毒素胁迫烟草抗黑胫病鉴定及抗性指标分析

为建立一种高效准确的烟草黑胫病抗性鉴定方法,以4种具有不同抗性特性的烟草品种为材料,研究培养基附加不同浓度黑胫病病菌毒素及不同胁迫时间对烟草种子萌发和根系生长的影响。结果表明,烟草黑胫病病菌毒素胁迫对烟草种子的发芽率和根系生长均有抑制作用,抑制效果随胁迫浓度的增加而增强,且不同品种对毒素胁迫的耐受力不同,利用体积浓度为50%的毒素胁迫15 d时,抗病品种G28、中抗品种YN116、中感品种净叶黄、感病品种红花大金元的根系长进培养基中的株数比率分别为79.38%、70.74%、33.55%和13.36%。初步确定鉴别烟草种子抗性特性的最佳粗毒素胁迫浓度为50%（即含蛋白质13.53μg/mL,含糖19.64 mg/mL）、最佳鉴定时间为胁迫15 d,利用该方法可在短期内高效准确地鉴定出不同品种（种质）对烟草黑胫病的抗感水平,加快烟草抗黑胫病育种进程。     

利用赤星病菌毒素快速高通量鉴定烟草抗性种质的方法研究

为寻求一种快速高通量筛选鉴定烟草抗赤星病种质或材料的方法,本研究以烟草（Nicotiana tobacum L.）种质净叶黄、Beinhart1000-1、NC89 和G140 作为供试材料,利用烟草赤星病菌毒素就烟草种质对赤星病的抗病性鉴定方法进行研究,试验设计3 种鉴定方法：毒素液浸根法、毒素液浸种法和毒素培养基法.为验证毒素培养基法鉴定结果的可靠性,对烟草种质材料净叶黄、Beinhart1000-1、NC89、G140、K326、G28 和中烟100 的室内鉴定结果,与其对烟草赤星病的田间抗性鉴定结果进行了相关性分析.结果表明,室内鉴定结果与田间鉴定结果之间极显著相关（r=-0.9588）,室内鉴定结果可准确反映烟草种质对赤星病的抗病性.     

烟草赤星病胁迫对不同抗性品种光合特性和渗透调节的影响

以抗烟草赤星病品种净叶黄(JYH)和感病品种长脖黄(CBH)为材料,在盆栽试验条件下,研究不同烟草赤星病胁迫程度(轻度胁迫、中度胁迫和重度胁迫)对光合特性和渗透调节的影响。结果显示:⑴烟草赤星病胁迫导致2 个品种的叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素和类胡萝卜素含量均呈下降趋势,且JYH 的降幅小于CBH。⑵ JYH、CBH 的净光合速率、气孔导度因烟草赤星病胁迫而降低。2 个品种的胞间CO₂ 浓度、气孔限制值变化具有明显差异,烟草赤星病胁迫导致CBH 的胞间CO₂ 浓度上升,气孔限制值则明显下降,这与JYH 在重度胁迫下的变化趋势一致。而JYH 的胞间CO₂ 浓度在轻度、中度胁迫降低,气孔限制值则呈上升趋势。⑶与CBH 相比,JYH 在烟草赤星病胁迫下具有较高的脯氨酸和可溶性总糖含量,较低的MDA 含量。研究结果表明,JYH 具有较强的光合作用和渗透物质调节能力,是对烟草赤星病胁迫具有较强抗性的生理基础。      

烟草镰刀菌根腐病抗性鉴定方法研究

为获得不同烟草品种镰刀菌根腐病抗性的鉴定方法，采用镰刀菌粗毒素幼芽接种、孢子悬浮液培养、带菌菌谷接种、离体叶片菌饼接种、草酸局部注射等5种方法对4个品种（小黄金1025、中烟100、长脖黄、664-01）的镰刀菌抗病性进行了研究。结果表明，镰刀菌毒素液胁迫法可以鉴定品种的抗感程度，适宜体系毒素浓度为8%，处理时间6d；镰刀菌孢子悬浮液接种法可以鉴定品种的抗感程度，适宜体系孢子液浓度为107个/mL，处理时间4 d；带菌菌谷接种也可以鉴定品种的抗感程度，适宜体系菌谷比例为20%，处理时间9 d；离体叶片用菌饼和草酸液处理，能区分品种的抗感性，但不能区分品种的抗感程度。研究结果认为孢子悬浮液接种法和带菌菌谷接种与其他3种方法相比可以准确评价品种对镰刀菌根腐病的抗感性。     

利用细胞工程筛选烟草抗赤星病突变体的研究——一种双层培养基筛选系统的建立

为有效筛选烟草抗赤星病细胞突变体,本研究建立了一种双层培养基筛选系统。即在下层培养基中接种烟草赤星病(Alternaria alternata),在上层培养基中接种烤烟品种 NC89和净叶黄的花药(NC89高感赤星病,净叶黄高抗赤星病)。在26±1℃培养40天后发现,NC89的花药出苗率和花药平均出苗数与对照(不接种赤星病的培养基)相比,分别由30%和53颗降到2%和12颗,而净叶黄的花药出苗率和平均出苗数基本没有变化。对筛选出来的 NC89花培突变体进行了田间赤星病抗性鉴定,其中80%对赤星病抗性较 NC89有所提高,甚至部分接近高抗。这说明该双层培养基系统可以有效地对抗烟草赤星病的细胞突变体进行筛选。本系统尤其适应于(1)需长期培养;(2)毒素不易制备或易失活的病原菌的抗性筛选。     

一种苗期鉴定烟草赤星病抗性的新方法

烟草赤星病抗性的高通量鉴定是快速筛选和培育烟草抗赤星病品种的前提条件。以15份对赤星病表现不同抗性水平的烟草种质为材料,采用链格孢菌菌饼接种苗期离体叶片,以发病叶片病斑面积作为抗性评价指标,对15份烟草种质的抗性进行评价,并与其田间成株期赤星病抗性进行比较分析。结果表明,采用苗期菌饼接种,供试15份烟草种质的病斑面积差异显著,感病品种病斑平均面积明显大于抗病品种;各品种苗期赤星病鉴定结果与成株期抗性鉴定结果基本一致,且苗期病斑面积大小与3个不同年份、同一地点的成株期平均病级指数间相关性均达到显著水平,分别为0.78、0.74和0.66。表明本研究探讨的苗期离体叶片菌饼鉴定法可以用于烟草赤星病早期鉴定,病斑面积可以作为评价指标准确反映不同烟草品种间赤星病的抗性差异。     

大豆品种耐盐性的快速鉴定法及不同时期耐盐性的研究

为了探索大豆品种耐盐性的简易鉴定方法,了解不同生育期大豆品种耐盐性的表现,从种子萌发开始用80mmol/L盐溶液对99个大豆品种的耐盐性进行了鉴定和生长观测.结果表明,80mmol/L盐溶液浸泡72h后的大豆发芽率可较好地反映大豆品种的耐盐性.种子萌发后根系的长度、侧根数量、根的干重和鲜重与品种的耐盐性密切相关.苗期大豆对盐胁迫的处理最为敏感,在营养生长期（V2和V4期）盐胁迫显著降低植株的高度和生物量,R2和R4期大豆品种的耐盐性最强,是生物量下降最小的时期.盐胁迫对R6期植株的伤害最大,种子萌发期的耐盐性表现与植株生长后期的耐盐性基本一致,种子萌发期的发芽率可以作为抗盐性的鉴定方法.     

烟草细胞及原生质体对烟草赤星病菌毒素(AT毒素)的抗性表现

从烟草赤星病病原菌的过滤培养液中提取的天然 AT 毒素,用来处理对该病菌具有不同抗性的烟草栽培品种的液体培养细胞,在浓度为3%(V/V)的 AT 毒素处理下,不管其品种对这一病原菌的抗性如何,所有烟草品种的细胞生长都受到抑制。然而,用细胞染色法判断抗病品种的细胞死亡率要比感病品种低得多。对经过4天培养的叶肉原生质体用 AT毒素处理24小时,也观察到这种差异,细胞分裂及进一步形成细胞团块仅发生在抗病品种的原生质体中,而感病品种的原生质体则不能。因此,用 AT 毒素处理烟草培养细胞或原生质体也许是一种鉴定烟草品系对赤星病抗性的有效方法。     

烤烟根系分泌物的分离鉴定及对种子萌发的影响

为研究烤烟根系分泌物在烟草连作障碍中的作用,揭示主要烤烟品种根系分泌物的种类、数量及其对烟草生长的影响,对中烟100、NC89、K326中不同组分根系分泌物的主要成分进行了分离鉴定,并调查了中烟100不同组分根系分泌物对烟草种子发芽率和发芽势的影响。结果表明,3个品种根系分泌物主要是有机酸类,其中在中性提取条件下,含量较高的物质有2-羟基丙酸、肉豆蔻酸、新植二烯、东莨菪素、辛酸等;在酸性提取条件下,含量相对较高的物质有3-羟基丁酸、新植二烯、丁二酸、棕榈酸、肉桂酸等;在碱性提取条件下,含量相对较高的物质有新植二烯、棕榈酸、硬脂酸等。2-羟基丙酸、苯甲酸、丁二酸、烟碱、新植二烯、肉豆蔻酸、棕榈酸、延胡索酸等为3个烤烟品种根系分泌物的共有成分。中烟100不同组分根系分泌物对种子发芽率和发芽势的影响程度依次为：中性组分＞酸性组分＞碱性组分。延胡索酸、丁二酸、烟碱3种物质对烟草种子发芽率均有抑制作用,并且随着浓度的增加而逐渐加强。     

新引国外烤烟品种的抗病性鉴定

为选育和利用抗病品种,有效防治烟草病害,采用人工诱发抗病性鉴定的方法进行了9个新引进的烤烟品种对烟草黑胫病、TMV、赤星病的抗性鉴定.结果表明:PVH2254,PVH2306,PVH2299抗性最好,高抗TMV,抗黑胫病,中抗赤星病;RGH04抗黑胫病,高抗TMV,中感赤星病,PVH2110和K326PVY中抗黑胫病、赤星病,感TMV;PVH1452抗黑胫病,感TMV,中感赤星病;NC71抗黑胫病,中感TMV和赤星病.     

利用花药培养系统选育烟草抗赤星病品系

在接种有烟草赤星病菌的双层培养基上及含赤星病菌毒素的选择培养基上，获得了烟草推广品种ＮＣ８９的花药培养苗。温室内采用离体叶片法对这些花培苗进行了赤星病抗性鉴定，结果约１８％－４２．９％的植株抗性较对照ＮＣ８９有所提高。选其中４株抗性较高且农艺性状与对照ＮＣ８９相近的单株经秋水仙素加倍后收获了种子，然后于１９９２、１９９３年分别在赤星病病圃及大田条件下对其Ｒ—１代、Ｒ—２代植株进行了赤星病抗性及农艺性状测试。两年试验结果一致表明：在染色体加倍以后，所选植株的后代在基因型上已完全纯合，赤星病抗性较对照ＮＣ８９有较大提高，农艺性状也有所改善，而且均稳定遗传，是不同于原ＮＣ８９的烟草新品系。其中两个品系对赤星病的田间相对防效分别达５７．８％和５３．４％，且农艺性状优异，在生产上具有广泛应用前景。     

钠盐与AT毒素对烟苗根生长的影响

为确定不同钠盐对烟草赤星病菌AT毒素毒性的影响,作者采用摩擦接种处理、浇根处理、种子根处理3种生物测定方法确定了以烟草种子根处理法作为烟草赤星病菌的毒性测定方法。用10种化合物分别以5种不同浓度与AT毒素混合接种烟苗,分别以单独接种毒素稀释液与无菌水作对照。根长测定数据经DPS软件统计分析,结果表明单独施用AT毒素明显抑制烟苗根的生长,差异极显著;氢氧化钠、硝酸钠、苯甲酸钠、酒石酸钠均不能改变毒素对根长的影响,碳酸钠(200mg/mL)、酒石酸钾钠(200mg/mL)、四硼酸钠(0.02~0.2mg/mL)、氟化钠(0.2~2mg/mL)、柠檬酸钠(0.2mg/mL-200mg/mL)、钼酸钠(0.02~2mg/mL)对烟草赤星病菌毒素有明显钝化作用,以钼酸钠0.02mg/mL浓度处理效果最好,其次为柠檬酸钠0.2mg/mL处理;钼酸钠20~200mg/mL处理可增加AT毒素的毒性,浓度越大效果越显著。      

烟草突变体筛选与鉴定方法篇:2.烟草抗主要病虫害突变体的筛选与鉴定

参照烟草品种抗病性鉴定标准GB/T 23224—2008,烟草基因组计划重大专项"烟草突变体创制、筛选与分析"建立了烟草抗病毒病、青枯病、黑胫病、赤星病、烟蚜的高通量筛选方法,将全面开展烟草抗主要病虫害突变体的大量筛选与鉴定工作。     

干湿和变温处理对烟草种子萌发的影响

为寻求烟草种子的最佳引发方式,提高丸化种子的发芽率、培育健壮烟苗,采用昼温20℃、夜温10℃的变温和干湿锻炼处理烟草裸种,然后包衣丸化,并对烟草裸种和丸化种芽进行了室内发芽和田间育苗试验.结果表明变温和干湿同时处理可有效地提高烟草种子活力,处理后的烟草丸化种芽较普通包衣种子的发芽率提高17.92%～18.81%,出苗率提高11.56%～15.94%,出苗和成苗时间分别缩短3～4d和7～8d.培育的烟苗根系发达,烟苗整齐度和壮苗率也显著提高.     

不同抗性烟草品种内源激素对赤星病胁迫的响应差异

为进一步明确烟株内源激素与赤星病抗性的关系,以抗赤星病烟草品种净叶黄和感病品种长脖黄为研究对象,通过盆栽种植并接种赤星病菌,比较不同抗性品种内源激素含量对赤星病胁迫的响应差异。研究结果显示,在赤星病胁迫下,净叶黄、长脖黄的脱落酸（ABA）含量和乙烯（ET）释放量均呈上升趋势,而生长素（IAA）以及细胞分裂素（CTK）含量表现为降低。同时,赤星病胁迫导致净叶黄的赤霉素（GA）、茉莉酸（JA）含量增加,引起长脖黄的JA含量降低,GA含量则先增加后降低。与净叶黄相比,长脖黄的ABA含量增幅较小,而GA、IAA、CTK与JA含量降幅较大,并且ET释放量较高。综上,在赤星病胁迫下,内源激素的含量差异以及变化幅度可以反映不同品种的抗病能力。     

利用双层培养基筛选烟草抗赤星病突变体

在接种有赤星病菌(Alternaria alternata)的双层培养基上,成功地从高感赤星病烟草品种 NC89的花药中诱导出突变体苗,对这些突变体苗进行了离体抗病性鉴定,结果表明:其中70％的植株不同程度地表现赤星病抗性,部分表现高度抗性。     

烟草赤星病发生流行规律及药剂防治试验研究

１９９７～１９９８年进行了烟草赤星病流行规律及药剂防治试验,结果表明：烟草赤星病与种植品种、施氮量、不同移栽期、降雨量、有雾天数有着密切的关系。供试１０个烤烟品种（系）中,Ｋ７３０、ＶＡ１１６、吉烟７号、４０２９、９１１１－２１、Ｇ８６６,表现了对赤星病较强的抗性;不同氮肥用量４个处理中,亩施纯氮２～３ｋｇ,发病率和病情指数最低;５月１０～１５日移栽发病率和病情指数较低;７个农药中防治烟草赤星病效果较好的药剂为扑海因１０００倍防效８３．００％,菌核净４００倍防效８１．０９％,抗赤星一号５００倍防效７０．５７％,杀菌霸２０００倍防效７０．４２％,大生５００倍防效６９．３６％。     

烟草赤星病拮抗芽胞杆菌的筛选、鉴定及促生防病作用

为获得对烟草赤星病菌具有较好生防效果的芽胞杆菌,从福建、山东、云南等地烟草叶片中分离得到187株菌株,对烟草种子进行浸种处理,通过测定发芽率筛选到能够促进种子萌发的6株菌株;利用平板拮抗法、离体叶片接种法、温室生测发现FJ1、FJ1-6能促进烟草生长且对赤星病防效较好;通过生理生化和分子生物学鉴定,FJ1为萎缩芽胞杆菌（Bacillus atrophaeus）,FJ1-6为贝莱斯芽胞杆菌（Bacillus velezensis）。防病特性研究发现,两菌株含有参与脂肽类抗生素Surfactin、Fengycin和Iturin合成的基因且脂肽类粗提物对赤星病菌丝生长有明显的抑制作用,抑制率分别为56.9%、65.0%。综上,FJ1、FJ1-6具有优良的促生防病特性及显著的促种子萌发效应,可应用于烟草育苗及赤星病的防治。     

硫化氢对烟草种子萌发和幼苗生长的影响

为了明确硫化氢(H₂S)对烟草种子萌发和幼苗生长的影响,以烟草品种K326为材料,用不同浓度H₂S浸泡处理后观察种子萌发情况;采用水培法对正常萌发后的烟草幼苗进行不同浓度H₂S、H₂S抑制剂(HA)、H₂S清除剂(HT)以及盐胁迫处理,观察其对烟草幼苗生长的影响。结果表明：与对照相比,低浓度(0.05 mmol/L、0.1 mmol/L)H₂S处理对种子萌发具有促进作用,高浓度(0.25 mmol/L、0.5 mmol/L)H₂S处理明显抑制种子萌发。HA浓度为0.15 mmol/L、HT浓度为0.2mmol/L的处理可显著抑制幼苗的根系生长。0.05 mmol/L的H₂S处理对烟草幼苗生长具有促进作用,同时可以缓解盐胁迫对幼苗生长和根系发育的抑制作用。     

不同花生品种（系）萌发期耐盐性的鉴定与评价

以相对发芽势、相对发芽率和相对发芽指数为指标对41个花生品种（系）萌发期的耐盐性进行鉴定。结果表明,盐胁迫对花生种子萌发有显著的抑制作用,这种抑制效应随着胁迫浓度的增加而增强,0.5%NaCl胁迫能较好反映品种萌发期的耐盐性差异,可用于花生品种资源的耐盐性鉴定。聚类分析表明,在欧氏距离D=15水平上可以细分为A、B、C、D、E共5个类群,其中A类群耐盐性较强,E类群表现为盐敏感。不同地区品种对不同NaCl浓度的耐性差异明显,河南品种的耐盐性较强;不同类型花生品种中以高世代品系的耐盐性较强。本研究筛选到3份耐盐品种和2份盐敏感品种。