发展与ET和SS水平的变化密切相关.     

仿生型BG-COL-HYA-PS复合支架细胞相容性

目的:研究仿生型BG-COL-PS-HYA复合支架材料与成骨细胞的相容性。方法:将小鼠胚胎成骨细胞种植于BG-COL-HYA-PS、BG-COL复合材料、58SBG支架上,用MTT法、ALP活性测定等观察细胞在材料中的生长情况。通过体外实验方法,观察其生物相容性。结果:成骨细胞在BG-COL-HYA-PS材料上能良好粘附、增殖,而在58SBG材料上粘附差、细胞逐渐死亡。MTT法结果显示:联合培养后,BG-COL-HYA-PS组的OD值为0.314±0.004,5天时达到0.621±0.002,分别为58SBG组的1.49倍和1.44倍,P<0.05。结论:仿生型BG-COL-PS-HYA复合支架具有天然骨分级结构和有良好的生物相容性,在诱导成骨细胞增殖方面性能优越,可作为骨组织工程支架材料,临床应用前景广阔。     

ACI患者治疗前后血清Hcy、ACA、APN联检的临床意义

目的:探讨了急性脑梗死(ACI)患者治疗前后血清Hcy、ACA和APN水平的变化及临床意义.方法:应用放免法和酶联法对32例ACI患者进行了治疗前后血清Hcy、ACA、脂联素(Adiponectin,APN)检测并与35名正常健康人作比较.结果:在治疗前血清Hcy、ACA水平非常显著地高于正常人组(P<0.01),而A...     

Vacuum Ultraviolet Photolysis of Hydrocarbon Polymers

Summary: The wavelength‐dependent vacuum ultraviolet (VUV) photolysis of several polymers, low density polyethylene (LDPE), biaxially oriented poly(propylene) (BOPP), atactic polystyrene (PS), and poly(methyl methacrylate) (PMMA), was studied by irradiation in vacuum with the well‐characterized emissions from four different resonant or excimer VUV sources. These lamps comprise radiofrequency (r.f.) discharges in different noble gases, such as krypton, xenon (at low pressures, producing near‐monochromatic resonant line radiations), xenon excimer (at “high” pressure), and a deuterium/argon mixture (producing a broad‐band emission). VUV‐induced mass loss (ablation or etching) was monitored in situ by quartz crystal microbalance measurements. Following irradiation, samples were analysed by ATR‐FTIR and XPS, to evaluate near‐surface structural changes (e.g., creation of unsaturation, cross‐linking) resulting from the VUV‐initiated bond scissions and radical‐creation reactions. PMMA was the most readily ablatable polymer, whereas the mass loss of BOPP was higher than that of LDPE, regardless of the irradiation wavelength, λ. All polymers were found to form double bonds, with the exception of PS, which is rather stable, probably due to energy dissipation by fluorescence.

Formation of double bonds in a) vinyl‐, b) vinylidene‐, and c) vinylene‐like unsaturated groups, as a function of the radiation dose, D, for KrL (?), XeL (?), and D₂Ar‐irradiated (?) PMMA.     

妊高征患者血浆ET-1和血清INH、D-D检测的临床意义

目的:探讨了血浆内皮素-1(ET-1)和血清抑制素(INH)、D-二聚体(D-D)水平在妊高征患者发病中的变化和临床意义.方法:采用放射免疫分析、酶联法和生化法对32例妊高征患者进行了血浆ET-1和血清INH、D-D检测,并与35名正常孕妇作比较.结果:妊高征患者血浆ET-1和血清INH、D-D水平均非常显著地高于正常...     

TgAb对ECLIA和RIA测定Tg影响的对比研究

采用电化学发光免疫分析(ECLIA)法和放射免疫分析(RIA)法同时测定甲状腺球蛋白(Tg)、自身甲状腺球蛋白抗体(TgAb),用回收实验研究TgAb对Tg测定的影响。选取84例甲状腺疾病患者血样,分别测定Tg、TgAb,将结果进行相关性分析。回收实验第一组分别加入50、100和200ng/ml的标准Tg;第二组对倍稀释5次,加入100ng/ml标准Tg;第三组为TgAb浓度梯度组,加入100ng/ml标准Tg。结果表明,两种方法Tg值均大于10ng/ml的31例标本,相关系数为0.676(P=0.000)。TgAb值的相关系数为0.677(P=0.000)。TgAb浓度增加,ECLIA法Tg值逐渐降低,RIA法Tg值逐渐升高。血清稀释后,ECLIA法Tg值和回收率逐渐升高,RIA法Tg值和回收率逐渐下降。不同标准Tg对Tg回收率无明显影响。两种方法测定Tg和TgAb有较好的相关性。ECLIA法比RIA法测定范围更宽,灵敏度更高。TgAb使ECLIA法可能低估Tg值,使RIA法可能高估Tg值。TgAb干扰Tg测定没有阈值存在。回收实验不能完全校正TgAb干扰导致的偏差。     

Dexamethasone attenuates LPS-induced changes in expression of urea transporter and aquaporin proteins,ameliorating brain endotoxemia in mice

Aim: AQP4 in the brain is involved in the occurrence and development of a variety of encephalopathy. AQPs family changes in kidney were accompanied by altered UTs family. The aim of this study was to observe AQP4 and UT-A3 expression in CNS and to explore their role in the pathogenesis of endotoxemia encephalopathy following peripheral LPS injection in mice. Methods: Endotoxemia was induced in C57Bl/6 mice by intraperitoneal injection of LPS. The expression of UT-A3 and AQP4 in brain were detected by Western blot and immunohistochemistry, the level of cytokines were detected by ELISA, and the content of LDH, AST/ALT, BUN and CREA were detected by colorimetric method. Results: As compared with the control group, in model group, the brain weight/ body weight ratio increased by 13%. Meanwhile, a 2.5 fold increase in LDH and a 1.2 fold increase in AST/ALT were found in peripheral serum (P < 0.05), and also, BUN and CREA increased 2.5 fold (P < 0.01). In addition to severe CNS injury in response to lipopolysaccharide, the contents of cytokines and the expression of AQP4 protein in hippocampal is increased (P < 0.05), while the expression of UT-A3 protein in the hippocampus and cortical astrocytes decreased (P < 0.05). And, in part, Dexa pretreatment attenuated those effects. Conclusions: In endotoxemia encephalopathy, AQPs and UTs which regulate the functions of cell membrane are both altered. We suggested that the molecular mechanisms of regulation in endotoxemia may provide a new strategy for clinical treatment of the disease and drug binding sites.     

血浆ET、Hcy和hs-CRP联检在冠心病诊治中的应用

目的：探讨了血浆内皮素（ET）、同型半胱氨酸（Hcy）和血清超敏C反应蛋白（hs-CRP）联检对冠心病的诊断价值。方法：分别应用放射免疫分析和免疫比浊法对38例冠心病患者进行了血浆ET、Hcy和血清hs-CRP检测,并与35名正常健康人做比较。结果：冠心病患者血浆ET、Hcy和血清hs-CRP水平均非常显著地高于正常人组（P〈0.01）,冠心病患者血浆ET水平与Hcy和hs-CRP水平呈正相关（r=0.6122、0.5842,P〈0.01）。结论：检测冠心病患者血浆ET、Hcy和hs-CRP水平的变化对观察病情和预后判断具有重要的临床价值。