菌株HYR-08色素的理化性质的初步研究

目的:探讨菌株HYR-08分泌的生物活性物质-色素的理化性质.方法:收集刚进入生长平稳期的菌株,采用酸热、研磨、酶解和超声波四种不同的破壁方法进行破壁,随后用丙酮萃取法获得色素粗产品.比较了该色素在蒸馏水、无水乙醇、甲醇、丙酮、四氢呋喃、氯仿中的溶解情况.同时我们也分析了酸碱度、光照和温度对该色素稳定性的影响.结果:超声波裂解法的提取效率最高.色素提取物在上述溶荆中的溶解能力由高到低依次为:四氢呋喃、丙酮、氯仿、无水乙醇、蒸馏水、甲醇.色素的稳定性对碱的耐受性明显强于酸.该色素提取物的稳定性与温度的升高及水浴时间的延长呈负相关.相同功率紫外光对该色素提取物的破坏能力要强于日光.结论:超声波裂解法是一种相对高效、经济简单的提取菌株HYR-08中色素的好方法.菌株HYR-08的色素提取物具有良好的对酸碱、温度和光照的耐受能力,提示该色素具有良好的生物医药开发前景.     

细胞核单一种类非组蛋白的提取

本文报道了一种提取单一种类染色质非组蛋白的简化方法。在获得核内酚溶性非组蛋白后进行双向电泳。切下胶内点蛋白于缓冲液浸泡抽提,离心得到上清,继用丙酮低温沉淀蛋白。     

棉阿舒囊霉细胞色素C的纯化、结晶和专一性的比较

棉阿舒囊霉(Ashbya gossypii)细胞色素C可用氯化钠抽提法或乙酸乙酯自溶法从菌体中抽出,经阳离子交换树脂Zeroli*226柱层析、硫酸铵分部沉淀及反透析后,可被纯化和结晶。乙酸乙酯自溶法的抽提得率高于氯化钠抽提法。两种方法抽提及纯化的细胞色素C在电泳中都表I见为均一,但氯化钠抽提之细胞色素C的生物活力略高于用乙酸乙酯抽提的细胞色素C。     

一种高效可直接用于PCR分析的土壤总微生物DNA抽提方法

以CTAB-溶菌酶-蛋白酶K-冻融裂解法直接抽提土壤总微生物的基因组DNA,利用G8000沉淀和纯化DNA.结果表明,该方法是一种简便、有效可直接应用于PCR分析的土壤总微生物基因组DNA的抽提方法.采用含聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的缓冲液预洗,添加CaCl₂和BSA,可以去除腐殖酸;用PEG8000沉淀DNA,可以提高DNA质量;采用冻融法破碎细胞,CTAB、溶菌酶和蛋白质酶K共同作用以裂解细胞,可以保证获得大片段的DNA,提高DNA产率.用该方法抽提的七子花林下土壤总微生物DNA产率为9.22 μg·g^-1,A260/A280为1.65,可适用于 PCR扩增及扩增rDNA限制酶切分析(ARDRA)技术,适宜的模板DNA浓度为0.67 ng·μl^-1.快速、有效、可直接用于PCR分析的土壤总微生物DNA提取方法的建立,为大规模的土壤微生物分子生态学研究提供了可能.     

噬菌体DNA的快速抽提

介绍一种噬菌体DNA的快速抽提方法.用聚乙二醇沉淀噬菌体颗粒,然后经DEAE纤维素纯化处理和酚抽提.与传统的噬菌体DNA纯化方法相比,改进后的方法方便、快速、经济,可获得高纯度的噬菌体DNA.     

三种李斯特菌菌体蛋白提取方法的比较

通过对3种李斯特菌菌体蛋白提取方法主要是破壁方式的比较,找到一种可高效提取李斯特菌菌体蛋白的方法,为该菌的深入研究提供可靠技术。以绵羊李斯特菌新鲜液体培养物为材料,收集菌沉淀,分别选用3种破壁方式破除细胞壁,三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)-丙酮沉淀法沉淀破壁液中的菌体蛋白,采用聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western-blot分析所得菌体蛋白。溶菌酶-超声破壁-TCA-丙酮沉淀法提取得到的李斯特菌菌体蛋白SDS-PAGE条带清晰丰富,Western-blot条带特异。溶菌酶-超声破壁-TCA-丙酮沉淀法可有效提取李斯特菌菌体蛋白,满足常用蛋白分析技术的要求,是一种提取李斯特菌菌体蛋白的可靠方法。     

还原型谷胱甘肽高产菌株的初筛及其提取工艺优化

目的:筛选还原型谷胱甘肽(GSH)高产菌株并优化其提取工艺.方法:从中科院沈阳应用生态研究所菌种保藏室的酵母菌库中筛选GSH高产的酵母菌,改进培养基组分,提高胞内GSH含量,并优化热水抽提和乙醇提取两种方法,提高提取液中GSH含量.结果:筛选获得一株酿酒酵母Y,其胞内GSH含量9.60 mg/g,培养基改良后,胞内GSH含量又提高了34.8%.通过单因素和正交试验确定热水抽提法最优提取条件为:料液比1∶3,pH 2.0,在90℃水浴中,抽提10min,GSH的产量可达14.27mg/g干菌体.结论:添加氨基酸和葡萄糖都有利于酵母菌体的生长和GSH合成.热水抽提法较乙醇提取法相比,提取效果好、无污染、操作简单,为后续的分离纯化工作奠定基础.     

菌株HYR-08色素的提取与鉴定的初步研究

目的:探讨菌株HYR-08分泌的生物活性物质-色素的成分及应用.方法:收集刚进入生长平稳期的菌株,采用丙酮-石油醚萃取法提取其色素并用0.22μm无菌滤膜纯化色素粗产品.用高效液湘色谱反相C18柱、740-FTIR傅里叶变换红外光谱仪与UV型紫外吸收光谱仪对色素样品进行分离与鉴定.用灌胃和腹腔注射两种方法检测色素对昆明小鼠的毒性.结果: UV全波段扫描结果发现在448 nm、462 nm和484nm处有3个明显的类胡萝卜素吸收峰,其中以448 nm峰最为明显.红外光谱检测发现在3027 cm'、2950 cm'、2858 cm'、1722 cm'、1649 cm'、1442 cm'和965cm'处有明显的β-胡萝卜素吸收峰.反相C18柱分离结果亦发现色素粗产品含有明显的β-胡萝卜素的特征峰.毒理实验结果发现该色素对昆明小鼠腹腔注射与口服的最小致死剂量成年鼠分别为:728.26mg/kg与2800mg/kg;幼年鼠分别为:589.65mg/kg与2489mg/kg.结论:菌株HYR-08分泌的色素主要成分为β-胡萝卜素,且毒性低.     

测定浮游植物中色素的高效液相色谱与二极管阵列分光光度计联用的方法

建立了高效液相色谱与二极管阵列分光光度计联用分析浮游植物中色素的方法.采用90%的丙酮提取藻类中的类胡萝卜素和叶绿素后在反相C18柱上分离,流动相选用甲醇/醋酸铵/丙酮,流速为2.0 mL*min-1.用可见光检测器检测,波长为440 nm.在线的二极管阵列检测器对色素峰的扫描(400～700 nm)得到各色素峰的吸收光谱的结果显示,保留时间相同的色素峰,吸收光谱可能不同.根据色素峰吸收的光谱特性确定色素的种类,可以避免色素峰保留时间相同而造成的判断误差,从而提高了分辨的准确性.     

提高叶绿体色素抽提效率的方法探讨

菠菜是“叶绿体色素提取和分离”实验中的常用材料。但受菠菜生长的季节性限制 ,有的季节采集不到 ,用其它植物绿叶 (树叶、蔬菜叶、野生植物叶 ) ,尤其是四季均可采到的常绿植物叶片替代 ,按教材的提取方法操作 ,所得到的色素提取液呈黄绿色 ,色素含量低 ,展层后 ,色素带颜色浅 ,有的色素带不能显现 ,实验效果差。分析其原因主要是 :1)对于角质层厚、机械组织多的绿叶 ,按常规方法研磨 ,组织、细胞破碎率低 ,提取出的色素绝对量少 ;2 )对含水量较高的蔬菜叶等 ,因过多水分的存在 ,降低了丙酮对色素分子的抽提效率。因此 ,实验中如何增加叶…