嗜中性粒细胞抑制LAK及NK细胞的细胞毒作用

用IL-2诱导出LAK,能产生对肿瘤靶细胞的破坏作用。NK细胞是LAK的主要前体细胞,二者细胞毒作用的特点相同。本文检测了外周血多形核中粒细胞(PMN)对LAK、NK 细胞毒作用的影响。体外低浓度IL-2诱导外周血淋巴细胞形成LAK 细胞,对M14瘤株进行释放~(51)Cr的细胞毒试验。在此试验中加入PMN,观察到LAK 的细胞毒作用明显受到抑制,且随     

应用双标记免疫荧光法检测IgA肾病病人的多形核细胞内免疫复合物

本文作者用双标记免疫荧光技术,检查15名IgA肾病病人,8名其它肾小球病病人和10名健康成人的末稍血多形核细胞(PMN)内细胞浆包涵体,以确定这些病人的PMN是否吞噬IgA免疫复合物。按Hurde法制备白细胞标本;用罗达明标记抗人C_3血清(R-G_3)对PMN初染后,再用FITG标记抗人IgG、IgA、和IgM抗血清(F-IgG、F-IgA、F-IgM)染色。用这种双标记免疫荧光法可观测到FITG-IgG、IgA、IgM和R C_3共同存在,即IgG和C_3、IgA和C_3、IgM和C_3,计数PMN内有IgG C_3、IgA C_3、及IgM     

琼脂糖板法检测中性白细胞趋化作用

<正> 体外中性白细胞(PMN)趋化试验是测定白细胞功能的一种方法。用琼脂糖凝胶技术和不连续梯度细胞分离液一次分离PMN,使该方法简化并能较广泛地应用于临床。现将本室开展此项工作结果报道于后。 一、材料和方法:根据Nelson和张成武报告加以修改。 (一)细胞制备参照Aguado氏法用1.077和1.097比重的聚蔗糖-泛影葡胺不连续的密度梯度方法一次性分离,获得PMN悬液。 (二)趋化因子为24小时培养的大肠杆菌悬液。     

中性粒细胞凋亡与凋亡中性粒细胞表面肿瘤坏死因子受体的研究

细胞凋亡是近年来的研究热点,中性粒细胞(PMN)作为机体防御系统的重要组成部分,其凋亡情况倍受关注.为了了解PMN的自然凋亡,观察凋亡PMN表面肿瘤坏死因子受体(TNFR)数量的变化,本研究利用PMN自然凋亡模型,采用放射配基结合受体分析法(RIBRA),检测凋亡PMN TNFR结合量.实验观察到PMN体外培养0h,6h,20h,TNFR结合量呈现增加趋势,而蛋白质合成抑制剂放线菌酮(CHX)仅在一定程度上抑制TNFR与肿瘤坏死因子α(TNF-α)的结合.研究表明TNFR结合量与PMN凋亡相关.     

中性粒细胞凋亡与组织损伤的研究进展

PMN受到刺激后可表现为凋亡、原发性坏死、继发性坏死、凋亡延迟(存活),而创伤后细胞凋亡的发生在机体内是一种普遍现象.PMN凋亡延迟与过度炎症反应及组织器官损伤有密切关系,调节PMN凋亡可以促进炎症的吸收和控制.凋亡机制的实现不仅需要PMN自身参与,也需要巨噬细胞或组织细胞对凋亡细胞识别和处理.     

海泡石-胶原复合物上成纤维细胞的粘附和扩散

本文通过短期的体外试验,研究了成纤维细胞在海泡石-胶原复合物制备的底物表面上的粘附和扩散。作者从胎牛皮提取Ⅰ型胶原并纯化,用文献报导的方法制备海泡石-胶原复合物(SC-复合物)。将SC-复合物置于pH为7.4、浓度为0.1M的磷酸盐缓冲液中,用0.5％的戊二醛室温处理10～20分钟制备戊二醛交联的海泡石-胶原复合物(SCG-复合物)。用以前介绍的方法对复合物进行了交联度的评价后,用从人体得到的成纤维细胞进行体外细胞粘附和扩散试验。把以海泡石-胶原复合物作为     

蛋白激酶C在中性粒细胞凋亡信号转导中的作用

蛋白激酶C(PKC)是一类ca2+、磷脂依赖性的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,由12种具有不同生物学特性的同工酶组成.PKC通过催化多种蛋白质上Ser/Thr的磷酸化,在细胞下游信号转导和调节细胞功能中发挥重要的作用.中性粒细胞(PMN)是参与机体固有免疫的主要细胞,一旦分化成熟便启动它的自发性凋亡程序,从而维持机体的内环境稳定和促成炎症反应的无损伤性收敛.PMN凋亡的调控是一个受多基因、多因子、多条信号转导通路独立或交联作用的复杂网络.作为细胞内信号转导重要递质的PKC,在调控PMN的自发性凋亡进程中起着重要作用.     

N-亚甲基磷酸化壳聚糖基因纳米粒子的体外细胞毒性及基因转染实验研究

目的 考察N-亚甲基磷酸化壳聚糖( NMPCS)基因纳米粒子的体外细胞毒性及基因转染效率.方法 采用均相反应法制备了NMPCS,用复凝聚法制备了NMPCS/DNA纳米粒子;通过MTT实验考察了NMPCS及其与DNA复合物对HeLa细胞的细胞毒性,以荧光索酶质粒为报告基因考察了NMPCS及NMPCS-CaZ+载体介导的体外基因转染效率.结果 NMPCS及其与DNA的复合物在体外表现出很小的细胞毒性,远远低于同等浓度时聚乙烯亚胺(PEI)的毒性.通过对壳聚糖进行亚甲基磷酸化修饰后,可大幅提高载体的基因转染效率.结论 N-亚甲基磷酸化壳聚糖有望成为一种新型、安全、高效的非病毒基因载体.     

全身炎性反应综合征中性粒细胞线粒体细胞色素c的研究进展

全身炎性反应综合征(systemic inflammation response syndrome,SIRS)是多种疾病发展至多器官功能障碍综合征(multiple organs dysfunction syndrome,MODS)的前期表现.中性粒细胞,又名多形核白细胞(polymorphonuclear neutrophil,PMN)是重要的炎症效应细胞,其凋亡延迟或障碍进而导致炎症反应持续发展和加剧是SIRS的主要病理生理过程.线粒体细胞色素c(cytochrome c,Cyt-c)是重要的凋亡蛋白,通过内源性和外源性等多种凋亡途径参与PMN凋亡.深入探讨SIRS时PMN凋亡异常的分子机制,研究线粒体Cyt-c在PMN凋亡中的作用,寻找诱导PMN适时、适度凋亡的有效方法,对于限制组织损伤、控制炎症反应、减轻SIRS有重要意义.     

微量法测定多形核白细胞的Fc受体

循环多形核白细胞(PMN)的异质性有较多报导,根据细胞表面IgE Fc受体的表达,PMN可分为两种功能不同的亚群,机体正常状态下,80%循环PMN可与IgE—包被的绵羊红细胞形成玫瑰花结。形成花结的白细胞(RFN)具有较强的粘附性、集聚作用及对C5a的趋化作用,也具有较强吞噬作用和杀菌作用。RFN的这些特殊功能可能即其参与脓肿形成或无菌性炎症反应的原因。这些细胞在肉芽肿边缘     

肿瘤坏死因子-a对中性粒细胞凋亡的影响

细胞凋亡是生物界普遍的生命现象,是由基因控制的细胞自主的有序性的死亡,与临床疾病关系密切.中性粒细胞(PMN)是一种主要的炎性细胞,本实验通过光镜、电镜、电泳、流式细胞仪等方法研究了重要的炎性介质肿瘤坏死因子-a(TNF-a)对正常和炎症状态下外周血PMN凋亡的影响.结果表明,TNF-a可以诱导PMN凋亡,且与作用时间和作用浓度相关.PMN的凋亡在炎症微环境中被改变,PMN凋亡延迟,对TNF-a反应性下降.     

麻风病人中性粒细胞趋化性测定

<正> 中性粒细胞(PMN)主要参与炎症反应过程,发挥抗感染的免疫作用。体外PMN趋化试验是一种测定白细胞功能的常用方法。国内尚未见有关对麻风病人PMN趋化功能测定的报道。我们对临床上明确诊断的住院麻风病人进行了PMN趋化性测定,现将结果报道如下。     

肾上腺素对中性粒细胞释放PGE_2和TXB_2的影响

目的 :观察肾上腺素对体外中性粒细胞在A2 31 87刺激下对释放PGE2 和TXB2 的影响。方法 :用无菌的 1%糖元注入大鼠腹腔 ,收集腹水 ,提取PMN。将PMN分成PMN组、A2 31 87组和A2 31 87加ADR三组 ,并用RIA法分别测定上清中PGE2 和TXB2 的含量 ,上述试验过程重复 3次。结果 :PMN释放PGE2 和TXB2 的含量 ( x±s,pg/5× 10 6 细胞 ) ,各组分别为 :( 1)PMN正常对照组 :60 .3± 3 4 .5 ,5 7.4± 12 .3 ;( 2 )PMN +A2 31 87组 ;93 .3 4± 3 2 .6,10 1.9± 3 1.2 ;( 3 )PMN +A2 31 87+ADR组 :15 6.6± 2 8.5 ,169.8± 48.2。且 ( 1)组和 ( 2 )组相比 ,( 2 )组二者的含量显著高于 ( 1)组 (P <0 .0 5 ) ;( 1)组、( 2 )组和 ( 3 )组比 ,且 ( 3 )组二者的含量显著高于 ( 1)组、( 2 )组 (P <0 .0 5 )。结论 :ADR促进由A2 31 87诱导的PMN释放PGE2 和TXB2 含量的增加 ,可能是ADR直接影响了还氧酶活性 ,推测与开启Ca+ + 通道有关。     

体外构建的HSP70-肝癌抗原肽诱导抗原肽特异性免疫反应1

目的研究体外构建的HSP70-肝癌抗原肽复合物诱导针对肝癌的特异性免疫反应能力,为该复合物的临床应用奠定基础.方法在体外构建HSP70-肝癌抗原肽复合物,联合应用粒/巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)及白介素-4(IL-4)直接从志愿者外周血中培养出DC;以HSP70、HSP70-肝癌抗原肽、抗原肽分别刺激DC,DC激活同源的T淋巴细胞产生细胞毒性T淋巴细胞(CTL),检测其杀伤T2细胞和肝癌细胞系的能力.结果HSP70-抗原肽、抗原肽均可诱导CD8+的抗原肽特异性CTL,而前者的诱导效果更强.结论体外构建的HSP70-抗原肽复合物具有免疫原性,HSP70可以增强抗原肽诱导特异性免疫反应的能力,HSP70-抗原肽复合物有可能作为肽疫苗用于临床肿瘤免疫治疗.     

HSP70多肽复合物修饰树突细胞抗胰腺癌研究

目的：研究肿瘤热休克蛋白70（HSP70）多肽复合物修饰树突状细胞激活淋巴细胞治疗胰腺癌的策略和方法。方法：采用低渗裂解，ConA—Sepharose亲和层析柱及ADP—Agarose亲和层析柱，从小鼠胰腺癌（MPC83）瘤块中纯化HSP70多肽复合物；纯化出的70KD蛋白修饰小鼠骨髓来源诱导树突细胞（DC）并制备树突细胞HSP70多肽肿瘤疫苗，MTT法检测修饰后DC增殖活性；用修饰后DC激活小鼠脾淋巴细胞，MTT法检测激活淋巴细胞在不同效靶比下对MPC83的体外杀伤活性。结果：获得较高纯度分子量为70kD左右的蛋白质；50～100ng HSP70多肽复合物可修饰10^4树突细胞，每克瘤块能获取HSP70多肽复合物约100μg；来自MPC83细胞瘤块HSP70多肽复合物激活的淋巴细胞能特异性杀伤MPC83细胞。结论：采用低压亲和层析柱可从胰腺癌瘤块中获得较高纯度HSP70多肽复合物，HSP多肽复合物DC疫苗用于胰腺癌细胞免疫治疗能获得体外杀伤效果，为临床胰腺癌生物免疫治疗奠定基础。     

ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡的形态学变化

目的研究前列腺素E受体亚型3(EP3)激动剂ONO-AE-248诱导的中性粒细胞(PMN)非凋亡性程序化细胞死亡的形态学变化,探讨PMN死亡形式的多样性和复杂性。方法运用透射电镜、荧光显微镜及激光共聚焦扫描显微镜观察PMN在自发性凋亡与ONO-AE-248刺激下亚细胞微结构的变化。结果以5mmol/L的ONO-AE-248刺激PMN12h后,电镜观察绝大多数PMN的多叶核融合为单叶核,核质疏松,核膜分层、起泡甚至破裂,核质溢出,但细胞膜较完整,细胞器无明显改变。以荧光染料DAPI标染活细胞核,ONO-AE-248刺激后,PMN表现为多叶核融合成大而模糊的球形,核染色密度较低;ONO-AE-248刺激的PMN死亡仍有细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)的外翻。ONO-AE-248刺激组与自发性凋亡组PMN在线粒体的形态结构、分布和细胞质内的染色性均有明显差异。结论ONO-AE-248在体外能刺激人PMN发生非凋亡性程序化细胞死亡,这一刺激过程不影响自发性凋亡的PMN细胞膜PS的外翻,并且细胞核和线粒体的改变是其早期最为显著的形态学改变,提示二者可能是ONO-AE-248刺激的靶标和早期的药物反应中心。     

中性粒细胞胞外诱捕网通过circRNA＿0080220促进乳腺癌增殖及侵袭的机制研究

为探究中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular trap, NET)对乳腺癌增殖、侵袭的影响及其相关机制,对临床患者肿瘤和癌旁组织进行环状RNA(circular RNA, circRNA)芯片检测,并使用qRT-PCR进行验证;采用免疫组化法检测组织中淋巴细胞抗原6复合物(lymphocyte antigen 6 complex, ly6g)和中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase, NE)的表达情况;分离外周血多形核中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophil, PMN),刺激形成NET,将纯化后的NET与乳腺癌细胞系MCF7共孵育,通过脂质体将si-circRNA＿0080220转染至MCF7细胞,采用qRT-PCR检测circRNA＿0080220和miR-1271的表达变化;通过CCK-8、细胞划痕和Transwell试验检测MCF7细胞增殖、迁移和侵袭的变化;利用双荧光素酶报告试验检测circRNA＿0080220与miR-1271的相关性。结果显示,乳腺癌患者肿瘤部位的ly6g和NE表达水平高于癌...     

聚乳酸-聚乙醇酸可降解支架构建组织工程食管

目的:观察人食管上皮细胞在聚乳酸-聚乙醇酸(PLGA)支架上的贴附和生长情况,利用组织工程技术培养工程化人工食管.方法:制作PLGA三维细胞支架;分离培养成人食管上皮细胞,体外扩增后种植到PLGA支架上.在体外和裸鼠体内分别培养食管上皮细胞-支架复合物,分期终止培养,进行组织学染色、扫描电镜、细胞角蛋白免疫组织化学检测.结果:体外培养显示,人食管上皮细胞在支架材料上贴附生长良好,长期培养仍保持食管上皮细胞特性,裸鼠体内培养4周后可形成食管黏膜样组织.结论:PLGA支架适合食管上皮细胞黏附生长,可作为食管组织工程的细胞载体.     

大鼠中性粒细胞的分离及糖皮质激素受体阻断率的测定

中性粒细胞(PMN)是一种极为活跃的细胞,参与机体的免疫反应和增强机体的防御作用以及维持正常的微循环功能。以往由于大鼠白细胞中PMN比率较低,多采用人血PMN。本文采用改良的Haslett法,通过     

防御素:动物细胞中的内源抗生素肽

多形态核中性白细胞(PMN)具有氧化和非氧化两种方式的杀菌机制,非氧化机制是由PMN细胞质中的苯胺兰颗粒的内源抗菌多肽介导的,这些抗菌分子包括防御素(defensin)、溶菌酶等。防御素富含精氨酸,非糖苷化多肽具29～34个氨基酸残基。不同动物的防御素均含有特异性的半胱氨酸区,有3个分子内二硫键。除存在于PMN中外,其它类型的细胞也可表达。防御素的同类物-cryptdin的cDNA最近已从鼠小肠细胞中被克隆。在感染和损伤后的某些昆虫的血淋巴中已测出类似于哺乳动物防御素的富含半胱氨酸的小分子抗菌肽