黄伞单孢杂交育种的初步研究

以采自山西省五台山和关帝山的WT3 和GD3两个黄伞纯化菌株为材料,显微观察了黄伞担孢子萌发的菌丝及交配特征,在PDA培养基上担孢子首先在其一端萌发出菌丝,宽度约3~4μm,接着产生分枝呈散发状向四周延伸。试验表明:单核菌丝体上可产生类似原基的凸状体,但不具结实性。两个单核菌丝交配后出现锁状联合是形成双核菌丝的典型特征,并具有结实性。     

黑木耳交配型的研究*

从黑木耳Auricularia auricula沪3菌株的子实体收集、分离、鉴定得到157株单孢子萌发的单核菌丝体,以其中73株孢子单核体为材料进行交配实验,经过三轮交配反应,结果表明,木耳的交配型符合四极性交配系统的分布规律。根据四种交配反应情况把73株孢子单核体分为四组,并从四组中挑选出B17、B177、B101、B65作为四种交配型的标准菌株;与此同时,从沪3菌株的双核菌丝体制备的原生质体中获得53株原生质体单核体,对这些单核体进行交配,确定出两种亲本交配型,以Y150(A1B1)和Y121(A2B2)作为标准菌株,将两个亲本交配型标准菌株与四个孢子单核体标准菌株进行交配反应,初步确定出四种孢子单核体的交配型分别为: B17 (A2B2)、B177(A1B1)、B101(A2B1)和B65(A1B2)。     

黑木耳交配型的研究

从黑木耳Auricularia auricula沪3菌株的子实体收集,分离,鉴定得到157株单孢子萌发的单核菌丝体,以其中73株孢子单核体为材料进行交配实验,经过三配交配反应,结果表明,木耳的交配型符合四极性交配系统的分布规律。根据四种交配反应情况把73株孢子单核体分为四组,并从四组中挑选出B17,B177,B101,B65作为四种交配型的标准菌株;与此同时,从沪3菌株的双核菌丝体制备的原生质体中获得53株原生质单核体,对这些单核体进行交配,确定出两种亲本交配型,以Y150（A1B1）和Y121（A2B2）作为标准菌株,将两个亲本交配型标准菌株与四个孢子单核体标准菌株进行交配反应,初步确定出四种孢子单核体的交配型分别为：B17（A2B2）,B177（A1B1）,B101（A2B1）和B65（A1B2）。     

担子菌类食用真菌双核体生物学性质研究进展及其启迪

担子菌类典型食用真菌,如香菇、灵芝、金针菇、糙皮侧耳、刺芹侧耳、黑木耳等,其生活史中的主要存在形式是双核体。双核体可以通过有性和无性两种方式生成单核体,可亲和的单核体之间通过质配形成具有锁状联合的双核体。目前对食用真菌单核体的研究结果拓展了对单核体和双核体生物学性质特性的认识。双核体细胞作为一种单倍双核存在形式,具有许多不同于二倍体的生物学特性,许多研究者对双核体的等级秩序、适配性、稳定性等生物学性质开展了一些研究,相关研究结果为菌种种性维持、杂交育种创新、遗传学研究范式建设等工作带来诸多启迪。对双核体在作为菌种中表现出的增量性、可育性、全能性等特性的分析,可以为解决食用真菌菌种种性长期维持稳定的问题带来启迪。双核体细胞核之间的显隐性关系以及互补关系对杂交育种创新可能具有重要的指导意义。核间等位基因在双核体细胞中存在不同的表达水平,为从双核体视角研究食用真菌的科学问题提供新思路。对食用真菌双核体的研究有可能形成更加具有学科特色的食用真菌研究范式。     

用CHEF凝胶电泳探测远缘担子菌间原生质体融合后的染色体变异

用电场诱导灰盖鬼伞(Coprinus cinereus Co5104,his~-)和佛罗里达侧耳(Pleurotusflorida Pf67, ade~-)两菌株的原生质体融合,获得了两类属间融合子:一类为不断发生分离的单核体,另一类为稳定的双核异核体。利用等高钳位均匀电场(CHEF)凝胶电泳技术比较融合子与两亲本的染色体长度多型性(CLP),显示出融合子的染色体变异以整条染色体的丢失为主。结合形态观察和DAPI核荧光染色的结果,推测单核融合子在胞质融合后很可能发生了核融合,但来自亲本Pf67的染色体不断丢失,最后融合子的遗传组成以来自Co5104的染色体为主;而双核融合子在质配之后可能并未发生核配,不过,来自各亲本的染色体最终均只有部分得以保留在融合子中。     

黄伞(Pholjcta adiposa)生态习性初探

黄伞(Pholiota adiposa)俗称刺蘑,属于环锈伞属,在自然界分布广泛,是一种可食用的野生菇类,1985年秋,在喀左县东哨乡家柳树上采集,经形态特征鉴定定为“黄伞”。为了增添食用菌的新品种,使此菇早日转为商品栽培,我们对黄伞菇的菌丝特性、子实体的生态条件进行了初步研究,现报道如下:     

黄伞深层发酵菌丝体与子实体蛋白质的营养评价

采用国际上通用的营养价值评价方法,全面评价了黄伞深层发酵菌丝体与子实体蛋白质的营养价值。黄伞深层发酵菌丝体蛋白质的氨基酸评分(AAS)、化学评分(CS)、必需氨基酸指数(EAAI)、生物价(BV)、营养指数(NI)和氨基酸比值系数分(SRCAA)分别为82.86、54.96、92.73、89.38、35.42和87.24,均高于子实体。这说明黄伞深层发酵菌丝体是良好的蛋白源。     

基于等位基因InDel快速检测黑木耳原生质体单核体

以黑木耳 Auricularia auricula-judae栽培菌株Au916三磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）两个等位基因中的InDel为基础,以原生质体再生菌株为研究材料,建立了基于InDel的黑木耳原生质体单核体检测技术,并采用荧光显微镜检和配对试验对此方法进行了验证。应用InDel能清晰地区分黑木耳双核体和两种原生质体单核体,且不同的单核体之间可以进行交配,其杂交双核体能正常出耳,结果表明基于等位基因InDel标记可以快速准确地检测黑木耳原生质体单核体。在大规模测序获得真菌基因组信息的基础上,InDel标记在原生质体单核体鉴定中的应用将更加普遍。     

简并引物在黑木耳交配型因子研究中的应用初报

交配型因子控制着异宗结合担子菌单核体之间交配的可亲和性、核配和子实体正常发育。对几种四极性担子菌的研究表明,交配型因子A、B对应于不同染色体上的两个交配型座位(mating type locus),每个座位又包含α和β两个亚单位,每个亚单位内部又有许多基因(李莉云等,1998)。对二极性担子菌大麦坚黑粉菌Ustilago hordei和光滑环锈伞Pholiota nameko的研究显示,二极性担子菌的A因子同样由两个亚单位组成(Lee et al.,1999,Ratanatragooldacha et al.,2002)。在已克隆的所有担子菌A交配型基因中,都存在与同源盒(Homeobox)类似的序列。同源盒序…     

利用SSR标记鉴定香菇单核体及杂交后代

【目的】研究简单重复序列(Simple sequence repeat,SSR)分子标记方法用于香菇原生质体单核体、孢子单核体及其杂交后代的分离和鉴定。【方法】利用基于香菇全基因组序列信息开发的SSR标记,分析由香菇品种"L808"双核菌丝制备的原生质体单核体、孢子单核体及其杂交后代的SSR指纹。【结果】对制备的原生质体单核体的鉴定中,在不经过杂交配对的情况下,鉴定出"L808"的两种不同极性的原生质体单核体,其分离比例为191:1,该鉴定结果得到SSR标记、随机扩增多态性DNA(Random amplified polymorphismic DNA,RAPD)标记及传统方法的验证。另外,开发的香菇SSR标记还能以多位点组合的方式,用于对孢子单核体及其杂交后代的鉴定。【结论】应用SSR标记可加快香菇单核体的制备进程,并提高鉴定单核体及相关杂交菌株的准确性,促进香菇遗传育种研究。     

运用mRNA差异显示技术研究黄伞发育相关基因

采用mRNA差异显示技术对黄伞菌丝体、原基、菇蕾、子实体菌柄和子实体菌盖进行研究,获得了在生殖生长阶段差异表达的4条cDNA片段T_(11)G B0304、T_(11)G B0304-2、T_(11)G B0322与T_(11)C B0310,经过回收、重扩增、克隆与鉴定后进行测序分析,结果发现T_(11)G B0322的序列在GenBank中与氧类固醇结合蛋白(oxysterol-binding protein)基因序列的同源性达到41％。再经过半定量PCR方法验证,表明T_(11)G B0322基因片段是在生殖生长阶段差异表达的基因片段。     

黄伞菌丝蛋白质营养价值评价

本文测定了黄伞Pholiotaadiposa菌丝粗蛋白含量和氨基酸组成,采用国际上通用的营养价值评价方法,对其蛋白质的营养价值进行全面评价,并与营养价值较高的白灵侧耳Pleurotusnebrodensis、刺芹侧耳Pleurotuseryngii和金顶侧耳Pleurotrscitrinopileatus进行比较。分析结果表明,黄伞菌丝的必需氨基酸含量最高,占其氨基酸总量的43.9%,蛋白质的氨基酸评分(AAS)、化学评分(CS)、必需氨基酸指数(EAAI)、生物价(BV)、营养指数(NI)和氨基酸比值系数分(SRCAA)分别为92.0、71.3、88.5、84.8、40.4和78.8,六项指标均比参比食用菌高。结果说明黄伞菌丝具有很高的营养价值。     

三种鳞伞属(Pholiota)真菌的菌丝生物学特性初步研究

研究了多脂鳞伞(Pholiota adiposa)、翘鳞伞(P.squarrosa)和多脂翘鳞伞(P.squarroso-adiposa)三种鳞伞属真菌的菌丝生物学特性。结果表明,多脂鳞伞和翘鳞伞菌丝生长的最适碳源为麦芽糖;多脂翘鳞伞最适碳源为蔗糖和麦芽糖。多脂鳞伞和翘鳞伞最适氮源均为牛肉膏和酵母膏;而多脂翘鳞伞最佳氮源为酵母膏和蛋白胨。三种菌丝生长的最适温度均为25℃。多脂鳞伞在pH值6~8均生长良好,最适pH值7~8,偏碱性;翘鳞伞和多脂翘鳞伞最适pH值均为6~7。     

黄伞胞外多糖抗自由基作用的研究

目的:以乙醇沉淀的黄伞发酵浓缩液得到的胞外多糖为研究对象,检验其对自由基的清除作用。方法:采用电子顺磁共振(EPR)波谱仪检测黄伞胞外多糖清除羟自由基OH.和超氧阴离子自由基O2-.的作用。结果:在样品浓度均为100mg/mL的条件下,利用Fenton反应体系,黄伞胞外多糖对羟自由基OH.的清除率仅为38.5%;而利用次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系,黄伞胞外多糖对超氧阴离子自由基O2-.的清除率可达到80.6%。结论:黄伞胞外多糖在体外对自由基有一定的清除作用且其对超氧阴离子自由基O2-.的清除作用明显优于对羟自由基OH.的清除作用。     

Effect of diethylstilboestrol on adipose-tissue lipids

1. The effect of diethylstilboestrol on the fatty acid composition of adipose-tissue lipids of the ox (Bos taurus) was studied. 2. The capsula adiposa (perirenal) was shown to contain more total saturated fatty acids, whereas more total unsaturated fatty acids were found in the panniculus adiposus (subcutaneous). 3. Significantly more stearic acid and linolenic acid were obtained from the capsula adiposa, whereas the panniculus adiposus contained more myristoleic acid, palmitoleic acid and oleic acid. 4. Implanting diethylstilboestrol significantly increased the deposition of the saturated fatty acids, particularly stearic acid. 5. A decrease in the deposition of total unsaturated fatty acids, myristoleic acid, palmitoleic acid and linoleic acid can also be attributed to the diethylstilboestrol treatment.     

Molecular Distinctions Between Phytophthora capsici and Ph. tropicalis Based on ITS Sequences of Ribosomal DNA

Among four species of Phytophthora tested, only Ph. capsici and Ph. tropicalis showed the same length for DNA sequence for both internal transcribed spacer (ITS)1 and ITS2 of ribosomal DNA. Phytophthora palmivora and P. nicotianae have lengths different from each other, and from the other two species. Although A1 and A2 types of Ph. capsici differ from each other by only one nucleotide, there are 10 different nucleotides between A1 and A2 types of Ph. tropicalis. Phylogenetic analysis of combined ITS sequences identified four clades each consisting A1 and A2 mating types of same species. The neighbor‐joining and maximum parsimony trees show that Ph. tropicalis (A2) is clustered with the clade of two isolates of Ph. capsici before joining the clade of A1 and two other isolates of Ph. tropicalis from GenBank. Our results support the separation of Ph. tropicalis and demonstrate the need to sequence more than a single isolate of a species in the study of molecular phylogeny of Phytophthora. The phylogenetic trees also suggest that Ph. tropicalis (A2) may represent a transitional isolate in the process of species evolution.     

铅、锰对黄伞菌丝形态及细胞活性的影响

【目的】确定铅(Pb2+)、锰(Mn2+)对黄伞菌丝形态、结构及其菌丝活力的影响,并比较黄伞对Pb2+、Mn2+的适应性和耐受性。【方法】采用平板培养和液体培养方法,结合菌落形态和菌丝的电镜观察,测定菌落直径、菌丝鲜重,并以原子吸收分光光度计测定Pb2+、Mn2+含量。同时测定液体培养条件下菌丝的鲜重和胞外多糖产量以验证菌丝活力。【结果】不同Pb2+、Mn2+浓度下黄伞菌丝体形态变化明显,Pb2+、Mn2+的浓度≥500 mg/L可显著抑制黄伞菌丝的生长;高浓度Pb2+、Mn2+下(Pb2+≥700 mg/L、Mn2+≥2 000 mg/L)黄伞菌丝体锁状联合大量减少,且大小不一、分布不均,菌丝褶皱变形。黄伞在菌丝平板生长过程中,当Pb2+、Mn2+分别为100 mg/L时,黄伞菌丝生长速度最快。黄伞在液体培养过程中,当Mn2+浓度为300 mg/L、Pb2+浓度为50 mg/L时,菌丝鲜重以及产生的胞外多糖含量最大。【结论】Pb2+、Mn2+对黄伞的菌丝生长、菌丝活力及结构形态有较大的影响;黄伞对锰离子的适应性和耐性明显高于对铅离子的适应性和耐性。     

Structural analysis and in vitro antitumor effect of polysaccharides from Pholiota adiposa

Glycoconjugate Journal - Pholiota adiposa is an edible chestnut mushroom with many health benefits, such as antioxidant and anticancer activity. In this paper, polysaccharides were extracted from...