槲皮素、芦丁、没食子酸抑制黄嘌呤氧化酶的活性及动力学特性

为了解槲皮素、芦丁、没食子酸及其与维生素C联用对黄嘌呤氧化酶(XOD)的抑制特性,本文通过建立黄嘌呤氧化酶体外抑制模型,以别嘌呤醇为阳性对照,测定这三种天然化合物在不同浓度下对XOD的抑制效果及抑制动力学。结果表明：三种物质对黄嘌呤氧化酶均有抑制作用,且具有浓度依赖性,其抑制效果与结构和本身性质有明显相关性,抑制作用强弱次序为槲皮素>芦丁>没食子酸,半抑制浓度IC50值分别为(5.51±0.41) μmol/L、(48.66±0.49) μmol/L、>200 μmol/L;单一没食子酸抑制效果较弱,而没食子酸在维生素C的协同下,对XOD的抑制率从20.17%提高至40.96%,起到提高抑制效果和体系稳定性的双重作用;以上三种物质对XOD的抑制类型属于不同模式的非经典型混合抑制剂。本文对研究此类物质的抑制机理和应用有重要意义。     

超声辅助提取苦丁茶多糖的工艺优化及其对黄嘌呤氧化酶抑制活性

目的：优化苦丁茶多糖的提取工艺，分析其对黄嘌呤氧化酶的抑制活性。方法：以得率为指标，采用响应面优化超声辅助法研究料液比、超声时间、超声温度、超声功率对苦丁茶多糖的得率的影响；通过体外实验测定苦丁茶多糖对黄嘌呤氧化酶的抑制率及其动力学常数K_i。结果：响应面试验优化条件为：料液比1:25 g/mL，超声时间60 min，超声温度40℃，超声功率260 W，得到得率为5.85%。苦丁茶多糖对黄嘌呤氧化酶的抑制率随物质量浓度增大而增加，IC₅₀为1.28 mg/mL，其对黄嘌呤氧化酶抑制作用类型属于竞争性可逆抑制，抑制动力学常数K_i为0.62 mg/mL，结论：苦丁茶多糖能够抑制黄嘌呤氧化酶的活性，其可作为潜在的预防高尿酸血症的食品或保健品进行深入研究，以期对苦丁茶的综合利用提供理论数据。     

马鲛鱼黄嘌呤氧化酶抑制肽的制备 工艺优化及抗氧化活性研究

目的 探究马鲛鱼黄嘌呤氧化酶抑制肽制备的最佳条件及其抗氧化活性。方法 以马鲛鱼为原料，黄嘌呤氧化酶抑制肽采用超声辅助酶法制备，并筛选最佳反应用酶；以单因素实验为基础，通过Box-Behnken响应面分析法，以黄嘌呤氧化酶抑制活性为响应值，优化得到酶解最优条件。通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH)自由基清除等方法测定膜分离物的抗氧化活性；肌肽和鹅肌肽的含量测定采用了高效液相色谱法。结果 最佳反应用酶为复配的中性蛋白酶与复合蛋白酶，总加酶量0.3%（中性蛋白酶∶复合蛋白酶=1:1, m:m）。优化所得的最佳酶解条件为：酶解温度50℃，加酶量为0.2%，pH为7.0。在此条件下黄嘌呤氧化酶抑制率37.49%，与回归理论模型基本符合。3个组分的膜分离物中，相对分子量小于1 kDa的酶解产物的抗氧化性能力最强。马鲛鱼中鹅肌肽的含量为1.558 mg/g，而肌肽含量则为0.10 mg/g。结论 马鲛鱼制备及工艺优化所得的黄嘌呤氧化酶抑制肽对黄嘌呤氧化酶有较好的抑制作用，为工业化制备马鲛鱼黄嘌呤氧化酶抑制肽提供了数据基础和理论依据，肌肽和鹅肌肽的含量测定为分离纯化马鲛鱼黄嘌呤氧化酶抑制肽试验奠定了基础。。     

五种药食同源花提取物体外协同抗氧化作用

通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除试验和2,2-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐(2,2-azobis-(2-amidinopropane)dihydrochloride,AAPH)诱导红细胞溶血试验评价菊花、金银花、槐花、代代花、白扁豆花水提物和水提物的复配物(菊花50%,槐花18%,白扁豆花15%,代代花12%,金银花5%)的抗氧化性,并讨论五种药食同源花的协同抗氧化作用。结果表明五种药食同源花的提取物及其复配物均具有一定程度的抗氧化能力。在DPPH体系中,根据自由基的半数清除率(IC₅₀值),各提取物抗氧化能力大小顺序为复配物(IC₅₀=97.83 μg/mL) > 槐花(IC₅₀=98.63 μg/mL) > 菊花(IC₅₀=140.79 μg/mL) > 金银花(IC₅₀=146.35 μg/mL) > 代代花(IC₅₀=692.24 μg/mL) > 白扁豆花(IC₅₀=701.51 μg/mL),复配物表现出明显的协同抗氧化效果。AAPH诱导红细胞溶血体系中,复配物和槐花提取物表现出很强的溶血抑制作用,而金银花、菊花、代代花以及白扁豆花提取物仅表现出较弱的抑制作用。剂量在50~300 μg/mL时槐花提取物对红细胞的溶血抑制率小于复配物,当剂量达到300 μg/mL时,槐花提取物和复配物对红细胞的溶血抑制率分别为77.83%±1.85%和80.94%±1.46%,这说明五种药食同源花提取物之间存在协同抗氧化作用。     

英红九号茶蛋白降尿酸肽的酶解制备及不同分子量组分的活性对比

以英红九号红茶渣为原料,通过碱提酸沉提取茶叶蛋白,以黄嘌呤氧化酶抑制率为指标,采用单因素和响应面实验优化酶解制备降尿酸肽,对其氨基酸组成进行分析,并对最优酶解物进行超滤分离和活性评价。结果表明,在底物浓度2%（m/V）、加酶量0.3%（m/V）、温度39 ℃、pH值7.5和酶解时间3.4 h条件下,得到的降尿酸肽的黄嘌呤氧化酶抑制率为85.42%。氨基酸分析表明,降尿酸肽中必需氨基酸含量丰富（38.49%）,高比例的疏水性氨基酸（48.00%）和碱性氨基酸（13.67%）对黄嘌呤氧化酶抑制活性有重要作用。酶解物经过超滤分离后,与原酶解物的活性（IC50 0.72 mg/mL）比较,<3 ku组分的黄嘌呤氧化酶抑制活性显著提升（IC50 0.41 mg/mL）。该研究可为茶叶蛋白的高值化利用提供参考,为茶叶源新型降尿酸健康食品的开发提供了理论依据。     

黄嘌呤氧化酶多酚抑制剂的筛选及其作用机制

黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)是人体内次黄嘌呤和黄嘌呤代谢产生尿酸的关键酶,而多酚单体可抑制黄嘌呤氧化酶从而减少尿酸合成进而缓解痛风症状。为探究来源于天然产物的多酚单体对XOD的抑制作用机制,首先研究几种常见活性较好的多酚单体对黄嘌呤氧化酶的抑制率,及其对XOD的抑制动力学,并且通过荧光猝灭实验与分子对接模拟多酚单体与XOD之间的相互作用形式。在6种多酚单体中,白藜芦醇、表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)和橙皮苷对黄嘌呤氧化酶活性的抑制效果较好,室温下IC50分别为261.22、150.51、97.08μmol/L,是黄嘌呤氧化酶的竞争性抑制剂。荧光猝灭实验表明,单体与XOD结合使酶的内源荧光发生了猝灭现象,猝灭机制为静态猝灭。分子对接模拟表明,多酚单体能与XOD的氨基酸残基结合,结合位点位于钼蝶呤(molybdopterin,Mo-Pt)辅因子或黄素腺嘌呤二核苷酸(flavine-adenine dinucleotide,FAD)结构域的异恶嗪环附近。多酚单体是有效的XOD竞争性抑制剂,可以通过抑制黄嘌呤氧化酶的活性有效降低尿酸水平,在天然产物的开发和功能性食品的应用中具有很好的前景。     

藜麦蛋白肽的酶解制备及体外降血脂与降尿酸活性研究

为研究藜麦蛋白降血脂肽的最佳酶解工艺条件和降尿酸活性,本研究以藜麦为原料提取蛋白,采用胰脂肪酶抑制率为活性指标,通过单因素实验和响应面分析法优化降血脂肽的制备工艺,并对藜麦蛋白肽的胰脂肪酶抑制活性、牛磺胆酸钠结合活性、胆固醇酯酶抑制活性、黄嘌呤氧化酶抑制活性和氨基酸组成进行分析表征。结果表明,藜麦降血脂肽的最优酶解条件为pH1.6、酶解温度42.9℃、底物浓度3.03%、酶解时间1 h和酶底比0.2%,所得酶解液的胰脂肪酶抑制率理论值为90.43%,实际值为90.93%±0.10%。该条件下制备的最优酶解物表现出优异的体外降血脂效果,其胰脂肪酶抑制率和胆固醇酯酶抑制率的IC₅₀分别为7.49μg/mL和4.73 mg/mL,牛磺胆酸钠结合率的EC₅₀为0.53 mg/mL。此外,最优酶解物显示出良好的黄嘌呤氧化酶抑制效果(IC₅₀=5.97 mg/mL),表明其具有体外降尿酸的作用。氨基酸分析表明,藜麦蛋白肽的必需氨基酸含量丰富(34.23%),并且疏水性氨基酸和酸性氨基酸百分含量分别为34.11%和31.66%。藜麦蛋...     

几种天然产物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用

研究从几种天然产物中筛选出有效的黄嘌呤氧化酶抑制剂。采用酶促反应动力学的方法研究绞股蓝皂苷、葛根素、苹果多酚、褐藻糖胶4种天然产物的黄嘌呤氧化酶体外抑制作用,进行动态监测,绘制LineweaverBurk曲线,计算IC50值,探讨其抑制效果和作用方式。试验结果表明,苹果多酚可以通过反竞争性抑制作用,有效抑制黄嘌呤氧化酶活性;褐藻糖胶虽在体外模型中也表现出显著抑制黄嘌呤氧化酶活性的作用,但抑制类型不典型。上述两种活性物质是来源于普通食品中的天然产物,具有安全可靠的特性,可以作为改善高尿酸血症患者健康状况的保健类食品原料。     

青占鱼黄嘌呤氧化酶抑制肽制备工艺优化

目的 本研究以青占鱼为原料,对黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)抑制肽的制备条件进行优化。方法 选用五种蛋白酶对其水解制备黄嘌呤氧化酶抑制肽,测定XOD抑制率和水解度并用以评价效果,通过单因素和响应面分析相结合的实验方法优化酶解条件,最后对其分子量分布情况进行了检测分析。结果 结果表明复配酶制剂为最适酶,最佳酶解工艺为：加酶量4000U/g,酶解时间4h,酶解温度55℃,pH 7.0,料液比1:2;同时测得最优工艺下XOD抑制率和水解度的实际值分别为65.21%和18.5%,与理论值基本无差别。采用该法制备的青占鱼XOD抑制肽分子量分布情况为：5500~3000Da的肽段占比56.44%,3000~1500Da的肽段占比31.07%,＜1500Da的肽段占比12.49%。结论 本研究可为青占鱼制备XOD抑制肽的生产工艺与机理研究提供一定的技术参考与理论支持。     

常见蔬菜提取物对黄嘌呤氧化酶抑制作用的筛选研究

黄嘌呤氧化酶(XO)能够催化次黄嘌呤生成黄嘌呤并进一步产生尿酸,尿酸在痛风的形成上起了关键的作用.二十九种常见蔬菜的甲醇提取物被用于体外抑制黄嘌呤氧化酶的试验.在200mg/mL浓度下,29种甲醇提取物中有20种对XO具有抑制效果,并且有3种抑制率超过50%:在100 mg/mL浓度下,有17种蔬菜提取物显示了抑制作用...     

带鱼黄嘌呤氧化酶抑制肽制备及工艺优化

目的 制备带鱼黄嘌呤氧化酶抑制肽, 研究含肌肽类活性肽的带鱼提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用。方法 以带鱼为原料, 通过超声辅助酶法制备带鱼黄嘌呤氧化酶抑制肽, 高效液相色谱法测定肌肽类活性肽的含量。结果 以肽粉得率和黄嘌呤氧化酶抑制率为指标, 筛选得到碱性蛋白酶为最佳反应用酶。以单因素实验为基础, 通过Box-Behnken响应面分析法, 以水解度、黄嘌呤氧化酶抑制活性、肌肽及鹅肌肽含量为响应值, 优化得到酶解最优条件: 酶解时间5 h, 超声时间21 min, 酶解温度49℃。在此条件下, 得出水解度21.90%、黄嘌呤氧化酶抑制率52.03%、鹅肌肽含量0.66%和肌肽含量为0.15%, 与回归理论模型基本符合。在最优酶解方案的基础上, 将酶解液进一步分成不同组分, 可得到肌肽类活性肽含量升高, 抑制活性变大。结论 肌肽类活性肽对黄嘌呤氧化酶活性的抑制有着积极的作用, 这为工业化利用带鱼制备黄嘌呤氧化酶抑制肽提供理论及指导。     

基于黄嘌呤氧化酶活性抑制和斑马鱼高尿酸血症模型的降尿酸功效食药材筛选

结合体外（黄嘌呤氧化酶活性抑制）和体内（斑马鱼高尿酸血症模型）方法,对15种食药材乙醇粗提物的降尿酸活性进行筛选。体外实验设置空白组、酶反应组、抑制剂组、对照组,酶标仪295 nm测定吸光度,计算15种食药材对黄嘌呤氧化酶（XOD）活性的抑制率;体内实验随机选取受精后第5 d（5dpf）的斑马鱼,设置空白组、模型组（200 μmol/L PO+10 μmol/L XSS）、食药材给药组（200 μmol/L PO+10 μmol/L XSS+不同浓度提取物）、阳性对照组（200 μmol/L PO+10 μmol/L XSS+APL 2 mmol/L）,水溶浸泡,28.5 ℃培养箱中孵育24 h,测定尿酸含量,对具有良好XOD抑制活性的食药材做进一步降尿酸活性验证。体外试验结果表明,15种乙醇粗提物均具有XOD抑制活性,其中8种在400 μg/mL时抑制率达到50%以上,分别为:红景天、兔耳草、牡丹皮、败酱草、黄柏、绿萝花、决明子、雪菊。体内试验结果表明,8种处理组尿酸水平与模型组相比显著降低（P<0.05或P<0.01）,均显示出降尿酸活性。     

体外亚硝化模拟体系优选阻断NPYR生成的复合香辛料精油配比

为了有效抑制N-亚硝基吡咯烷（N-nitrosopyrrolidine,NPYR）的形成,在体外模拟亚硝化反应体系中,先通过单因素实验研究市售常见的8种超临界萃取香辛料精油（Spices essential oil,SEO）,包括花椒精油、八角精油、青花椒精油、丁香精油、迷迭香精油、黑胡椒精油、当归风味姜油、砂仁精油,对NPYR的抑制作用,再利用响应面中心组合试验设计,筛选复合香辛料精油（Compound spices essential oil,CSEO）的最佳配比。单因素实验结果表明,除砂仁精油外,其他7种SEO对NPYR的形成均有抑制作用,抑制率大小与其添加浓度有一定关系。其中迷迭香精油（15、20.0 mL/L）对NPYR的抑制作用最强（80%以上）;其次花椒精油（5.0、10.0 mL/L）、青花椒精油（0.5 mL/L）和丁香精油（15.0 mL/L）对NPYR的抑制率可以达到68%以上;当归风味姜油（10.0 mL/L）和八角精油（15.0 mL/L）的抑制效果略低（50%以上）,而黑胡椒精油对NPYR的抑制率则相对较弱（低于50%）。响应面中心组合设计试验得到对NPYR抑制效果最优的CSEO配比为:441.0 μL/L花椒精油、337.0 μL/L八角精油、17.0 μL/L青花椒精油、14.0 μL/L丁香精油和137.0 μL/L迷迭香精油,由模型优选得出对NPYR抑制率的预测值为69.84%,验证试验得出的抑制率为68.40%,CSEO对N-二甲基亚硝胺（N-nitrosodimethylamine,NDMA）的抑制率为66.69%。     

8种别样茶对AGEs抑制能力的筛选及其抑制机制探究

目的:本研究通过检测非酶糖基化终末产物（advanced glycation end-products,AGEs）生成量评价8种别样茶的糖基化抑制能力,并探究抑制效果较好的别样茶对AGEs生成各阶段的抑制作用机制。方法:本研究首先对8种别样茶水提液中总黄酮含量进行检测,接着通过构建体外蛋白质非酶糖基化模型实验检测了8种别样茶抑制AGEs生成的能力,最后择优测定其对糖基化早期产物果糖胺、中期产物活性羰基化合物以及蛋白质交联的抑制能力,从而探究其对非酶糖基化反应的抑制机制。结果:大叶苦丁茶（Ilex latifolia Thunb）和甜茶（Rubus suavissimus S. Lee）对AGEs的抑制效果在8种别样茶中较为突出,50 μg/mL时AGEs抑制率分别达到了76.31%±0.87%和81.75%±0.41%;大叶苦丁茶和甜茶主要通过抑制糖基化早期、中期产物的生成量来减少AGEs的产生。其中,500 μg/mL甜茶对果糖胺抑制率最高（59.12%）,蛋白质交联抑制率最高（81.41%）,5000 μg/mL大叶苦丁茶对活性羰基化合物抑制率最高（94.24%）。结论:大叶苦丁茶及甜茶可以作为抑制糖基化反应的功能食品,本研究可为具有抑制AGEs产生功效原料的综合开发利用提供一定的理论依据。     

茶碱及其复配多酚协同清除丙烯醛作用研究

目的 考察茶碱及结构相似的生物碱在模拟加工体系中对丙烯醛（acrolein, ACR）的清除活性并探究12种常见多酚与茶碱复配对其活性的影响。方法 通过高效液相色谱法分析模拟加工体系中茶碱及结构相似的生物碱对ACR的清除活性以及模拟生理条件下12种多酚与茶碱复配后反应体系中茶碱和ACR一加合产物（TP-ACR）含量的变化，并以表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin gallate, EGCG）为代表，根据Chou-Talalay法则将茶碱与EGCG以1:50的比例进行复配, 计算联合作用指数，分析复配组分之间作用效果。结果 茶碱、副黄嘌呤、可可碱在模拟加工体系均有良好的ACR清除活性，茶碱的活性最佳，30min时可清除体系中79%的ACR。12种多酚中杨梅素、槲皮素、山奈酚、高良姜素和姜黄素可促进茶碱对ACR的清除作用，促进效果分别可达10.7%、26.8%、20.1%、19.4%、43.1%，而根皮素、表儿茶素、EGCG、阿魏酸、绿原酸、咖啡酸和白藜芦醇则抑制了茶碱的清除活性。茶碱与EGCG的添加浓度范围分别为0.05-0.5 μg/mL与2.5-25 μg/mL时联用在低温和高温条件下均可表现出较好的协同效应。结论 茶碱自身可在模拟加工条件下发挥良好的ACR清除作用，且可与多酚联用协同增效，从而提高其清除活性。     

黄芪多糖对黄嘌呤氧化酶活性的抑制作用

黄嘌呤氧化酶是尿酸生成的关键酶,通过抑制黄嘌呤氧化酶的活性可以有效降低机体内尿酸的含量。为探究黄芪多糖对黄嘌呤氧化酶的抑制作用,采用紫外分光光度法测定单位时间内酶促反应体系中酶活力的变化,计算不同质量浓度的黄芪多糖对黄嘌呤氧化酶的抑制率,得到半抑制浓度IC₅₀。双倒数作图法判断黄芪多糖对黄嘌呤氧化酶的抑制类型,并计算抑制常数Ki值,等毒法评价黄芪多糖与别嘌呤醇的联合作用效果。黄芪多糖能够抑制黄嘌呤氧化酶的活性,其IC₅₀为1.37 mg/mL。动力学分析表明,黄芪多糖对黄嘌呤氧化酶为竞争性可逆抑制作用,抑制常数Ki为0.59 mg/mL。黄芪多糖与别嘌呤醇的联合作用表现为拮抗作用,黄芪多糖对黄嘌呤氧化酶的活性有抑制作用。     

黄蜀葵花总黄酮提取工艺优化及其对黄嘌呤氧化酶的抑制作用

通过十二烷基硫酸钠（SDS）协同超声波提取黄蜀葵花中总黄酮,并研究其对黄嘌呤氧化酶（XOD）的抑制作用,从而达到高效利用黄蜀葵花资源的目的。以总黄酮含量为指标,通过单因素实验确定料液比、超声波功率、SDS浓度为主要影响因素,再采用Box-Behnken中心组合设计结合响应面分析法,对黄蜀葵花总黄酮提取工艺进行优化,并对提取液抑制XOD的效果进行测定。结果表明:最佳提取方案为料液比1:48 g/mL,超声功率320 W,SDS浓度0.05 g/mL,在此条件下对黄蜀葵花中总黄酮进行提取,含量为4.63 mg/g;在抑制剂浓度为0.38~1.92 mg/mL范围内,黄蜀葵花提取液XOD抑制率最高为98.35%,对XOD有良好的抑制作用。     

北极海洋红球菌B7740（Rhodococcus sp.）产类胡萝卜素和类异戊二烯醌的抗氧化、抗增殖活性

本实验旨在研究来自北极海洋红球菌B7740类胡萝卜素和类异戊二烯醌提取物（B7CIQE）的体外抗氧 化活性（通过β-胡萝卜素漂白测定、脂质和蛋白质氧化抑制实验、DNA氧化断裂抑制实验）、抗增殖活性（通过 抗人肝癌细胞HepG2和人口腔癌细胞KB增殖实验）和细胞内抗氧化效果。实验中使用日常饮食常见高等植物来 源类胡萝卜素（β-胡萝卜素、叶黄素、番茄红素）作为对照组,评价B7CIQE的生物活性：β-胡萝卜素氧化抑制 率为B7CIQE（70.20%）＞2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚（66.70%）＞表没食子儿茶素没食子酸酯（17.80%）＞番茄 红素（1.90%）;油脂开始氧化的温度顺序为B7CIQE（175 ℃）＞β-胡萝卜素（165 ℃）＞叶黄素（162 ℃）＞ 番茄红素（160 ℃）;蛋白质氧化抑制率为B7CIQE（25.75%）＞β-胡萝卜素（24.97%）＞叶黄素（17.94%）＞ 番茄红素（10.40%）;HepG2细胞抗增殖实验半最大效应浓度为叶黄素（20.86 μg/mL）＜β-胡萝卜素 （124.88 μg/mL）＜B7CIQE（126.34 μg/mL）＜番茄红素（139.24 μg/mL）;KB细胞抗增殖实验半最大效应浓度为 B7CIQE（25.14 μg/mL）＜叶黄素（64.29 μg/mL）＜番茄红素（69.87 μg/mL）＜β-胡萝卜素（149.16 μg/mL）。结 果表明,与植物源类胡萝卜素相比,B7CIQE具有相对更优异的抗氧化和抗增殖活性。     

没食子酸对猪胰α-淀粉酶和蛋白酶的抑制作用

以没食子酸为材料,通过考察酶质量浓度、反应体系中底物和酶及没食子酸添加顺序、不同反应时间、不同没食子酸质量浓度对猪胰α-淀粉酶、蛋白酶的活性影响,研究没食子酸对两种酶的抑制作用。结果表明,在底物质量浓度为1g/100mL、体系添加顺序为酶液与抑制剂没食子酸溶液37℃预温5min后加入底物溶液的条件下,没食子酸抑制猪胰α-淀粉酶活性最优条件为:α-淀粉酶质量浓度0.64mg/mL,反应时间15min,没食子酸对α-淀粉酶的最大抑制率为95.52%;在体系添加顺序为酶液与抑制剂没食子酸溶液40℃预温5min后加入底物溶液的条件下,没食子酸抑制猪胰蛋白酶活性的最优条件为:胰蛋白酶质量浓度0.63mg/mL,反应时间30min,没食子酸对胰蛋白酶的最大抑制率为99.24%。没食子酸对两种酶的抑制效果均随没食子酸质量浓度的增大而增强。     

裙带菜α-葡萄糖苷酶抑制活性肽的制备

通过响应面法优化裙带菜α-葡萄糖苷酶抑制活性肽的制备工艺,以期得到一种调控餐后血糖的新型有效成分。选择五种蛋白酶酶解裙带菜蛋白筛选最佳水解酶,研究底物浓度、加酶量、pH、酶解温度、酶解时间对产物抑制率和水解度的影响,并根据单因素实验结果运用Box-Behnken设计原理进行三因素三水平的响应面优化试验,测定酶解液的分子量并绘制酶抑制动力学曲线。结果表明,最佳酶解条件为碱性蛋白酶,底物浓度7.11%,pH10.14,温度47 ℃,加酶量10000 U/g,反应时间1 h,在此条件下,酶解液的抑制率为51.17%,与预测值接近;裙带菜酶解液多为小肽,半抑制浓度为46.079 mg/mL,抑制类型为典型的可逆混合型抑制。本研究获得了裙带菜α-葡萄糖苷酶抑制活性肽的最佳制备工艺和理化性质,为开发新型降血糖活性肽提供理论基础和实验依据。