豌豆细胞中rRNA前体剪切位点研究

利用ITS1探针原位杂交标记和抗核仁纤维蛋白单克隆抗体免疫标记技术, 研究了豌豆(Pisum sativum)根端分生细胞中rRNA的剪切位点. 结果表明, rRNA前体剪切发生在核仁的致密纤维组分(dense fibrillar component, DFC)和颗粒组分(granular com- ponent, GC), 而纤维中心(fibrillar center, FC)没有标记信号. 放线菌素D(actinomycin D, AMD)处理豌豆根端分生组织细胞, 使rDNA的转录受到抑制. 随着AMD处理时间的延长, rRNA剪切的标记信号逐渐减弱, 说明rRNA前体的剪切是一个逐渐的过程.     

丁酸钠对人胃腺癌MGC-803细胞核仁纤维中心和银染蛋白的影响

用透射电镜观察到MGC-803细胞的核仁是网织型的,在网眼内分布有电子密度低的纤维中心。MGC-803细胞经丁酸钠作用后,其核仁的类型发生了改变,多呈环型的,核仁的中央有一个大的纤维中心;纤维中心和银染颗粒的大小和数目明显减低;用图像分析仪测得核仁银染蛋白所占面积与核总面积的比值也明显降低。结果提示:丁酸钠可能通过抑制rRNA合成和rDNA转录活性调控MGC-803细胞的增殖。     

豌豆细胞核仁中U3 snoRNA的分布和转运

rRNA前体剪切是发生在核仁中重要生物学事件。U3 snoRNA作为rRNA的一个剪切因子被认为是rRNA前体剪切第一步,即5′ETS剪切所必需的,鉴定U3能够为确定rRNA前体剪切位点和剪切产物转运提供间接证据。,本文利用原位杂交技术研究了豌豆（Pisum sativum L.)核仁中U3 snoRNA的分布和转运。结果表明,U3 snoRNA分布在致密纤维组分（dense fibrillar component,DFC)和颗粒组分（granular component,GC)中,在纤维中心（fibrillar center,FC)没有分布 ,当用放线菌素D（actinomycin,D,AMD)处理豌豆根端分生细胞时,rDNA转录受到抑制,标记信号减弱,随着AMD处理时间的延长,标记信号逐渐变弱并出现在DFC远轴区域和GC区域。本文结果提示,rRNA前体剪切发生在DFC和GC区域,剪切产物从围绕FC的区域向周边转运。     

豌豆细胞核仁中U3 snoRNA的分布和转运

rRNA前体剪切是发生在核仁中的重要生物学事件.U3 snoRNA作为rRNA的一个剪切因子被认为是rRNA前体剪切第一步,即5′ ETS剪切所必需的.鉴定U3能够为确定rRNA前体剪切位点和剪切产物转运提供间接证据.本文利用原位杂交技术研究了豌豆(Pisum sativum L.)核仁中U3 snoRNA的分布和转运.结果表明, U3 snoRNA分布在致密纤维组分(dense fibrillar component, DFC)和颗粒组分(granular component, GC)中,在纤维中心(fibrillar center, FC)没有分布.当用放线菌素D (actinomycin D, AMD)处理豌豆根端分生细胞时,rDNA转录受到抑制,标记信号减弱.随着AMD处理时间的延长,标记信号逐渐变弱并出现在DFC远轴区域和GC区域.本文结果提示,rRNA前体剪切发生在DFC和GC区域,剪切产物从围绕FC的区域向周边转运.     

煤绒菌Fuligo septica显型原质团细胞核及菌核的超微结构

从煤绒菌显型原质团中提纯细胞核、核仁,诱导原质团形成菌核,并在透射电镜下观察。研究结果表明:细胞核具有中央核仁,核仁可以看到明显的纤维中心、致密纤维中心和颗粒结构。原质团中存在大量的黏液颗粒。菌核具有双层膜,内含有细胞器及脂滴。     

煤绒菌Fuligo septica显型原质团细胞核及菌核的超微结构

从煤绒菌显型原质团中提纯细胞核、核仁,诱导原质团形成菌核,并在透射电镜下观察。研究结果表明:细胞核具有中央核仁,核仁可以看到明显的纤维中心、致密纤维中心和颗粒结构。原质团中存在大量的黏液颗粒。菌核具有双层膜,内含有细胞器及脂滴。     

煤绒菌Fuligo septica显型原质团细胞核及菌核的超微结构

从煤绒菌显型原质团中提纯细胞核、核仁,诱导原质团形成菌核,并在透射电镜下观察。研究结果表明:细胞核具有中央核仁,核仁可以看到明显的纤维中心、致密纤维中心和颗粒结构。原质团中存在大量的黏液颗粒。菌核具有双层膜,内含有细胞器及脂滴。     

对rDNA转录活性的图象分析

用低浓度的放线菌素D(AMD)处理人的外周血淋巴细胞,可以导致细胞周期各阶段核仁形成区(NOR)的银可染性显著减少,表明了放线菌素D对rDNA的转录活性具有明显的抑制作用。本实验采用IBAS图象分析系统,对经不同浓度的放线菌素D处理过的外周血淋巴细胞进行形态学测量和计算机统计分析,其结果阐述了细胞中NOR的银可染性(即rDNA的转录活性指标)与AMD浓度梯度的相关性,并以此建立了相应的回归方程。本文结果表明,间期的银染核仁面积是检测rDNA转录活性较为敏感的指标。     

蚕豆核仁残体的电镜研究

本文报道了有丝分裂过程中蚕豆(Vicia faba)根端分生组织细胞内一种由核仁物质组成的特殊结构,我们将其称作核仁残体。经常规染色后,可在前期末正在分散的核仁物质中看到由直径15—20nm 的颗粒和纤维组成的核仁残体;前中期时,核仁残体附着在染色体上,其电子密度低于染色体。Bernhard 染色结果表明,核仁残体的主要成分是核糖核蛋白(RNP)颗粒和纤维,一些核仁残体中存在着与染色质染色反应相似的被漂白区。有的核仁残体附着在中、后期染色体上,有的游离存在于细胞质中。本文讨论了核仁残体的成分及其本质等问题。     

小麦核仁在细胞周期中的变化

运用Bernhard染色方法研究了小麦根端分生组织细胞核仁在细胞周期中的变化。结果显示,间期核仁染色很深,能够区分出纤维中心（FC）、致密纤维组分（DFC）和颗粒组分（G）,而染色质被漂白,在染色质间可以观察到细小的RNP颗粒。进入前期,在染色质的边缘有小的RNP颗粒分布。中期,染色体周边分布着类似于间期核仁的深染的大RNP颗粒,形成一个不完全连续的“鞘”状结构;在染色体内部看不到类似核仁的深染颗粒。到了后期时,仍可见RNP“鞘”状结构的存在。进入末期,这些RNP植物逐渐由“鞘”脱离,最后参与新核仁的形成。这些结果表明,核仁解体后的物质直接转移到了中期染色的表面,并形成不连续的表层,没有进入染色体的内部。     

小麦核仁的超微结构在细胞周期中的变化

应用整体银染技术在电镜下对小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ Ｌ．）根端分生细胞核仁在细胞周期中的超微结构变化进行了研究。结果显示,间期核仁染色很深,能够区分出纤维中心、密集纤维成分、颗粒成分和核仁液泡等结构;染色质上也布满大量染色浅的细小银粒。前期,随着核仁的解体和染色质的集缩,染色质的边缘逐渐出现深染的大颗粒;到前期末时,大量的核仁物质向染色体周围扩散并附着到其表面。中期染色体的周边分布着来自解体核仁的银染大颗粒,形成一个不大均匀也不完全连续的“鞘”状结构。后期仍可见这种“鞘”状结构的存在。进入末期,这些银染核仁物质逐渐由“鞘”脱离,彼此融合形成前核仁体,最后参与新核仁的形成。这些结果表明,核仁解体后的物质直接转移到了染色体的表面,并形成一个不连续的表层,没有进入染色体内部;染色体内部的银染颗粒与核仁及其解体物质无关     

小鼠卵母细胞体外成熟及受精过程中细胞核的时空变化规律

用电镜方法研究小鼠卵母细胞的发育及受精虽然已有很多报道,但大多数是有关细胞质、尤其是皮质颗粒、高尔基复合体及线粒体的形态及分布变化的。从卵母细胞体外成熟培养、第一次减数分裂恢复到受精后第二次减数分裂完成,细胞核经历了复杂的变化,有关的系统研究却很少。本实验详细地研究了小鼠卵母细胞体外成熟及受精过程中两性生殖细胞内细胞核的时空变化规律。从卵巢中采集生发泡（ＧＶ）期卵母细胞,进行体外成熟培养,经超排获得的成熟卵母细胞去卵丘和透明带后,用于体外受精。于体外成熟培养及受精后的不同时间,用光镜及电镜方法观察细胞核变化及极体排放。结果表明,尽管大多数卵母细胞在体外培养２至４小时生发泡破裂（ＧＶＢＤ）,但有１３．６％在培养８小时后仍处于ＧＶ期（图１）。电镜观察揭示,不发生ＧＶＢＤ的卵母细胞核的核仁由颗粒性纤维成分、空泡及纤维中心组成。有时核仁表面有空泡。只有核仁完全致密化、核仁周围有核仁相随染色质分布时,卵母细胞才获得恢复减数分裂的能力。ＧＶＢＤ发生时,随着核仁相随染色质向核膜侧扩散迁移,核仁越来越小;与此同时,核膜打折,染色质团块中央出现电子致密的芯。核仁的消失早于核膜的破裂,提示核仁成分可能参与核膜打折及破裂,体外培     

多头绒泡菌核仁及其骨架中原肌球蛋白的免疫细胞化学鉴定

分离多头绒泡菌(physarum polycephalum)细胞的核仁,先用Dnase I消化,去除核仁内的DNA;然后用025mol/L (NH4)2ＳＯ４和2mol/L NaCl相继抽提去掉大部分蛋白质,制备成核仁骨架。SDSPAGE分析结果表明,核仁骨架中含有约20种多肽,其中包括37kD左右与原肌球蛋白分子量相当的多肽。以兔抗原肌球蛋白抗体为一抗,FITC标记的羊抗兔IgG抗体为二抗的间接免疫荧光检测结果表明,核仁和核仁骨架样品都能发出明亮的荧光,而对照样品未见明亮的荧光。间接免疫斑点印迹检测结果进一步证明,在核仁骨架的蛋白质成分中存在原肌球蛋白。胶体金免疫电镜检测结果显示,标记原肌球蛋白抗体的标本上有较多的金颗粒,而对照组标本上只有极少的金颗粒。金颗粒在核仁中主要呈散在分布。     

蚕豆细胞核仁和核质中剪接因子SC35的定位研究

本文以蚕豆(Vicia faba L.)根端分生组织细胞为材料,以抗SC35抗体为探针,在电镜下对SC35在高等植物细胞中的存在与否和分布特点进行了研究,发现经抗SC35抗体标记后,标明SC35位置的胶体金颗粒主要分布于核仁的致密纤维组分(DFC)、核质的染色质间颗粒(IGs)和染色质周边纤维处(PFs),而核仁的纤维中心(FC)、核仁液泡和集缩染色质团块中央部位的金颗粒很少。DFC, IGs和PFs处的金颗粒平均密度分别为65.89个/μm~2和36.28个/μm~2,远远高于集缩染色质团块中央部位以及FC和核仁液泡处的金颗粒平均密度(分别为5.90个/μm~2和6.26个/μm~2)。说明蚕豆细胞核仁的DFC,核质的IGs和PFs处富含剪接因子SC35。本文研究结果表明,SC35或SC35类蛋白在蚕豆细胞核质中的分布与其在哺乳动物细胞核质中的分布规律相似。同时本文首次报道了SC35或SC35类蛋白存在于核仁中。     

核仁是怎样行使其生理功能的

真核细胞间期核中最显著的细胞结构是核仁。在光学显微镜下,核仁通常呈均质而致密的球体;在电子显微镜下,核仁主要分为三个区,即.1)颗粒区,含有核糖体前体颗粒;2)致密的丝状区即纤维区,包含有正在转录的RNA分子;3)浅染色区,或称为核仁内染色质,该区包含有从染色体核仁组织者区来的DNA,其中含有rRNA基因。因而,从成份上说,核仁是由DNA、RNA和蛋白质组成的,它的主要功能是转录rRNA和装配核糖体亚单位。     

多头绒泡菌核仁骨架的研究

从多头绒泡菌（Ｐｈｙｓａｒｕｍ　ｐｏｌｙｃｅｐｈａｌｕｍ　Ｓｃｈｗ）间期细胞核中分离出核仁,用ＤＮａｓｅ　Ｉ、０．２５ｍｏｌ／Ｌ（ＮＨ４）２ＳＯ４和２ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ去除核仁ＤＮＡ和大部分蛋白质,得到核仁骨架。核仁骨架是直径１０３０ｎｍ的纤维组成的网络结构,含有约２０种多肽,其中包括与肌动蛋白电泳迁移率相当的４３ｋＤ左右的多肽。免疫荧光检测结果表明,核仁骨架能与肌动蛋白抗体结合而发出明亮的荧光。免疫斑点印迹结果进一步证实,核仁骨架的蛋白质成分中存在肌动蛋白。免疫电镜结果指出,代表肌动蛋白的金颗粒分布在整个核仁中。     

细叶黄芪叶肉原生质体发育早期细胞核的变化

采用常规超薄切片、放射性同位素标记以及图像处理等技术,对细叶黄芪叶肉原生质体发育早期细胞核内的核仁结构、ＲＮＡ合成和ＤＮＡ合成等活动进行了研究。结果表明,离体培养后４ｈ,核仁体积开始增大,培养３－５天时,其体积增长了４－５倍。同时,颗粒区（Ｇ）与纤维区（ＤＢＣ）的比值明显上升,培养５天时,Ｇ／ＤＦＣ比值增长近８倍。此时,核仁的纤维中心也增多。用放射性同位素标记的研究结果表明,培养后４ｈ,＾３Ｈ－尿     

多头绒泡菌银染核仁周期的电镜研究

以同步化培养的多头绒泡菌（Physarum poldycephalum Schw.)原生质团为材料,应用整体银染技术,电镜下研究了核仁在细胞周期中的超微结构变化。结果变化：核仁成熟时比较大,位于细胞核中央,核仁内可区分出纤维中心、密集纤维成分和颗粒成分等。前期时,核仁向边缘移动,前期末在近核膜处解体,解体的核仁物质主要呈团块状散开。中期时,解体的核仁物质位于细胞核中央染色体区域的周围,染色体上没有特异的银染区域,染色体周边也看不到银染的“鞘”状结构,但在染色体中可见一些散在的银染大颗粒。末期时,核仁物质与染色体一起到达两极,在子细胞核中与正在解集缩的染色质共存一起,以后核仁物质逐渐汇合并与染色质分开。大约在有丝分裂结束120min后,在细胞核中形成一候 中央位置的大核仁,结果提示,低等真核生物的核仁结构和周期变化与高等真核生物的不完全相同。     

核仁和核仁蛋白

核仁是位于细胞核内的非膜结构。电子显微镜下的核仁从形态上可以分为三层结构包括纤维中心区(FC)、高密度纤维区(DFC)和颗粒区(GC)。核仁内的蛋白有核糖体蛋白和非核糖体蛋白两种。利用蛋白质组学方法已经鉴定了350多种核仁蛋白,其中包括80多种核糖体蛋白。核仁是核糖体合成的场所,核仁中的非核糖体蛋白对核糖体的生物合成起关键调控作用。核仁不仅是细胞内通讯和核糖体：RNA加工的中心,而且在细胞周期、细胞增殖和衰老中起重要调控作用;核仁也是tRNA、mRNA和其它类型小分子RNA加工的场所。因此核仁是一个多功能的细胞生命活动中心。     

无核仁原生动物蓝氏贾第虫rDNA的分布

过去的工作已表明,源真核生物（Archezoa)中的双滴虫类极其原始,核中尚无核仁发生,以蓝氏贾第虫（Giardia lamblia)作为双滴虫类的代表,用高度特异的核仁组织区银染法（改良的Ag-I法,李靖炎,1985）在电镜下检视其rDNA在核中的分布。结果发现,代表rDNA之所在的银粒并不集中形成任何类似核仁组织区或核仁纤维区的结构;在作为对照的小眼虫（Euglena gracilis)体内,银粒则完全集中在核仁纤维区中,因此,作者以为贾第虫rDNA的这种分布代表着核仁组织区进化形成以前的一种原始状态。