基于单克隆抗体的胶体金免疫层析法快速检测丁香酚

目的 采用免疫层析技术对丁香酚残留的胶体金免疫层析快速检测试纸条的制备开展研究。方法 用柠檬酸三钠还原法制备胶体金纳米颗粒, 标记丁香酚单克隆抗体得到胶体金-丁香酚单克隆抗体复合物。以硝化纤维素膜为固相载体, 包被丁香酚-BSA偶联物为检测带(T带), 羊抗鼠IgG为质控带(C带), 建立了丁香酚的胶体金免疫层析快速检测试纸条。结果 胶体金免疫层析试纸条具有较高的灵敏度和特异性, 检出限为2.0 mg/L。结论 本研究所开发的胶体金免疫层析试纸条可作为快速测定丁香酚的可靠、低成本的方法。     

除草剂扑草净胶体金免疫层析检测试纸条的研制

制备了扑草净胶体金免疫层析检测试纸条,建立了水样中扑草净的快速检测方法.采用柠檬酸三钠还原氯金酸法制备胶体金,对胶体金免疫层析方法的工作条件(NC膜的封闭条件、金标垫的处理方法)进行优化.最终建立的方法检出限为5 ng/mL,5min内可以通过目测进行结果判断.河水样品不需要任何处理可以直接进行检测,检出限为5 ng/mL.本研究建立的快速免疫检测方法适用于水中扑草净残留的现场检测.     

沙丁胺醇免疫层析试纸条的应用研究

用胶体金和纳米金-聚苯胺-纳米金微球(GPG)分别标记制备的沙丁胺醇多克隆抗体,喷涂在玻璃纤维垫上,将包被抗原和羊抗兔二抗分别固定到硝酸纤维素膜上作为检测线(T-Line)和质控线(C-Line),干燥后组装试纸条,建立免疫层析分析方法。考查检测试纸条的灵敏度和稳定性,并应用于动物源性食品(猪肉、牛肉、羊肉和猪肝)中沙丁胺醇残留的可视化检测。实验结果可以看出,沙丁胺醇胶体金标记免疫层析分析方法的样品检出限为5μg/L,沙丁胺醇GPG标记免疫层析分析方法的样品检出限为10μg/L。     

胶体金免疫层析法定量检测鱼和虾中苯巴比妥残留

建立了一种快速定量检测水产品鱼和虾中苯巴比妥残留的胶体金免疫层析方法。采用胶体金纳米粒标记苯巴比妥单克隆抗体,研究了胶体金免疫层析条件如标记体系p H值、标记抗体浓度、检测T线包被原浓度、质控C线羊抗鼠Ig G浓度、样品前处理方法等对胶体金灵敏度的影响,并借助胶体金试纸条读数仪进行定量检测。结果表明:方法检出限为0.07 ng/mL,线性范围0.08～0.94ng/m L,裸眼消线值(cut-off值)为10.0 ng/mL。方法特异性良好,与巴比妥、戊巴比妥、异戊巴比妥三种结构类似物交叉反应率小于10%。选择罗非鱼、草鱼、鲈鱼和虾进行添加回收试验,样品回收率在73.50%～114.17%之间,相对标准偏差小于15%,且结果与UPLC-MS/MS法一致。该方法具有准确、灵敏、简便、快速等特点,非常适用于水产品鱼和虾中苯巴比妥残留现场快速筛查。     

时间分辨荧光免疫层析快速检测牛奶中地塞米松

目的 建立基于时间分辨荧光微球对牛奶中的地塞米松残留进行快速检测的方法,并对该方法性能进行评估。方法 使用地塞米松抗体标记时间分辨荧光微球,分别采用湿法和干法制备检测试纸条,比较两种方法的灵敏度,同时确定了微球的最佳抗体标记量,并对试纸条的重复性、检测灵敏度进行评估。结果 以20 μg抗体/mg微球的标记量,湿法制备的试纸条检测灵敏度更佳。该方法重复性检测中变异系数CV为8.2%,地塞米松溶液的检出限为0.07 ng/mL,检测牛奶中地塞米松的IC50为0.24 ng/mL。结论 该方法具有测试简单、灵敏度高等特点,制备的试纸条可满足牛奶中地塞米松残留的检测要求。     

乳品中多种抗生素残留胶体金检测方法研究

研究用于牛奶和奶粉中多种抗生素残留同时检测的胶体金免疫层析试纸条。基于胶体金免疫层析技术,搭建抗原包被体系和胶体金标记抗体体系,优化检测方法,考察胶体金快速检测试纸条的检测灵敏度、特异性、准确度和实际样本适应性。试纸条可同时检测卡那霉素、红霉素、林可霉素3种药物在牛奶、奶粉中的残留,检测限分别为50.0,20.0和75.0μg/L,假阳性率和假阴性率均为0,样本无需前处理,检测操作简单,10 min内实现3种药物同时检测。采用胶体金试纸条和液相色谱串联质谱法对20份牛奶和奶粉盲样进行比对试验,阳性样品全部检出,2种方法测定结果一致。建立的胶体金免疫层析技术及试纸条检测准确可靠,适用于现场大批量样本的快速检测和筛选。     

食用油中致癌物苯并芘的快速免疫检测胶体金层析试纸条研制

采用免疫胶体金技术,首次建立了一种快速检测苯并芘的试纸条方法。先合成了苯并芘半抗原,并与载体蛋白偶联得到免疫抗原。再利用人工免疫的方法成功获得了单克隆抗体,通过酶联免疫检测方法的建立对制备的单克隆抗体性能进行了验证。将单克隆抗体用以标记胶体金,并将苯并芘包被抗原与二抗(羊抗鼠IgG)分别喷制到硝酸纤维膜上,与样品垫、吸水垫依次粘贴在PVC衬板上制备成了胶体金层析试纸条。经验证该试纸条检测限可达5~10 ng/mL,具有检测速度快、操作简单、灵敏度高等优点,且该试纸条与大部分苯并芘结构类似物无交叉反应。经实际食用油样品的加标实验,证明了该试纸条可实现对当前食用油中致癌物苯并芘的快速、准确判定。     

上转换荧光猝灭试纸条检测牛奶中磺胺喹恶啉

目的:根据荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)的原理,构建一种基于上转换荧光纳米材料的新型免疫标记荧光猝灭试纸条检测牛奶中的兽药磺胺喹恶啉(sulfaquinoxaline,SQX)残留。方法:通过热分解方法合成上转换纳米荧光材料,通过柠檬酸三钠还原法制备胶体金纳米颗粒。将合成的上转换荧光颗粒固定在试纸条C线上,并将上转换荧光颗粒与SQX包被抗原的混合物固定在T线上,将胶体金标记的SQX单克隆抗体喷涂在金标垫上。滴加样品后,随着样品液的流动,金标抗体会移动到T线处并与SQX包被抗原结合,这种结合会导致抗体上的纳米金颗粒(受体)与T线上的上转换颗粒靠近(供体),从而发生FRET,产生荧光猝灭。在980 nm激发器激发波长下通过目测检测荧光强弱变化,从而实现对SQX的检测。结果:该免疫荧光猝灭试纸条检测SQX的方法检测限为1μg/L,牛奶样品的检测限为8μg/L。整个检测过程不超过15 min。结论:该方法操作简便、灵敏度高、检测时间短、结果易于判断,可以满足牛奶中SQX残留的现场快速检测的要求。     

胶体金免疫层析法快速定量检测猪肝中喹乙醇残留

本文研究了胶体金免疫层析试纸条快速定量检测猪肝中喹乙醇残留的方法。利用胶体金免疫层析技术,制备了喹乙醇胶体金试纸条,检测了其特异性,并建立了T/C比值法进行定量检测猪肝中喹乙醇的残留。制备的试纸条可以在15min内完成定性和定量检测,与卡巴氧、乙酰甲喹和3-甲基-喹噁啉-2-羟酸几乎无交叉反应。当肝中喹乙醇质量浓度在1~200ng/mL范围内,试纸条有较好的线性关系,最低检测限为6.83ng/mL。阴性加标实验结果表明,喹乙醇浓度在25、50、100ng/mL时,试纸条的回收率在90.9%~105.0%之间。     

胶体金免疫层析试纸条快速检测水和玉米中阿特拉津的残留

本文以胶体金作为抗体标记物,建立了一种检测阿特拉津残留的免疫层析试纸条快速检测方法.该方法的检出限为2ng/mL,10min内可以得到检测结果.本文以自来水和玉米作为样品进行了添加回收实验,水样不需要任何前处理直接检测,水样的检出限为2 ng/mL;玉米样品经简单前处理后检测,玉米样品的检出限为40 ng/g,且该方法的检测结果与间接竞争ELISA方法的结果一致.该方法具有成本低、操作简单、灵敏度高、检测快速,结果易于判定等优点,适用于大量样品的现场筛选.