大肠埃希菌耐药性水平传播实验研究

目的研究重症监护病房（ICU）患者标本中分离的大肠埃希菌的耐药情况以及耐药性水平传播的实验研究。方法采取双纸片法（K-B）检测细菌的耐药性;产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌为供体菌,耐利福平大肠埃希菌（对其他抗生素敏感）作为受体菌进行接合实验;采用聚合酶链反应（PCR）技术扩增整合子和耐药基因。结果30株大肠埃希菌中产ESBLs菌株检出率为46．7％;接合培养后,接合菌携带23kb和25kb大质粒,而无供体菌中一系列小质粒;供体菌和接合菌均携带I型整合子。结论大肠埃希菌耐药性严重,且呈多重耐药性;产ESBLs菌株可通过质粒和整合子将耐药基因转移给敏感菌,导致耐药性传播。     

宋内志贺氏菌1173质粒基因组及耐药基因转移机制

【目的】研究质粒介导宋内志贺氏菌1173耐药基因bla_(CTX-M-64)转移的机制。【方法】用双纸片协同扩散法验证1173是否产超广谱β-内酰胺酶(ESBL),用PCR扩增鉴定其携带的耐药基因,接合转移实验检验其耐药质粒是否可通过接合转移给其他细菌,并对接合子是否产ESBL和携带耐药基因进行检验,利用VITEK~?2检测1173和接合子的耐药谱,提取质粒进行高通量基因组测序,并对质粒序列进行生物信息学分析,以研究其耐药基因转移机制。【结果】1173是产ESBL的多药耐药宋内志贺氏菌,携带的耐药基因有bla _(CTX-M-64)和bla _(TEM),其中的bla _(CTX-M-64)可通过接合转移作用传递给受体菌EC600,并使接合子具有相应的耐药谱。经序列测定和生物信息学分析表明,介导bla _(CTX-M-64)水平转移的是ISEcp1-bla_(CTX-M-64)-Δorf477转座单元。【结论】质粒携带的bla_(CTX-M-64)介导1173对多类抗菌药物的耐药,ISEcp1-bla_(CTX-M-64)-Δorf477转座单元介导bla_(CTX-M-64)在细菌间的转移。     

伤寒沙门菌耐药质粒体内接合转移的研究

目的研究伤寒沙门菌耐药质粒pRST98在小鼠体内向大肠埃希菌的接合转移,比较质粒在体内、外接合转移的异同。方法由于伤寒沙门菌是一种只对人类致病的病原菌,因此将伤寒沙门菌的耐药质粒pRST98导入遗传背景明确的鼠伤寒沙门菌低毒株RIA中,用接合子pRST98/RIA口饲BALB/c小鼠进行体内接合转移。结果在体外伤寒沙门菌很容易将pRST98转移给大肠埃希菌E.coliK12W1485(F-)RifrLac+,该接合子又可将pRST98转移给鼠伤寒沙门菌RIA,但在不同宿主菌中耐药标志的表达有差异。未经人工感染小鼠肠道分离的大肠埃希菌耐药情况严重,口饲pRST98/RIA后出现了部分耐药标志与pRST98耐药谱相同的大肠埃希菌,但有些抗生素的耐药标记未能表达。质粒检测显示体内形成的接合子均含耐药质粒pRST98。结论伤寒沙门菌耐药质粒pRST98在动物体内、外均可转移给大肠埃希菌,但同一质粒在体内、外大肠埃希菌株中耐药标志表达有差异,即使在同一小鼠体内分离的不同接合子,pRST98/E.coli菌株耐药性亦有不同,显示耐药质粒表达的多样性和复杂性。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的耐药性分析

目的:了解产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌在泌尿系统感染中的流行情况及对12种常用抗菌药物的耐药性,为临床合理使用抗生素提供必要依据.方法:采用K-B纸片扩散法,测定128株大肠埃希菌对12种抗菌药物的耐药性,同时使用E-test方法筛选超广谱β-内酰胺酶阳性菌株.结果:从128株大肠埃希菌中共检出ESBL 26株,产ESBL细菌阳性率为20.3%.在12种抗菌药物中,亚胺培南的体外抗菌活性最好,敏感率为100%,其次为阿米卡星(90.5%).结论:产ESBL细菌多重耐药现象严重,只有正确使用抗生素才能降低ESBL的发生,而对于产ESBL菌株感染的治疗,亚胺培南应作为首选药物.     

产ESBLs大肠埃希菌整合子及其相关基因盒的研究

目的检测产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌中整合子的整合酶及插入的相关基因盒情况,分析整合子对细菌耐药性的影响。方法采用K-B琼脂扩散法对45株临床分离的产ESBLs大肠埃希菌进行药敏试验;应用PCR法检测45株产ESBLs大肠埃希菌Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子;对Ⅰ类整合子阳性菌进行整合子相关基因盒检测。结果45株菌中有27株（60．0％）含有Ⅰ类整合子,没有检测到Ⅱ类和Ⅲ类整合子阳性菌。在Ⅰ类整合子阳性菌中,有23株携带Ⅰ类整合子相关基因盒（85．2％）,5种不同的基因盒图谱,片段大小在600～2322bp,分离自同一科室的部分菌株携带大小相同的基因盒;Ⅰ类整合子阳性菌株的耐药率高于整合子阴性的菌株。结论Ⅰ类整合子及整合子相关基因盒在产ESBLs大肠埃希菌株中分布广泛,整合子在细菌耐药中发挥作用。     

产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌呼吸道分离株的基因分型及耐药性分析

目的了解深圳市人民医院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌呼吸道分离株超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型特点及耐药性。方法采用临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的表型确证试验筛选出该院呼吸道分离株产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共78株。应用PCR及DNA测序法分析产酶株的TEM、SHV及CTX-M3种β-内酰胺酶基因,用琼脂稀释法测定细菌最低抑菌浓度(MIC)。结果 37株产ESBLs大肠埃希菌中,28株(75.7%)检出CTX-M-14基因,4株(10.8%)检出CTX-M-9基因,其他型较少见。41株肺炎克雷伯菌中,25株(61.0%)检出SHV-12基因,4株(9.8%)检出SHV-11基因,其他SHV型较少。20株(48.8%)检出CTX-M-14基因,5株(12.2%)检出CTX-M-3基因,其他型较少。产ESBL菌株均对亚胺培南敏感,对氨苄西林/舒巴坦的耐药率最高(90%),对其他抗生素有不同程度耐药。结论深圳市人民医院呼吸道分离的产ESBLs大肠埃希菌以CTX-M-14型为主,产酶肺炎克雷伯菌以SHV-12和CTX-M-14型为最常见。     

中药抗耐药大肠埃希菌研究进展

近年来,耐药大肠埃希菌感染日趋严重,产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌株不断增加,由于细菌的多重耐药性,西药抗生素治疗效果差.医药工作者将新药物研究的方向投向中药.本研究就近年来中药抗耐药大肠埃希菌研究进展进行综述.     

产ESBL克雷伯菌与大肠埃希菌质粒分布的初步研究

比较产超广谱 β 内酰胺酶克雷伯菌与大肠埃希菌质粒的表型与分布。用BlaTEM引物经PCR技术将 5 1株克雷伯菌与 2 9株大肠埃希菌编码产超广谱 β 内酰胺酶的质粒扩增 ,琼脂糖凝胶电泳分离目的片段后得到完整的质粒电泳图谱。克雷伯菌与大肠埃希菌存在有相同大小的产超广谱 β 内酰胺酶的质粒。 2种细菌有产ESBL相同质粒 ,PCR技术可用于产超广谱 β 内酰胺酶细菌质粒的分析。     

医院与社区获得性感染大肠埃希菌耐消毒剂基因比较分析

目的 比较在本地区医院感染与社区获得性大肠埃希菌中耐消毒剂基因的流行情况.方法 收集从临床标本中分离出的大肠埃希菌112株,根据感染途径不同,将其分为医院与社区获得性两组,用PCR方法检测耐消毒剂基因qacE△1,并进行组间检出率比较.结果 本地区医院与社区获得性感染大肠埃希菌耐消毒剂基因的携带率分别为58.1％(43/74)和23.7％ (9/38),组间比较差异有统计学意义(P ＜0.05);74株医院获得性大肠埃希菌中,产ESBL率为71.6％(53/74),38株社区获得性大肠埃希菌中,产ESBL率为39.5％ (15/38).医院与社区获得性产ESBL大肠埃希菌耐消毒剂基因qacE△1检出率分别为64.2％(34/53)与6.7％(1/15),组间比较差异亦有统计学意义(P＜0.01).结论 医院获得性感染大肠埃希菌耐消毒剂基因的携带率高于社区获得性大肠埃希菌,产ESBL阳性菌株的携带率显著高于产ESBL阴性菌株,这可能是由于医院环境中消毒剂选择压力和/或携带耐消毒剂基因的菌株在医院内水平传播速度较快的结果.     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌感染及耐药性分析

大肠埃希菌是临床最常见的病原菌之一,近年来产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌感染不断增加,给临床治疗带来了很大的难度。因此,了解其感染与耐药状况,对指导临床合理应用抗生素显得至关重要。笔者对2002年1月～2003年6月临床分离的产ESBLs大肠埃希菌感染情况及耐药性进行了分析,并与不产ESBLs大肠埃希菌进行了比较,现报告如下。     

ICU病区大肠埃希菌中qnr基因的分布与耐药性的研究

目的调查温州医科大学附属第一医院ICU病区分离的大肠埃希菌基因的分布以及与耐药谱的关系,并初步探讨其在分子流行病学中的作用。方法收集2012年1-9月ICU病区分离的大肠埃希菌76株进行qnr基因检测,并通过DNA直接测序确定;分析qnr基因在ICU病区分离的大肠埃希菌的分布及其与耐药性的关系。结果根据PCR产物片段大小及测序分析,76株大肠埃希菌中共有qm基因阳性菌株46株,阳性率为60. 5% ;对阳性菌株进行DNA测序、BLAST比对,其中25株为qnrB基因,17株为qnrS基因阳性,12株基因阳性,未检测到qwC和qnrD基因。在46株qnr基因阳性菌株中有38株为产ESBL菌株,而在qnr阴性菌株中仅有5株ESBL阳性。结论该院ICU分离大肠埃希菌qnr基因携带严重,呈现出多重耐药性,多伴随呈现为产ESBL菌株。     

ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌整合子分布及其与ESBLs基因关系研究

目的研究整合子在院内感染ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌中的分布及其与细菌耐药的相关性,探讨Ⅰ类整合子在ESBLs基因水平转移中的作用及其与ESBLs基因型的关系。方法运用K-B法,纸片扩散法,PCR,接合传递试验、套式PCR、质粒谱分析及DNA测序研究携带耐药基因的Ⅰ类整合子与耐药播散的关系。结果产ESBLs和非产ESBLs菌株中Ⅰ类整合酶扩增阳性例数分别是70例（占66.7%）和22例（占22.4%）,2组整合子阳性率差异有统计学意义（P〈0.01）。整合子阳性组中ESBLs、多重耐药菌均明显高于阴性组。产ESBLs菌株中blaSHV、blaCTX和blaTEM基因与整合子经质粒共同转移的频率分别是79.3%、58.5%和45.1%。结论整合子在产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌中的分布明显高于非产ESBLs菌株,主要为Ⅰ类整合子,并参与产ESBLs菌株多重耐药性的形成,其中blaSHV基因型与整合子经质粒共同转移的频率高于其他两类基因,提示SHV型酶在浙南地区具有更强的扩散优势。     

新生儿病区产ESBLs大肠埃希菌整合子及其耐药性分析

目的 了解新生儿病区产ESBLs大肠埃希菌整合子的携带情况及其耐药性.方法 采用K-B琼脂扩散法对56株产ESBLs大肠埃希菌进行药敏试验;应用PCR法检测Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子;以肠杆菌科重复序列-聚合酶链式反应(ERIC-PCR)进行基因分型.结果 56株产ESBLs大肠埃希菌的Ⅰ类整合子检出率为60.7％,未检出Ⅱ类和Ⅲ类整合子;菌株对庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明、头孢唑林、氨曲南、头孢他啶的耐药率差异有统计学意义(P＜0.05),阳性菌株的耐药率高于阴性菌株;56株大肠埃希菌分为45种基因型.结论 Ⅰ类整合子广泛存在于新生儿病区产ESBLs大肠埃希菌并与其耐药性相关.     

2921株大肠埃希菌的临床分布与耐药分析

目的了解近五年来本院分离的大肠埃希菌(ECO)的临床分布和耐药性变化,为临床合理治疗大肠埃希菌引起的感染提供参考。方法采用VITEK-32全自动微生物分析系统,对2009-2013年分离的大肠埃希菌进行菌株鉴定和药物敏感试验,用WHONET 5.4软件进行耐药统计分析。结果 2009-2013年本院共分离出2 921株ECO,2009-2012年大肠埃希菌主要分离自尿液,平均占29.4%,2013年大肠埃希菌主要分离自血液,占27.6%;2011-2013年产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌平均检出率为70.1%,高于2009-2010年的平均检出率64.1%(P0.05);主要来源于普外科和ICU,分别占22.1%、18.4%;非产ESBLs大肠埃希菌对头孢替坦、哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南的耐药率高于产ESBLs大肠埃希菌(P0.05),对本研究其他药物的耐药率,非产ESBLs大肠埃希菌低于产ESBLs大肠埃希菌(P0.05);产ESBLs大肠埃希菌对氨苄西林、头孢唑啉、头孢曲松、氨苄西林/舒巴坦的耐药率均90%,非产ESBLs大肠埃希菌对氨苄西林的耐药率70%。结论大肠埃希菌是临床常见致病菌,本市产ESBLs大肠埃希菌的分离率非常高,耐药问题十分严重,应加强合理使用抗菌药物管理,定期监测,控制耐药菌的产生,预防医院感染暴发流行。     

老年大肠埃希菌血流感染患者的临床分析

为探讨老年大肠埃希菌血流感染患者的临床特点及药敏结果,回顾性分析徐州医科大学附属医院2013年1月-2016年12月340例大肠埃希菌血流感染老年患者的临床资料及药敏结果,采用SPSS软件进行分析。结果显示,患者均合并基础疾病(恶性肿瘤、高血压病、糖尿病、肺部感染等);感染途径主要为消化道(38.5%)、呼吸道(36.8%)和泌尿道(22.6%);检出产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamase,ESBL)大肠埃希菌96例(28.2%);ESBL阳性菌对氨苄西林、复方磺胺甲恶唑、环丙沙星、哌拉西林、第3代头孢、左氧氟沙星的耐药率均高;所有菌株均对碳青霉烯类敏感。结果提示,该院老年大肠埃希菌血流感染患者均合并基础疾病,常见感染途径是消化道、呼吸道和泌尿道,ESBL阳性大肠埃希菌除对碳青霉烯类抗菌药物敏感外,对多种抗菌药物耐药。     

亚抑菌浓度头孢西丁对耐药质粒接合转移的影响

目的探讨亚抑菌浓度头孢西丁对耐药质粒接合转移的影响,研究病原菌耐药性播散的产生机制。方法采用聚合酶链反应（PCR）分析临床分离的63株产ESBLs肺炎克雷伯菌株SHV型β-内酰胺酶编码基因。质粒接合转移试验采用肉汤接合法。研究不同亚抑菌浓度头孢西丁（0、1、0.5、0.25、0.125μg/ml）和不同作用时间（2、4、6、8、10、12 h）下临床产ESBLs肺炎克雷伯菌株供体菌与受体菌E.coliC600接合转移频率的变化。结果63株临床分离的产ESBLs肺炎克雷伯菌株有41株扩增出SHV型基因,阳性率为65.08%。随着亚抑菌浓度头孢西丁作用时间的增加,接合转移频率有随之增加的趋势。在相同作用时间下,头孢西丁浓度0.125μg/ml作用下的接合转移频率高于其他亚抑菌浓度的作用。结论应合理使用抗菌药物,减少抗菌药物的选择性压力,防止耐药细菌传播。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌blaCTX-M基因的检测

目的了解产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶 (ESBLs) 大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌在深圳市人民医院的分布情况.方法应用美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的表型确证试验,从2000年6月～2003年8月该院临床标本分离株中筛选出不重复的产ESBLs菌株215株,其中大肠埃希菌151株,肺炎克雷伯菌64株,应用聚合酶链反应(PCR)检测所有产ESBLs株的bla(CTX-M)基因.结果 PCR结果显示,大肠埃希菌bla(CTX-M)基因阳性率为92.1%(139/151),肺炎克雷伯菌的阳性率为65.6%(42/64).bla(CTX-M)基因阳性菌株主要来源于临床送检尿和痰标本,并广泛分布于20多个临床科室.结论该院临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产生的ESBL大多数为CTX-M型,该类酶广泛分布于各临床科室,需引起重视.     

重症监护病房产ESBLs菌的基因分型

目的了解深圳市人民医院重症监护病房分离菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的检出率及其基因型分布情况。方法收集来自重症监护病房大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分离株48株,采用CLSI推荐的表型确证方法筛选出ESBLs株,并利用PCR及DNA测序法分析产酶菌株的ESBL基因型。结果（1）48分离株菌中共检出产ESBLs菌24株,阳性率为50.0%。（2）产酶菌中93.8%（15/16）的大肠埃希菌和87.5%（7/8）的肺炎克雷伯菌分别检出CTX-M基因;其中72.7%（16/22）为CTX-M-14。6株肺炎克雷伯菌检出SHV基因,其中3株为SHV-11型,另3株为SHV-12型,6株含SHV基因的肺炎克雷伯菌中5株合并CTX-M基因。而所有大肠埃希菌株均未检出SHV基因。所有产酶菌中,分别有10株大肠埃希菌和2株肺炎克雷伯菌检出TEM-1基因,其中1株大肠埃希菌只检出TEM-1基因,未检出SHV型或CTX-M型基因。结论重症监护病房分离菌ESBLs检出率高,以CTX-M-14为主要基因型。     

临床产ESBLs大肠埃希菌整合子检测及基因型分析

了解临床分离的产ESBLs大肠埃希菌(ESBLs-producing Escherichia coli,ESBL-EC)中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合子及ESBL-EC基因型的分布。收集2014年1月至12月某三甲医院住院患者分离的大肠埃希菌,经全自动细菌分析系统鉴定并检测其对临床常用抗菌药物的耐药性,双纸片协同试验确定ESBL-EC,采用聚合酶链反应(PCR)对整合子基因和ESBLs基因进行检测。K-B法比较整合子阳性菌株与阴性菌株的耐药率。结果发现,98株临床非重复ESBL-EC对青霉素类、头孢菌素类、喹诺酮类、单环酰胺类和庆大霉素耐药率均大于50%,对妥布霉素耐药率为31.62%,对呋喃妥因、阿莫西林/克拉维酸和阿米卡星较敏感,分别为11.11%、13.4%和6.12%;对碳青霉烯类抗菌素、替加环素和哌拉西林/他唑巴坦敏感率为100%。98株菌中检出47株含Ⅰ类整合子(47.96%),3株含Ⅱ类整合子(3.06%),所有菌株中有1株同时含Ⅰ类和Ⅱ类整合子,未检出Ⅲ类整合子。整合子阳性菌株对四环素和复方新诺明的耐药率高于整合子阴性菌株(P0.05)。98株菌中β-内酰胺酶基因TEM、CTX-M-9、CTX-M-1、CTX-M-2和SHV阳性率分别为62.24%、53.06%、32.65%、4.08%和3.06%,ESBL-EC基因分型分布以TEM合并CTX-M-9型(共30株)最多见,占30.61%。结果表明,Ⅰ类整合子在产ESBLs大肠埃希菌中分布广泛,本研究尚不足以证明整合子的存在可影响ESBL-EC菌株抗生素耐药水平。同时携带TEM和CTX-M-9基因是安徽医科大学解放军174临床学院产ESBLs大肠埃希菌临床耐药菌株产生的主要原因。     

血流感染患者大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶及耐药性分析

目的分析血流感染患者大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶（Extended—Spectrum Beta Lactamases,ESBLs）的现状及其耐药特征,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法对浙江省上虞市人民医院2011年1月至2012年12月住院患者血培养分离的96株大肠埃希菌,采用纸片扩散表型确证试验进行ESBLs检测,用K．B法做药敏试验。结果血培养的大肠埃希菌分离率2011年、2012年分别为19．48％、17．47％。大肠埃希菌产ESBLs的检出率2011年、2012年分别为60．00％、60．78％。产ESBLs菌株对多种抗菌药物的耐药率显著高于不产ESBLs菌株。无论大肠埃希菌是否产ESBLs,碳青霉烯类抗生素均具有很高的敏感率。结论血流感染患者分离的大肠埃希菌产ESBLs比率高,产ESBLs菌株对多种抗菌药物耐药性高。可经验性使用碳青霉烯类抗生素治疗大肠埃希菌所致的血流感染。