西洋参茎叶总皂苷减轻大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤机制的研究

 目的：探讨西洋参茎叶总皂苷（PQS）减轻大鼠心肌细胞缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）损伤的机制是否与抑制钙调神经磷酸酶(CaN)有关。方法：采用乳鼠心肌细胞H/R损伤模型,转染CaN质粒使其过表达或CaN抑制剂FK506干扰其表达,分为正常对照组、缺氧/复氧组、药物预处理组、CaN过表达+药物预处理组、空载pCDB质粒+药物预处理组及CaN抑制剂+药物预处理组,以流式细胞术检测细胞凋亡,按CaN测试盒步骤测定心肌细胞CaN活性,以Western blotting方法检测心肌细胞CaN表达。结果：与对照组相比,CaN过表达组心肌细胞凋亡率增加（P<005）,与PQS+H/R组比较,FK506组心肌细胞凋亡率、抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax表达、CaN活性及蛋白表达无显著差异（P>005）。结论：抑制CaN活性可以减轻心肌细胞H/R损伤,但联合应用FK506对H/R心肌细胞的保护作用不比单独应用PQS强,PQS减轻心肌细胞H/R损伤的机制可能与CaN途径无关。     

脂联素通过减轻内质网应激抑制缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤

目的:通过培养SD大鼠乳鼠心室肌细胞建立缺氧/复氧(H/R)模型,观察脂联素(adiponectin,APN)对心肌细胞缺氧/复氧内质网应激所致心肌细胞损伤的影响,为心脏缺血/再灌注损伤的防治提供理论依据。方法:采用胰蛋白酶消化法原代培养乳鼠心室肌细胞,α肌动蛋白免疫荧光法进行鉴定。选用培养72 h的单层心肌细胞,实验分为以下3组:正常对照组、单纯H/R组、APN+H/R(3 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、30 mg/L)组。实验终止后,观察心肌细胞形态的变化,测定乳酸脱氢酶(LDH)的释放,通过流式细胞术来检测心肌细胞的凋亡。用RT-PCR和Western blotting测定内质网应激指标GRP78、caspase-12的表达。结果:与空白对照组相比,单纯H/R后,细胞凋亡率显著增加(68.20%±1.73%vs0.73%±0.21%,P0.05),乳酸脱氢酶(LDH)的活性增加,内质网应激蛋白GRP78、caspase-12在蛋白及mRNA水平表达明显增高,APN预处理后进行H/R,可较大程度地逆转上述指标变化,与H/R组相比均具有显著差异(P0.05),并且呈现一定的浓度依赖性。结论:H/R可以诱导心肌细胞的内质网应激;脂联素可以通过减轻内质网应激来减轻心肌细胞凋亡,对心肌细胞有保护作用。     

转录因子ZFP580在缺氧预处理抗大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用

 目的：通过观察缺氧预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及锌指核转录因子ZFP580表达的改变,探讨ZFP580的作用及机制。方法：培养大鼠H9c2心肌细胞,分为3组：（1） 缺氧/复氧(H/R)组：H9c2心肌细胞换用模拟缺血溶液(pH=6.2)缺氧(95% N2 + 5% CO2)培养3 h,复氧培养2 h;（2） 缺氧预适应(HPC)组：H9c2心肌细胞经3个循环的短暂缺氧(10 min)/复氧(20 min)处理后,进行同上H/R实验;(3) 对照(C)组：正常培养的H9c2心肌细胞。通过MTT染色及LDH水平判定HPC的作用。Western blotting方法观察心肌细胞中转录因子ZFP580表达及ERK1/2磷酸化情况,以及ERK1/2磷酸化抑制剂PD98059对ZFP580表达的影响。分别构建高/低表达ZFP580的慢病毒载体并转染H9c2心肌细胞,经H/R实验后利用Annexin V-PE/7-AAD染色及流式细胞术检测H9c2细胞凋亡情况,Western bloting方法观察caspase-3活化情况。结果：HPC能显著改善H/R处理后H9c2心肌细胞存活率降低和LDH漏出的现象。Western blotting结果显示,HPC组心肌细胞中ZFP580表达及ERK1/2磷酸化程度较H/R处理组明显上升,且PD98059预处理明显抑制HPC诱导的ZFP580的表达上调。慢病毒介导的基因转染实验发现,ZFP580高表达的H9c2心肌细胞在H/R损伤后凋亡率降低且细胞中活化caspase-3表达下降。结论：HPC可引起心肌细胞中转录因子ZFP580表达上调,ZFP580作为ERK1/2通路的下游靶分子发挥抗心肌细胞凋亡的作用。ZFP580表达上调可能作为内源性保护机制之一介导了HPC的细胞保护作用。     

内质网应激在Bim介导缺氧致心肌细胞凋亡中的作用

 目的：探讨内质网应激在Bim介导缺氧致心肌细胞凋亡中的作用。方法：在体外原代培养出生1~3 d大鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定。设计并化学合成3对靶向bim的siRNA,用脂质体法将siRNA转染心肌细胞,筛选沉默效率最高的siRNA。实验分组：（1）空白对照组;（2）缺氧组;（3）缺氧+脂质体组;(4)缺氧+阴性对照siRNA组;(5)缺氧+Bim-siRNA组。MTT法观察细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞内钙离子浓度变化情况;Western blotting检测内质网应激标志分子caspase-12和三磷酸肌醇（IP3）的表达情况。结果：免疫组化鉴定证实大鼠心肌细胞原代培养成功。在荧光显微镜下,转染了阴性对照siRNA组的细胞中观察到绿色荧光,即转染成功;Western blotting 结果显示,Bim-siRNA转染均能有效降低Bim蛋白的表达,其中第2对沉默效率最高,达到86.73%。缺氧损伤导致心肌细胞活性明显下降（P<005）,转染Bim-siRNA后细胞活性较阴性对照组升高。缺氧细胞凋亡率较对照组明显增加（P<0.01）,细胞内钙离子浓度明显增高,而沉默bim的表达能降低细胞凋亡率和细胞内钙离子浓度。缺氧导致内质网应激标志分子caspase-12和IP3表达较空白对照组明显上调（均P<005）,而抑制Bim表达后caspase-12和IP3表达明显降低。结论：沉默bim的表达能有效抑制缺氧导致心肌细胞凋亡的作用,内质网应激标志分子caspase-12和IP3可能参与了Bim介导缺氧致心肌细胞凋亡的过程。这有望为临床心肌缺血缺氧损伤的治疗提供新思路。     

缺氧预适应抑制缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡的作用及机制

目的：研究缺氧预适应（HP）对缺氧复氧（H/R）诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法： 体外培养新生大鼠心肌细胞，分3组：正常对照组、HP+ H/R组和H/R组，吖啶橙（AO）染色法观察心肌细胞凋亡形态学特征，流式细胞术检测心肌细胞凋亡率，比色法检测心肌细胞caspase-3的活性，免疫组织化学法结合计算机图像分析检测心肌细胞Bcl-2蛋白的表达。结果： 心肌细胞H/R损伤后，AO染色可见典型凋亡细胞，流式细胞仪检测其凋亡率为(29.7±5.4)%，HP可显著降低心肌细胞凋亡率至(7.8±1.3)%（P＜0.01）。H/R组心肌细胞caspase-3的相对活性为5.9±0.8，HP+H/R组心肌细胞caspase-3的相对活性为2.6±0.5，显著低于H/R组（P＜0.01）。Bcl-2在正常心肌细胞即有表达，其阳性染色吸光度值为119.4±7.1，H/R组为99.6±5.0，显著低于正常组（P＜0.01），HP+H/R组为126.5±6.2，显著高于H/R组（P＜0.01）。结论： HP可通过增加心肌细胞Bcl-2的表达、降低caspase-3活性而抑制H/R诱导的心肌细胞凋亡，发挥心肌细胞保护作用。     

p38MAPK信号通路在钙调磷酸酶促心肌凋亡中的作用

目的：探讨钙调磷酸酶（CaN）在缺氧/复氧和肾上腺素能刺激诱导心肌凋亡中的作用及p38 MAPK在CaN调节心肌凋亡中的作用。方法:采用体外培养新生Wistar大鼠心肌缺氧/复氧（H/R）模型，模拟在体缺血再灌注损伤，将心肌细胞随机分为3组：正常对照组（N组）、H/R+异丙基肾上腺素组（Ao组）、H/R+异丙基肾上腺素+环孢菌素A组（A1组）。采用流式细胞仪检测细胞凋亡，RT-PCR 检测CaN mRNA的表达， Western 免疫印迹法检测CaN及p38MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达。结果:H/R和异丙基肾上腺素（Iso）共同作用心肌后，心肌细胞凋亡率明显增加，给予CaN抑制剂环孢菌素（CsA）后，细胞凋亡率显著少于干预前(P<0.05)。H/R和Iso共同作用下，心肌CaN mRNA及蛋白表达水平均明显上调，同时p38 MAPK的活化状态p-p38 MAPK蛋白表达也显著增加，CsA干预后，CaN表达并无明显变化，但p-p38 MAPK蛋白表达显著减少(P<0.05)。结论:CaN 促进缺氧/复氧和肾上腺素能刺激诱导心肌细胞凋亡，可通过活化p38 MAPK而发挥促凋亡的作用。     

远志皂苷元抗H/R诱导皮层神经元凋亡的机制初探

 目的：初步探讨远志皂苷元（senegenin, Sen）对抗缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation, H/R）诱导大鼠原代皮层神经元凋亡的作用及机制。方法：提取原代大脑皮层神经元,培养至第6 d,进行相应的实验处理,分为正常对照组（control组）、模型组(H/R组)、Sen保护处理组（Sen+H/R组）和Sen处理组（Sen组）。流式细胞术检测各组凋亡率。采用Western blotting检测JNK、p-JNK、c-Jun、p-c-Jun、Bcl-2和Bax的表达变化。结果：H/R组与control组比较,细胞凋亡率显著升高（P<0.05）;而H/R+Sen组细胞凋亡率显著低于H/R组（P<0.05）,提示Sen可对抗H/R诱导的皮层神经元凋亡,模型构建成功;Western blotting结果显示Sen可显著增强H/R模型中JNK和c-Jun蛋白表达,抑制其磷酸化（P<0.05）,上调Bcl-2蛋白表达并抑制Bax蛋白表达（P<0.05）。结论：Sen抗H/R诱导神经细胞凋亡,发挥保护作用的可能机制是通过上调JNK和c-Jun蛋白表达,并抑制其磷酸化,进而上调Bcl-2表达并抑制Bax表达等来实现的。     

京尼平对缺氧/复氧损伤后大鼠心肌细胞凋亡及自噬的影响

目的 探讨京尼平对缺氧/复氧(H/R)损伤后大鼠心肌细胞凋亡及自噬的影响。方法 建立H/R损伤模型,体外培养的大鼠H9c2心肌细胞行缺氧12 h、复氧4 h。实验分为对照组（Con）、京尼平组(GE)、缺氧/复氧组(H/R)、缺氧/复氧+京尼平组(H/R+GE)。细胞计数试剂盒-8（CCK-8）检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡,透射电子显微镜观察自噬体,Western blotting检测Bax、Bcl-2、P62、Beclin1、LC3-Ⅱ、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和p-mTOR蛋白的表达。结果 京尼平预处理增强了H/R损伤后的H9c2心肌细胞活力,抑制细胞凋亡及自噬体累积,降低自噬结构断面积与细胞质断面积的比值。Western blotting结果显示,京尼平预处理减少了H/R损伤后Bax、LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白表达,增加Bcl-2、P62、p-Akt和p-mTOR蛋白表达。结论 京尼平可以抑制H/R损伤后心肌细胞凋亡及自噬,其机制可能与上调Akt/mTOR信号通路有关。     

甘氨酸受体α_1亚基在乳鼠心肌细胞的表达及损害性因素对其表达的影响

目的:研究甘氨酸受体α1亚基(GlyRα1)在乳鼠心肌细胞中的表达以及脂多糖(LPS)、缺氧/复氧(H/R)、异丙肾上腺素(ISO)和高糖(HG)对其表达的影响。方法:体外培养乳鼠心肌细胞,Western blotting方法检测心肌细胞上GlyRα1的表达;心肌细胞分别用LPS、H/R、ISO以及HG处理24 h,采用CCK-8试剂检测细胞活力,Western blotting方法检测心肌细胞上GlyRα1的表达。结果:Western blotting方法检测到乳鼠心肌细胞上GlyRα1的表达;LPS(20 mg/L)、ISO(100μmol/L)以及HG(25mmol/L)处理心肌细胞24 h与心肌细胞H/R 3 h对心肌细胞存活率无明显影响;LPS组、H/R 3 h组以及ISO组心肌细胞上GlyRα1表达均高于对照组(P0.01),而HG组心肌细胞上GlyRα1表达低于对照组(P0.01)。结论:乳鼠心肌细胞上存在GlyRα1,并且一定浓度的LPS、ISO与一定时间的H/R均可上调乳鼠心肌细胞GlyRα1的表达,而HG可下调乳鼠心肌细胞GlyRα1的表达。     

MR-1通过抑制PERK/Nrf2途径减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡

 目的:研究肌原纤维形成调节因子1 (MR-1)是否通过抑制蛋白激酶R样内质网激酶 (PERK)/核因子E2相关因子2（Nrf2）途径减轻缺氧/复氧 (H/R)诱导的心肌细胞凋亡。方法:在原代培养的乳大鼠心肌细胞H/R模型上,采用Annexin V/PI双标法检测心肌细胞的凋亡率;以Western blotting检测葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、磷酸化PERK、Nrf2、活化转录因子4 (ATF4)、C/EBP同源蛋白 (CHOP)、Bcl-2和Bax的蛋白水平,研究过表达或敲低对于H/R致心肌细胞凋亡的影响及其与PERK/Nrf2途径活化的关系。结果:H/R引起心肌细胞凋亡;过表达MR-1减轻H/R引起的细胞凋亡 (P<0.01),下调CHOP表达 (P<0.05),引起Bcl-2/Bax值升高 (P<0.01),并抑制H/R诱导的PERK磷酸化、Nrf2核转位和ATF4表达 (P<0.01)。敲低MR-1加重H/R引起的细胞凋亡 (P<0.01)、CHOP表达上调 (P<0.05)和Bcl-2/Bax值下降 (P<0.01),并加重H/R诱导的PERK磷酸化 (P<0.05)、Nrf2核转位和ATF4表达 (P<0.01)。结论:MR-1通过抑制PERK/Nrf2途径而减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡。     

附子多糖保护缺氧/复氧乳鼠心肌细胞及其抗内质网应激的机制研究

目的: 观察附子多糖对缺氧/复氧后心肌细胞的保护,并探讨附子多糖的保护机制是否与其抑制内质网应激反应有关。方法: 建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组(缺氧3 h后复氧6 h)和不同浓度附子多糖(0.1 g/L、1 g/L、10 g/L、20 g/L)+缺氧/复氧组。MTT法测定心肌细胞存活率,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,Western blotting分析葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及caspase-12的表达,荧光定量PCR进一步检测CHOP及caspase-12 mRNA表达。结果: 缺氧复氧后,心肌细胞中内质网应激反应标志蛋白GRP78表达增加,内质网应激凋亡相关蛋白CHOP及caspase-12蛋白和mRNA表达亦明显升高。与缺氧/复氧组相比较,附子多糖预处理24 h后可以有效抑制缺氧/复氧引起的GRP78、 CHOP和caspase-12的表达上调,增加心肌细胞的存活率,抑制心肌细胞凋亡的发生。附子多糖的保护效应呈剂量依赖形式,10 g/L剂量时达到峰值。结论: 附子多糖保护缺氧/复氧后心肌细胞的可能机制与其抑制内质网应激所介导的细胞凋亡途径相关。     

Urocortin调控Bcl-2家族与大鼠缺氧/复氧心肌细胞凋亡

目的观察神经肽Urocortin对大鼠缺氧/复氧心肌细胞Bcl-2及相关基因mRNA表达和细胞凋亡的影响。方法培养新生大鼠的心肌细胞并缺氧/复氧处理,用RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Bcl-xL、Bad mRNA表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果Urocortin治疗组Bcl-2的mRNA表达与缺氧/复氧组比较明显增加(P<0.05),Bax的表达明显下降(P<0.05),Bcl-xL、Bad mRNA表达无明显改变(P>0.05)。Urocortin治疗组凋亡细胞率与缺氧/复氧组比较减少(P<0.05)。结论Urocortin调节心肌细胞Bcl-2家族基因转录下凋促凋亡基因Bax表达,上调抑凋亡基因Bcl-2使Bcl-2/Bax比值增加。这可能是Urocortin抗大鼠缺氧/复氧心肌细胞凋亡的机制之一。     

右美托咪定对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 观察右美托咪定对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法 H9C2心肌细胞随机分为三组:正常对照组（Control）、缺氧/复氧组（H/R）、Dex（5 μmol/L）干预H/R组。Dex干预H/R组先用Dex预处理6 h后,再经缺氧/复氧处理。采用倒置显微镜观察各组H9C2心肌细胞形态的变化,检测各组细胞培养基中LDH的含量,CCK-8法检测各组H9C2心肌细胞的存活率,试剂盒检测caspase-3活性,TUNEL法检测细胞凋亡并计算凋亡指数。结果 与Control组相比,H/R组细胞皱缩,大量死亡,细胞活力降低,培养基中LDH含量增加,caspase-3活性增加,细胞凋亡指数增加,统计学意义显著（P＜0.01）;Dex预处理可明显改善H/R处理后细胞形态,提高细胞活力,减少LDH含量和caspase-3活性,降低细胞凋亡指数,统计学意义显著（P＜0.01）。结论 Dex可通过减少H9C2心肌细胞缺氧/复氧引起的细胞凋亡减轻损伤。     

葱白提取物对心肌缺血/再灌注损伤具有保护作用

目的 探讨葱白提取物(FOB)对心肌缺血/再灌注（I/R）损伤的影响及其机制。方法 结扎成年大鼠36只左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min建立在体心肌缺血/再灌注损伤模型;培养乳鼠心肌细胞缺氧6 h,复氧18 h建立离体心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤模型。分别随机分为对照组、I/R组(或H/R组)和FOB预处理+I/R组(或H/R组)。应用PowerLab多通道生理记录仪分析左心室功能;2,3,5-三苯基四唑氯铵（TTC）染色检测心肌梗死体积。流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting和Real-time PCR检测细胞凋亡相关蛋白和mRNA(Bcl-2、Bax、Caspase-3)的表达;免疫荧光检测细胞色素C(cytochrome C, Cyt-C)的表达。结果 在体大鼠实验中,与对照组比较,I/R组左心室收缩和舒张功能明显恶化(P<0.05);与I/R组比较,FOB预处理能明显改善左心室收缩和舒张功能,且减小心肌梗死体积(P<0.05)。在培养心肌细胞实验中,与对照组比较,H/R组细胞凋亡率明显升高（P<0.01）,Bcl-2蛋白及mRNA表达明显降低,而Bax、Caspase-3和Cyt-C的相关表达则明显升高(P<0.05);与H/R组比较,FOB预处理显著降低细胞凋亡率(P<0.05),增加Bcl-2蛋白及mRNA的表达水平,同时减少Bax、Caspase-3和Cyt-C的相关表达(P<0.05)。结论 葱白提取物对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能是通过线粒体途径减少心肌细胞凋亡从而发挥作用。     

siRNA 技术沉默SOCS3 对缺氧复氧心肌细胞增殖、凋亡的影响以及作用机制

目的：研究小干扰RNA（siRNA）靶向沉默细胞因子信号转导抑制因子3（SOCS3）基因对心肌细胞增殖、凋亡的影响以及可能作用机制。方法：采用脂质体Lipofectamine 2000转染大鼠H9C2心肌细胞,分为对照组、缺氧/复氧组、缺氧/复氧+siRNA NC组、缺氧/复氧+siRNA SOCS3组;免疫印迹试验（Western blot）检测细胞的转染效果;噻唑蓝（MTT）观察细胞的增殖活性,观察细胞中乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平的变化;膜联蛋白 V-FITC（Annexin V-FITC）/碘化丙啶(PI)染色法检测细胞凋亡率,Western blot检测核因子-κB（NF-κB）、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、c-Myc蛋白水平。结果：与对照组相比,缺氧/复氧组心肌细胞SOCS3蛋白水平显著增加（P<0.05）,细胞的增殖活性、SOD显著下降（P<0.05）,LDH、MDA、凋亡率显著升高（P<0.05）;靶向沉默缺氧复氧心肌细胞SOCS3基因表达较缺氧/复氧组细胞的增殖活性和SOD显著增加（P<0.05）,LDH、MDA、凋亡率显著降低（P<0.05）;缺氧/复氧干预心肌细胞显著抑制NF-κB、Cyclin D1、c-Myc蛋白表达（P<0.05）,下调SOCS3基因表达显著增加NF-κB、Cyclin D1、c-Myc蛋白表达（P<0.05）。结论：沉默SOCS3表达促进缺氧复氧心肌细胞增殖,抑制其凋亡,增强机体氧自由基的清除能力,其作用机制与NF-κB信号通路的激活有关。     

甘氨酸对缺氧/复氧心肌细胞[[Ca2+]i和TNF-α浓度的影响

目的: 观察甘氨酸对缺氧/复氧心肌细胞内游离钙、心肌细胞存活率和TNF-α浓度的影响。方法: 利用原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞建立心肌缺氧/复氧(H/R)模型,实验分7组:① 对照组;② 缺氧/复氧 (H/R)组;③ 0.5 mmol/L甘氨酸(GLY)+H/R组;④ 1.0 mmol/L GLY+H/R组;⑤ 2.0 mmol/L GLY+H/R组;⑥ 4.0 mmol/L GLY+H/R组;⑦ 4.0 mmol/L GLY对照组。结果: 在一定浓度范围内(0.5-2.0 mmol/L),甘氨酸能抑制缺氧/复氧损伤引起的细胞内钙超载,并呈现剂量依赖性关系,在2.0 mmol/L浓度水平,达到最佳抑制效应。甘氨酸能抑制心肌细胞产生TNF-α,避免心肌H/R损伤的加重,增加心肌细胞的存活率。 结论:甘氨酸对缺氧/复氧心肌具有保护作用,其机制与抑制钙超载,减少TNF-α的生成有关。     

程序化细胞死亡因子5对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和自噬的影响及机制

目的:探讨程序化细胞死亡因子5(PDCD5)对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞凋亡和自噬的影响及其作用机制。方法:以H9c2心肌细胞系为研究对象,建立H/R损伤模型,采用RNA干扰方法抑制PDCD5的表达,MTT法检测心肌细胞的存活率,TUNEL显色法检测细胞凋亡率,RT-qPCR和Western blot法分别检测mRNA和蛋白的表达水平。结果:H/R损伤的H9c2心肌细胞中,PDCD5表达水平升高,同时细胞的存活率降低,细胞凋亡率和自噬水平增加,而PDCD5沉默能够增加细胞存活率,同时减少细胞凋亡率,促进Bax表达且抑制抑Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及自噬相关蛋白beclin-1的表达。此外,沉默PDCD5可通过降低p-P65的蛋白水平抑制NF-κB通路。结论:沉默PDCD5通过阻断NF-κB信号通路而抑制H/R损伤诱导的心肌细胞凋亡和自噬,从而保护心肌细胞。     

西洋参茎叶总皂苷通过抑制过度内质网应激减轻大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的: 观察西洋参茎叶总皂苷 (PQS) 对缺氧/复氧 (H/R) 心肌细胞的保护作用,并从内质网应激 (ERS)的角度探讨其分子机制。方法: 建立心肌细胞缺氧/复氧 (H/R) 损伤模型,以台盼蓝染色法、乳酸脱氢酶活性以及流式细胞术检测细胞损伤及凋亡情况;以RT-PCR和Western blotting方法,检测ERS标志分子葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、钙网蛋白 (CRT)、C/EBP同源蛋白 (CHOP)、caspase-12及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果: 和H/R组心肌细胞相比,PQS+H/R组:(1) 细胞凋亡率降低4.19% (P<0.05),存活率升高21.2% (P<0.05),LDH活性降低66.58% (P<0.05);(2) Bcl-2 mRNA和蛋白表达分别升高30.9%和48.0% (P<0.05),Bax mRNA和蛋白表达分别降低39.7%和48.4% (P<0.05);(3) GRP78 mRNA和蛋白表达分别降低61.6%和37.7% (P<0.05),CRT mRNA和蛋白表达分别降低35.7%和52.2% (P<0.05); CHOP mRNA和蛋白表达分别降低57.0%和51.7% (P<0.05);剪切后的caspase-12蛋白表达降低34.9% (P<0.05)。结论: PQS可减轻H/R诱导的心肌细胞损伤,其机制是降低H/R诱导的GRP78、CRT mRNA和蛋白表达,抑制CHOP、caspase-12等内质网凋亡通路激活,从而抑制过度ERS介导的细胞凋亡。