猪肉内源性脂肪酶三种提取方法的比较研究

比较PEG2000/(NH4)2SO4双水相体系萃取法、反胶团提取法、双水相萃取和壳聚糖沉淀相结合的三种方法对猪肉内源性脂肪酶萃取效果的影响。通过正交实验进一步优化每一种方法的提取条件。结果表明:在PEG2000浓度25%、(NH4)2SO4浓度12%、pH6.5、壳聚糖浓度为2.5mg/mL的条件下,进行双水相萃取和壳聚糖沉淀相结合法萃取脂肪酶的萃取效果最佳,其萃取率为97.83%,分配系数为5.209,纯化倍数为7.74倍。     

克氏原螯虾壳膜几丁质酶的分离纯化

本研究以克氏原螯虾虾壳为材料,探讨克氏原螯虾壳膜中几丁质酶的分离纯化方法。通过硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100凝胶层析、苯基疏水层析和DEAE-32阴离子交换层析,获得比活力为44.93 U/mg、纯化倍数约16.28倍的电泳纯的几丁质酶制品。结合SDS-PAGE和飞行质谱测出该酶分子量为37.7 kDa,为单亚基蛋白。本实验的分离纯化方法可行,为后续酶学性质的研究提供了基础。     

酿酒酵母胞浆中乙醛脱氢酶的提取和研究

利用超声波破碎、硫酸铵分级盐析以及DEAE-32阴离子交换层析等方法提取了酿酒酵母胞浆内的乙醛脱氢酶(ALDH),并对其酶学性质进行了研究.结果表明,经过DEAE-32交换层析后得到的ALDH酶液,纯化倍数为11,产率为17%,酶的最适反应温度为25℃,最适pH在7.0～7.5之间.     

PEG/(NH4)2SO4双水相体系提取和纯化糖化酶

用PEG／（NH4）2SO4双水相体系提取，纯化糖化酶，研究了影响体系分配系数，回收率和纯化因子的因素从而确定了萃取糖化酶的最佳条件。在WPEG为0．24，W（NH4）2SO4为0．08条件下，分配系数最小，达0．022，回收率为95．6％。     

两种纯化玉米超氧化物歧化酶方法的比较

本文利用硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤初步分离了玉米SOD,利用DEAE-52离子交换层析和金属螯合亲和层析分别纯化了SOD.其中经离子交换层析后的比活为3 304,纯化倍数为118,回收率为4.8%,基本达到电泳纯.经金属螯合亲和层析纯化后比活为8 597,纯化倍数为307,回收率为29.4%,达到了电泳纯.     

文蛤纤维素酶分离纯化及性质

采用缓冲液提取、(NH4)2SO4分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Phenyl Sepharose 6 Fast Flow疏水层析,从文蛤(Meretrix meretrix L)中分离纯化出一种纤维素酶。结果显示:纯化后的纤维素酶比活力达到40.33 U/mg,纯化倍数为13.12;SDS-PAGE检测其亚基相对分子质量为59 700;文蛤纤维素酶的最适pH为5.2,最适反应温度为45℃,该酶在p H 4～6和4～50℃范围内有较好的稳定;在最适条件下,以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为底物测得其Km值为0.111 mmol/L。     

双水相萃取长鱼蛋白酶的工艺研究

采用聚乙二醇(PEG)/盐双水相体系以分离纯化长鱼蛋白酶。通过研究不同成相盐及其浓度、不同PEG分子量及其浓度和不同p H对双水相萃取长鱼蛋白酶的影响。结果表明,最优化的双水相体系为25%PEG1000、20%(NH4)2SO4和p H7.0,在此条件下长鱼蛋白酶上相酶活回收率和纯化倍数分别为90.5%和4.40。     

类芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶的分离与纯化

类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)CH-3是一株高产β-甘露聚糖酶的菌株。本研究采用乙醇沉淀法、硫酸铵盐析法、聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系对CH-3菌株产生的β-甘露聚糖酶进行分离与纯化,以选出纯化率高且残余酶活力高的方法。结果发现,乙醇沉淀法和硫酸铵盐析法纯化效果较差,聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系的纯化效果较好,PEG浓度为20%(m/m)时,上相测得的总酶活力最高,可以达到221 U/m L。在(NH4)2SO4浓度为18%(m/m)时,上相测得总酶活力最高,可以达到264 U/m L,同时酶萃取率达最大值为86.2%。因此,最优的双水相体系是20%(m/m)PEG和浓度为18%(m/m)(NH4)2SO4。     

根霉淀粉酶的分离纯化及部分性质研究

本实验对根霉RhizopusRA-1淀粉酶进行了分离纯化,经过(NH4)2SO4分步沉淀,DEAE-纤维素离子交换层析和Sephadex G-100凝胶层析等3部纯化,得到了电泳纯的糖化酶和两条紧密相连的液化型淀粉酶带,用SDS-PAGE法测得三种酶都只含有一种亚基,相对分子质量分别为78000,48000,50000。     

热带假丝酵母木糖醇脱氢酶的分离纯化

探讨了热带假丝酵母中木糖醇脱氢酶的分离纯化工艺。分步采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶层析以及Hi Trap Blue HP亲和层析等纯化方法,得到电泳纯的木糖醇脱氢酶。经SDS-PAGE和native-PAGE分析表明,木糖醇脱氢酶分子质量约为90ku,由2个分子质量为45ku的亚基组成。最终酶蛋白纯化倍数达到60·8倍,回收率为10·9%。