具有胃黏膜保护作用的羊肚菌菌株的筛选及液体发酵

目的：筛选获得具有胃黏膜保护作用且生物量较高的羊肚菌菌株,并优化所获得菌株的发酵培养基,筛选获得对胃黏膜保护效果较好的羊肚菌发酵培养基中的碳、氮源。方法：将小鼠随机分为正常组、模型对照组和不同给药剂量组,以无水乙醇诱导胃黏膜损伤为模型,比较各组胃黏膜损伤指数,同时测定并比较不同羊肚菌菌株生物量;利用碳氮源单因素和正交试验,以胃黏膜损伤指数为主要筛选指标,同时测定并比较不同培养基发酵羊肚菌菌株生物量与胞外多糖含量。结果：羊肚菌M1 液体发酵物的水提液,能显著降低小鼠急性酒精胃黏膜损伤的损伤指数(P ＜ 0.05),同时生物量达到10.28g/L;分别以可溶性淀粉与酵母膏为碳、氮源时M1 液体发酵物的水提液对小鼠胃黏膜保护效果最好,抑制率分别达到80.92%、53.02%;正交试验结果表明：以质量分数2.0% 可溶性淀粉和1.5% 酵母膏组合时M1 液体发酵物的水提液对小鼠胃黏膜保护效果较好,抑制率达到76.02%,生物量达到8.88g/L。结论：羊肚菌M1 不仅对小鼠胃黏膜具有较好的保护作用,而且生物量较高,其对胃黏膜保护效果较好的发酵培养基中的最适碳、氮源为可溶性淀粉2.0%、酵母膏1.5%。     

羊肚菌液体发酵培养基成分及培养条件的优化

采用单因素和正交试验设计法对羊肚菌液体发酵培养基成分及培养条件的优化进行了研究。结果表明,羊肚菌液体发酵培养基最佳配方为可溶性淀粉2.5%,酵母膏2.5%,MgSO4 0.1%, KH2PO4 0.2%, VB1 0.2%;最适培养条件：pH值为7,发酵温度28℃、转速140r/min,装液量100mL/250mL,摇床振荡培养7d,在最佳条件下所生产的菌丝生物量为3.438g/200mL。羊肚菌液体发酵培养基成分和发酵条件的优化工艺能高效生产菌丝体,为以后开发羊肚菌真菌资源产品奠定了基础。     

α-萘乙酸对黑脉羊肚菌生物量、胞内多糖含量及多糖抗氧化性能的影响

在黑脉羊肚菌液体发酵培养基中添加不同浓度的α-萘乙酸(NAA),考察NAA对黑脉羊肚菌生物量及胞内多糖含量的影响,并对多糖的抗氧化性能进行了研究。结果表明:适当浓度的NAA能够提高黑脉羊肚菌生物量及胞内多糖含量,在其浓度为2.0μg/mL时,菌丝体干重和每克干菌丝体胞内多糖含量达到最大,分别为9.873 g/L和429.5 mg,与不添加NAA相比,分别增加了34.89%和15.68%;添加适当浓度的NAA也能提高胞内多糖对DPPH自由基的清除作用,但是降低了其对羟基自由基的清除作用。     

羊肚菌液体深层发酵条件

以羊肚菌为材料，研究了发酵过程中碳源、氮源、无机盐、培养条件对菌丝体生物量、胞外多糖的影响，以及发酵过程中菌丝体生物量、胞外多糖、总糖及还原糖质量浓度、培养基PH值的动态变化，并在此基础上确定了羊肚菌液体深层发酵的最佳条件。结果表明：羊肚菌液体深层发酵的最优培养基配比为：玉米粉4．0g／dL、葡萄糖1．0g／dL、黄豆粉2．0g／dL、酵母粉0．3g／dL、KH2PO4 0．2g／dL、MgSO4 0．1g／dL、CaSO4 0．1g／dL；最优培养条件为：24℃，起始pH5．8，250mL的摇瓶装液量为100mL，接种量10mL，摇瓶转速140r／min，发酵时间为108h。     

羊肚菌生物转化玉米醇溶蛋白液体发酵工艺优化

要以玉米蛋白粉为主要原料,采用羊肚菌对其发酵培养,确定羊肚菌生物转化玉米醇溶蛋白的培养基配方和培养条件。结果表明:羊肚菌生物转化玉米醇溶蛋白液体发酵最适培养基配方为:葡萄糖添加量5.4%,玉米蛋白粉添加量8%,CaSO_4添加量0.3%,KH_2PO_4添加量0.2%,此条件下,得出菌丝体生物量为1.62 g/100 mL,蛋白转化率为27.51%。在最适培养基配方的基础上,液体发酵培养条件为:接种量10%,培养温度26℃,初始pH 4,装液量100 mL/500 mL。在此优化条件下,试验验证得出菌丝体生物量为2.41 g/100 mL、蛋白转化率为36.69%。     

共生食用菌松茸菌丝体液体发酵的研究

目的研究松茸菌丝体液体发酵方法和最佳条件。方法经RAPD-PCR分析确认松茸菌丝体菌种,研究松茸液体深层发酵过程中菌丝体的生物量、残糖浓度和pH随时间变化的过程;比较不同种龄对菌丝体积累的影响,确立最佳接种种龄;比较不同初始糖浓度发酵过程的结果,运用中间补糖的方法,确定最优的补糖时间。结果最佳接种种龄为6d;初始糖浓度较低有利于缩短松茸种子液生长的延迟期,较高则可使菌丝体在较长时间保持生长并获得较高的生物量产出。d12为最优补糖时间,在摇瓶体系中培养24d最终得到12.77g/L的菌丝体生物量。结论最佳培养条件下,采用中间补糖法适合液体发酵过程中松茸菌丝体的积累。     

不同碳源对黑芝菌丝体液体发酵的影响

对黑芝菌丝体液体发酵体系进行了研究.实验中以黑芝菌丝体生物量为主要评价指标,通过正交实验研究了无机盐、维生素和碳源在黑芝菌丝体发酵中的交互作用.结果显示:黑芝菌丝体对果糖的吸收利用要优于蔗糖和乳糖,且当碳源种类不同时,黑芝菌丝体对无机盐和维生素的需求也明显不同.实验中筛选出的较适宜黑芝菌丝体液体发酵的培养基为:果糖20 g/L+KH2PO42 g/L+K2HPO4 2 g/L+MgSO4·7H2O 2 g/L+CaCl2·2H2O 1 g/L+VB1 20 mg/L,pH自然.黑芝菌丝体在此培养基中发酵培养7d,菌丝生物量可达0.8086g/dL.     

粗柄羊肚菌液体发酵条件研究

对粗柄羊肚菌菌丝体液体发酵的条件进行了研究。结果表明,在PYG(0.5%酵母提取物的PDA)培养基上,合适的摇瓶培养条件是:发酵温度25℃,发酵摇瓶转速150r/min,培养基装量为150mL/500mL(加10粒玻璃珠),添加0.7%的羧甲基纤微素(CMC)可以明显地提高菌丝体的生物量。在上述摇瓶培养条件基础上,通过6种发酵培养基发酵实验,获得生物量最高的发酵培养基,其组成为麦芽汁50%、玉米粉2%、酵母提取物0.5%,发酵生物量为16.4g,再生率为9%。     

超声波诱变对猴头菇粗多糖的影响

考察超声波诱变对猴头菇菌丝体和子实体中粗多糖含量及活性的影响。将猴头菇菌株进行不同时间的超声波诱变,各诱变菌株经平板培养初筛和液体发酵培养复筛后,最终得到1株菌丝体生物量最大、粗多糖含量最高的猴头菇变异菌株H-2,然后将原始菌株和H-2菌株进行袋料栽培以获得子实体,并对子实体粗多糖含量进行了比较,最后,比较了原始菌株和H-2菌株子实体粗多糖的抑菌活性。变异菌株H-2菌丝体和子实体的粗多糖含量比原始菌株分别提高了1. 2%和2. 3%,并且H-2子实体粗多糖对金黄色葡萄球菌有显著抑菌效果。猴头菇菌株经适当时间的超声波诱变后,可以提高其菌丝体和子实体中粗多糖的含量和抑菌活性。     

粗柄羊肚菌液体发酵条件研究

对粗柄羊肚菌菌丝体液体发酵的条件进行了研究.结果表明,在PYG(0.5%酵母提取物的PDA)培养基上,合适的摇瓶培养条件是:发酵温度25℃,发酵摇瓶转速150 r/min,培养基装量为150mL/500mL(加10粒玻璃珠),添加0.7%的羧甲基纤微素(CMC)可以明显地提高菌丝体的生物量.在上述摇瓶培养条件基础上,通过6种发酵培养基发酵实验,获得生物量最高的发酵培养基,其组成为麦芽汁50%、玉米粉2%、酵母提取物0.5%,发酵生物量为16.4g,再生率为9%.     

4株羊肚菌胞外多糖含量及其生物活性的研究

为探讨不同羊肚菌菌株胞外多糖的含量及其抑菌、抗氧化活性和对α-淀粉酶的抑制作用是否有差异,以4株羊肚菌(编号为YS-Y、XH-0、XH-2、XH-4)为材料,利用醇沉法提取羊肚菌胞外多糖,并用Sevag法去除蛋白后,测定其胞外多糖含量及其抑菌活性、抗氧化能力和对α-淀粉酶的抑制作用,并将其结果进行对比。结果表明,YS-Y、XH-0、XH-2、XH-44株羊肚菌胞外多糖的含量分别为10.05%、5.80%、19.89%、8.34%;4株羊肚菌具有一定程度的抑菌能力,菌株XH-2的抑菌效果优于其它3株,且对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制效果最好;4株羊肚菌的还原力、DPPH自由基、ABTS+自由基以及羟自由基清除率都随着质量浓度的增大而增大,当质量浓度达到1.0 mg/mL时,菌株XH-2的还原能力和ABTS+自由基清除能力优于其他3株,其OD700值和EC50分别为0.136和0.56 mg/mL;菌株XH-4的DPPH和羟自由基清除率优于其它3株,其EC50分别为16.68 mg/mL和1.40 mg/mL,且4株羊肚菌的羟自由基清除率均大于VC;菌株XH-2对α-淀粉酶的抑制作用优于其它3株,其EC50为1.55mg/mL。该研究表明羊肚菌胞外多糖具有一定的生物活性,菌株XH-2和XH-4具有更大的药用潜力,可为羊肚菌资源开发提供一定的参考意义。     

基于体外模拟消化的黑脉羊肚菌多酚细胞抗氧化及抗增殖活性

以黑脉羊肚菌多酚提取物为研究对象,通过体外模拟消化实验,研究消化过程中消化液多酚含量及氧自由基吸收能力的变化;研究体外模拟胃、肠消化对人肝癌细胞（HepG2细胞）和人结肠癌细胞（Caco-2细胞）的毒性及抗增殖活性的影响;并以HepG2细胞为模型对细胞抗氧化活性（cellular antioxidant activity,CAA）进行评价。结果表明：体外模拟消化后,黑脉羊肚菌多酚释放及氧自由基吸收能力均有提高,模拟胃、肠消化过程中多酚释放分别在1 h和0.5 h达到最高并保持稳定。细胞实验表明,在不产生细胞毒性的范围内,胃0 h、胃液1 h、肠液0.5 h对HepG2的抑制率分别为41%、45%、91%;对Caco-2细胞的抑制率分别为73%、96%、90%。CAA结果显示,胃消化处理的样品表现出促氧化的作用,肠消化处理的样品表现出抗氧化的作用,肠液0.5 h的CAA值为（70.506±0.011）μmol QE/100 g（以干质量计）。由此可见,体外模拟消化处理黑脉羊肚菌具有一定的抗氧化及抗增殖活性,为羊肚菌功能活性的开发提供了理论依据。     

人工栽培和野生羊肚菌游离氨基酸主成分分析及综合评价

采用氨基酸自动分析仪对云南、四川、吉林、甘肃的人工栽培和野生羊肚菌游离氨基酸（free amino acids,FAAs）的组成及含量进行测定,通过滋味活性值（taste active value,TAV）比较其呈味特性,主成分分析法及聚类分析法进行综合评价。结果表明：野生羊肚菌中FAAs含量丰富,含18?种氨基酸,总含量为29.04～35.48?mg/g;人工栽培羊肚菌未检出游离色氨酸和脯氨酸,不同省份间总含量差异较大,为20.77～43.07?mg/g。同一省份野生羊肚菌FAAs含量一般大于人工栽培羊肚菌,野生较人工栽培羊肚菌鲜味更突出。呈味氨基酸中,吉林省人工栽培羊肚菌的甜味、苦味及芳香族氨基酸含量均较高。谷氨酸对羊肚菌的鲜味影响最大,野生羊肚菌TAV在13.75～17.79之间,人工栽培羊肚菌TAV在5.28～11.02之间,云南野生羊肚菌鲜味氨基酸含量最高。精氨酸在苦味氨基酸中TAV最高,野生羊肚菌的苦味氨基酸含量小于人工栽培羊肚菌。综上,野生羊肚菌鲜味突出,吉林人工栽培羊肚菌氨基酸营养品质最好,为栽培技术的推广和营养品质开发提供一定参考依据。     

野生和人工栽培羊肚菌营养价值对比分析

为全面比较野生和人工栽培羊肚菌的营养价值,以晋中、大同人工栽培羊肚菌以及南充、丽江野生羊肚菌为样品,采用国家或行业标准方法对4类样品中的基本营养成分、矿物质元素、维生素和氨基酸含量进行了测定。利用营养质量指数、氨基酸评分、化学评分、必需氨基酸指数、生物价和营养指数等指标对野生和人工栽培羊肚菌的营养价值进行了分析和对比。结果表明:人工栽培羊肚菌的粗蛋白、粗脂肪和粗纤维的含量比野生羊肚菌略高;野生羊肚菌铁元素和维生素C的含量比人工略高,其他大多数矿质元素和维生素的含量相差不大;人工栽培羊肚菌的氨基酸含量、生物价及营养指数比野生羊肚菌高。人工栽培羊肚菌的营养价值能够与野生羊肚菌媲美,且重金属的摄入风险更低,适宜作为高品质的羊肚菌食材并加大人工种植规模。     

内蒙古奶豆腐中潜在益生性乳酸菌的筛选

对从内蒙古奶豆腐中分离的16 株乳酸菌进行16S rDNA分子鉴定,其中9 株鉴定为乳酸片球菌、5 株为屎肠球菌、1 株为植物乳杆菌、1 株为鼠李糖乳杆菌。进一步对分离得到的菌株进行模拟人工胃液和胆盐耐受性、疏水性、体外降胆固醇和抗氧化特性研究。结果表明：植物乳杆菌M1-2和鼠李糖乳杆菌M6-1对模拟人工胃液有较高的耐受性;屎肠球菌M7-1、M8-1和M8-2具有较高的胆盐耐受性;植物乳杆菌M1-2和鼠李糖乳杆菌M6-1对甲苯和十六烷的疏水性显著高于其他菌株。体外功能性实验结果表明,屎肠球菌M1-1、植物乳杆菌M1-2、乳酸片球菌M1-3和M2-1的体外降胆固醇能力较高,胆固醇降解率均超过30%;鼠李糖乳杆菌M6-1对过氧化氢的耐受性、羟自由基（•OH）和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基的清除能力最高。综上所述,植物乳杆菌M1-2和鼠李糖乳杆菌M6-1具有较好的益生特性,可作为今后开发功能性产品的潜在益生菌株。     

基于离子液体辅助提取的羊肚菌HPLC指纹图谱分析

目的:建立一种绿色环保的羊肚菌高效液相指纹图谱分析方法。方法:采用离子液体-水溶液绿色溶剂提取样品,通过单因素考察离子液体种类、离子液体碳链长度、离子液体质量分数、提取时间、料液比对提取量的影响,确立了最终提取条件为40%[OMIM]PF₆水溶液(料液比1:10)湿法研磨样品10 min;同时使用绿色高效液相色谱法对羊肚菌进行分析检测:Agilent ZORBAX SB-AQ C₁₈色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),0.2%乙酸-乙醇作为绿色流动相体系进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温40℃,检测波长260 nm。采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)"对20批试验样品(14批六妹羊肚菌、6批其他食药用菌)进行相似度评价,采用SPSS 22.0软件对所有样品进行了聚类分析和主成分分析。结果:建立了羊肚菌的HPLC指纹图谱,标定10个共有峰,鉴定了5个核苷类成分(尿嘧啶、胞苷、尿苷、鸟苷、腺苷),20批试验样品中14批羊肚菌样品相似度均大于0.9,另外6批常见食药用菌相似度在0.25~0.65之间;聚类和主成分分析结果显示羊肚菌样品与其他食药用菌在本实验条件下化学成分存在显著差异,可有效鉴别羊肚菌和常见食药用菌。结论:本试验建立了简便、绿色、快速的羊肚菌HPLC指纹图谱分析方法,有助于提升羊肚菌的综合质量评价水平。     

羊肚菌胞外多糖液态发酵培养基配方优化及其体外降血糖活性

本研究以甘肃省野生三地羊肚菌为研究对象,探究羊肚菌胞外多糖液态发酵培养基最佳方案与体外降血糖活性。采用单因素实验比较红糖、玉米粉等7种添加物对羊肚菌液态发酵过程中胞外多糖含量的影响,在此基础上采用响应面分析法优化羊肚菌胞外多糖液态发酵培养基配方。通过测定羊肚菌胞外多糖对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制率检测其体外降血糖活性。结果表明:当红糖添加量2.20 g/L、尿素添加量3.18 g/L、玉米粉添加量2.40 g/L时,实际得到羊肚菌胞外多糖的含量可达到1.20 g/L。羊肚菌胞外多糖在浓度为1.0 mg/mL时对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制率则分别达到73.46%和36.37%,羊肚菌胞外多糖具有较好的降血糖活性。     

六妹羊肚菌原生质体再生菌株交配型的分离鉴定

该研究对六妹羊肚菌（Morchella sextelata）的原生质体进行制备及再生,且对分离后的原生质体再生菌株的交配型进行分子生物学鉴定,并对其交配型稳定性进行验证。结果表明,CYM液态培养制备原生质体效果较好,再生率及回收率分别为0.15%～9.00%、60%～80%;共获得182株再生菌株,其中,MAT1-1-1交配型菌株占34.62%,MAT1-2-1交配型菌株占24.73%,双交配型（MAT1-2-1/MAT1-2-1）菌株占36.26%。稳定性试验结果表明,经过原生质体化过程及诱变处理,六妹羊肚菌的单交配型原生质体“同核体”的“二代”再生菌株交配型没有改变,与亲本菌株交配型一致,而双交配型原生质体的再生菌株中又发生了两种交配型分离的现象。