抗人L-PGDS人-鼠嵌合轻链的真核表达

目的:在Sp2/0细胞中表达抗人L-PGDS人-鼠嵌合轻链.方法:采用RT-PCR技术从稳定分泌抗人L-PGDS单克隆抗体(mAb)的小鼠杂交瘤细胞中扩增抗体轻链可变区基因VL, 并构建到人-鼠嵌合轻链表达载体pAG4622.重组质粒pAG4622/VL经DOTAP试剂转染入Sp2/0细胞, 酶酚酸筛选后用ELISA和RT-PCR检测表达产物.结果:在筛选后的转染细胞上清中检测到抗人L-PGDS人-鼠嵌合轻链蛋白, 且其细胞中存在相应嵌合轻链mRNA.结论:嵌合轻链的稳定表达, 为后续抗人L-PGDS人-鼠嵌合抗体的获得奠定基础.     

抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因转化拟南芥的初步研究

目的:建立能表达抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的转基因植株,为汉坦病毒基因工程抗体的研究提供实验基础.方法:将构建的含抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的植物抗体表达质粒3G1MH-pCAMBIA2301,用TSS冻融法导入农杆菌GV3101,利用农杆菌介导的抽真空转基因技术转化野生型拟南芥,获得转基因植株.用PCR、Northern blot检测转基因植株.结果:经PCR分析表明,拟南芥的基因组中有抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因整合,并成功获得7株T0代转基因拟南芥.植株提取RNA,经Northern blot分析可见约1 500 bp及800 bp处的目的条带,为编码重、轻链的目的基因.结论:成功地构建了含抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的拟南芥植株,为进一步利用植物表达治疗性抗体奠定了基础.     

抗Aβ鼠源单克隆抗体的人源化改造及其表达鉴定

目的 将前期构建的抗Aβ人-鼠嵌合抗体进行可变区人源化改造,为抗Aβ抗体在临床人体中应用奠定基础。方法 采用模板替换法对已构建的人-鼠嵌合抗体基因中的重、轻链可变区框架区进行人源化改造,构建抗Aβ人源化抗体的真核表达载体。用脂质体法将重、轻链共转染CHO细胞进行表达,采用ELISA法检测表达产物效价、表达量;同时用SDS-PAGE及Western Blot检测表达产物分子量;免疫组化法鉴定其生物活性。结果 重组改造后的抗Aβ人源化抗体基因重链约为1500bp,轻链约为750bp,与预期一致。转染CHO细胞后获得表达,表达量为1.11mg/L,抗体重链相对分子量约为51ku,轻链约为25 ku。ELISA结果显示能与Aβ特异性结合（细胞培养上清A值：2.24）,与改造前的嵌合抗体比较效价基本相同。抗体人源化检测显示,只能被羊抗人抗体识别,不能被羊抗鼠抗体识别。免疫组化显示表达产物有结合Aβ抗原的活性。结论 将抗Aβ人-鼠嵌合抗体进行可变区人源化改造后,基本保持了原嵌合抗体的生物学特性,为其今后应用于临床提供了可能性。     

抗RSV人-鼠嵌合抗体的构建及表达

用RT PCR法克隆抗RSV 鼠单抗4C2 的轻、重链可变区基因, 构建了轻、重链分别表达的载体pAG4622_4C2 和pAH4604 4C2, 及轻、重链同时表达的载体pdHL4C2, 分别转染SP2/0 细胞和DHFR- CHO细胞, 检测培养上清中的嵌合抗体表达。结果在pdHL4C2 转染的CHO 细胞中检测出了可与表达RSVG/F糖蛋白的143TK 细胞结合的人 鼠嵌合抗体     

人-鼠嵌合抗体表达载体的构建和抗人HER2抗体的表达

目的 :构建表达人 鼠嵌合抗体的通用真核表达载体 ,用于以嵌合抗体的形式表达PCR获取的小鼠抗体可变区基因 ,以便将人 鼠嵌合抗体应用于临床治疗。方法 :用人Tac抗原信号肽以及人IgCκ基因和γ1CH基因 ,构建人 鼠嵌合抗体的表达载体 ,并转染真核细胞 2 93T进行表达。用RT PCR、FACS和ELISA进行抗体表达的鉴定。结果 :利用人Tac抗原信号肽以及人IgCκ基因和γ1CH基因 ,构建了用于表达人 鼠嵌合抗体的通用真核表达载体。用本研究设计的引物 ,扩增小鼠抗人HER2抗体的V区基因片段 ,酶切后先后插入所构建的载体的相应克隆位点 ,转染 2 93T细胞可将PCR获得的小鼠抗体V区基因片段表达为人 鼠嵌合抗体。用RT PCR、FACS和ELISA证实 ,本系统可表达嵌合抗体。结论 :构建了人 鼠嵌合抗体的真核表达载体 ,并证实了其可在 2 93T细胞中表达。     

抗胃癌鼠单抗3H11V区基因的克隆及人—鼠嵌合轻链的表达

利用前导肽序列设计引物，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术从分泌抗人胃癌的单抗杂交瘤细胞系３Ｈ１１分离克隆了抗体的轻重链可变区基因序列。经ＤＮＡ序列分析表明所获基因含有全部前导序列，其成熟蛋白编码部分与从第一骨架区引物所克隆的序列相符。将轻链基因组建到人－鼠嵌合轻链表达载体中，转染至小鼠骨髓瘤细胞Ｓｐ２／０中，可获得人鼠嵌合轻链的表达，证明所克隆的基因具有表达活性，为人－鼠嵌合抗体的构建奠定了基础。     

抗人小细胞肺癌单抗2F7人-鼠嵌合Fab片段基因的构建和表达

目的：通过基因工程抗体改造获得具有与人小细胞肺癌有特异性反应的人－鼠嵌合抗体2F7 Fab片段，方法：采用RT－PCR技术从抗人小细胞肺癌单克隆抗体2F7杂交瘤中克隆该抗体的重，轻链可变区基因，将2F7单抗的重，轻链可变区基因装入带有人恒定区基因的表达载体pSW1-Fab中，构建得到pSW1-2F7 Fab，转化受体菌E.coil XL1-Blue,IPTG诱导表达，经Western blot和ELISA鉴定表达蛋白的活性。结果：从抗人小细胞肺癌单克隆抗体2F7杂交瘤中克隆获得了抗体重、轻链可变区基因，测序证实2F7单抗的重链（VH）可变区基因全长362bp，编码120个氨基酸，轻链（VL）可变区基因全长319bp，编码105个氨基酸，构建的2F7人－鼠嵌合Fab表达载体诱导后获得了目的蛋白的表达，主要分泌在菌液的上清中，表达量较高且稳定，具有与NCI－H128细胞特异性结合的活性。结论：构建和表达了抗人小细胞肺癌单抗2F7人－鼠嵌合Fab片段，表达产物具有与抗原结合的特异性，为进一步研究和应用打下了基础。     

抗人CD16单克隆抗体可变区基因的克隆和表达

目的：克隆抗人CD16单克隆抗体重，轻链可变区（VH，VL）基因并合成单链抗体（ScFv)基因。方法：从分泌抗人CD16单克隆抗体的杂交瘤细胞B88－9中提取总RNA，应用RT－PCR技术获得抗CD16单克隆抗体的VH，VL基因，用连接肽（Linker)肽VH和VL连接成具有VH－Linker-VL结构的ScFv基因，将其克隆到表达载体pcDNA3.1( )，并转杂COS－7细胞。结果：VH基因长度为354bp，属于鼠抗体可变区重链基因家族I（B）亚群，VL基因长度为333bp，属于鼠抗体可变区kappa轻链基因家族Ⅲ亚群，采用夹心ELISA方法检测到ScFv的表达。结论：抗人CD16单克隆抗体VH与VL基因的克隆和ScFv基因的构建为基于CD16的导向免疫治疗奠定了基础。     

抗CD4人-鼠嵌合抗体的表达和抗增殖效应

目的：制备抗CD4人－鼠嵌合抗体。方法：从分泌抗CD4单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA，通过RT－PCR扩增出VH和VL的DNA 片优，对VH和VL进行DNA序列测定和分析，证实VH和VL具有小鼠Ig可变区完整的结构功能后，将VH亚克隆至重链表达载体pγ1-Expr,VL亚克隆至轻链表达载体pκ－Expr转化XL2－Blue细菌，通过菌落或质粒PCR筛选阳性克隆，通过电转染将VH－Pγ1，LV－pκ共转染至小鼠骨髓瘤细胞X63Ag8,653，通过G418筛选，ELISA和免疫荧光鉴定。结果：得到分泌抗CD4人－鼠嵌合体的阳性转染瘤细胞克隆。所得到的嵌合抗体在体外对PHA和IL－2诱导的PBMC增殖具有抑制作用。结论：人－鼠嵌合抗体得到成功表达，并有可能作为免疫抑制剂应用于抗移植排斥和自身免疫疾病的治疗。     

基因工程乳腺癌特异性人单链抗体的表达与特性

研究解决分泌人单抗的杂交瘤细胞系难于稳定持久分泌抗体的难题，制备单链抗体，使单抗分子小型化，为进一步研究其在肿瘤诊断和治疗中的应用作准备。从分泌抗乳腺癌人单抗的杂交瘤细胞CM－1总RNA中，利用RT－PCR技术分别扩增出人单抗重链可变区VH基因和轻链可变区VL基因，将扩增产物纯化后克隆于pGEM-T载体中，进行DNA测序和序列比较分析后，将两者共克隆于表达载体中诱导表达，利用斑点免疫印迹及竞争抑制法检测表达产物的抗原性。所克隆的CM－1人单抗重链可变区和轻链可变区基因片段，分别属于人免疫球蛋白IgM Ⅲ亚群，和鼠κ轻链V亚群，ⅩⅦ家族，用斑点免疫印迹法检测可见表达产物能与人乳腺癌细胞特异结合；人CM－1单克隆抗体对此单链抗体与人乳腺癌细胞的结合有竞争性抑制作用，抑制率为75．7％。结论：成功地制备了可特异结合乳腺癌细胞的CM－1单链抗体。     

局部注射辛伐他汀对骨质疏松大鼠股骨髁骨小梁的改建效应

背景：局部注射具有成骨作用的辛伐他汀,可显著增加骨质疏松大鼠股骨颈及股骨髁部的骨密度及力学强度,分析局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。 目的：进一步研究骨质疏松大鼠股骨内局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。为将辛伐他汀应用于临床骨质疏松局部治疗提供实验基础。 方法：18只雌性SD大鼠双侧卵巢切除后3个月,制备大鼠骨质疏松模型。实验大鼠随机数字表法均分为3组,分别在实验大鼠的右侧股骨髓腔内单次注射辛伐他汀溶液5 mg、10 mg,对照组单纯注射空白载体。分别在注射后1个月处死大鼠并取材。Micro-CT扫描并定量分析骨组织形态变化。 结果与结论：给药后1个月,Micro-CT扫描结果显示,辛伐他汀治疗组的骨微结构参数如骨皮质厚度、骨小梁密度及连接率明显优于对照组。说明疏松骨骼单次注射小剂量辛伐他汀可显著促进股骨髁部骨小梁改建,改善骨骼微结构,可为强化局部、防治骨质疏松骨折的新选择进一步提供实验基础。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Effect of route of antitoxin administration on efficacy of treatment of experimental tetanus

The efficacy of treatment with Diaform-3 antitoxin, given by either intracisternal or intralumbar injection in a dose of 400 i.u./kg, was compared in experiments on 100 rabbits with ascending, hematogenous, and cerebral tetanus caused by injection of 1 c.l.d. of tetanus toxin. Intracisternal injection of the antitoxin was found to be three times more effective than intralumbar (the proportion of animals cured was 31.4 and 10.2% respectively). The latter was effective only in animals with ascending tetanus, evidently because the portal of entry of the toxin into the CNS was along the peripheral nerves of the hind limbs.Central Research Laboratory, L'vov Medical Institute. (Presented by Academician of the Academy of Medical Sciences of the USSR A. M. Chernukh.) Translated from Byulleten' Éksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 86, No. 8, pp. 212–213, August, 1978.     

Effect of ultralow doses of thyroliberin on microviscosity of lipid components of biological membranes

Effects of the regulatory peptide thyroliberin on microviscosity of lipid components of endoplasmic reticulum biological membranes in mouse hepatocytes were studied by electron paramagnetic resonance. Thyroliberin in a concentration of 10⁻³–10⁻¹⁸ M decreased microviscosity of surface layers of membrane lipids. This decrease was the most pronounced (30%) under effects of 10⁻¹⁰ and 10⁻¹⁶ M thyroliberin. Physiological effects of thyroliberin corresponded to its influence on the membrane structure. Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 129, No. 1, pp. 38–40, January, 2000     

膝关节骨性关节炎的关节镜治疗体会

目的我科自2001～2005年4月对59例67膝的骨性关节炎（0A），进行关节镜检查及镜下清理术。方法镜检：膝关节骨性关节炎伴不同程度滑膜炎，滑膜皱壁粘连纤维片，关节软骨不同程度破坏。镜下清除增生滑膜，松解粘连，去除剥脱软骨、修复关节面。结果随访2月～4年，平均1.5年，术后综合评估2月～1年，优良率94％；1～2年，优良率79.2％；2年以上优良率54.8％。结论关节镜对膝关节骨性关节炎诊断能提供了比较全面的资料，并对骨性关节炎早期有良好疗效，具有创伤小、恢复快、并发症少和重复治疗等优点。     

Assessment of the efficacy of treatment of hemangiomas

Assessment of the aftereffects of cryoexposure and ultrahigh-frequency cryoexposure on hemangioma tissue of various types, cavernous and squamous, showed a higher cryogenic effect in hemangiomatous tissue preexposed to ultrahigh-frequency waves. A quantitative criterion is proposed for assessing the efficacy of the studied methods of exposure. Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 119, N ^o 6, pp. 669–672, June, 1995     

石斛属民族药用植物的分类及生药学研究

中药石斛早在《神农本草经》中就被列为上品,其应用历史悠久,具有养阴生津、补肾益气、润喉护嗓、活血明目、抗癌防老等功效。本文对国内外石斛属民族药用植物的分类及生药学研究进行了综述。     

Localization of cytoplasmic antigens of cells of differentiated layers of the epidermis in epithelium of the human thymus

N. F. Gamaleya Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Academy of Medical Sciences of the USSR, Moscow. (Presented by Academician of the Academy of Medical Sciences of the USSR S. V. Prozorovskii.) Translated from Byulleten' Éksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 109, No. 3, pp. 308–310, March, 1990.