戊二醛交联几丁质固定化青霉素G酰化酶及其性质研究

目的以几丁质为载体,戊二醛为交联剂固定化粪产碱杆菌青霉素G酰化酶。方法单因素优化固定化条件,以交联度、pH、温度、酶量4因素3水平正交试验,确定最佳固定化条件,并研究固定化酶的最适反应温度、pH及批次稳定性。结果最佳固定化条件为几丁质0.3 g,酶量6.0 mL,交联度1.5%,温度37℃,pH 8.0,时间48 h,固定化酶最高比活性为62.3 U/g湿载体,最适反应温度为65℃,最适pH 9.0,重复使用8批活性基本稳定。结论戊二醛交联几丁质固定化青霉素G酰化酶稳定性较好,具有一定的工业应用前景。     

戊二醛交联几丁质固定化青霉素G酰化酶及其性质研究

目的 以几丁质为载体,戊二醛为交联剂固定化粪产碱杆菌青霉素G酰化酶.方法 单因素优化固定化条件,以交联度、pH、温度、酶量4因素3水平正交试验,确定最佳固定化条件,并研究固定化酶的最适反应温度、pH及批次稳定性.结果 最佳固定化条件为几丁质0.3 g,酶量6.0 mL,交联度1.5%,温度37℃,pH 8.0,时间48 h,固定化酶最高比活性为62.3 U/g湿载体,最适反应温度为65℃,最适pH 9.0,重复使用8批活性基本稳定.结论 戊二醛交联几丁质固定化青霉素G酰化酶稳定性较好,具有一定的丁业应用前景.     

壳聚糖-铜(Ⅱ)配合物固定化青霉素G酰化酶

目的壳聚糖与CuSO4络合为壳聚糖铜后以高分子配位键法固定化青霉素G酰化酶,考察固定化酶的性质。方法单因素优化固定化条件,对Cu^2＋浓度、络合时间、pH、温度、加酶量进行L16（4^5）的正交试验,获得最佳固定化条件,并研究固定化酶的最适反应温度、pH及批次稳定性。结果最佳固定化条件为：壳聚糖直接与Cu^2＋络合制备壳聚糖铜载体,Cu^2＋浓度／0．1g·mL^-1,络合时间16h;载体0．3g,酶量1mL,pH4．9,温度30℃,固定化25h。最高固定化酶活性为65U／g湿载体,固定化酶最适反应温度60℃,最适pH9．0,固定化酶具有较好的保存稳定性。结论壳聚糖-铜（Ⅱ）配合物固定化青霉素G酰化酶的活性高,具有一定的应用潜力。     

交联青霉素G酰化酶聚集体制备及其催化特性研究

目的考察交联青霉素G酰化酶聚集体催化特性,探讨其应用潜力。方法以硫酸铵为沉淀剂获得青霉素G酰化酶蛋白沉淀,戊二醛交联沉淀的蛋白质制备交联酶聚集体,在此基础上研究交联酶聚集体的催化特性。结果交联粪产碱杆菌来源青霉素G酰化酶聚集体的最适反应温度55℃,最适pH 9.0,其酸碱和热稳定性均优于游离酶,重复使用13批次几乎无酶活性丢失,反应20批次后仍有50.9%的活性。结论交联酶聚集体的稳定性较游离酶好,具有一定的工业应用前景。     

交联青霉素G酰化酶聚集体制备及其催化特性研究

目的考察交联青霉素G酰化酶聚集体催化特性,探讨其应用潜力。方法以硫酸铵为沉淀剂获得青霉素G酰化酶蛋白沉淀,戊二醛交联沉淀的蛋白质制备交联酶聚集体,在此基础上研究交联酶聚集体的催化特性。结果交联粪产碱杆菌来源青霉素G酰化酶聚集体的最适反应温度55℃,最适pH9．0,其酸碱和热稳定性均优于游离酶,重复使用13批次几乎无酶活性丢失,反应20批次后仍有50．9％的活性。结论交联酶聚集体的稳定性较游离酶好,具有一定的工业应用前景。     

固定化青霉素酰化酶水解青霉素G的研究

研究了固定化青霉素酰化酶的部分性质，包括酶的最佳温度、ｐＨ，酶的反应动力学常数，酶的稳定性等，探讨了固定化酶反应器中青霉素Ｇ的酶解过程，建立了酶解过程的数学模型，并对此过程进行了计算机模拟和预测。     

固定化青霉素酰化酶对荧光假单胞菌群体感应的抑制作用

水产品腐败菌的群体感应现象是加速水产品腐败的原因之一。近年来,由于化学保鲜剂的使用导致许多腐败菌产生抗性,并且其安全性也令消费者担忧,因此研究安全、高效的生物保鲜剂是水产保鲜中的重要课题。本研究用固定化青霉素酰化酶来抑制水产品优势腐败菌——荧光假单胞菌的群体感应现象。利用CV026验证固定化青霉素酰化酶对荧光假单胞菌AHLs的淬灭作用;利用光学显微镜和扫描电镜研究酶对生物被膜的影响;利用牛奶琼脂平板验证胞外蛋白酶的活性;通过分子对接预测酶与不同AHLs的相互作用。结果表明,固定化青霉素酰化酶能够降低荧光假单胞菌AHLs的含量,从而减少紫色杆菌CV026紫色菌素的生成,减缓荧光假单胞菌生物被膜和胞外聚合物的形成。同时也干预了胞外蛋白酶的产生,当酶质量浓度为15 mg/mL时无法观察到明显的蛋白抑制圈。分子对接结果显示,该酶与短链和长链的信号分子都能成功对接,然而,更偏向于长链AHLs。3D对接结果显示,C14-HSL被活性中心周围的氨基酸残基全部包裹,相互以氢键连接,氢键的数量较多,结合作用更强。由此说明固定化青霉素酰化酶具有良好的群体感应淬灭活性,可作为新型保鲜剂应用于水产品保鲜。     

丝素膜作为固定化酶载体的研究：丝素膜固定化青霉素酰化酶性质的研究

本文以丝素蛋白膜和ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ４Ｂ（交联琼脂糖）为载体固定青霉素酰化酶（ＰＡ），详细研究了固定化前后酶性质的变化。结果表明与自由酶相比，固定化酶的热稳定性及ｐＨ值稳定性有很大的提高；固定化酶的表现米氏常数比自由酶仅有很小的增加；此外研究发现用丝素蛋白膜为载体比用Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ为载体制备的固定化酶具有更高的热稳定性。     

交联法固定化米曲霉菌体光学拆分DL-色氨酸的研究

采用戊二醛作交联剂,对米曲霉3042产氨基酰化酶液态发酵菌体进行固定化,固定化酶活保留率最高达到30.4%。固定化米曲霉菌体扫描电镜图可看出,通过固定化后菌体之间结合紧密程度提高,有利于米曲酰化酶附着在菌体上。对固定化米曲霉菌体分批拆分制备L-色氨酸进行了研究,固定化菌体酶活的半衰期约为27d。     

重组大肠杆菌产青霉素酰化酶的发酵动力学研究

对产青霉素酰化酶重组大肠杆菌M3进行分批发酵动力学研究。根据Logistic和Luedeking-Piret方程,拟合出重组大肠杆菌M3分批发酵过程中菌体生长、青霉素酰化酶合成、基质消耗的动力学模型及模型参数。结果表明,重组大肠杆菌M3产青霉素酰化酶的发酵动态过程能很好的被该模型所表达。