高效液相色谱法检测富硒酵母中的硒代蛋氨酸

建立了高效液相色谱法测定富硒酵母中硒代蛋氨酸的分析方法。采用酶解提取法提取富硒酵母样品中的硒代蛋氨酸,丹磺酰氯柱前衍生,C18色谱柱(4.6 mm×250 mm i.d.,5μm)分离,以10 mmol/L磷酸二氢钠缓冲液(含4%N,N-二甲基甲酰胺,pH=6.55)和乙腈为流动相进行梯度洗脱,荧光检测(激发波长:320 nm;发射波长:523nm)。硒代蛋氨酸的检出限为(S/N=3)1μg/L,定量限为(S/N=10)5μg/L。在1 mg/L~50 mg/L范围内的线性关系良好(R≥0.999 6)。加标回收率在91.12%~107.83%,方法相对标准偏差<1.2%。本方法具有专属性好,灵敏度高,适用于富硒酵母原料及相关产品中的硒代蛋氨酸的定量测定。     

耐硒驯化灵芝菌种的液态发酵中硒的富集特征

对灵芝(Ganoderma lucidum)菌株在平板上做耐硒驯化,然后对驯化前后灵芝菌种液态发酵过程中富硒性能进行了比较,最后对驯化灵芝液态发酵中硒富集特征进行了研究。实验结果表明,灵芝菌种经耐硒驯化后,其生物量、菌丝体硒含量、总硒含量最高分别达到16.1 g/L,13 264μg/L和91.5 mg/L,明显优于未驯化组。对驯化灵芝液态培养过程中硒富集特征研究表明,富硒灵芝中存在硒代蛋氨酸(SeMet)、硒代胱氨酸(SeCys2)、硒甲基硒代半胱氨酸(SeMeCys)和无机硒(Se(IV))等4种硒形态,其中SeMet、SeCys2占主要部分,分别可达硒代氨基酸总量的60%～90%、10%～40%;在培养过程中单一增加Na2SeO3添加浓度,并不能显著增加灵芝中硒代氨基酸含量,而更多以Se(IV)形式存在。     

高效液相色谱-电感耦合等离子体串联质谱法测定富硒大蒜中硒形态

目的 建立大蒜中硒形态的高效液相色谱-电感耦合等离子体串联质谱测定方法。方法 采用ZORBAX SB-Aq反相离子对色谱柱作为分析柱,10.00 mmol/L柠檬酸(铵)+5.00 mmol/L己烷磺酸钠+2.00%甲醇为流动相,梯度洗脱,可在10.00 min内完成对硒酸根(SeO2-₄)、亚硒酸根(SeO2-₃)、硒代胱氨酸(SeCys2)、甲基-硒代半胱氨酸(MeSeCys)、硒代蛋氨酸(SeMet)和硒代乙硫氨酸(SeEt)的分离分析。采用恒温振摇辅助酶提取法对大蒜进行提取。结果 SeO2-₄、SeO2-₃、SeCys2、MeSeCys、SeMet和SeEt的方法检出限分别为0.40、0.40、0.44、0.47、0.35和0.45 μg/kg,0.00～100.00 μg/L范围内线性相关系数(r)均>0.999,线性关系良好。除SeCys2,加标回收率为79.00%～104.00%,相对标准偏差为2.20%～5.00%(n=7)。结论 该方法稳定性好,灵敏度和准确度高,适用于大蒜中5种硒形态分析。     

超声提取结合HPLC-ICP-MS联用测定富硒山茶油中的硒形态

采用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱(HPLC-ICPMS)法测定富硒山茶油中硒代胱氨酸、甲基-硒代半胱氨酸、亚硒酸根、硒代蛋氨酸、硒酸根5种硒形态化合物含量。样品0.5 g经蛋白酶K和超声提取，利用Hamilton PRP-X100色谱柱进行分离，以5 mmol/L柠檬酸溶液(pH 5.5)、超纯水为流动相进行梯度洗脱，外标法定量。结果表明，采用1 mL蛋白酶K溶液为提取剂，超声提取50 min，5种硒化合物在15 min内得到了有效分离。5种硒化合物的质量浓度为5.0~100 μg/L时，线性关系良好，相关系数均大于0.999，检出限为0.16~1.15 μg/L，定量限为9.6~69.0 μg/kg，相对标准偏差(RSD)为1.86%~4.87%，样品加标回收率为94.6%~113.1%。表明该法操作简便、检出限低、精密度及准确度良好，适用于富硒山茶油中硒的形态分析。     

富硒玉米蛋白水解物中硒肽及含硒氨基酸的结构鉴定

为了明确硒在玉米蛋白中的赋存形式,采用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS/MS),结合质谱数据库比对以及高效液相色谱-等离子体质谱法(HPLC-ICP/MS),对富硒玉米蛋白水解物中硒肽及含硒氨基酸的结构进行鉴定。结果确定了5个小肽,其氨基酸序列分别为:SeMet-MeSeCys-Glu、Met-MeSeCys-Glu、MeSeCys-Glu-Asp、Ile-MeSeCys-Glu、γ-Glu-MeSeCys;确定了4种含硒氨基酸,分别为硒代蛋氨酸(SeMet)、硒代乙硫氨酸(SeEt)、L-硒-甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)、硒代胱氨酸(SeCys2)。借助于标样对含硒氨基酸和二肽进行定量,5个硒肽均含MeSeCys,其中只有一个肽段含SeCys2;但在含硒氨基酸中则是以SeMet含量最高为(586.3±49.5)ng/g,最低的是SeCys2为(102.6±9.0)ng/g。     

液相色谱——氢化物发生原子荧光光谱法测定富硒稻谷中硒的形态

建立了富硒稻谷中硒代胱氨酸(SeCys)、亚硒酸根(Se(IV))、硒代蛋氨酸(SeMet)、硒酸根(Se(VI))4种硒形态的高效液相色谱-氢化物发生原子荧光光谱分析方法。稻谷样品采用链霉蛋白酶E酶解提取,40 mmol/L磷酸氢二铵为流动相,经汉密尔顿阴离子交换柱分离后的溶液引入仪器进行氢化物发生-原子荧光光谱法测定。结果表明,4种硒形态标准曲线线性关系良好(R~2≥0.999 0),方法检出限为0.008 01-0.059 25 mg/kg,回收率为85.9-103.9%,RSD3%。本方法前处理简单,灵敏度高,能有效地分离并检测出稻谷中多种硒形态含量。     

HPLC-ICP-MS法测定富硒小麦中硒的形态

建立高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用(high performance liquid chromatography-inductively coupled plasma mass spectrometry,HPLC-ICP-MS)检测富硒小麦中4种硒形态分析方法。使用微波辅助酶萃取富硒小麦中亚硒酸盐(SeIV)、硒酸盐(SeVI)、硒代蛋氨酸(SeMet)和硒代胱氨酸(SeCys2),采用Hamilton PRP X-100色谱柱,以6 mmol/L柠檬酸为流动相,pH=5.0,在9 min内可完全分离4种硒形态。SeCys2、SeIV、SeMet、SeVI的检出限分别为0.23、0.15、0.30、0.16μg/L,线性相关系数(r2)均大于0.999。以富硒小麦为基体进行加标回收试验,SeCys2、SeIV、SeMet、SeVI的回收率在93.7%～105.2%之间,相对标准偏差为2.2%～6.6%(n=6)。方法简单快速,具有良好的精密度和准确度,适用于富硒小麦中硒形态分析。     

阴离子交换色谱-氢化物发生-原子荧光光谱联用测定片剂类富硒保健品中4种形态硒

目的建立了阴离子交换色谱-氢化物发生-原子荧光光谱联用测定富硒保健品中硒酸根[Se(Ⅵ)]、亚硒酸根[Se(Ⅳ)]、硒代胱氨酸(SeCys_2)和硒代蛋氨酸(SeMet)的方法。方法采用Hamilton PRP-X100阴离子交换柱(250 mm×4.1 mm,10μm),以40 mmol/L磷酸氢二铵(pH=6.0)为流动相,在12 min内可完全分离4种硒形态。结果 Se(Ⅳ)、Se(Ⅵ)、SeCys_2和SeMet的检出限分别为0.85、1.07、0.91和1.73μg/L,标准曲线相关系数均0.999 5,加标回收率为80.2%~108.7%,相对标准偏差(RSD)均5.0%。比较了不同提取方法对片剂类富硒保健品中4种硒形态的提取效果,以亚硒酸盐为硒源的样品采用0.6 mol/L盐酸提取效果理想,提取率92%;含有有机硒的保健品采用蛋白酶K提取,提取率82%。结论本方法快速、简单、准确,适用于测定片剂类富硒保健品中硒形态,为监督富硒保健食品的质量提供技术支持。     

超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱法测定富硒食品中的硒代氨基酸

目的建立一种用于检测富硒食品中4种硒代氨基酸的超高效液相色谱-串联质谱法。方法考虑3种样品前处理方法的影响,采用0.1%的甲酸(A)和乙腈(B)二元流动相体系对N-乙酰-L-硒代蛋氨酸、Se-(甲基)硒基-L-半胱氨酸、硒代蛋氨酸和硒代胱氨酸等4种硒代氨基酸进行色谱分离。采用多反应监测模式(multiple reaction monitoring,MRM)进行监测,基质匹配外标法进行定量。结果口服液中,4种硒代氨基酸的线性关系良好(r0.996),平均回收率范围为89.0%~104.5%,相对标准偏差均小于7%。结论该方法对简单基质的样品中硒代氨基酸的测定结果准确可靠,但基质效应较为明显。     

高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法检测富硒苹果中5种硒形态

目的建立高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用技术(high performance liquid chromatographyinductively coupled plasma mass spectrometry,HPLC-ICP-MS)测定富硒苹果中5种硒形态的方法。方法对样品提取方法、流动相的类型、浓度、p H值等条件进行考察及确定,采用柠檬酸超声提取的方式处理样品,流动相为浓度为5 mmol/L、p H=5.0的柠檬酸溶液。选用Hamiltion PRP-X100阴离子分析柱,色谱进样量为100μL,质谱采用碰撞池模式进行测定。结果本方法在15 min内可以完全分离5种硒形态,硒代胱氨酸(Se Cys2)、甲基硒代半胱氨酸(Me Se Cys)、亚硒酸根(Se(Ⅳ))、硒代蛋氨酸(Se Met)、硒酸根(Se(Ⅵ))的检出限分别为0.6、0.7、1、0.9、1μg/L,样品加标回收率范围为82.1%~98.3%,相对标准偏差为1.6%~3.8%。结论本方法可以简单、快速、准确地测定富硒苹果中硒的5种形态。     

UHPLC-DAD Multi-Method for Determination of Phenolics in Aromatic Plants

The aim of this paper was to develop and validate a method of ultra high-performance liquid chromatography coupled with diode array detector (UHPLC-DAD), which allows quantifying simultaneously 19 phenolic compounds in aromatic plants. Twenty-one fresh and dried aromatic plants were extracted with methanol before their UHPLC-DAD analysis. The method was validated regarding specificity, working range, linearity, limit of detection (LOD) and quantification (LOQ), precision, and accuracy. The developed method allows detecting and quantifying the phenolic compounds at low concentrations (LOD < 0.15 μg/mL, except for carnosol and carnosic acid). The relative standard deviation obtained was lower than 5.73 and 8.75%, for repeatability and intermediate precision, respectively. The proposed method is straightforward and sensitive, with good precision and accuracy. Dried thyme presented the highest diversity of phenolic compounds and rosmarinic acid was present in most of the samples. This analytical tool is a valid alternative to conventional methods to quantify phenolic compounds in aromatic plants or in their extracts.     

Vortex-Assisted Liquid-Liquid Micro-extraction Followed by Head Space Solid Phase Micro-extraction for the Determination of Eugenol in Fish Using GC-MS

Vortex-assisted liquid-liquid micro-extraction (VALLME) was applied for eliminating the matrix effect and improving the sensitivity of eugenol determination by headspace solid phase micro-extraction (HS-SPME) coupled with gas chromatography-mass spectrometer (GC-MS) in fish samples. Under the optimum condition of VALLME and HS-SPME, the good linearity of eugenol in fish samples was obtained in the range from 15.0 to 750.0 μg/kg. The limit of detection (LOD) and the limit of quantification (LOQ) for eugenol were 0.5 and 1.5 μg/kg, respectively. The recovery of eugenol was ranging from 95.4 to 119.9% and the relative standard deviation (RSD %) for eugenol was lower than 20%. The results turned out that VALLME followed HS-SPME-GC-MS was a simple, rapid, and accurate method for the determination of eugenol in fish samples. The levels of eugenol in different parts of real samples were tested by the developed method, and the results concluded that the developed method was compatible with GC-MS analysis with long-term application and had excellent repeatability, linearity, and sensitivity.     

分散液液微萃取-高效液相色谱法测定枸杞中α-生育酚

建立基于分散液液微萃取样品前处理法,并结合高效液相色谱紫外检测技术测定枸杞中α-生育酚的含量,考察影响分散液液微萃取的因素包括萃取剂和分散剂类型及用量、p H值、离子强度、萃取时间和萃取温度。方法的线性范围为100~50 000μg/L,r=0.999 7。在最优条件下,日内和日间重复性分别为2.9%和6.5%,检出限为3.1μg/L,定量限为10.2μg/L。并将该法成功应用于3种市售枸杞中α-生育酚含量的测定,加标回收率为85.7%~106.3%,相对标准偏差为0.68%~4.62%。方法具有有机溶剂用量少、操作简单快捷、准确度和灵敏度高、重复性好等优点。     

高效液相色谱法同时测定葡萄酒中16 种添加剂

研究同时测定葡萄酒中16 种添加剂的高效液相色谱方法。该法主要采用C A P C E L L P A K C 18柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）分离,以甲醇-20 mmol/L乙酸铵溶液为流动相,采取梯度洗脱,在波长250 nm处进行测定。结果表明,在0.1～20 mg/L的质量浓度范围内线性相关系数良好,相关系数范围为0.999 3～0.999 7,方法检出限范围为0.01～0.5 mg/L,相对标准偏差在0.3%～6.3%之间,平均回收率范围在76.5%～108.5%之间。本方法简便、可靠,能满足对市场上葡萄酒中相关非法添加剂的检测监控要求。     

燕窝中唾液酸的DAD/FLD串联HPLC测定方法研究

建立燕窝中唾液酸的柱前衍生二极管阵列/ 荧光检测器(DAD/FLD)串联的反相高效液相色谱检测方法。用硫酸氢钠溶液水解样品,以邻苯二氨盐酸盐为衍生化试剂,采用C18 柱分离,四氢呋喃溶液(含体积分数0.5%磷酸和体积分数0.15% 正丁胺)- 乙腈为流动相等度洗脱,流速1.0mL/min,二极管阵列检测波长230nm,荧光激发波长(Ex) 230nm,发射波长(Em) 425nm。结果表明,唾液酸在0.1～750μg/mL 范围内线性良好(r ＞ 0.9990),20min内完全分离,回收率在85.03%～97.14% 之间。检出限0.2μg/mL(DAD),0.005μg/mL (FLD),FLD 检出限比DAD低两个数量级且杂峰少,在DAD 检出限以上的相同浓度下,DAD 比FLD 更灵敏。本方法具有灵敏度高,重复性好,分析速度快等特点,可准确测定燕窝等样品中唾液酸含量。     

Determination of free and total sulfites in wine using an automatic flow injection analysis system with voltammetric detection

An automated flow injection analysis (FIA) system, based on an initial analyte separation by gas-diffusion and subsequent determination by square-wave voltammetry (SWV) in a flow cell, was developed for the determination of total and free sulfur dioxide (SO₂) in wine. The proposed method was compared with two iodometric methodologies (the Ripper method and a simplified method commonly used by the wine industry). The developed method displayed good repeatability (RSD lower than 6%) and linearity (between 10 and 250 mg l^?1) as well as a suitable LOD (3 mg l^?1) and LOQ (9 mg l^?1). A major advantage of this system is that SO₂ is directly detected by flow SWV.     

当归胶囊中三种有效成分含量测定的方法学验证

目的:建立当归胶囊中三种有效成分藁本内酯、阿魏酸、粗多糖的含量测定方法,并对检测方法进行方法学验证。方法:藁本内酯、阿魏酸采用高效液相色谱法,粗多糖采用紫外分光光度法,进行系统适应性、专属性、线性、检出限、准确度、精密度、重复性、稳定性等的方法学考察。结果:藁本内酯在20~60 μg/mL线性良好,r=0.9996,平均加样回收率为99.72%(RSD=2.99%),精密度、重复性、稳定性RSD均≤1%;阿魏酸在6~18 μg/mL线性良好,r=0.9990,平均加样回收率为96.11%(RSD=4.18%),精密度、重复性、稳定性RSD均≤2%;粗多糖在0.05~0.15 mg线性良好,r=0.9987,平均加样回收率为103.52%(RSD=4.79%),精密度、重复性、稳定性RSD均≤5%。结论:三种方法准确、可靠,可用于当归胶囊中三种有效成分藁本内酯、阿魏酸、粗多糖的含量测定。     

高效液相色谱-串联质谱测定黄冠梨果皮中主要酚类物质

为研究黄冠梨果皮中的主要酚类物质,采用了高效液相色谱—串联质谱方法定性、定量检测黄冠梨果皮中主要酚类物质,并评价该方法定量分析的准确性、线性和检出限。以甲醇—1%乙酸溶液为流动相做梯度洗脱,柱温30℃,检测波长280 nm,流速为0.6 mL/min;质谱检测在负离子模式下,利用全扫描模式、多反应检测模式和中性丢失模式进行。在此方法下,样品中的酚类物质在50 min内得到分离并由色谱的保留时间和质谱信息确定。结果表明:黄冠梨果皮中共检测出15种酚类物质,主要以绿原酸含量最多,含量为65.765 2 mg/100gDW,其次是熊果苷、儿茶素、香豆酸、咖啡酸、槲皮素等。     

乙酸酐衍生GC-ECD法测定饮料中三氯蔗糖含量

建立一种乙酸酐衍生-气相色谱-电子捕获器检测食品中三氯蔗糖含量的方法。样品经水稀释、1-甲基咪唑催化、乙酸酐衍生,生成的衍生物采用气相色谱-质谱法定性,气相色谱-电子捕获器法定量。结果表明：衍生目标物为4,1’,6’-三氯-2,3,6,3’,4’-五乙酰基蔗糖,并且在0.02～1.2 mg/mL范围内线性关系良好（R= 0.999 4）,检出限为0.23 mg/kg,回收率为90.0%～94.5%,相对标准偏差（n=6）为0.6%～2.5%。该方法操作简单、干扰少、检出限低、灵敏度高、线性好、结果准确,能很好地满足饮料中三氯蔗糖含量的测定。     

QuEChERS/超高效液相色谱-串联质谱法测定大黄鱼中非法染料硫代黄素

建立了超高效液相色谱-串联质谱法测定大黄鱼中硫代黄素残留的分析方法。样品中的硫代黄素经乙腈-水溶液提取,QuEChERS方法净化,C₁₈色谱柱分离,以0.1%（体积分数）甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,三重四极杆质谱电喷雾多反应监测模式检测,外标法定量。结果表明,硫代黄素为0.5～50.0 ng/mL时线性关系良好,相关系数（r）大于0.998,检出限为2.0μg/kg,定量限为5.0μg/kg。在5.0、20.0、100.0μg/kg 3个浓度下的平均回收率为94.1%～99.2%,相对标准偏差小于1.60%。该方法操作简单、准确性高、重复性好,可用于大黄鱼中非法染料硫代黄素的测定,为大黄鱼的质量监管提供了有力的技术支撑。