香蕉离体茎尖超低温保存研究

以香蕉(Musaspp.)试管苗为试材,对其离体茎尖小滴玻璃化法超低温保存的影响因素进行了研究。小滴玻璃化法和玻璃化法超低温保存后再生率的差异表明,香蕉更适合用小滴玻璃化法进行超低温保存。香蕉小滴玻璃化法超低温保存的方案如下:试管苗在60g/L蔗糖的MS培养基上培养1~2个月,剥离带有1~2片叶原基的茎尖,室温下装载30m in(可延长至4h),0℃下PVS2处理40~50m in。6个基因型的14个品种的再生率平均为46.9%。通过SSR分子标记检测,再生植株的遗传稳定性没有发生改变。该结果为香蕉种质资源的长期保存提供了理论依据和技术支撑。     

影响体胚发生途径香蕉(Musa spp.,AAB Group)植株再生的因素

香蕉品种‘Agbagaba'和‘Orishele'的胚性细胞悬浮系(ECS)在液体培养基中分别预培养1和2周后,将其接种在RD1和M3培养基上,于光照或黑暗条件下进行体胚的再生.从沉积细胞体积(SCV)为1 mL(1 mL SCV)的ECS获得的再生体胚数量因预培养时间、再生培养基的种类及培养条件的不同而异.植株的再生率及从1 mL SCV的ECS获得的再生植株数量也受上述体胚再生条件的间接影响.     

利用超低温保存方法脱除香蕉束顶病毒的研究

香蕉束顶病毒(BBTV)是香蕉生产中的严重病害之一,主要通过感病材料和香蕉交脉蚜等昆虫进行传播,目前尚无有效防治方法.本研究以感染BBTV的巴西蕉(Musa AAA Cavendish)为材料,研究了感染BBTV的巴西蕉离体再生和超低温保存技术条件,表明离体茎尖在MS+6-BA 4 0 mg/L+NAA 0 4 mg/L的培养基上分化不定芽较好;采用玻璃化法超低温保存技术保存带有BBTV的香蕉茎尖,再生后植株BBTV脱除率达到60 6%,而常规的茎尖培养对BBTV的脱除率仅为26 7%.     

从香蕉胚性细胞悬浮系获得再生植株

2个主栽香蕉品种的未成熟雄花诱导产生的胚性愈伤组织接种至液体培养基中,经3～4个月的继代培养后长成质地均匀的胚性细胞悬浮系(ECS),悬浮系中60%～80%是胚性细胞团.ECS接种至体胚再生培养基上约4～5周后开始出现再生体胚,萌发的体胚以MS培养基培养后可获得再生植株.     

香蕉植株根区土壤的真菌多样性分析

尖孢镰孢菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)是香蕉枯萎病的病原菌,该菌是一种土壤习居菌,了解香蕉根区土壤中真菌多样性及镰孢菌属(Fusarium)真菌所占比例,对如何减少土壤中的病原菌、预防香蕉枯萎病的发生有重要的指导意义。该文通过采集不同宿根年限的香蕉健康植株和枯萎病植株的根区土壤,利用高通量测序技术测定土壤样品中的真菌种群。结果表明:(1)同一宿根年限的香蕉植株中,健康植株根区土壤中所获的reads及OTUs数量均高于枯萎病植株,说明健康植株根区土壤的真菌多样性丰富于枯萎病植株。(2)除了一年生香蕉枯萎病植株以担子菌门(Basidiomycota)为主外,其他土壤样品中均以子囊菌门(Ascomycota)为主,其中的丛赤壳科最高相对丰度来自三年生健康植株的根区土壤(26.02%),其次是五年生的枯萎病植株根区土壤(15.56%)。(3)在丛赤壳科中,镰孢菌属在三年生健康植株土壤中的相对丰度最高(2.54%),在其他样品中的相对丰度在0.1%～0.65%之间;在镰孢菌属中,腐皮镰孢菌(Fusarium solani)的相对丰度(0～1.59%之间)高于尖孢镰孢菌(F.oxysporum),尖孢镰孢菌仅占很小的比例(相对丰度0～0.08%之间)。可见,在不同香蕉植株的根区土壤中,健康植株的根区土壤真菌多样性高于枯萎病植株,无论是健康植株还是枯萎病植株的根区土壤中,作为香蕉枯萎病病原菌的镰孢菌属或尖孢镰孢菌的群体均不占主导地位。     

抗冻蛋白(afp)基因表达载体的构建及对香蕉胚性细胞悬浮系的转化

通过PCR从‘京都七寸人参'胡萝卜基因组DNA中扩增抗冻蛋白基因,测序结果表明该基因的核苷酸序列与从宁夏‘吴忠'胡萝卜中克隆的完全一致。先后将获得的胡萝卜afp基因克隆和亚克隆至pMD18-T和pBI121,构建植物表达载体pBI121-afp。通过冻融法将pBI121-afp导入根癌农杆菌EHA105中。以香蕉栽培品种‘北大矮蕉'的胚性细胞悬浮系为受体,采用农杆菌介导法将胡萝卜afp基因导入其中,然后在Kanamycin的选择压力下通过体细胞胚发生途径进行植株再生。共获得抗性再生植株9株,其中两株经PCR检测呈阳性,可初步确定目的基因已经整合到这两株转基因香蕉植株的基因组中。     

黄瓜花叶病毒香蕉株系衣壳蛋白转基因烟草的研究

构了侵染香蕉的黄瓜花叶病毒两个株系的衣壳蛋白基因的植物表达载体,并通过农杆菌共培养法的基因枪法,分别将两个株系的ＣＰ基因转化入了两种烟草植株。其ＣＰ基因转化频率及植株再生率研究结果表明,农杆菌共培养法比基因枪法,土耳其烟比本生烟,农杆菌１：１０倍稀释液比培养原液和１：１００倍稀释液,具有更高的转化频率和植株再生能力。Ｓｏｕｔｈｅｍ ｂｌｏｔ,ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｍ ｂｏｌｔ检测ＣＰ基因整合研究结果     

外部因子对蝴蝶兰叶片原球茎状体发生的影响

对影响蝴蝶兰叶片原球茎状体 (PL B,Protocorm - like- body)发生和植株再生的外部因子进行了研究。结果表明 :BA是决定原球茎状体发生的主要因子 ;苹果汁、香蕉汁和椰子汁明显促进原球茎状体的形成 ;在 MS+BA5mg/L+椰子汁 15%的培养基中 ,蝴蝶兰叶片原球茎状体的诱导率可达 6 0 %以上 ;活性炭可有效防止外植体叶块变褐死亡 ;多效唑 1.5mg/L可促进再生植株根的形成 ,使叶片变厚变短变绿 ,使试管苗移栽成活率达 95%以上     

对枯萎病不同抗性的香蕉品种的内生细菌多样性及群落结构

【目的】了解抗感品种香蕉植株中内生细菌与香蕉枯萎病间的关系,从而为香蕉枯萎病的发生与防控提供一定的理论基础。【方法】通过基于16S rRNA的末端标记限制性片段长度多态性技术(Terminal restriction fragment length polymorphism,T-RFLP)分析健康和感枯萎病香蕉植株不同品种各组织,以及香蕉植株不同发病时间根组织中内生细菌的多样性和群落结构。【结果】抗病品种"农科一号"植株根、假茎、叶片各组织中内生细菌的种类基本都比感病品种"巴西蕉"的相应组织中的要丰富。感枯萎病香蕉植株根、假茎、叶片各组织中内生细菌种类基本都比健康植株各组织的丰富。在植株发病前、发病初期、再到发病后一个月的不同时期,对于抗病品种而言,其内生细菌的多样性都基本保持稳定,而感病品种则变化幅度较大。同时发现不同品种不同组织的内生细菌的优势种群有所不同,且不同品种健康和发病植株都存在一些特有优势种群。【结论】香蕉抗病品种比感病品种植株中内生细菌的多样性更丰富且更稳定;感枯萎病植株中的内生细菌种类比健康的丰富;而且不同抗性品种中健康和感病植株内的优势种群存在明显差异。     

香蕉通过胚状体途径的快速繁殖研究

采用吸芽顶端分生组织培养的方法快速繁殖香蕉已广泛应用于生产。近年来,我们通过胚状体途径的快速繁殖已取得成功。取香蕉花序顶端3—5厘米,分别将雄花、花苞片和花序轴剪碎作外植体。基本培养基为MS。诱导胚状体培养基为 MS 2,4-D2mg/L(单位以下同) BA0.5 NAA0.5,胚状体发育和分化培养基为 MS BA3.0 NAA0.2;加速再生植株生长培养基为 MS KT0.2 NAA0.     

滇黄芩再生植株中黄酮类化合物的组织化学定位及黄芩苷的含量测定

应用植物组织化学定位方法,研究了组织培养滇黄芩再生植株中黄酮类化合物的积累分布状态;并且通过HPLC对滇黄芩再生植株中黄芩苷的含量进行测定。结果表明,滇黄芩再生植株黄酮类化合物主要存在于营养器官的表皮和皮层,以及茎、叶腺毛中。同时,测定再生植株中黄芩苷的含量表明,地下部分(根)含量为0.12%;地上部分(茎、叶)含量为0.43%。     

植物凝胶和蔗糖对橡胶树体胚植株再生的影响

为了筛选巴西橡胶体胚植株最为适合的植物凝胶和蔗糖用量,该研究以巴西橡胶树无性系热研7-33-97成熟体细胞双子叶次生胚状体为材料,以添加0.23μmol·L~(-1)KT,0.11μmol·L~(-1)IAA和8.7μmol·L~(-1)GA3的MS培养基为植株再生培养基,研究了添加不同用量的植物凝胶和蔗糖对巴西橡胶树体胚植株再生和生长的影响。结果表明:在橡胶树体细胞胚植株再生培养基中,不同用量的植物凝胶对植株再生频率和植株生长状况有显著影响,较低浓度(0~1 g·L~(-1))时,随着用量增加,植株再生频率提高,但较高浓度(1~4 g·L~(-1))时,随着用量增加,植株生长受到抑制。植物凝胶添加1 g·L~(-1)时植株生长最好,植株再生率为(86.4±5.7)%,株高5 cm以上的占(53±9.4)%,带叶植株为(81.7±3)%;而蔗糖对植株再生频率影响不显著,但对再生植株生长的影响显著,低蔗糖(20~30 g·L~(-1))时促进植株抽叶但抑制茎干伸长,高蔗糖(70~80 g·L~(-1))时显著抑制抽叶但促进茎干伸长。蔗糖添加50 g·L~(-1)时植株生长最好,株高5 cm以上的占(57.6±5.4)%,株高5 cm以上带叶植株占(46.3±12.3)%,均为最高且从外观来看,在50 g·L~(-1)时植株茎干和根都较为粗壮。因此,在橡胶树体细胞胚植株再生培养基中,植物凝胶和蔗糖最佳用量分别为1 g·L~(-1)和50 g·L~(-1)。     

黄瓜子叶节高频再生体系建立及再生植株倍性观察

以‘农城3号’黄瓜子叶节为试材,研究不同苗龄、不同激素对黄瓜离体植株再生频率及再生不定芽的影响,并对再生植株进行了根尖染色体计数和叶片气孔保卫细胞叶绿体数目的鉴定。结果表明,(1)6-BA对黄瓜不定芽诱导起关键作用,IBA不利于黄瓜不定芽的诱导。(2)MS 2.0mg/L6-BA培养基是‘农城3号’黄瓜通过子叶节进行不定芽诱导再生植株的最佳培养基。(3)正常发育的无菌苗4~5d左右子叶不定芽再生频率较高,苗龄超过5d,不定芽再生频率明显下降。黄瓜子叶再生植株与实生苗的根尖染色体数目均为2n=14,再生植株与实生苗的气孔保卫细胞叶绿体数均分布在6~10的范围内,说明再生植株的倍性没有发生改变。     

植物病毒:对微繁殖的危害及其控制

目前:组织培养被广泛地用作植物快速增殖和种质传播的一种有效方法。然而,它可能会通过侵染培养物或侵染组织培养物衍生的植株的传播而将植物病毒大规模扩散。澳大利亚研究人员R. A. Drew等人已从感染有香蕉束顶病毒(BBTV)(在澳大利亚、亚洲和非洲的一种严重侵染香蕉的病毒)的香蕉树外植体中微繁殖出植株。这些植株尚未表现出病毒侵染症状,与未侵染的对照产生的微繁殖植株没有区别。然而,经16个月的培养后产生的植株有75％表现出BBTV侵染的症状。     

抑菌剂和筛选剂对香蕉受体系统的影响

本研究将抑制农杆菌生长的两种抑菌剂头孢霉素和特泯丁,以及3种筛选剂潮霉素B、卡那霉素和PPT除草剂,以不同浓度添加到香蕉的3种受体系统中,研究它们对香蕉组织生长与分化的影响.实验结果表明:不同抑菌剂和筛选剂对香蕉再生体系的影响程度不同,不同香蕉再生体系对相同抑菌剂和筛选剂的敏感性也不同,因此不同香蕉再生体系需要选择不同的抑菌剂与筛选剂的最佳的配比和组合配比.3种筛选剂在香焦的3种再生体系中的筛选能力顺序都为:PPT＞潮霉素B＞卡那霉素.     

组培广藿香形态特征及挥发油成分分析

对原产于广州石牌和海南的两个广藿香(Pogostemon cablin)栽培品种进行组织培养并获得了再生植株.用GC法对广藿香再生植株的挥发油成分进行分析研究.结果表明,广藿香两个品种的再生植株生长2～3个月后形态上有明显的差异.生长3个月的再生植株中,原产于广州石牌的广藿香挥发油含量为1.4%,低于原产于海南的广藿香(2.9%);而挥发油的成分中,广州石牌广藿香的广藿香酮含量为375.76 mg ml1,显著高于海南广藿香(7.82 mg ml1).这说明组织培养获得的再生植株保持了其原植物在形态、挥发油含量和成分上的差异性,为广藿香的品种分类提供了实验依据.     

杂交水稻体细胞再生植株的观察

改进了杂交水稻器官发生的再生植株的炼苗方法。采用两步炼苗法再将植株直接移栽入土,可使移栽成活率超过80％。观察了温室条件下成活的体细胞再生植株的生长、发育及结实情况。结果表明,再生植株的总叶片比实生植株减少,有效分蘖增加,抽穗期提早。但单株实粒数减少,种子粒形出现变异,单株之间粒重变异显著。总计对43株再生植株的粒重进行了统计分析,发现了7个粒重变异显著的单株,变异率为16.3％。起源子茎的再生植株与起源于幼穗的再生植株相比,各方面无显著差异。比较了再生植株与在同样条件下栽培的实生植株的种子发芽率,发现个别再生植株的种子发芽率有所下降。     

电融合获得用于选择抗CTV砧木的酸橙与甜橙体细胞杂种植株

在已知参数条件下,通过电场诱导酸橙(Citrus aurantium L.)叶肉原生质体和沙漠蒂甜橙(C.sinensis Osbeck cv.Shamouti)的胚性愈伤组织原生质体融合,融合产物经培养再生出40棵植株.染色体检查表明所得到的植株具有36条染色体,为四倍体植株.再生植株具有翼叶,叶片厚,表现出多倍体的特征.采用2个10-碱基随机引物鉴别再生植株的杂种特性.在2个引物的扩增带型中,再生植株的随机扩增带图里出现了融合亲本的特征带.对再生植株染色体计数和RAPD分析的结果表明它们是酸橙和甜橙种间异源四倍体体细胞杂种植株.这些体细胞杂种植株的获得为选择具有酸橙优良性状、同时抗CTV的新型砧木提供了好的试材.     

大豆组织培养再生植株

建立从离体培养高效率再生植株的程序是用细胞遗传操作改良农作物的一个先决步骤。从栽培大再组织培养能再生植株的报道,近年日渐增多(可参考文献)。其中,获得再生植株效率比较高的报道,所用的品种材料和     

柑橘抗寒细胞变异体的获得及其抗性遗传稳定性的研究

锦橙(Citrus sinensis (L.) Osbeck cv. Jincheng)珠心愈伤组织悬浮细胞通过γ射线诱变与高浓度羟脯氨酸离体选择的方法,获得了抗性细胞系,并再生植株。抗性细胞系及其再生植株比供体(对照)的抗寒性分别提高1.4 ℃和2.4 ℃,连续3年测定结果表明再生植株抗寒性的增强是稳定的。其叶片总DNA的RAPD分析说明供体与变异植株可能在DNA水平上存在细微的差异,冷驯化进一步加强抗性细胞系与再生植株在抗氧化酶SOD、过氧化氢酶(CAT)活性和脯氨酸(Pro)、丙二醛含量上的差异。变异系抗性增强的生理基础涉及Pro代谢外的其他途径,抗氧化酶活性的提高与其抗寒性的增强有关。