尖吻蝮(Agkistrodon acutus)蛇毒的分离及其生物活性的研究

用二乙氨乙基纤维素柱层析法将尖吻蝮蛇毒分成15个组分,并对粗蛇毒及各分离组分进行了各种生物活力的测定,结果表明:1.粗蛇毒中存在有精氨酸酯酶,蛋白水解酶、碱性磷酸酶,磷酸二酯酶,5′—磷酸二酯酶,5′—核苷酸酶,ADP酶、ATP酶,L—氨基酸氧化酶及磷酸酯酶A等10种酶活力;但不存在胆碱酯酶及核糖核酸酶的活力;2.蛋白水解酶,5′—核苷酸酶及ADP酶普遍存在于粗蛇毒经分离后的各组分中;3.精氨酸酯酶存在于组分6—13中,以第8组分的活性最高;4.第1及5—13组分显示有较高的凝血活性,第1—2组分及9—15组分显示有出血毒,第12(小鼠死亡率2/5)及第13组分(小鼠死亡率3/5)显示有较高的毒性;第1—2,9—15组分显示有纤溶活性。     

蛇毒的研究与利用——Ⅴ.福建产圆斑蝰蛇(Vipera russelli siamensis)蛇毒的柱层析分离及酶活力和生理效应的测定

用羧甲基葡聚糖凝胶C-50对福建产圆斑蝰蛇(Vipera russelli siamensis Smith)蛇毒进行了柱层析分离,获得12个蛋白峰。其中有2个组份具有促凝作用,4个组份具有抗凝作用。对各蛋白峰进行7种酶活力测定的结果表明,福建产圆斑蝰蛇毒的促凝作用与精氨酸酯酶无明显关系。而致死毒性与磷脂酶A活力相重迭。粗毒具有较高的精氨酸酯酶、磷脂酶A和磷酸二酯酶活力,而无出血和纤维蛋白溶解作用。     

蛇毒的研究与利用——Ⅴ.福建产圆斑蝰蛇(Vipera russelli siamensis)蛇毒的柱层析分离及酶活力和生理效应的测定

用羧甲基葡聚糖凝胶C-50对福建产圆斑蝰蛇(Vipera russelli siamensis Smith)蛇毒进行了柱层析分离,获得12个蛋白峰。其中有2个组份具有促凝作用,4个组份具有抗凝作用。对各蛋白峰进行7种酶活力测定的结果表明,福建产圆斑蝰蛇毒的促凝作用与精氨酸酯酶无明显关系。而致死毒性与磷脂酶A 活力相重迭。粗毒具有较高的精氨酸酯酶、磷脂酶A 和磷酸二酯酶活力,而无出血和纤维蛋白溶解作用。     

尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶的纯化及其理化性质研究

尖吻蝮蛇毒纤维蛋白溶解酶是一种具有纤维蛋白溶解活性的蛋白水解酶 ,常具有出血活性 ,因此 ,寻找具有纤维蛋白溶解活性 ,又无出血活性的纤维蛋白溶解酶十分必要。作者对尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶(NHFLE)进行了分离纯化及其理化性质的研究。应用凝胶过滤和离子交换柱层析法分离纯化收集具有酶活性的蛋白峰 ,用 1 2 % SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳作纯度鉴定和测定纤维蛋白溶解酶的相对分子量 ,采用纤维蛋白平板法测定活性。结果从尖吻蝮蛇毒 NHFLE的分离纯化得的单一峰纤维蛋白溶解酶为单一条带 ,其相对分子量为 2 50 0 0 ,没有…     

尖吻蝮蛇蛇毒出血毒素DaHT-3的纯化与性质

被尖吻蝮蛇咬伤会引起严重的出血,对蛇毒出血毒素的研究有利于治疗蛇伤出血药物的筛选.通过SephadexG-75,DEAE-SephadexA-50,SephadexG-200和两次PBE聚焦层析,从尖吻蝮蛇(Dienagkistrodonacutus)蛇毒中纯化到一个分子量为56000的出血毒素(DaHT-3),经氨基酸组成测定计算,由487个氨基酸残基组成.此成分在SDS-PAGE上显示出一条均一的蛋白染色带,用等电聚焦电泳测定,其pI为5.50.该出血成分的最小出血剂量是2.6μg,具有蛋白水解酶活力,其活力为3.68,但没有精氨酸酯酶和磷脂酶A2活力.用红外光谱仪研究DaHT-3在溶液中酰胺I带的吸收谱,该毒素含有31.8%的α螺旋、56.1%的β折叠和12.1%的转角;当加入EDTA螯合剂去除金属离子后,它们的α螺旋、β折叠、转角和无规卷曲分别变为11%、26.4%、46.2%和16.5%,而出血活力和蛋白水解酶活力均丧失,表明该出血毒素是金属蛋白酶     

蛇毒的研究与利用——Ⅳ.浙江产蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)蛇毒的柱层析分离及磷酸二酯酶的大规模纯化

应用二乙胺基乙基葡聚糖A-50和盐浓度梯度洗脱的方法,对浙江产蝮蛇毒进行了柱层析分离,获得14个蛋白峰,测定了磷酸二酯酶、磷酸单酯酶、5'-核苷酸酶、蛋白水解酶、氨基酸酯酶、L-氨基酸氧化酶、磷脂酶A、出血毒素、抗凝血活酶组份以及血纤溶酶样物质在蛋白质峰中的分布。介绍了一种大规模制备磷酸二酯酶的简便、经济的纯化方法,对用这种方法制备的酶制剂的某些主要质量标准进行了分析鉴定并与国外同类产品进行了比较,该酶用于人工合成核糖和脱氧核糖寡核苷酸的顺序分析获得了较为满意的结果。     

烙铁头(Trimeresurus mucrosquamatus)蛇毒的研究[Ⅰ]柱层析分离及酶活性与生物活性测定

本文报导了用二乙氨基乙基葡聚糖凝胶A-50和氯化钠直线梯度洗脱方法,获得14个蛋白峰。测定了11种酶活性,含有精氨酸酯酶,蛋白水解酶,L-氨基酸氧化酶,5′-核苷酸酶,腺三磷酸酶,磷酸单酯酶,磷酸二酯酶,核苷焦磷酸酶,磷脂酶A9种,不含核糖核酸酶,胆碱酯酶。对每个蛋白峰的生物活性测定表明,出血毒主要分布在12峰,其次为10—14峰。致死活性表现在1,12—14峰。1峰具有较强溶解纤维蛋白的活性。8,10—14峰具有明显的凝血酶样作用,酶活性的分布及其对凝血系统的作用接近一致。11—13峰能使血小板聚集。 烙铁头毒蛇在我国分布很广,成都生物所两栖爬行动物研究室1974年作过报导。蛇毒的研究已被许多学者所重视,Suzuki在Anthony.T.Tu.编著的Venoms Chemistry and Moleculor Biology(1977)报导了该蛇毒含磷酸单酯酶,磷酸二酯酶,5′-核苷酸酶及小分子活性多肽,1970年Ouyang报导含透明质酸酶,1963年Murata报导有蛋白水解酶活性。Ouyang等(1976—1978)分离纯化纤溶组分,并研究了该组分的理化性质。但对各组分的酶活性及生物活性测定尚未见报导。为充分利用这一丰富资源,我们对湖南产烙铁头蛇毒进行了柱层析分离和各组分的酶活性和生物活性测定,结果报导于下。     

尖吻蝮蛇蛇毒出血毒素的纯化与部分性质

目的　被尖吻蝮蛇 （ Ｄｉｅｎａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎ ａｃｕｔｕｓ） 咬伤会引起严重的出血, 对蛇毒出血毒素的研究有利于治疗蛇伤出血药物筛选。 方法　采用 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ７５, Ｄ Ｅ Ａ Ｅ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ５０, Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２００ 和两次 Ｐ Ｂ Ｅ 聚焦层析纯化。 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 电泳和等电聚焦电泳测定纯化样品的纯度和等电点。氨基酸组成用自动氨基酸分析仪测定。以小鼠背部皮下注射部位出血斑的面积来确定最小出血剂量和常规的方法测定酶活性。结果　从尖吻蝮蛇毒中纯化到一个相对分子量为５６ ０００ 的出血毒素 （ Ｄａ Ｈ Ｔ３）, 经氨基酸组成测定计算,它由 ４８７ 个氨基酸残基组成。此成分在 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ上显示出一条均一的蛋白染色带, 其ｐ Ｉ为５５０。该出血成分的最小出血剂量是 ２６μｇ, 具有蛋白水解酶活力, 其活力为 ３６８, 但没有精氨酯酶和磷脂酶 Ａ２ 活力。当加入 Ｅ Ｄ Ｔ Ａ 螯合剂去除金属离子后, 它们的出血活力和蛋白水解酶活力均丧失。 结论　这是从大陆尖吻蝮蛇毒中获得的一个新的出血金属蛋白酶 （ Ｄａ Ｈ Ｔ３）。     

王锦蛇血清对尖吻蝮蛇毒的抑制作用

目的 探讨王锦蛇血清对尖吻蝮蛇毒的抑制作用。方法 王锦蛇血清与不同剂量的尖吻蝮蛇毒分别混合后,注射到小鼠背皮下,测定王锦蛇血清对尖吻蝮蛇毒的抗出血活力;腹腔注射此混合物后,测定王锦蛇血清对尖吻蝮蛇毒的抗毒效价;先后注射尖吻蝮蛇毒和王锦蛇血清,测定王锦蛇血清对尖吻蝮蛇毒引起的死亡、组织损伤和炎症的抑制、保护和治疗作用。结果 1ml王锦蛇血清可完全抑制10mg（干重）的尖吻蝮蛇毒的出血活力;1ml王锦蛇血清可中和11mg（干重）尖吻蝮蛇毒的致死活力;王锦蛇血清对由尖吻蝮蛇毒引起的致死、组织损伤和炎症有显著的抑制、保护和治疗作用。结论 王锦蛇血清是尖吻蝮蛇毒的强抑制剂,可能成为未来新的蛇伤治疗药物的原料。     

清栓酶的临床应用概况

清栓酶的临床应用概况华亮吉中国石油天然气第六建设公司职工医院桂林５４１００４清栓酶（抗栓酶、Ｓｖａｔｅ）系东北或江浙蝮蛇毒液中分离出来的一种酶制剂,主要含精氨酸酯酶,还有蛋白水解酶等１７种酶,以及神经生长因子和表皮生长因子,因而具有抑制血小板聚集、抗...