草鱼nrf1基因的克隆与表达及其应激响应研究

为研究跨膜转录因子核因子E2相关因子1 (Nuclear factor-erythroid 2 related factor 1, nrf1)在动物机体抗氧化应激过程中的作用,通过同源克隆获得草鱼nrf1基因序列,其开放阅读框为1560 bp,编码519个氨基酸;系统进化树分析表明草鱼nrf1与团头鲂(Megalobrama amblycephala)进化关系较近。对nrf1进行组织表达分析,结果显示nrf1在肝脏中表达水平最高,其次是心脏和肠道(P<0.05)。昼夜节律分析显示,在9:00时nrf1表达水平最高且显著高于3:00、12:00、18:00、21:00和24:00(P<0.05)。经急性氨氮胁迫处理24h和48h时,发现草鱼nrf1基因在低氨氮(5 mg/L)组和高氨氮(20 mg/L)组中表达量相对于对照组均显著升高(P<0.05);且低氨氮组nrf1表达量在24h时显著低于高氨氮组(P<0.05),而在48h时显著高于高氨氮组(P<0.05)。此外,研究使用3种不同蛋白源(鱼粉、菜粕和豆粕)饲料对草鱼进行生长实验,发现在养殖后14d、28...     

共轭亚油酸对草鱼肝脏和肌肉组织的细胞学形态、抗氧化能力以及脂肪代谢相关基因表达的影响

采用65d的生长实验研究共轭亚油酸(CLA)对草鱼肝脏和肌肉细胞学形态、抗氧化能力以及脂肪代谢相关基因表达的影响。共配制7种近似等氮(粗蛋白: 36 g/100 g)等脂(粗脂肪: 4.5 g/100 g)的饲料: 0 (对照组)、0.5 (CLA0.5)、1 (CLA1)、1.5 (CLA1.5)、2 (CLA2)、2.5 (CLA2.5)和3 g/100 g CLA (CLA3)。每个饲料组均设置3个生物学重复,实验鱼初始体重约为(5.08±0.08) g。实验结果显示:与对照组相比,CLA0.5-CLA2.5组草鱼肝脏和肌肉组织细胞学形态均无明显异常,但CLA3组肝细胞线粒体空泡化,内质网肿胀,排列过于紧密;肌细胞肌节结构松散,肌原纤维降解;在CLA1.5-CLA2.5组肝脏和肌肉中超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力均显著上升(P<0.05);在CLA1.5-CLA3组中肝脏过氧化氢酶(CAT)活力均显著高于对照组(P<0.05),但谷胱甘肽还原酶(GR)活力无显著变化(P>0.05),且在CLA0.5-CLA3组中肌肉CAT和GR活力均无显著变化(P>0.05)。CLA1.5-CLA2组肝脏中MDA含量显著低于对照组(P<0.05),而CLA2.5-CLA3组MDA含量显著高于对照组(P<0.05)。CLA3组肌肉中MDA含量显著高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,在CLA1.5-CLA2.5组肝脏和肌肉中乙酰辅酶A羧化酶(ACC) mRNA表达显著下调(P<0.05),脂蛋白脂酶(LPL)、激素敏感性脂肪酶(HSL)和过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)均显著上调表达(P<0.05)。在CLA2-CLA3组肝脏以及CLA1.5-CLA2和CLA3组肌肉中脂肪酸去饱和酶2(FAD2)mRNA显著上调表达(P<0.05)。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)mRNA在CLA1-CLA3组肝脏中显著下调表达(P<0.05),而其在肌肉中均无显著变化(P>0.05)。综上所述,结合2%CLA在不影响草鱼的生长和饲料利用,且显著降低肝脏脂肪积累,研究结果建议,2% CLA在不影响草鱼肝脏和肌肉组织细胞学形态的前提下,可有效提高其肝脏和肌肉组织抗氧化能力并促进其脂肪分解代谢以及抑制脂肪合成代谢相关基因表达。     

Keap1/Nrf2/ARE通路相关基因在热诱导的氧化应激小鼠肝脏中的表达

为了研究热应激对小鼠肝脏抗氧化功能及Keap1 (kelch-like ECH-associated protein- 1)/Nrf2（NF-E2-related factor 2）/ARE (antioxidant response element)通路相关基因表达的影响,选用30只8周龄雄性小鼠随机分成6组,每 d连续42 ℃热处理2 h,分别在热处理0 d(对照组)、1 d、2 d、4 d、8 d和12 d时观察肝脏组织形态学和免疫组织化学分析,另取一部分肝脏组织保存于-80 ℃用于后续荧光定量PCR实验,检测肝脏抗氧化指标及Keap1/Nrf2/ARE通路相关基因的表达．结果显示：小鼠的体表温度和直肠温度在热处理后都极显著高于热处理前．组织形态学观察发现,热处理导致小鼠肝脏组织充血和肝细胞水肿．小鼠肝脏氧化应激指标 MDA (malondialdehyde)含量在热处理第2 d较对照组显著升高,GSH (glutathione)含量、GSH-PX (glutathione peroxidase)活力和总SOD (superoxide dismutase)活力在第4 d和12 d都有升高．免疫组织化学发现,与对照组和第12 d组相比,Nrf2蛋白在第1 d,2 d,4 d,8 d表达明显,其中Nrf2蛋白在第4 d表达最为显著. 荧光定量RT PCR结果表明,与对照组比较Keap1基因的表达量从热处理第1 d开始显著降低,Nrf2基因的表达量在第4 d和12 d显著升高,HO-1 (Heme oxygenase-1)基因的表达量在第1 d显著升高,NQO1 (Quinone oxidoreductase)和GCLC (Glutamate cysteine ligase catalytic)基因的表达量在第1 d和4 d显著升高．上述结果表明,热应激引起了小鼠肝脏氧化损伤, Keap1/Nrf2/ARE通路可能参与了肝脏自身缓解热应激的过程.     

低温应激对吉富罗非鱼血清生化指标及肝脏HSP70基因表达的影响

实验旨在探讨急性低温应激对吉富罗非鱼(GIFT,Oreochromis niloticus)血清生化、免疫指标以及肝脏HSP70 mRNA水平的影响。实验选取平均体重为(177±2.18)g左右的吉富罗非鱼作为实验对象,设定(25±1)℃对照组和低温(9±1)℃冷应激试验组,每组设定5个平行组,分别在0、2、6、12h随机采样,测定血清血糖(GLU)、胆固醇(CHOL) 、甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、补体3 (C3)、补体4 (C4)、溶菌酶(LSZ)、皮质醇(COR)、三碘甲腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)以及肝脏HSP70mRNA水平。结果表明:与对照组相比,试验组GLU水平在冷应激后6h,TG水平在冷应激后2、6h,CHOL水平在冷应激后6、12h均有显著升高(P<0.05),ALT水平在冷应激后2、12h均有显著升高(P<0.05);试验组AST、COR、T3水平在冷应激2、6、12h时出现显著升高(P<0.05),C3、C4、LSZ水平在冷应激后2、6、12h均出现显著下降(P<0.05);与对照组相比,试验组HSP70mRNA水平在冷应激后的12h出现显著升高(P<0.05)。因此,急性低温应激可以提高吉富罗非鱼肝脏应激蛋白HSP70mRNA水平,影响该鱼的非特异免疫力和相关生理指标。     

热应激对齐口裂腹鱼非特异性免疫功能及细胞凋亡的影响

为研究热应激及恢复对齐口裂腹鱼（Schizothorax prenanti）机体损伤、非特异性免疫功能和细胞凋亡的影响,测定了热应激前（19℃,对照组）、热应激（27℃,0、2h、4h、8h、12h,实验组）及恢复适温6h后（19℃,恢复组）的非特异性免疫相关生理生化指标及细胞凋亡率。结果表明,超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）在应激0、4h、8h、12h后活性上升,应激0和12h与应激前差异极显著（P<0.01）;髓过氧化物酶（Myeloper oxidase,MPO）在热应激4h达到最大值;谷草转氨酶（Glutamic-oxalacetic transaminase,GOT）的活性实验组与对照组差异不显著,恢复6h后GOT活性极显著高于对照组（P<0.01）;谷丙转氨酶（Glutamic-pyruvic transaminase,GPT）在应激0、4h、12h和恢复到适温6h后的活性极显著高于对照组（P<0.01）;丙二醛（Malondialdehyde,MDA）含量在热应激2h、4h和12h时极显著高于对照组（P<0.01）,8h时显著高于应激前（P<0.05）,应激12h MDA含量达到最大值,恢复6h后MDA含量恢复至应激前水平（P<0.05）;补体3（Complement 3,C3）含量升高,在热应激12h时显著高于对照组（P<0.05）,恢复6h C3含量下降,与对照组差异不显著（P>0.05）。持续27℃热应激不同时间后,各实验组的细胞凋亡率都显著高于对照组（P<0.05）,且在处理4h时细胞凋亡率达到最高值（52.42%）,恢复19℃ 6h后细胞凋亡率显著降低（P<0.05）。研究表明,持续27℃热应激改变了机体非特异性免疫力,导致鱼体出现炎症,损伤细胞,恢复到适温后,鱼体各项机能逐渐恢复。研究结果可为深入研究齐口裂腹鱼高温适应调控机理提供基础数据,也为齐口裂腹鱼养殖、运输等过程中的温度控制提供科学依据。     

大黄素、维生素C及其配伍对团头鲂抗拥挤胁迫的影响

选取1200尾健康的团头鲂(Megalobrama amblycephala Yih),体重为(133.44±2.11)g,随机分成4组,其中1组为对照组,投喂基础日粮(含50.3 mg/kg维生素C,以L-抗坏血酸-2-多聚磷酸酯为Vc源),另外3组为试验组,投喂饲料是在基础日粮中分别添加60 mg/kg大黄素、700 mg/kg Vc、60 mg/kg大黄素+700 mg/kg Vc。饲养60d后,从各池中取25尾规格基本一致的鱼,进行连续48h的拥挤胁迫(100 g/L)实验,分别于0h、12h、24h、48h取样分析团头鲂血液和肝脏的生化指标以及肝脏两种HSP70s mRNA的表达水平,并统计各组鱼的累积死亡率。结果表明,在拥挤胁迫前,与对照组相比,大黄素、Vc组显著提高了团头鲂血清总蛋白(TP)、溶菌酶(LSZ)和碱性磷酸酶(AKP)的水平,肝脏超氧化物歧化酶(SOD)的活性和诱导型HSP70 mRNA的表达水平,降低了血清皮质醇(COR)、甘油三酯(TG)以及肝脏丙二醛(MDA)的含量(P<0.05),且大黄素组还显著提高了肝脏过氧化氢酶(CAT)的活性(P<0.05);配伍组虽然血清TP、LSZ以及肝脏HSP70 mRNA的水平显著升高,肝脏MDA的含量也显著降低(P<0.05),但均未表现出协同增效作用。在拥挤胁迫后,与对照组相比,大黄素、Vc组不同程度地提高了团头鲂血清TP和AKP的水平,肝脏SOD和CAT的活性以及HSC70和HSP70 mRNAs的表达水平,降低了血清COR、葡萄糖(GLU)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、TG以及肝脏MDA的水平,而LSZ活性表现为先下降后升高;在配伍组中,这些指标虽然有类似以上的变化趋势,但大多差异不显著(P>0.05),且同样未表现出协同增效作用。统计表明,大黄素和Vc组鱼的累积死亡率在拥挤胁迫24h、48h均显著低于对照组(P<0.05),而配伍组与对照组的差异均不显著(P>0.05)。由此可见,在基础日粮中添加大黄素60 mg/kg或Vc 700 mg/kg,可提高团头鲂的非特异性免疫力、抗氧化能力以及两种HSP70s mRNA的表达水平,增强鱼体的抗应激能力。二者配伍则效果不佳,其相互作用的机理还有待于进一步研究。     

多模式镇痛在全膝关节置换术中的疗效评价

目的:探讨联合关节周围注射镇痛药物和持续静脉镇痛的多模式镇痛对全膝关节置换术(total knee arthroplasty,TKA)患者功能恢复的疗效。方法:60例拟行单侧TKA的患者完全随机分为实验组(28例)和对照组(28例)。所有患者术前48 h开始服用塞来昔布(西乐葆)200 mg/次,每天2次。实验组患者术中膝关节周围注射镇痛药物,术后给予持续静脉镇痛(continuous intravenousanalgesia,CIA)。对照组患者没有运用关节周围注射药物,仅给予术后CIA。记录术后CIA用量、各时间点静止视觉模拟疼痛评分(rest visual analogue score,RVAS)、被动活动视觉模拟疼痛评分(passive visual analogue score,PVAS)和膝关节活动度(range of mo-tion,ROM),同时观察药物的毒副作用。结果:(1)实验组术后24、48 h内PCA的用量均显著低于对照组(P<0.05)。(2)实验组术后4、8、12、24、48 h的RVAS和24、48 h的PVAS均显著低于对照组(P<0.05);术后72 h两组间RVAS和PVAS的差异均无统计学差异(P>0.05)。(3)实验组术后第1、2、3 d的ROM均显著高于对照组(P<0.05),术后第l、2 w两组ROM之间的差异无统计学意义(P>0.05);实验组术后主动屈膝到90?所需的天数显著低于对照组(P<0.05)。(4)实验组中恶心、呕吐和追加药物的发生率均显著低于对照组(P<0.05),未发现伤口感染、延期愈合及组织坏死等并发症。结论:联合使用关节周围注射镇痛药物和持续静脉镇痛的多模式镇痛方案,可以有效的缓解TKA患者术后早期的疼痛,促进患者膝关节的功能恢复,减少了单一用药所产生的不良反应。该方案安全有效、操作简单,是一种值得推广的TKA术后镇痛方法。     

草鱼自噬相关基因Beclin1的克隆及其在MC-LR胁迫下的表达特征

为评估微囊藻毒素-LR (MC-LR)对鱼类自噬的影响, 根据转录组测序结果得到的EST序列, 采用RACE技术获得了草鱼(Ctenopharygodon idella)自噬基因Beclin1 (CiBeclin1)的cDNA全长序列。该基因序列全长1590 bp, 包括1344 bp的开放阅读框, 编码447个氨基酸, 分子量为51.2 kD, 理论等电点为4.88。CiBeclin1包含1个BH3和1个ECD结构域。CiBeclin1氨基酸序列与其他物种的相似性为88%—98%, 构建的进化树显示CiBeclin1与稀有鲫(Gobiocypris rarus)的Beclin1亲缘关系最近。实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测结果表明, CiBeclin1在肝、肾、脾等10种不同组织中均广泛表达, 但在肝脏组织中的相对表达量最丰富, 显著高于相对表达量最低的头肾组织(P<0.05)。在不同剂量(25和100 μg MC-LR/kg BW) MC-LR胁迫24h、48h、72h和96h后, 草鱼肝脏中CiBeclin1表达量均显著低于对照组的表达水平, 研究结果表明, MC-LR能抑制草鱼CiBeclin1的表达, 但MC-LR是否在该剂量下诱导了草鱼的自噬还有待于进一步研究。     

草鱼在摄食高能饲料后血清生化指标的动态变化

为研究草鱼(Ctenopharyngodon idella) 在摄食高能饲料后血清生化指标的动态变化, 选择均重为(55.0±2.5) g 的健康草鱼320 尾, 随机分成4 组, 每组4个重复, 分别以3组高能纯化饲料(分别以额外的蛋白质、脂肪、糊精供能, 高能饲料组较对照组总能量提高11%)及对照组饲料喂养草鱼11周后, 将鱼体禁食48h后采样(对照), 再饱食投喂, 在摄食后的2h、8h和24h取样, 测定实验鱼8种血清生化指标, 并对采样时间点(T)和不同饲料(D)进行双因素方差分析。为确保实验结果的准确性, 需要保证不同处理组的采样时间同步性, 即均在餐后同一时间点采样。结果显示: 除血清总胆固醇(TCHO)含量外, 血清碱性磷酸酶(ALP)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性, 以及血清甘油三酯(TAG)、葡萄糖(GLU)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)含量均受到采样时间点(T)即餐后时间的显著影响, 饲料(D)对上述8个指标亦均有显著影响, 且两者存在交互作用。草鱼血清GLU含量和血清AST活性均在餐后2h达到峰值, 血清ALT和ALP活性以及LDLC含量均在餐后24h达到峰值, 血清TAG含量在餐后8h达到峰值, 而血清TCHO和HDLC含量则无明显峰值。在餐后24h, 3个高能组的ALT活性和GLU含量较对照组显著升高, 血清AST和ALP活性以及TAG、TCHO和HDLC含量较对照组无显著差异。上述结果表明, 草鱼血清生化指标受到餐后采样时间点和饲料的显著影响。     

低盐度胁迫对银鲳幼鱼肝脏抗氧化酶、鳃和肾脏ATP酶活力的影响

通过逐级降低水体盐度的方法,将银鲳幼鱼分别在盐度25、20、15和10的条件下饲养120 h,检测不同盐度下、不同时间点银鲳幼鱼肝脏中抗氧化酶、鳃和肾脏ATP酶的活力.结果表明:随着盐度的降低和处理时间的延长,肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽-S-转移酶(GST)活力总体表现出先升后降的趋势(P<0.05);而过氧化氢酶(CAT)的活力除在盐度20的24 h和盐度15的48 h略有上升外,其他各时间点的酶活力均低于对照组(P<0.05);谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活力表现出逐步升高的趋势(P<0.05);谷胱甘肽还原酶(GR)活力在盐度15的24 h时出现上升,随后下降到较低水平(P<0.05).鳃和肾脏中Na+/K+-ATP酶和Ga2+/Mg2+-ATP酶活力总体均表现为先升后降的趋势(P<0.05),只是在两种器官中ATP酶上升的起始盐度和时间有所不同.适当降低水体盐度可以激活和增强银鲳幼鱼肝脏中的抗氧化酶、鳃和肾脏ATP酶活力,消除机体中过多的活性氧自由基和稳定细胞内外渗透压平衡.但不同酶被激活具有一定的组织器官特异性和时序性,而且当达到机体的耐受极限后,酶活力反被抑制.     

转基因抗病草鱼研究进展

草鱼是我国淡水养殖的著名品种。草鱼的疾病严重阻碍着我国水产业的发展。通过分析当前国内外转基因技术培育抗病草鱼的现状,对今后转基因抗病草鱼的研究作了展望。     

饲料氧化鱼油对草鱼肝胰脏结构和功能的损伤

为了探讨饲料氧化鱼油对草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肝胰脏组织结构及其功能的影响, 研究以豆油、鱼油及氧化鱼油作为饲料脂肪源, 分别设计鱼油组(6F)、豆油组(6S)、2%氧化鱼油(4S2OF)、4%氧化鱼油(2S4OF)及6%氧化鱼油(6OF)5组等氮、等能的半纯化饲料, 在池塘网箱中养殖72d。结果显示: 氧化鱼油显著增加草鱼血清ALB、GLB、MDA和GSH含量(P0.05), 显著降低肝胰脏GSH和SOD含量(P0.05); 氧化鱼油会显著增加草鱼肝胰脏指数及肝胰脏脂肪含量(P0.05), 且草鱼血清TG含量显著上升(P0.05), HDL/LDL显著下降(P0.05); 氧化鱼油使血清及肝胰脏TC含量显著增加(P0.05), 血清TBA显著下降(P0.05), 肝胰脏TBA显著上升(P0.05); 氧化鱼油会引起草鱼脂肪肝, 损伤肝胰脏细胞线粒体, 并导致肝胰脏细胞纤维化和组织萎缩。结果表明: 饲料添加氧化鱼油会引起草鱼氧化应激, 并降低草鱼肝胰脏抗氧化能力; 扰乱草鱼肝胰脏脂肪代谢, 引起脂肪肝; 影响胆汁酸肝肠循环, 使胆汁酸在肝胰脏中堆积, 并损伤肝胰脏细胞线粒体, 最终增加草鱼肝胰脏脂肪性肝炎发生率。     

Effect of berberine hydrochloride on grass carp Ctenopharyngodon idella serum bactericidal activity against Edwardsiella ictaluri

Bactericidal activity of grass carp (Ctenopharyngodon idella) serum was significantly enhanced when pre-treated with 15 mg l?1 or 3 mg l?1 of berberine hydrochloride, an effective component of several commonly used herbal medicines in aquaculture. The complement consumption experiment demonstrated that berberine hydrochloride can certainly activate fish complement system. The results of both experiments suggested that berberine hydrochloride could enhance the serum bactericidal activity in grass carp by activating the complement system and indicating the potential in the prevention or treatment of fish diseases.     

Antigenic analysis of grass carp reovirus using single-chain variable fragment antibody against IgM from Ctenopharyngodon idella

Grass carp (Ctenopharyngodon idella) is an important species of freshwater aquaculture fish in China. However, grass carp reovirus (GCRV) can cause fatal hemorrhagic disease in yearling populations. Until now, a strategy to define the antigenic capacity of the virus’s structural proteins for preparing an effective vaccine has not been available. In this study, some single-chain variable fragment antibodies (scFv), which could specifically recognize grass carp IgM, were selected from a constructed mouse naïve antibody phage display cDNA library. The identified scFv C1B3 clone was shown to possess relatively higher specific binding activity to grass carp IgM. Furthermore, ELISA analysis indicated that the IgM level in serum from virus-infected grass carp was more than two times higher than that of the control group at 5–7 days post infection. Moreover, Western blot analysis demonstrated that the outer capsid protein VP7 has a specific immuno-binding-reaction with the serum IgM from virus-infected grass carp. Our results suggest that VP7 can induce a stronger immune response in grass carp than the other GCRV structural proteins, which implies that VP7 protein could be used as a preferred immunogen for vaccine design.     

池塘循环水养殖对混养草鱼食用品质的影响

为探究养殖模式对草鱼(Ctenopharyngodon idellus)鱼肉品质的影响,实验对两种养殖模式下(传统池塘养殖和池塘循环水养殖)草鱼的食用品质进行了差异比较。结果表明,循环水养殖草鱼肌肉白度和弹性高于传统池塘养殖的草鱼,且其不饱和脂肪酸和必需氨基酸含量均显著高于传统池塘养殖;其中, n-3和n-6系列不饱和脂肪酸含量显著高于传统池塘养殖草鱼,是其1.2倍,使得草鱼的肌肉品质和营养品质更佳。此外,循环水养殖可降低草鱼中带有土腥味和青草味的己醛、庚醛和1-辛烯-3-醇等物质的含量,且鲜味核苷酸(IMP)含量高于传统池塘养殖草鱼,使得草鱼的风味更鲜美、浓厚。研究表明,循环水养殖草鱼的肌肉品质和营养特性均优于传统池塘养殖。     

Comparative study on the gut microbiotas of four economically important Asian carp species

Gut microbiota of four economically important Asian carp species(silver carp, Hypophthalmichthys molitrix; bighead carp,Hypophthalmichthys nobilis; grass carp, Ctenopharyngodon idella; common carp, Cyprinus carpio) were compared using 16 S rRNA gene pyrosequencing. Analysis of more than 590,000 quality-filtered sequences obtained from the foregut, midgut and hindgut of these four carp species revealed high microbial diversity among the samples. The foregut samples of grass carp exhibited more than 1,600 operational taxonomy units(OTUs) and the highest alpha-diversity index, followed by the silver carp foregut and midgut. Proteobacteria, Firmicutes, Bacteroidetes and Fusobacteria were the predominant phyla regardless of fish species or gut type. Pairwise(weighted) UniFrac distance-based permutational multivariate analysis of variance with fish species as a factor produced significant association(P0.01). The gut microbiotas of all four carp species harbored saccharolytic or proteolytic microbes, likely in response to the differences in their feeding habits. In addition, extensive variations were also observed even within the same fish species. Our results indicate that the gut microbiotas of Asian carp depend on the exact species, even when the different species were cohabiting in the same environment. This study provides some new insights into developing commercial fish feeds and improving existing aquaculture strategies.     

Optimization of gelatine extraction from grass carp (Catenopharyngodon idella) fish skin by response surface methodology

To establish the optimum gelatine extraction conditions from grass carp fish skin, response surface methodology (RSM) was adopted in this study. The effects of concentration of HCl (%, A), pre-treatment time (h, B), extraction temperature ( degrees C, C) and extraction time (h, D) were studied. The responses were yield (%) and gel strength (g). A=1.19%, B=24 h, C=52.61 degrees C and D=5.12h were determined as the optimum conditions while the predicted responses were 19.83% yield and 267 g gel strength. Gelling and melting points were 19.5 degrees C and 26.8 degrees C, respectively. Moreover, grass carp gelatine showed high contents of imino acids (proline and hydroxyproline) 19.47%. RSM provided a powerful tool to optimize the extraction parameters and the results may be adapted for industrial extraction of gelatine from grass carp fish skins.     

微囊藻毒素与细菌内毒素对草鱼淋巴细胞凋亡的联合毒效应

采用体外暴露方式,以草鱼淋巴细胞为试验对象,研究了水体中微囊藻毒素(MC-LR)与细菌内毒素(LPS)复合作用对鱼免疫系统的影响.结果表明： MC-LR和LPS在单一与复合暴露下都能够诱导草鱼淋巴细胞发生凋亡,呈现细胞凋亡典型的阶梯状DNA电泳特征.但对比复合暴露与单一暴露的凋亡率可以发现,MC-LR与LPS复合暴露会发生协同作用,并呈显著剂量-效应关系,其中复合暴露Ⅳ组凋亡率为单一暴露Ⅰ(MC-LR)和Ⅱ(LPS)组的2-1和3.3倍.MC-LR可协同LPS抑制谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性,引发细胞内活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)水平上升,导致DNA损伤,致使淋巴细胞阻滞于G0期,增殖受到明显抑制,加速鱼淋巴细胞的凋亡,提高细胞凋亡率.表明MC-LR能够协同LPS加剧其对鱼体免疫细胞毒性,对水产养殖业产生严重不利影响.     

草鱼感染GCRV后血液中淋巴细胞变化及BCL10表达分析

为了研究草鱼BCL10基因在草鱼出血病中的应答机制, 文章克隆了BCL10基因, 并利用生物信息学、荧光定量和血涂片等技术对其进行了分析。生物信息学结果显示, BCL10基因开放阅读框为738 bp, 编码245个氨基酸。实时荧光定量PCR结果显示, 感染病毒后草鱼体内BCL10表达量持续上调, 在肝胰腺和中肾中第4天达到峰值, 第7天表达量开始下调。血涂片显微镜观察发现了血液中淋巴细胞在感染病毒后第1到第4天下降, 第7天时上升。肾脏的组织病理学观察也发现中肾中肾小管上皮细胞第1到第7天逐渐空泡化, 脱落坏死。以上结果表明, BCL10基因参与了草鱼应对草鱼呼肠孤病毒(GCRV)入侵的免疫应答。     

转基因鱼离市场还有多远

根据本实验室转基因鱼育种研究的现状,讨论了“转基因鱼离市场还有多远”这一令人关注的问题。转草鱼生长激素重组基因（ＣＡｇｃＧＨ）鲤鱼具有明显的快速生长和饵料节省效应,鱼体有高干物质含量及高蛋白低脂肪的生化组成,是一种优质食用鱼。把一种鱼的基因转移到另一种鱼,即转“全鱼”基因后,受体鱼基因组改变的程度,仅相当于两种杂交的１０万分之一左右,因而它对水生态系统的胁迫作用轻微的,充其量可视为与相应杂交鱼实质