AuNPs/Sol-gel复合膜法固定乙酰胆碱酯酶生物传感器检测有机磷农药

基于有机磷农药对乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)的抑制作用,用金纳米粒子(Au nanoparticles,AuNPs)与壳聚糖/SiO2杂化溶胶-凝胶构成复合固酶基质,将AChE固定于玻碳电极表面,制备了电流型AChE生物传感器选用久效磷进行实验,以氯化硫代乙酰胆碱为底物,建立了电化...     

光度法快速测定土壤中呋喃丹

呋喃丹是一种内吸性杀虫剂。因其残留毒性高,口服易急性中毒,是蔬菜生产过程是禁用的农药。但个别错误施用的现象时有发生,给土壤和蔬菜带来了污染。因此,研究呋喃丹在土壤中残留的分析方法具有重要意义。呋喃丹属氨基甲酸酯类农药,可用农药残留快速测定法(酶抑制法)测定,但检出限高且不能准确定量测定。国家标准采用色谱法测定,但样品处理和仪器要求高,不能用于快速检测。     

QuEChERS/液相色谱-串联质谱法测定5种蔬菜中17种氨基甲酸酯类农药的基质效应研究

建立了QuEChERS/液相色谱-串联质谱法测定5种蔬菜中17种氨基甲酸酯农药残留的方法,研究了该方法下姜、大葱、黄瓜、胡萝卜和白菜对17种农药的基质效应,并探讨了基质种类、基质浓度、农药浓度对基质效应的影响。结果表明:不同基质中的17种氨基甲酸酯农药在5~100μg/L浓度范围内线性关系良好,平均回收率为76.5%~111.8%,相对标准偏差(n=6)为2.5%~8.2%。5种常见蔬菜对17种氨基甲酸酯农药均存在不同程度的基质效应,且多数呈基质抑制效应,其中,基质种类、基质浓度和农药浓度均会影响基质效应强度。胡萝卜对硫双威和乙霉威、黄瓜对硫双威的基质效应均在0.8~1.1之间,日常检测中,可根据实际需求忽略其基质效应影响。但对于其他蔬菜中氨基甲酸酯类农药的检测,必须考虑基质效应的影响。     

用乙酰胆碱酯酶和硫代黄素T体系的荧光猝灭测定有机磷农药

在pH 7.0的磷酸盐缓冲溶液中,硫代黄素T与乙酰胆碱酯酶相互作用,酶的内源荧光被硫代黄素T猝灭,而在490nm处产生硫代黄素T的特征荧光发射峰.在该体系中加入有机磷农药对氧磷后,硫代黄素T的特征荧光峰被猝灭,荧光猝灭强度△F与对氧磷浓度C px存在线性关系,其线性浓度范围为O.20～2.40mg/L,回归方程为△F=0.041C px(μg/L) 84.17,相关系数为0.9984,检出限(3σ)为7.87μg/L.对检测原理的探讨表明,硫代黄素T使乙酰胆碱酯酶内源荧光静态猝灭,二者形成了超分子复合物,产生了特征荧光峰;但是,有机磷农药对氧磷可破坏此复合物,因而硫代黄素T的特征荧光峰被猝灭.相比利用酶的抑制原理来检测农药残留的方法,该方法具有简便、快速、不需要消耗酶的底物的优点.     

电动流动分析和酶抑制法测定池塘水中农药残留折合总量

用电动流动分析和酶抑制法测定池塘水中有机磷和氨基甲酸酯农药残留折合总量。电动流动分析系统由一台自制电渗泵和4个电磁切换阀组成,由计算机编程控制。酶抑制法用面粉酯酶,有机磷和氨基甲酸酯农药作酶抑制剂,底物的酶解产物与显色剂反应,用分光光度计在524 nm检测。有机磷和氨基甲酸酯农药的折合浓度对数线性范围为0.02~0.20 mg/L乐果,检出限为0.01 mg/L乐果,每小时可测24个样品。氨基甲酸酯在80℃完全水解,而有机磷部分水解,据此可判断农药类别。     

有机磷农药残留掌上检测仪的设计

设计了一种能够实现现场检测的有机磷农药残留掌上检测仪,其能够快速筛查有机磷农药污染的蔬菜,保障果蔬类农产品市场安全.基于酶抑制率法测量原理,以发光二极管(LED)为光源,设计双光电检测电路,由硅光电二极管进行信号采集,信号经单片机进行数据处理,实现了吸光度值和抑制率数字显示.与传统分光光度计相比,本实验设计的检测仪巧小轻便(127 mm×77 mm×35 mm)、方便携带,可实现现场零距离检测.实验表明,在乐果农药浓度为0.1~1.0?g/m L范围内,抑制率与乐果浓度呈良好线性,相关系数为0.9986,检出限为0.058?g/m L.将其应用于蔬菜中有机磷农药残留的测定,检测结果与国标方法有良好的相关性,能够对蔬菜中有机磷农药残留进行现场快速分析检测,具有实际的应用价值.     

金-乙酰胆碱酯酶纳米复合物膜电化学检测有机磷农药

本文构建了一种基于界面法合成的金-乙酰胆碱酯酶(Au-AChE)纳米复合膜,并用于电化学检测有机磷农药.固定于电极表面的Au-AChE纳米复合膜中的AChE催化氯化乙酰胆碱(ATCl)水解生成硫代胆碱,硫代胆碱在特定电位下产生氧化峰电流.有机磷农药对AChE有抑制作用,当溶液中有机磷农药增多时,AChE催化ATCl水解生成硫代胆碱量减少,氧化峰电流下降.在最佳条件下,传感器用于甲胺磷检测的线性范围为0.005~5,5~100μg/mL,最低检出限为0.0011μg/mL,并显示出良好的稳定性与重现性,可用于实际样品中甲胺磷的检测.研究表明,界面法合成的金膜能有效固定AChE,并可拓展到其他生物分子的固定,以期构建不同的生物传感器.     

新型氨基甲酸酯农残生物传感器制备及检测性能分析

采用自组装法制备多层乙酰胆碱酯酶/壳聚糖/碳纳米管(AChE/CS/FCNTs/GCE)生物传感器,利用循环伏安法(CV)、电化学阻抗谱(EIS)和差分脉冲伏安法(DPV)表征传感器并考察其检测氨基甲酸酯农药性能。成功制备了新型氨基甲酸酯AChE/CS/F-CNTs/GCE生物传感器,新型传感器对氨基甲酸酯农药具有良好的响应。典型氨基甲酸酯类农药2-(1-甲基乙基)苯基甲基氨基甲酸酯在2.00×10-9~2.00×10-7g/L内呈现良好的线性关系,检出限达到5.41×10-9g/L。新型传感器适用于氨基甲酸酯农药残留检测。     

层层自组装纳米金与乙酰胆碱酯酶电化学生物传感器检测有机磷农药

采用层层自组装技术制备了快速检测有机磷农药的生物传感器,利用带正电荷的高分子聚电解质聚二烯丙基二甲基氯化铵(PDDA)将乙酰胆碱酯酶(AChE)和金纳米粒子(AuNPs)通过静电力逐层固定到玻碳电极(GCE)表面,并采用交流阻抗和微分脉冲伏安法研究了此生物传感器的电化学行为。由于金纳米粒子优异的电催化性能和良好的生物相容性,使固定化的乙酰胆碱酯酶对其底物具有更高的亲和力和更快的响应速度。实验结果表明:修饰金纳米粒子后,传感器的氧化电流明显增大,在4.6×10-5～5.3×10-3mol/L范围内,固定化酶的抑制率与甲基对硫磷浓度的对数成正比,检出限为7.6×10-6mol/L。该生物传感器具有制备方法简便、成本低、灵敏度高等优点,已成功用于蔬菜样品中甲基对硫磷含量的测定。     

超快速液相色谱-串联质谱法快速筛查蔬菜中176种农药的残留量

采用超快速液相色谱-串联质谱(UFLC-MS/MS)技术建立了蔬菜中176种农药残留快速筛查的分析方法。蔬菜样品采用乙腈提取,盐析后无需净化。采用多反应监测-信息关联采集-增强子离子扫描(MRM-IDA-EPI)的复合扫描模式,利用基于EPI谱图和色谱峰峰面积的谱库检索技术,完成了蔬菜中176种农药残留的定性定量分析。所有农药在各自的线性范围内线性关系良好(r＞0.99),除了丁硫克百威和灭蝇胺在3个添加水平下的平均回收率分别为46.8%和53.1%,其余174种农药的平均回收率范围为72.4%～126.4%,相对标准偏差范围为1.0%～18.7%,方法的检出限和定量限范围分别为0.005～2.0 μg/kg和0.1～10 μg/kg。该方法具有快速、灵敏度高、准确度高等优点,适合于蔬菜样品中农药多残留的快速筛查分析。     

酶抑制法在快速检测蔬菜中农药残留应用中的探讨

正目前,蔬菜中农药残留的快速检测方法有国家标准GB/T 5009.199-2003和行业标准NY/T448-2001。两者中都有采用酶抑制法测定蔬菜中的有机磷和氨基甲酸酯类农药的残留,该法具有简便、快捷、经济的优点,对操作人员、样品处理和检测环境要求较低,在市场上容易推行,是我国目前控制高毒农药残留的一种有效手段[1]。现在市场上使用的速测试剂盒大都是依据这两项标准生产的,但由     

基于QuEChERS净化/气相色谱法测定蔬菜及水果中16种有机氯农药残留

该文建立了蔬菜及水果中16种有机氯农药残留的QuEChERS净化/气相色谱快速检测方法。样品经1%冰乙酸乙腈处理,QuEChERS净化,气相色谱分离后,以色谱峰保留时间定性,外标法定量。结果表明:16种有机氯农药在2.0~100μg/L质量浓度范围内的线性关系良好,相关系数均大于0.99,检出限为0.16~2.90μg/L,在4种基质(油菜、黄瓜、橙子、苹果)中的加标回收率为70.1%~119%,相对标准偏差(RSD)为0.23%~5.2%。与其它前处理方法相比,该方法简便、快速、准确、高效,可用于蔬菜及水果样品中有机氯残留的高通量快速筛查。     

毛细管电泳法测定天麻素对乙酰胆碱酯酶活性的抑制

阿尔茨海默症（AD）是引起中老年人痴呆最常见的疾病。目前治疗AD的药物主要为乙酰胆碱酯酶抑制剂（AChEI）。建立快速地从天然产物中筛选AChEI的方法,将对临床治疗AD产生积极的作用。该研究建立了一种简单可靠的AChEI筛选新方法。通过海美溴铵在毛细管内壁形成一段正电荷涂层,再经过离子吸附作用制备1.5 cm长的乙酰胆碱酯酶（AChE）反应器。底物碘化乙酰硫代胆碱在0.015 MPa压力下进样10 s,在微酶反应器中停留1 min后采用毛细管电泳（CE）法对底物和酶解产物进行分离。天麻素是天麻的重要药效成分之一,对AChE具有抑制作用。该研究以天麻素为例,根据加入药物前后酶解产物峰面积的差异,完成天麻素对AChE活性的抑制能力的测定。结果表明,随着天麻素浓度的增加,产物峰面积逐渐减小,对AChE的活性抑制变大。该方法所建微酶反应器产物峰面积的RSD值小于5.3%,可连续使用300次。当天麻素浓度为5.24 μmol/L时,对AChE活性抑制率达到64.8%。根据加入不同浓度天麻素时的抑制率,测定出天麻素的IC₅₀值为（2.26±0.14）μmol/L（R²=0.9983）。与传统紫外分光光度法所得结果（2.09±0.18）μmol/L吻合较好。固定化酶微反应器的活性变差时,可以洗脱掉固定在柱上的AChE,重复酶的固定化步骤即可完成再生。该方法简单、高效,运行成本低,柱上固定的AChE酶反应器稳定性较好,可重复使用,极大地提高了工作效率,未来有望应用于各类AChEI的高通量筛选,对AD药物的研发具有积极作用。     

蛋白质基体对提取测定水产品中氨基甲酸酯类农药残留的影响及其消除

利用乙腈水溶液为提取液,结合高效液相色谱建立了快速测定水产品中氨基甲酸酯类农药残留的方法。实验考察了蛋白质基质、有机溶剂种类、净化剂等因素对氨基甲酸酯类农药提取率的影响。结果表明,水产品中共存的蛋白质基体会影响氨基甲酸酯类农药的提取率。当采用80%的乙腈水溶液作为提取液时,提取液可以使蛋白质发生缓慢且完全的变性,释放与其结合的氨基甲酸酯类农药,从而提高提取效率。而目前广泛应用的Qu ECh ERS样品前处理方法,由于乙腈与无水硫酸镁的共同作用,引起了样品中蛋白质基质快速变性、聚集包埋药物不利于样品中农药残留的提取。80%的乙腈水溶液具有较强的化学极性,因而提取液中与药物残留共存的脂溶性杂质较少。在提取液中加入少量的PSA和C_(18)粉末即可达到满意的净化效果,简化了样品提取液的后续净化步骤。该方法用于水产品中四种常用氨基甲酸酯类农药(速灭威、异丙威、甲萘威与杀虫丹)的检测,相对标准偏差为0.7~2.5%,回收率为71.7%~103.8%,检出限为1.3~37 ng·g~(-1)。     

基于聚多巴胺纳米粒子的荧光增强型探针检测乙酰胆碱酶

以多巴胺盐酸盐为原料,在碱性条件下通过氧化反应制备聚多巴胺荧光纳米粒子(F-PDA),再与二氧化锰(MnO_2)纳米片进行复合,构建了用于检测乙酰胆碱酶(AChE)的F-PDA@MnO_2复合物荧光探针。MnO_2纳米片和F-PDA复合,体系的荧光被猝灭。在底物乙酰硫代胆碱(ATCh)存在下,加入AChE后,体系荧光恢复,恢复程度与AChE浓度在5.0～100 mU/mL范围内呈良好的线性关系,检出限为0.14 mU/mL(S/N=3)。该方法用于缓冲溶液中AChE的检测,加标回收率为89.5%～120%,相对标准偏差为1.6%～2.5%,且具有较高的选择性。可为基于F-PDA传感体系构建提供新的方法学模型。     

基于目标物调控原位生成量子点的杀扑磷荧光传感新方法研究

基于目标物调控原位生成荧光物质,建立了硫化镉量子点(CdS QDs)介导的荧光传感器,实现了大米中有机磷农药杀扑磷的高灵敏、高选择性分析检测.乙酰胆碱酯酶(AChE)催化水解硫代乙酰胆碱(ATCh)生成硫代胆碱(TCh),其作为稳定剂诱导原位生成大量CdS QDs,体系荧光信号增强.当目标农药杀扑磷存在时,AChE活性...     

基于铜-巯基配位聚合物电化学催化的新型乙酰胆碱酯酶电化学传感器

乙酰胆碱酯酶（AChE）是普遍存在于周围神经系统中的一种关键酶,可特异性催化底物乙酰胆碱发生水解反应,产生胆碱和醋酸盐,这一过程与阿尔兹海默症和炎症过程等相关疾病有着密切的关系.在本研究中通过硫代胆碱（TCh）与Cu（Ⅱ）反应合成了一种铜-巯基配位聚合物[命名为TCh-Cu（Ⅱ）CP],并发现该聚合物具有独特的电催化活性,基于此构建了一种用于AChE活性检测和抑制剂筛选的新型电化学生物传感平台.结果表明,该聚合物修饰在电极表面后可以催化邻苯二胺产生明显的电化学信号,信号强度与AChE浓度在0.05至100 mU·mL^-1范围内具有良好的线性关系,检出限为0.03 mU·mL^-1（S/N=3）,通过该方法还实现了AChE抑制剂的筛选.和传统的检测方法相比,该传感方法具有制备简单、选择性高和灵敏度高等特点.     

QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定荨麻提取物中17种氨基甲酸酯类农药残留量

采用Qu ECh ERS-超高液相色谱-串联质谱技术,建立了荨麻提取物中17种常见的氨基甲酸酯类农药残留量的检测方法。样品用含1%甲酸的乙腈提取,Qu ECh ERS法净化,电喷雾正离子(ESI+)模式电离,多反应监测模式检测,基质匹配标准曲线法定量。17种氨基甲酸酯农药在2.5~50μg/L线性关系良好,相关系数均大于0.9920,加标浓度为10,20,50μg/kg,平均回收率在65.3%~119.2%,相对标准偏差(RSD)均低于11%,检出限在0.12~1.7μg/kg。方法适用于荨麻等植物提取物中氨基甲酸酯类农药残留量的测定。     

优化的QuEChERS/超高液相色谱-串联质谱法测定鲜茶叶中21种氨基甲酸酯类农药残留

本文应用改进的QuEChERS法结合超高效液相色谱-电喷雾电离串联质谱仪,建立了同时检测鲜茶叶中21种氨基甲酸酯类农药残留的测定方法。样品用1%甲酸乙腈提取,经N-丙基乙二胺(PSA)、C18和石墨化碳黑(GCB)3种复合吸附剂净化,采用UHPLC-MS/MS在动态多重反应监测(DMRM)模式下检测,基质匹配外标法定量。结果表明:21种氨基甲酸酯在2~100μg·L-1范围内线性关系均大于0.995,在三个添加水平下(5、10、25μg·kg-1)的回收率为73.6%~105.0%,相对标准偏差(RSD)为1.4%~7.3%,检出限(LOD)为0.018~0.86μg·kg-1,定量限(LOQ)为0.060~2.87μg·kg-1。该方法样品前处理简单快速、分析时间短、准确度和精密度均符合农药多残留检测技术的要求,适用于鲜茶叶中21种氨基甲酸酯类农药的快速筛查和测定。     

蔬菜中氨基甲酸酯类农药残留的固相微萃取分离和HPLC法检测

采用固相微萃取制样,荧光检测器高效液相色谱法测定了蔬菜中氨基甲酸酯农药残留. 确定了影响固相微萃取效果的萃取头涂层、萃取条件、洗脱条件和蔬菜样品分析处理方法. 结果表明,蔬菜中氨基甲酸酯类农药的检出限在0.4×10-9～40×10-9 g/g范围内,线性范围为0.05～1 mg/L,回收率74.4%～108.4%,相对标准偏差(RSD)4.26%～13.97%.