微波处理对钙质土壤放线菌分离效果的影响

采用平板稀释法研究了微波处理对钙质土壤放线菌分离效果的影响。结果表明:①微波处理对提高放线菌出菌率有促进作用。在高氏1号培养基(GA)上,4种供试土壤经微波处理后放线菌总数较对照增加99.5%～234.1%,微波处理效应均达到极显著水平(P0.01);链霉菌数较对照增加58.3%～377.7%,除3号土样外,微波处理效应均达到极显著水平(P0.01);未鉴定放线菌较对照增加96.7%～304.8%,处理与对照的差异均达到显著水平(P0.05);②不同培养基上的微波处理效应不同。GA培养基上的微波处理效应(Effect of Microwave Irradiation,EMI)最强,放线菌总数及未鉴定属放线菌的微波处理效应均表现为GAGA-Ca,GA培养基上放线菌总数的EMI较GA-Ca培养基提高26.4%～120.9%;③风干土样的微波处理效应大于湿土样。     

秦岭太白山北坡土壤拮抗性放线菌分布及特性

以太白山北坡12个不同海拔高度的代表性土样为研究对象,采用皿内琼脂块法筛选拮抗性放线茵.结果表明:在太白山北坡不同海拔高度土壤中生存着大量拮抗性放线菌,在分离出的141株放线菌中,有82.3％的放线菌对21种靶标菌有拮抗作用.其中,海拔800～1845、3488、3655和3670 m土壤中的拮抗性放线菌分别占其总数73.7％～86.8％、81.3％、78.9％及82.3％,在海拔1200～2300及3400 m以上土壤中分离到的广谱强拮抗性放线菌占其总数的42.1％.在拮抗性放线菌中,对金黄色葡萄球菌有强拮抗性的放线菌占拮抗菌总数的24.1％,对棉花黄萎病、草莓疫霉及人参根腐病原菌等多种植物病原菌有强拮抗性的放线菌分别占拮抗菌总数的2.4％、6.9％和11.2％.土壤放线菌拮抗潜势SAAP可作为评价土壤中拮抗性放线菌资源蕴藏量的定量指标.     

青海沙珠玉人工植被系统土壤放线菌生态分布及拮抗性

为探索人工植被重建对土壤放线菌的影响,采用稀释平板法及琼脂块法对青海沙珠玉地区植被重建后沙土中放线菌的生态分布及拮抗性进行了研究.结果表明：随着高寒干旱沙地植被重建和覆盖度的提高：土壤放线菌数量显著增加,其中退耕还草地土壤中放线菌总数较沙地提高145.4%,小单孢菌数量约为沙地的6倍;拮抗性放线菌平均筛出率大幅度增加,退耕还草地土壤中拮抗性放线菌、天然草地土壤中抗细菌放线菌及林地土壤中抗病原真菌放线菌的平均筛出率约分别为沙地的2、3.2及1.5倍;地表植被盖度与土壤养分对放线菌数量以及拮抗性放线菌数量有很大影响,其中有机质、碱解氮含量以及鲜草产量与放线菌总数的相关性达到极显著水平(P<0.01),有机质含量、鲜草产量与拮抗性放线菌株数的相关性达到极显著水平(P<0.01).此外,植被盖度、土壤全氮、全磷、全钾、全盐以及速效钾含量与放线菌总数、链霉菌数、小单孢菌数的相关性也达到显著水平(P<0.05).     

河西走廊酒泉地区盐碱土壤中可培养放线菌多样性

为了探究甘肃河西走廊酒泉地区盐碱土壤中可培养放线菌种群多样性信息,采用稀释平板涂布法对采集到的4个盐碱土样进行分离培养纯化,并基于16S rRNA基因序列对分离的放线菌株进行系统发育分析。结果显示:根据菌落的表型差异从中共分离到63株放线菌菌株,它们分属于7个亚目、11个科、24个属;其中Streptomyces属为河西走廊酒泉地区盐碱土壤中可培养放线菌的优势菌群,共分离到24株,占放线菌种群总数的38.1%,并且有22株放线菌与已知菌序列的相似性低于98%,占放线菌总数量的34.9%。表明,河西走廊酒泉地区盐碱土壤中的放线菌资源丰富,类群具有多样性。     

祁连山高山植物根际土放线菌生物多样性

从祁连山老虎沟不同海拔位点的15种植物根际土中培养得到78株特异表型放线菌,并结合菌体形态、生理代谢特征、抗菌活性及16S rDNA序列对其生理及系统发育多样性进行了研究。结果表明,分离菌株分属于链霉菌属(Streptomyces spp.)(73株)、诺卡氏菌属(Nocardia spp.)(4株),另有1株与GenBank中同源性最高的菌株Micromonospora saelicesensis相似性达92%,为1潜在新种。链霉菌属为主要类群,占分离菌株的93.6%,该属菌株在5个海拔位点的15种植物根际土中均有分布,但存在海拔位点、植物种类的差异性和特异性;诺卡氏菌属的菌株仅见于海拔2200 m的猪毛菜、海拔2800 m的钉柱萎陵菜和3800 m处的甘肃蚤缀根际土中;1潜在新种分离自海拔2200 m处的沙生针茅根际土。次级代谢物产生和拮抗性筛选研究结果表明:H2O2酶、脂酶2(Tween-40)、脲酶、蛋白酶、脂酶3(Tween-80)、淀粉酶、H2S、脂酶1(Tween-20)、可溶性色素及有机酸这10类次级代谢物产生菌分别占供试菌株的89.7%、82.1%、70.5%、62.8%、53.8%、52.6%、48.7%、44.9%、32.1%和17.9%,其中,淀粉酶、脂酶1、色素和有机酸仅由链霉菌产生;有29株放线菌对参试人类病原菌具有抑制作用,占供试菌株的37.2%,分布于5个海拔位点的12种植物根际土,其中,从药用植物甘肃黄芪和四裂红景天根际土中分离到的抗性菌株占拮抗性放线菌总数的60%。研究表明,高山地区植物根际土放线菌资源丰富,菌株生理功能多样,是新放线菌种和生物活性物质的重要资源库。     

假橐吾内生菌分离及其拮抗菌的筛选与鉴定

从菊科植物假橐吾(Ligulariopsis shichuana Y.L.Chen)中分离得到110株内生真菌和26株内生放线菌,依照形态培养特征对菌株进行初步分类鉴定,采用琼脂块法进行拮抗菌株筛选,并对拮抗性最好的2株内生放线菌进行分子鉴定.结果表明:(1)经初步鉴定,将分离到的假橐吾内生真菌合并为86种,分为10个属,其中交链孢霉属和丝核菌属占优势(分别为41.9%和16.3%);内生放线菌分为3个属,其中链霉菌属占优势(92.3%).(2)抗菌活性试验表明,有31株内生真菌分别对细菌、植物病原真菌具有显著抑制作用,全部内生放线菌对靶标菌有抗性,其中菌株wz57和wz01拮抗性最强.(3)根据16S rDNA序列比对结果,菌株wz57和wz01与链霉菌属(Streptomyces griseoplanus)相似性最高,分别达到99.3%和99.5%,初步归为Streptomyces griseoplanus.     

藏东南地区土壤放线菌的生态分布及活性研究

从藏东南原始森林、高山草甸、沼泽、粮田与保护地等不同植被、从2970~4590m不同海拔高度采集土样50份,用多种培养基分离中、低温放线菌,并对放线菌的数量、组成、生理生化特性以及它们的拮抗性等进行了研究。按放线菌的形态学特征进行了鉴定。结果表明:①从藏东南各种土壤中放线菌分离到9个属,其中束丝菌属在国内未见报道。以粮田中放线菌的数量和种类最多。②原始森林中拮抗性放线菌数量最多,提供了从原始森林土壤中可以筛选到更多拮抗性放线菌的重要信息。③抗革兰氏阳性细菌的放线菌菌株数较抗革兰氏阴性细菌的多,拮抗真菌的放线菌菌株数比拮抗细菌的多。④藏东南土壤链霉菌具有许多酶活性。     

贵州兴义喀斯特洞穴可培养放线菌多样性及抗菌活性初筛

【目的】进一步了解兴义喀斯特洞穴可培养放线菌资源及产活性代谢产物的能力。【方法】选取多种分离培养基,利用稀释直接涂布平板法对贵州黔西南兴义市多个喀斯特洞穴的土壤和岩石进行可培养放线菌资源分离;利用三种发酵培养基对相关放线菌进行生物产物初筛。【结果】根据16S rRNA基因序列的比对分析,将分离得到的251株放线菌分别归类到44个属,其中链霉菌属(Streptomyces)占分离菌株的比例为24.30%,小单孢菌属(Micromonospora)占比11.95%,红球菌属(Rhodococcus)占比9.16%,微杆菌属(Microbacterium)占比7.17%,诺卡氏菌属(Nocardia)占比6.37%,该五类放线菌为该地区可培养放线菌的优势菌群。对70株细菌进行活性次级代谢产物筛选,其中35株放线菌对指示菌具有抑制活性,且主要类群为链霉菌属和小单孢菌属。【结论】贵州兴义喀斯特洞穴中存在丰富多样的放线菌类群,且蕴藏大量具有产生活性次级代谢产物能力的菌株,为医药产业提供潜力菌株资源,极具进一步发掘和研究的价值。     

三江源地区不同退化程度草地的土壤放线菌区系

用不同分离方法,对三江源地区不同退化程度草地土壤放线菌的数量和多样性进行了比较.从5份土样中共分离放线茵178株,根据表型特征和16S rRNA基因序列分析,分别归入7个已知属:小单孢菌属(Micromonospora)、原小单孢菌属(Promicromonospora)、诺卡氏菌属(Nocardia)、假诺卡氏菌属(Pseudonocardia)、游动放线菌属(Actinoplanes)、韩国生工茵属(Kribbella)和链霉菌属(Streptomyces).其中链霉菌属分离菌株可归入7个表型类群.发现轻度退化高寒草原的土壤放线菌数量,丰度和多样性高于重度退化高寒草原;针茅高寒草原的土壤放线菌数量和多样性高于蒿草高寒草甸,而其中链霉菌的种类低于后者.表明高寒草地的退化程度与其中土壤放线茵的数量和多样性呈负相关.     

塔里木盆地荒漠盐碱生境土壤放线菌的初步研究

采用常规方法研究了新疆塔里木盆地荒漠盐碱生境土壤放线菌区系、放线菌的耐盐、碱性及对植物病原真菌的拮抗性。结果表明:土壤放线菌区系较单一,仅分离到链霉菌属和拟诺卡氏菌属,其中以链霉菌属为主(98.57%),链霉菌可分10个类群,以白孢类群为优势类群。土壤含盐量愈高,链霉菌组成愈简单。放线菌的最适生长盐浓度多集中在6%~8%,最适生长pH集中在7~8。24株供试放线菌中,有4株中度嗜盐放线菌对供试靶标菌有拮抗性,占供试菌的16.67%。     

微波处理对嗜碱和嗜盐海洋放线菌分离效果的影响

【目的】研究微波处理对于分离嗜碱和嗜盐海洋放线菌的效果。【方法】用微波处理7份海泥样品,梯度稀释后涂布于3种分离培养基,分离具有嗜碱和嗜盐特性的海洋放线菌。【结果】微波处理后的7份样品中,4份样品中嗜碱海洋稀有放线菌和3份样品的嗜盐海洋稀有放线菌数量极显著提高;7份样品中的嗜碱、嗜盐海洋小单孢菌属、游动放线菌属、诺卡氏菌属等稀有放线菌数量均有显著增加,不同样品中新分离到链孢菌属、小双孢菌属、链孢囊菌属及其他未鉴定的海洋稀有放线菌,分离到属的数量提高了1-4个。【结论】微波处理不仅显著提高嗜碱和嗜盐海洋放线菌的分离数量,而且明显增加了海洋稀有放线菌的分离种类。     

Microwave irradiation is a useful tool for improving isolation of actinomycetes from soil

Actinomycetes are an important source of novel, biologically active compounds. New methods need to be developed for isolating previously unknown actinomycetes from soil. The objective of this experiment was to study microwave irradiation of soil as a means for isolating previously unknown actinomycetes. Soil samples were collected at ten elevations between 800 m and 3670 m on Taibai Mountain, Shaanxi Province, China. Moistened soil samples were irradiated at 120 W heating power (2450 MHz) for 3 min using a household microwave oven. Irradiation increased total actinomycete, streptomycete, and antagonistic actinomycete counts on three types of culture media. Irradiation also increased the number of culturable actinomycete isolates. Some actinomycete isolates were culturable only after the soil was irradiated, whereas other isolates could not be cultured after irradiation. Irradiation of soil from elevations >3000 m increased actinomycete counts significantly but had little effect on the number of culturable actinomycete isolates. In contrast, irradiation of samples from elevations <3000 m had relatively little effect on actinomycete counts, but significantly increased the number of culturable actinomycete isolates. We used 16S rDNA sequence analysis to identity 14 actinomycete isolates that were only culturable after irradiation. Microwave irradiation of soil was helpful for isolating Streptomyces spp., Nocardia spp., Streptosporangium spp., and Lentzea spp. Slightly more than 90% of the identified actinomycete species were biologically active. In conclusion, microwave irradiation is a useful tool for isolating biologically active actinomycetes from soil.     

Oligotrophy is Helpful for the Isolation of Bioactive Actinomycetes

It is necessary to develop new methods for the isolation of unknown actinomycetes from soils. To evaluate the effects of oligotrophic medium on the isolation of soil actinomycetes and develop a new isolation method, the Gause’s synthetic medium was diluted to one tenth the recommended concentration in the present study. Soil dilution plate technique was used to isolate actinomycetes from the soil samples. Oligotrophy decreased actinomycete and streptomycete counts, as well as the number of antagonistic actinomycete species. Oligotrophy also decreased the number of actinomycete species in five samples. Some actinomycete species were cultured only on the oligotrophic medium, whereas other species could not be cultured. Oligotrophy decreased actinomycete counts more significantly for soils with organic matter content >40 g/kg. We used 16S rRNA sequence analysis to identify 22 actinomycete species that were only cultured on the oligotrophic medium. Oligotrophic medium was helpful for the isolation of Streptomyces spp., Micromonospora spp. and Streptosporangium spp. Slightly more than 80 % of the identified actinomycete species were biologically active. Therefore, we could draw a conclusion that oligotrophic medium could be helpful for the discovery of new antibiotic producers and the exploitation and utilization of new, biologically active compounds.     

盐碱环境放线菌多样性研究

放线菌因产生多种多样的生物活性物质而受到重视。但极端环境放线菌的研究甚少。采用DGGE、纯培养法,重点研究了新疆、青海及埃及的重盐碱环境的放线菌分布情况,种类组成,生物学特性。发现了1个新科,8个新属及30多个新种。从嗜(耐)盐碱放线菌筛选到许多带有PKS基因的菌株。认为极端环境放线菌是生物活性物质的重要来源;改进分离程序,分离未知放线菌,是放线菌多样性研究及开发利用的前提之一;并对极端环境放线菌研究作了论述。     

Isolation of new actinomycete strains for the screening of new bioactive compounds

In order to facilitate the discovery of novel bioactive compounds from microorganisms, various techniques for isolation of new actinomycete strains have been attempted. Studies of the vertical distribution of actinomycetes in soil, isolation of actinomycetes from desert soils or fallen leaves, selective isolation of Kitasatospora strains using novobiocin or Actinoplanes strains using the chemotactic method, and the use of gellan gum as a solidifying agent were carried out. We discovered 9 novel bioactive compounds from actinomycete strains isolated under unusual conditions, and proposed two new genera, five new species and one new subspecies.     

西沙群岛海域海洋放线菌的分离及其抗菌活性

分离西沙群岛海域放线菌并研究其抗菌活性。采用干燥、辐射、冷冻及加热处理等11种样品预处理方式和10种培养基对海洋放线菌进行分离,对代表性菌株进行鉴定,并考察分离放线菌生长的海水依赖性。进一步以金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、啤酒酵母和扩展青霉为指示菌考察分离放线菌的抗菌活性。从西沙群岛海域样品中分离获得放线菌383株,其中专性海洋放线菌23株。选定93株代表菌株进行鉴定,93株菌隶属于9个科,11个属。不同培养基对分离放线菌菌株的数量及种类影响显著。6株放线菌对4种指示菌均有抑菌活性,其中4株为专性海洋放线菌,表明海洋环境具有丰富的放线菌资源,这些放线菌特别是专性海洋放线菌有望为新型抗菌物质的发现与开发提供菌种来源。     

药用昆虫喙尾琵琶甲肠道抗菌活性放线菌的筛选及鉴定

【目的】探究药用昆虫喙尾琵琶甲Blaps rynchopetera肠道具有抗菌活性的放线菌,为抗菌药物开发提供新的放线菌资源。【方法】结合稀释涂布法和选择培养法从喙尾琵琶甲成虫肠道分离放线菌。以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methieillin-resistant Staphylococus aureus)、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌Escherichia coli、粪肠球菌Enterococcus faecalis、鼠伤寒沙门氏菌Salmonella typhimurium 和铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa 6株致病细菌以及黑曲霉Aspergillus niger、青霉菌Penicillium expansum和白色念珠菌Canidia albicans 3株致病真菌为指示菌,通过牛津杯琼脂扩散法测试放线菌次生代谢产物的抗菌活性。随后,采用分子生物学方法进行16S rRNA序列分析鉴定活性显著的18株放线菌并构建系统发育树。【结果】从喙尾琵琶甲成虫肠道中分离到176株共生放线菌,初步活性筛选结果显示其中46株放线菌表现出不同程度的抗菌活性。多株放线菌对致病菌具有广谱的抑菌作用且抑菌圈直径超过阳性对照药。选择抑菌圈直径大于15 mm的18株放线菌进行分子鉴定,结果显示均为链霉属Streptomyces。【结论】喙尾琵琶甲肠道含有丰富的抗菌活性放线菌资源。     

一株皱叶南蛇藤内生放线菌的分离、鉴定及活性研究

目的:分离具有抗肿瘤作用与抗菌作用的内生放线菌,并对其进行分子鉴定和系统发育分析.方法:从皱叶南蛇藤中分离内生放线菌,通过滤纸片法和SRB法对其进行抗菌活性和抗肿瘤活性筛选,然后利用菌株形态特征、培养特征、生理生化特性和16S rRNA基因序列分析对活性菌株进行鉴定结果:从皱叶南蛇藤中分离到10株内生放线菌,其中内生放线菌LCB369具有较好的抗菌活性和抗肿瘤活性,该菌对5种致病菌和肝癌细胞株HepG2均有抑制作用.经分子分类学分析鉴定,该菌与Streptomyces microflavus 在同一个分支上,同源性为99%.结论:皱叶南蛇藤内生菌LCB369具有明显抗菌和抗肿瘤作用,经鉴定为链霉菌Streptomyces microflavus.